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中国食用菌 2024年第2期43卷 68-75页

作者：李晓晖盖舒萍汪雯翰琚建伟张守兵丁保安李燕贾薇上海海洋大学食品学院上海201306 上海市农业科学院食用菌研究所/农业农村部南方食用菌资源利用重点实验室/国家食用菌工程技术研究中心/国家食用菌加工技术研发分中心上海201403 上海彤颜实业有限公司上海201417 上海国森生物科技有限公司上海201403

通过原生质体单核化技术获得樟芝单核体,基于内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列进行鉴定,采用14个引物对简单重复序列区间(inter-simple sequence repeats,ISSR)进行多态性扩增,筛选条带清晰、重复性好的引物用于樟芝... 详细信息

通过原生质体单核化技术获得樟芝单核体,基于内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列进行鉴定,采用14个引物对简单重复序列区间(inter-simple sequence repeats,ISSR)进行多态性扩增,筛选条带清晰、重复性好的引物用于樟芝单核体的交配型鉴定。结果表明,通过原生质体单核化技术获得31个樟芝单核体,经ITS序列分析确定获得的单核体为樟芝。以单核体S2、S10、S14、S27的DNA为模板,对14条ISSR引物进行初步筛选,得到4个条带清晰、重复性好的引物P7、P9、P21、P25用于交配型鉴定。单核体S9和S25为同一交配型,两者与S2为不同交配型,通过镜检进一步验证S9、S25可以与S2形成具有锁状联合的双核菌株。该方法可明显缩短樟芝单核体交配型的鉴定时间。

关键词：樟芝单核体交配型 ISSR ITS

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猴头菌多糖合成关键基因A6180的克隆和异源表达

猴头菌多糖合成关键基因A6180的克隆和异源表达

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中国食品科学技术学会第十七届年会

作者：任鄄宝邹根张赫男吴迪张忠李文杨焱上海海洋大学食品学院上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

猴头菌（Hericium erinaceu）是我国著名的珍贵食药兼用菌,其主要的生物活性成分是猴头菌多糖,具有免疫调节、抗癌、降血脂和保护胃黏膜等多种功效。基于猴头菌三代全基因组测序和多糖的差异多组学分析结果,对一株高产多糖的猴头菇突变... 详细信息

猴头菌（Hericium erinaceu）是我国著名的珍贵食药兼用菌,其主要的生物活性成分是猴头菌多糖,具有免疫调节、抗癌、降血脂和保护胃黏膜等多种功效。基于猴头菌三代全基因组测序和多糖的差异多组学分析结果,对一株高产多糖的猴头菇突变株的关键基因进行挖掘,发现编码UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因A6180在突变株中显著上调,可能和猴头菇多糖高产有关。为了验证该基因在多糖合成过程中的关键功能,在对其编码序列进行密码子优化后,分别在大肠杆菌和酿酒酵母中进行异源过表达来验证其酶学性质及生物学功能,为在猴头菌中进行过表达获得高产多糖菌株奠定基础。在大肠杆菌中异源表达的重组蛋白经过纯化后进行对其酶学特性进行测定,可以高效地将UDP-葡萄糖转化成UDP-半乳糖,相关酶活达（1.107±0.07） U/mg,证实了此目的基因发挥着UDP-葡萄糖-4-差向异构酶活性。同时在酿酒酵母中的异源表达的结果也初步验证了该基因对猴头菇活性多糖结构和功能有着关键作用。本研究利用分子生物学技术进行高产多糖优势菌株关键基因进行功能表征,为猴头菇生物活性多糖合成途径的解析奠定基础。

关键词：猴头菌活性多糖异源表达 UDP-葡萄糖-4-差向异构酶

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香菇添加剂重金属含量检测与分析

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上海蔬菜 2017年第2期 78-79页

作者：李玉刘四海尚晓冬宋春艳杨慧谭琦周峰上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室上海市农业遗传育种重点开放实验室上海奉贤201403 湖北炎帝农业科技股份有限公司湖北随州431500

