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基于Amplex Red荧光分析法的新型高通量乙酰胆碱酯酶抑制剂筛选模型构建以及应用

食用菌学报 2022年第4期29卷 77-88页

作者：于子行贾薇杨妍唐传红刘利平张赫男张劲松汪雯翰上海海洋大学食品学院上海201306 上海市农业科学院食用菌研究所农业农村部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海201403

基于Amplex Red荧光分析法,构建新型乙酰胆碱酯酶抑制剂(acetylcholinesterase inhibitor,AChEI)高通量筛选模型并对其进行评价,检测97个灵芝(Ganoderma lucidum)子实体醇提物对乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)的抑制活性,再通过细胞模型进行验证。结果表明:构建的新型高通量AChEI筛选模型具有准确度、灵敏度高,不受测试样品溶液颜色干扰等优点;筛选出3个对乙酰胆碱酯酶具有较强抑制活性的灵芝子实体醇提物,研究结果可为后续灵芝来源AChEI的开发提供参考。

关键词：食用菌阿尔茨海默症乙酰胆碱酯酶抑制剂灵芝 SH-SY 5Y细胞

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香菇营养品质评价体系的构建

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核农学报 2021年第4期35卷 881-890页

作者：李巧珍姜宁李正鹏宋春艳刘建雨董浩然蒋俊尚晓冬上海市农业科学院食用菌研究所/农业部南方食用菌资源利用重点实验室/国家食用菌工程技术研究中心/上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403

为构建香菇营养品质评价体系,本研究测定了46个不同来源香菇菌株的15项营养品质指标,通过相关性分析、因子分析和聚类分析对营养品质评价指标进行了简化,通过灰色关联度分析和主成分分析建立了香菇营养品质综合评价函数,并通过概率分布... 详细信息

为构建香菇营养品质评价体系,本研究测定了46个不同来源香菇菌株的15项营养品质指标,通过相关性分析、因子分析和聚类分析对营养品质评价指标进行了简化,通过灰色关联度分析和主成分分析建立了香菇营养品质综合评价函数,并通过概率分布建立了香菇营养品质综合评分标准。结果表明,香菇营养品质指标之间离散度不同,变异系数介于8.72%~70.52%之间。综合分析结果将15项营养品质评价指标简化为10项指标(即灰分、粗蛋白、粗多糖、维生素C、Na、Ca、Fe、Cu、Zn、Mn),并建立了香菇营养品质综合评价函数和香菇营养品质综合评分9级标准。本研究为香菇营养品质评价提供了一定的数据支持和方法。

关键词：香菇营养品质多元统计分析灰色关联度分析

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热胁迫对双孢蘑菇抗氧化酶及热激蛋白基因的差异表达的影响

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菌物学报 2021年第3期40卷 616-625页

作者：郝海波黄建春王倩隽加香肖婷婷宋晓霞陈辉张津京上海市农业科学院食用菌研究所上海市农业遗传育种重点开放实验室农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海201403

抗氧化酶和热激蛋白是双孢蘑菇Agaricus bisporus抵御逆境胁迫的重要蛋白,高温胁迫下菌丝会通过二者基因的差异表达来减少对自身的损伤。通过对双孢蘑菇菌丝进行40℃热胁迫处理0-120min后发现,随着热胁迫时间延长,菌丝生长速度降低、气... 详细信息

抗氧化酶和热激蛋白是双孢蘑菇Agaricus bisporus抵御逆境胁迫的重要蛋白,高温胁迫下菌丝会通过二者基因的差异表达来减少对自身的损伤。通过对双孢蘑菇菌丝进行40℃热胁迫处理0-120min后发现,随着热胁迫时间延长,菌丝生长速度降低、气生菌丝增多和菌丝分叉明显。转录组分析抗氧化酶和热激蛋白基因差异表达发现,在热胁迫30-60min时抗氧化酶基因gpx、ppo3和cat3与热激蛋白基因hsp、hsp70-1和hsp70-17上调表达明显,而在90-120min时抗氧化酶基因ppo1、ppo2和cat2与热激蛋白基因hsp16、hsp70-14、hsp70-3和hsp70-16上调表达明显。跟踪抗氧化酶活性发现,热胁迫能激活过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD),使酶活性提高2-3倍;同时热胁迫降低了超氧化物歧化酶(SOD)酶活性,而对多酚氧化酶(PPO)影响不明显。此外,研究还发现热胁迫能使双孢蘑菇积累更多的超氧阴离子氧化自由基(O^(2-)),从而对菌丝造成损伤。因此,双孢蘑菇在热胁迫过程中可以通过启动不同的抗氧化酶和热激蛋白基因表达来抵御高温胁迫对菌丝造成的损伤,其中CAT和POD可能起到主要清除氧化自由基的作用,对双孢蘑菇耐高温基因的初步研究为选育耐高温品种奠定基础。

关键词：双孢蘑菇抗氧化酶热激蛋白差异表达

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不同栽培基质对银耳子实体分级醇沉粗多糖结构特征及活性的影响

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菌物学报 2025年第4期44卷 108-122页

作者：叶宇航陈万超吴迪刘朋张忠李文王元凤杨焱上海市农业科学院食用菌研究所农业农村部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海201403 上海师范大学生命科学学院上海200234

以本草(BC)基质、棉籽壳(MZK)基质栽培的福建古田银耳及段木(DM)基质栽培的四川通江银耳子实体为研究对象,采用50%、70%乙醇分级醇沉,得到BC-50、BC-70、MZK-50、MZK-70、DM-50、DM-70共6个粗多糖组分。对不同基质来源的粗多糖组分中多... 详细信息

以本草(BC)基质、棉籽壳(MZK)基质栽培的福建古田银耳及段木(DM)基质栽培的四川通江银耳子实体为研究对象,采用50%、70%乙醇分级醇沉,得到BC-50、BC-70、MZK-50、MZK-70、DM-50、DM-70共6个粗多糖组分。对不同基质来源的粗多糖组分中多糖含量、蛋白质含量、糖醛酸含量、分子量分布、单糖组成、抗氧化活性和免疫活性进行了分析研究。结果表明,DM-70组分的多糖含量最高为(80.68±0.23)%,BC-70组分的得率最高为14.27%,BC-50组分糖醛酸含量最高为(21.04±0.35)%;本草银耳70%醇沉多糖的分子量分布较小为8.098×10^(4)Da,段木银耳50%醇沉多糖的分子量分布最大为2.184×10^(6)Da。50%醇沉多糖组分主要由岩藻糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和葡萄糖醛酸组成,70%醇沉多糖组分主要由岩藻糖、木糖、甘露糖和葡萄糖醛酸组成。体外抗氧化和免疫活性表明,在作用浓度为2 mg/mL时本草银耳50%醇沉多糖组分对DPPH和ABTS的自由基清除率较高,体外刺激巨噬细胞释放NO实验表明,本草银耳粗多糖组分体外刺激巨噬细胞释放NO的能力最强。体外对UVB损伤HSF细胞的修复活性试验表明,BC-70组分对HSF细胞免受UVB的损伤效果最好。研究结果为银耳加工原料的选择及根据目标活性组分选择合适栽培基质提供了理论参考。

关键词：栽培基质分级醇沉结构特性抗氧化活性体外免疫活性

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利用转录组分析茉莉酸甲酯对金针菇原基生长的影响

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食用菌学报 2022年第3期29卷 1-9页

作者：李玉朱秋瑾李巧珍陆欢王瑞娟杨慧尚晓冬刘建雨上海市农业科学院食用菌研究所农业农村部应用真菌资源与利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室上海201403

按照工厂化生产模式栽培金针菇(Flammulina filiformis),搔菌后在栽培料表面喷洒茉莉酸甲酯,以喷洒蒸馏水为对照,利用转录组分析茉莉酸甲酯对金针菇原基生长的影响。结果表明:与对照组相比,茉莉酸甲酯组原基出现时间提前,原基发育更快;... 详细信息