我们收集了9种市场占有率较高的香菇添加剂产品,检测4种食用菌常见重金属污染元素铅(Pb)、汞(Hg)、镉(Cd)、砷(As)的含量,并参考《饲料卫生标准》做出简单判断,除香菇添加剂E的砷含量有超标风险外,其他检测数值均较低,重金属污染风险较小。

关键词：香菇添加剂重金属检测

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4℃处理下草菇生理指标与耐低温胁迫相关性研究

4℃处理下草菇生理指标与耐低温胁迫相关性研究

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中国菌物学会2023年学术年会

作者：郑婷婷万佳宁龚明石胜茸杨瑞恒王瑞娟汪滢上海市农业科学院食用菌研究所农业农村部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海海洋大学食品学院

为了研究生理指标与草菇耐低温胁迫相关性,对经4℃筛选的3个菌株(VC1、VC3、VC4菌株)以及草菇V23菌株进行菌株鉴定、系统分类、生长形态、生长速率试验,并测定菌丝4℃处理下的生理指标。结果表明:VC1、VC3和VC4分别为云芝Trametes versi... 详细信息

为了研究生理指标与草菇耐低温胁迫相关性,对经4℃筛选的3个菌株(VC1、VC3、VC4菌株)以及草菇V23菌株进行菌株鉴定、系统分类、生长形态、生长速率试验,并测定菌丝4℃处理下的生理指标。结果表明:VC1、VC3和VC4分别为云芝Trametes versicolor、乳白原毛平革菌Phanerochaete sordida、毛栓菌Trametes hirsuta,其中VC系列与草菇V23分别位于同一腐生担子菌演化支的木腐和草腐类群。VC系列均能够在4℃生长,其中VC1长势最好;VC1和草菇V23在15-32℃的生长形态和生长速率最为相似。4℃处理0-32h只有VC1表现出较低的β-葡萄糖苷酶抑制活力,而V23则表现出明显的波动。组平均距离分析表明VC1和V23的β-葡萄糖苷酶序列的相似性最高。与下降的VC1总糖含量相比,4℃处理下的V23总糖含量显著上升;V23多糖含量下降比例高达20.97%,远高于VC1的14.69%。这就暗示4℃处理下V23较高的β-葡萄糖苷酶活力促进细胞壁多糖降解成单糖,导致了总糖含量的上升。以上结果提示β-葡萄糖苷酶的活力和总糖含量可能与草菇耐低温胁迫负相关。

关键词：草菇耐低温菌株生长形态 β-葡萄糖苷酶总糖

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灵芝子实体中三萜类物质抗氧化活性的谱效关系

灵芝子实体中三萜类物质抗氧化活性的谱效关系

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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：杨妍张劲松汪雯翰上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验上海海洋大学食品学院

灵芝(Ganoderma lingzhi)为担子菌门、伞菌纲、多孔菌科灵芝真菌,是我国重要的药用真菌之一,已有2000多年的记载和利用历史。灵芝的抗氧化清除自由基作用一直是受到学术界关注的研究课题,自由基是细胞代谢过程中产生的活性物质,自由基... 详细信息

灵芝(Ganoderma lingzhi)为担子菌门、伞菌纲、多孔菌科灵芝真菌,是我国重要的药用真菌之一,已有2000多年的记载和利用历史。灵芝的抗氧化清除自由基作用一直是受到学术界关注的研究课题,自由基是细胞代谢过程中产生的活性物质,自由基可以造成Aβ(Amyloidβ-protein,Aβ)沉积及微管相关蛋白tau蛋白(microtubule-associated protein tau,tau)的磷酸化,会进一步使AD(Alzheimer's disease,AD)大脑中的氧化还原反应失衡,而过多的Aβ沉积及Tau蛋白高度磷酸化则造成严重脑部损伤。目的研究灵芝三萜特征图谱和抗氧化活性的相关性,探讨灵芝三萜抗氧化活性的物质基础,并筛选活性色谱峰。方法在以HPLC法建立灵芝指纹图谱分析方法的基础上,采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl, DPPH)法测定灵芝样品抗氧化活性,运用偏最小二乘回归分析,将灵芝醇提物抗氧化活性与指纹图谱共有峰的峰面积相关联,并结合三萜标准品在HPLC上进样,匹配活性色谱峰,研究灵芝抗氧化作用的物质基础及谱效关系。结果从27个匹配特征峰中筛选出S9、S10与灵芝清除DPPH自由基能力呈显著正相关,并通过与对照品比对确定了S9为灵芝酸B、S10为灵芝酸LM2。结论灵芝抗氧化活性指纹图谱在乙醇提取物基础上建立,不但可系统表征该灵芝复方成分-药效的相关性,也可准确追踪并分离药理活性部位,为灵芝药材资源的质量控制及进一步开发利用奠定基础。