按照工厂化生产模式栽培金针菇(Flammulina filiformis),搔菌后在栽培料表面喷洒茉莉酸甲酯,以喷洒蒸馏水为对照,利用转录组分析茉莉酸甲酯对金针菇原基生长的影响。结果表明:与对照组相比,茉莉酸甲酯组原基出现时间提前,原基发育更快;茉莉酸甲酯组与对照组的差异表达基因有413个,其中上调表达基因233个,下调表达基因180个。GO功能富集分析表明,上调的差异表达基因主要富集于苯丙烷生物合成、肉桂酸生物合成、L-苯丙氨酸代谢等过程,下调的差异表达基因主要富集于二磷酸核苷代谢、己糖代谢、单糖代谢、糖酵解等过程。KEGG代谢途径富集分析表明,差异表达基因主要富集于糖酵解/糖异生、氨基酸代谢和能量代谢等过程。

关键词：金针菇茉莉酸甲酯原基转录组分析差异表达基因功能富集分析

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基于CRISPR/Cas9的蛹虫草无抗性标记转化技术的构建

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菌物学报 2022年第7期41卷 1044-1054页

作者：李波邹根周思池尹昕杨占山鲍大鹏李晓玲汪滢长春工业大学化学与生命科学学院吉林长春130012 梧州学院食品与制药工程学院广西梧州543002 上海市农业科学院食用菌研究所食用菌工程技术研究中心农业部南方食用菌资源利用重点实验室上海201403

传统的真菌遗传改造方法需要抗性标记,但目前可使用的抗性标记基因非常有限,导致蛹虫草遗传改造面临着抗性基因数量不足的问题,且尚未能实现多个目的基因的连续敲入或敲除,因此在蛹虫草中建立高效的无抗性标记转化技术显得尤为重要。本... 详细信息

传统的真菌遗传改造方法需要抗性标记,但目前可使用的抗性标记基因非常有限,导致蛹虫草遗传改造面临着抗性基因数量不足的问题,且尚未能实现多个目的基因的连续敲入或敲除,因此在蛹虫草中建立高效的无抗性标记转化技术显得尤为重要。本研究利用CRISPR/Cas9技术对蛹虫草的Cmura5基因进行编辑,通过内源5S-1、5S-2和U6启动子对gRNA进行转录,结果表明使用U6启动子对Cmura5基因的编辑效率达到了100%。在尿嘧啶缺陷型菌株Cmura5–中,回补野生型Cmura5基因可实现正向选择,即野生型菌株可以在基础培养基上生长。利用设计的同源臂对Cmura5基因进行回收,可以实现反向选择,即野生型在含有5-氟乳清酸培养基中生长受到抑制。以尿嘧啶缺陷型Cmura5–为出发菌株,利用无抗性标记转化技术,导入一个重组质粒效率为75%;连续导入2个重组质粒效率为80%;连续导入3个重组质粒效率为100%;连续导入4个重组质粒效率为50%,平均转化效率为75.7%,每一轮的标记回收率均在100%,实现了4个外源基因在蛹虫草中同时表达。

关键词： CRISPR/Cas9 蛹虫草无抗性标记 ura5 营养缺陷型标记

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基于电子舌、分子互作与分子对接联用技术的鲜味肽呈味特征评价及分子机制解析

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食品科学技术学报 2025年第03期 102-111页

作者：陈万超李文吴迪张忠李佳霖杨焱上海市农业科学院食用菌研究所/农业农村部南方食用菌资源利用重点实验室/国家食用菌工程技术研究中心

为探究鲜味多肽呈味特征及其与鲜味受体相互作用机制，以5种大球盖菇鲜味肽（EP-6、SG-7、PH-5、SE-6、ES-7）为研究对象，采用感官评定、电子舌分析、表面等离子体共振（SPR）分子互作技术及分子对接联用技术，系统评价了5种鲜味肽的... 详细信息

为探究鲜味多肽呈味特征及其与鲜味受体相互作用机制，以5种大球盖菇鲜味肽（EP-6、SG-7、PH-5、SE-6、ES-7）为研究对象，采用感官评定、电子舌分析、表面等离子体共振（SPR）分子互作技术及分子对接联用技术，系统评价了5种鲜味肽的鲜味强度并解析其与鲜味受体分子的作用机理。通过感官评分（0～10）与滋味稀释分析发现，EP-6与ES-7鲜味评分最高，分别为6.90±0.88、6.70±0.95,阈值分别为0.178 mmol/L和0.167 mmol/L,低于0.3 mg/mL谷氨酸钠（MSG）的阈值（1.774 mmol/L）。电子舌主成分分析结果显示，前两个主成分累积贡献率达91.8%,EP-6与ES-7鲜味强度接近质量分数为0.1%的MSG的鲜味强度，且与感官评定结果一致。SPR动力学分析表明，ES-7与T1R3-VFD受体结合亲和力最强(KD=1.471×10-6mol/L),结合解离速率呈“快上快下”特征；分子对接结果进一步揭示，EP-6与SG-7的对接能量最低，分别为-436.52、-397.81 kJ/mol,其稳定性依赖于ASN68、GLU45、HIS278等关键残基的氢键与疏水作用。此外，含硫氨基酸Cys等通过巯基作用延长鲜味感知，与感官评定的味感绵长特征相印证。通过电子舌、分子互作与分子对接多技术联用构建鲜味肽综合快速评价体系，可突破传统感官评定主观局限，明确鲜味受体结合域核心结合位点，并揭示含硫氨基酸对鲜味持久性的调控作用。研究旨在为天然鲜味增强剂的理性设计与高值化应用，以及食品风味精准调控技术的开发提供分子层面的理论依据。

关键词：鲜味肽分子互作表面等离子体共振分子对接鲜味受体 T1R3

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大球盖菇菌渣原位还田对土壤有机质、酶活力及细菌多样性的影响

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食用菌学报 2022年第1期29卷 27-35页

作者：洪琦赵勇陈明杰黄建春冯志勇陈辉张津京上海市农业科学院食用菌研究所农业农村部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点实验室上海201403 上海海洋大学食品学院上海201306

大球盖菇(Stropharia rugosoannulata)具有高效转化稻秸秆的能力,可以将秸秆转化为植物和土壤微生物可利用的营养物质。为了深入研究大球盖菇菌渣原位还田的作用,在利用稻秸秆栽培大球盖菇后,菌渣就地还田,考察其对土壤有机质、土壤中... 详细信息

大球盖菇(Stropharia rugosoannulata)具有高效转化稻秸秆的能力,可以将秸秆转化为植物和土壤微生物可利用的营养物质。为了深入研究大球盖菇菌渣原位还田的作用,在利用稻秸秆栽培大球盖菇后,菌渣就地还田,考察其对土壤有机质、土壤中几种重要酶的酶活和土壤细菌多样性影响的变化规律。结果表明:大球盖菇菌渣原位还田后土壤中有机质含量显著提高;与未种植大球盖菇的土壤(对照组)相比,种植过大球盖菇的土壤(处理组)中蔗糖酶、多酚氧化酶、过氧化氢酶和脲酶的活力均显著提高;对土壤细菌多样性分析发现,处理组土壤中细菌多样性水平提高,但占比超过1%丰度的细菌群落总比例呈下降趋势;土壤中细菌优势菌群发生了变化,在对照组中,Acidobacteria、Nitrospira、Nitrosomonadaceae、Latescibacteria、H16、Gaiella、NB1-j、Gaiellales、TK10、Actinobacteria、Bacteria、S085、JG30-KF-CM45、11-24为优势菌群;在处理组中,Anaerolineaceae、Ardenticatenia、KD4-96、Xanthomonadales、Pseudarthrobacter、43F-1404R、Geobacter、Sphingomonas、Bacillus、SBR2076、Variibacter、Caldilineaceae、Bryobacter、Saocharibacteria为优势菌群。

关键词：大球盖菇菌渣原位还田有机质酶活细菌多样性

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双孢蘑菇对高温胁迫的响应及耐热机理

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菌物学报 2021年第6期40卷 1400-1412页

作者：王倩黄建春卜乐男郝海波隽加香肖婷婷陈辉张津京上海市农业科学院食用菌研究所上海市农业遗传育种重点开放实验室农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海201403

本研究以双孢蘑菇Agaricus bisporus工厂化菌株A15和筛选得到的耐高温菌株A15-TH为研究对象,比较了高温胁迫对两个菌株菌丝生长的影响,并从氧化损伤修复及基础碳代谢-糖酵解途径两个角度探索双孢蘑菇对高温胁迫的响应及耐热机理。高温... 详细信息