关键词：灵芝高效液相色谱指纹图谱 DPPH清除活性谱效关系

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中国灵芝研究的问题、进展和前景

中国灵芝研究的问题、进展和前景

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2013年灵芝产品研究与开发学术研讨会

作者：张劲松 Hua Fan Werner Reutter 唐庆九贾薇唐传红刘艳芳杨焱周帅冯娜汪文瀚夏洛特医学院生物化学和分子生物学研究所德国上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海 201403

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高效液相色谱法测定葛仙米水溶性多糖含量

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上海农业学报 2020年第1期36卷 105-110页

作者：苏攀峰唐庆九陈盛赵立彬王玉兰刘艳芳周帅许剑锋上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 上海海洋大学食品学院上海201306 上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心上海201306 湖南炎帝生物工程有限公司株洲412000

通过建立高效液相法(HPLC)测定葛仙米水溶性多糖含量的方法,对HPLC测定葛仙米水溶性多糖含量的方法学进行考察。以纯化的葛仙米多糖为标准品,应用HPLC对经过不同预处理的葛仙米水溶性多糖进行含量测定。结果表明:选择柱型为TSKgel G6000... 详细信息

通过建立高效液相法(HPLC)测定葛仙米水溶性多糖含量的方法,对HPLC测定葛仙米水溶性多糖含量的方法学进行考察。以纯化的葛仙米多糖为标准品,应用HPLC对经过不同预处理的葛仙米水溶性多糖进行含量测定。结果表明:选择柱型为TSKgel G6000 PWXL液相色谱分析柱的效果较好,标准品的定量上、下限分别为10mg/mL和0.078625mg/mL;标准溶液浓度(Y)在0.15625~5mg/mL范围内,峰面积与进样量(X)呈良好的线性关系,线性方程Y=1995695.548X-170.597、R^2=0.999;精密度、重复性和稳定性的RSD分别为1.59%、1.13%、2.56%,平均加样回收率为97.8%、RSD为1.72%,说明该方法灵敏度高、重复性和稳定性较好,试验结果可靠,所建方法适用于葛仙米水溶性多糖含量的测定。

关键词：葛仙米水溶性多糖高效液相色谱法含量

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猴头菌β-葡聚糖-壳聚糖纳米颗粒的制备及其体外生物活性研究

猴头菌β-葡聚糖-壳聚糖纳米颗粒的制备及其体外生物活性研究

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第十二届药用真菌学术研讨会

作者：葛梅丽吴迪李文陈万超张忠杨焱上海海洋大学食品学院上海市农业科学院食用菌研究所农业农村部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发中心上海瑞丰农业科技有限公司

生物活性多糖的口服吸收率和生物利用度通常受到其复杂的支化结构和大分子量的限制。为了提高生物活性多糖的综合利用率,人们开发了许多递送系统,如纳米颗粒、纳米囊泡、纳米乳液。葡聚糖和壳聚糖近年来在制备纳米颗粒方面备受关注,而... 详细信息

生物活性多糖的口服吸收率和生物利用度通常受到其复杂的支化结构和大分子量的限制。为了提高生物活性多糖的综合利用率,人们开发了许多递送系统,如纳米颗粒、纳米囊泡、纳米乳液。葡聚糖和壳聚糖近年来在制备纳米颗粒方面备受关注,而葡聚糖的硫酸化是制备纳米颗粒的有效手段,硫酸化葡聚糖-壳聚糖纳米颗粒是由硫酸葡聚糖的硫酸基团与壳聚糖的氨基之间的静电相互作用形成的,这是在不使用外部交联剂的情况下合成纳米粒子的最简单方法之一。本研究采用自组装的方法通过静电相互作用制备硫酸化猴头菌β-葡聚糖-壳聚糖纳米颗粒(Sulfated Hericium erinaceus β-glucan-chitosan nanoparticles, DS-CS NPs),通过单因素试验和响应面分析,以粒径为考察指标,优化DS-CS NPs的制备工艺,并评价最佳工艺下纳米颗粒的粒径、形态以及体外生物活性。结果表明,纳米颗粒最佳制备工艺参数为:硫酸化猴头菌β-葡聚糖(Sulfated Hericium erinaceus β-glucan, DS)浓度为1 mg·mL-1,搅拌速度为800 rpm·min-1,壳聚糖(chitosan, CS)初始p H值为4,DS-CS NPs的粒径在130 nm左右,且分布较窄。DS-CS NPs与DS相比,其体外抗氧化活性有一定的提高,同时,DS-CSNPs对LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7产生NO以及促炎因子TNF-α分泌有明显的抑制作用,并呈浓度依赖性。该研究表明硫酸化猴头菌β-葡聚糖-壳聚糖纳米颗粒具有一定的体外抗氧化和抗炎活性,可望用于药物运载体系。

关键词：硫酸化猴头菌β-葡聚糖纳米颗粒壳聚糖抗氧化活性抗炎活性

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樟芝活性化合物抗非小细胞肺癌活性及作用机制研究

樟芝活性化合物抗非小细胞肺癌活性及作用机制研究

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中国菌物学会2018年学术年会

作者：杨海芮贾薇张劲松张赫男杨焱汪雯翰上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验石河子大学生命科学学院

肺癌在全球癌症死亡率中占据第一位。非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer, NSCLC)在所有类型肺癌中所占比例最大。目前主要用于治疗NSCLC的方法是化疗法,然而,临床使用的化疗药物普遍具有较大的毒副作用,且容易产生耐药性。食药... 详细信息