本研究以双孢蘑菇Agaricus bisporus工厂化菌株A15和筛选得到的耐高温菌株A15-TH为研究对象,比较了高温胁迫对两个菌株菌丝生长的影响,并从氧化损伤修复及基础碳代谢-糖酵解途径两个角度探索双孢蘑菇对高温胁迫的响应及耐热机理。高温胁迫下,对照菌株A15的菌丝生长速度降低,菌丝分叉增加;而耐高温菌株A15-TH菌丝生长速度高于A15,菌丝形态优于对照菌株,表现出对高温具有一定的耐受性。对两个菌株高温胁迫下氧化损伤及抗氧化酶系统进行研究发现,高温胁迫30-90min导致对照菌株A15的三磷酸腺苷(ATP)含量下降54.4%-59.6%,线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ活性升高,超氧阴离子(O2-)含量增加了34.9%-71.3%;此外高温胁迫降低了超氧化物歧化酶(SOD)的活性,影响了O2-的清除效率。耐高温菌株在受到高温胁迫后的氧化损伤及氧化修复效果与对照菌株不同,一方面体现在正常状态下维持较低的细胞能量代谢和较高的ROS合成量;另一方面抗氧化系统中sod1、sod2、cat1与对照菌株相比有不同程度的上调,SOD和过氧化氢酶(CAT)活性增强,可以更有效地清除过量的活性氧,减轻高温对菌丝的氧化损伤。尤其在高温胁迫120min时,A15的线粒体功能及抗氧化系统受到严重损伤,线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ活性和CAT活性大幅度下降,但是A15-TH线粒体复合体Ⅰ、Ⅲ活性分别增加至正常状态下的1.4倍和8.9倍,CAT活性比对照菌株高128%,维持了正常的线粒体功能及对活性氧的有效清除。进一步研究发现高温胁迫下,双孢蘑菇菌丝的己糖激酶和丙酮酸激酶活性增加,糖酵解途径加快;耐高温菌株A15-TH在正常状态下和高温胁迫下,己糖激酶和丙酮酸激酶的活性均高于对照菌株A15,具有更活跃的碳代谢。

关键词：双孢蘑菇高温胁迫线粒体氧化损伤修复糖酵解

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不同氮含量对大球盖菇菌丝生长和碳氮代谢相关酶活性及基因表达的影响

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食用菌学报 2024年第2期31卷 10-18页

作者：张津京卓馨怡冀浩郝海波岳一鸿王倩肖婷婷陈辉上海市农业科学院食用菌研究所农业农村部应用真菌资源与利用重点开放实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室上海201403 南京农业大学生命科学学院江苏南京210014 上海海洋大学食品学院上海201499

通过研究液体培养时不同氮含量(0.4%、0.6%、0.8%、1.0%、1.2%、1.4%)对菌丝生长、碳氮代谢相关酶活性及基因表达的影响,筛选大球盖菇(Stropharia rugosoannulata)菌丝生长最适氮源。结果表明:豆粕粉是大球盖菇菌丝生长最适氮源。氮含量... 详细信息

通过研究液体培养时不同氮含量(0.4%、0.6%、0.8%、1.0%、1.2%、1.4%)对菌丝生长、碳氮代谢相关酶活性及基因表达的影响,筛选大球盖菇(Stropharia rugosoannulata)菌丝生长最适氮源。结果表明:豆粕粉是大球盖菇菌丝生长最适氮源。氮含量为0.6%时,菌丝生长速度最快。在实验范围内,对照(氮含量为0)的亚硝酸盐还原酶活性较高,1.2%氮含量的天冬酰胺合成酶活性较高,0.6%氮含量的谷氨酸合酶活性最高;0.6%氮含量的内切β-1,4-葡聚糖酶活性最高,β-1,3-葡聚糖酶活性较高;0.6%氮含量的谷氨酸合酶基因表达量最高,1.2%氮含量的谷氨酸脱氢酶基因表达量较高;对照的β-1,3-葡聚糖酶基因和半纤维素酶基因表达量均最高。研究结果可为大球盖菇液体菌种开发和应用提供参考。

关键词：大球盖菇氮源纤维素酶基因表达

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