肺癌在全球癌症死亡率中占据第一位。非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer, NSCLC)在所有类型肺癌中所占比例最大。目前主要用于治疗NSCLC的方法是化疗法,然而,临床使用的化疗药物普遍具有较大的毒副作用,且容易产生耐药性。食药用真菌在东方有着独特的经济和医药价值,其天然组分的活性研究更是深得广大研究学者的青睐。因此,从食药用真菌中提取高效低毒的抗肿瘤活性先导化合物,用以研发新药将是生物医药界学者们研究的热点和难点。樟芝是原产于我国台湾的一种珍稀药用菌,具有多种生理活性,尤其是它卓越的抗肿瘤活性。樟芝中的明星分子,安卓喹诺儿,对NSCLC有很好的抑制作用,目前已进入FDA批准的NSCLC二期临床实验。然而,安卓喹诺儿主要来源于樟芝子实体,由于樟芝依赖生长的牛樟树是珍稀保护树种,且子实体生长极其缓慢,使得其研究成本居高不下,不利于科研的顺利进展。液态深层发酵具有原料来源广泛、成本低廉、生长过程短、操作易控制等优点,从液态发酵产物中分离纯化得到与安卓喹诺儿类似的活性物质,就成为十分值得开发的途径。本研究首先以樟芝液态发酵产物的粗提物为材料,研究其对NSCLC的抑制作用,发现其对NSCLC有较好的抑制作用,可引起S期细胞周期阻滞,诱导细胞发生凋亡。然而,粗提物是混合物,包含着许多成分不明的活性物质,很难从中发现发挥主要作用的活性单体物质。因此,后续研究采用实验室前期分离得到的两种单体化合物By-1和Antrodin C进行抗肺癌活性评价,并进一步探究其作用机制。其中,By-1主要来源于发酵液,Antrodin C主要来源于发酵菌丝体。通过对细胞迁移、细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡及凋亡相关蛋白、细胞自噬等检测来评价By-1和Antrodin C的抗肺癌活性,并探究自噬和凋亡的交互式调控是否参与抗肺癌活性中,进一步探究作用的信号通路。实验发现,By-1和Antrodin C均对非小细胞肺癌SPCA-1细胞株有较好的抑制作用,其作用机制主要是由于引起S期细胞周期阻滞,上调P53蛋白,P53参与ROS和Bcl-2介导的线粒体细胞凋亡途径,进一步引起Caspase家族的级联反应,促进凋亡执行因子Caspase-3的释放,进而诱导细胞凋亡。通过检测自噬性结构,自噬流的发生以及自噬标记蛋白LC3 II表达和LC3 I向LC3 II转变,发现By-1和Antrodin C可诱导SPCA-1细胞发生自噬。并进一步发现自噬发生是通过下调Akt/mTOR通路来介导的。通过自噬抑制剂和自噬激活剂处理细胞,对细胞增殖的检测,发现自噬在By-1和Antrodin C的抗肺癌活性中起保护性作用。将促凋亡化合物和抑制自噬化合物联用,将明显增加对肿瘤细胞的抑制能力,这可能为NSCLC治疗提供一条新思路。肺癌细胞中存在多种类型的基因突变,其中EGFR突变占到了总突变类型的一半以上。有数据表明,对EGFR突变型肺癌,采用靶向性治疗的方法,能达到更好的效果,且预后良好。通过对EGFR突变型细胞株HCC827细胞进行细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的相关检测,发现By-1和Antrodin C可以抑制该细胞增殖,将细胞阻滞在S期,并能诱导细胞发生凋亡。本研究采用不同类型的人非小细胞肺癌细胞系探究By-1和Antrodin C的抗肺癌活性及其分子机制,发现By-1和Antrodin C对NSCLC有较好的抑制作用,其作用机制是由于凋亡和自噬的交互式调控所致。由此可见,By-1和Antrodin C都有可能发展成为潜在的抗肺癌治疗的化疗药物,这也为后续的深入研究提供了理论依据。

关键词：樟芝非小细胞肺癌细胞凋亡细胞自噬

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樟芝发酵液中抗肿瘤活性物质的研究

樟芝发酵液中抗肿瘤活性物质的研究

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中国菌物学会第六届会员代表大会（2014年学术年会）暨贵州省食用菌产业发展高峰论坛

作者：贾薇白岩岩张劲松上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室河南农业大学生命科学学院

分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇等对樟芝发酵液进行萃取,对四个萃取相提取物的体外生物活性进行了研究,细胞实验显示樟芝发酵液提取物具有体外抗肿瘤、免疫调节、抗衰老以及抗氧化等的生物活性,其中抗肿瘤活性最为显著。对抗肿... 详细信息

分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇等对樟芝发酵液进行萃取,对四个萃取相提取物的体外生物活性进行了研究,细胞实验显示樟芝发酵液提取物具有体外抗肿瘤、免疫调节、抗衰老以及抗氧化等的生物活性,其中抗肿瘤活性最为显著。对抗肿瘤活性较强的氯仿相和乙酸乙酯相采用硅胶吸附色谱法进行分离,由氯仿相获得得到化合物Ⅰ和化合物Ⅱ。采用HNMR,C NMR以及高分辨质谱等现代光谱技术,进行结构鉴定,确定化合物Ⅰ为新化合物,命名为3-isobutyl-1-methoxy-4-(4-(3-methylbut一2-enyloxy)phenyl)-1H-pyrrole-2,5-dione,化合物Ⅱ为5-羟甲基呋喃甲醛。两个化合物具有很好的体外抗肿瘤活性。

关键词：樟芝发酵液抗肿瘤活性

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