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上海农业学报 2016年第3期32卷 63-66页

作者：于海龙吕贝贝宋春艳尚晓冬章炉军张美彦谭琦上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 上海市农业科学院生物技术研究所上海201106

以香菇‘申香16'为供试菌株,以硬杂木为主要碳源,研究了以麸皮及玉米粉为主要氮源材料对香菇菌丝生长、发菌、转色、出菇以及产量等指标的影响,试验表明香菇栽培中适量添加玉米粉有利于提高香菇菌丝生长速度,缩短发菌周期,且随着玉... 详细信息

以香菇‘申香16'为供试菌株,以硬杂木为主要碳源,研究了以麸皮及玉米粉为主要氮源材料对香菇菌丝生长、发菌、转色、出菇以及产量等指标的影响,试验表明香菇栽培中适量添加玉米粉有利于提高香菇菌丝生长速度,缩短发菌周期,且随着玉米粉含量的增加,菌丝生长速度呈先增加后减少的趋势,当麸皮含量为14%玉米粉含量为6%时,菌丝生长速度最快;香菇栽培中适量添加玉米粉可以起到增产的效果,但随着玉米粉在复合氮源中比例的增加香菇产量呈递减的趋势,当麸皮含量为18%麸皮玉米粉含量为2%时香菇产量最高。

关键词：香菇氮源生长,产量

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桑黄子实体和菌丝体中次级代谢物的分离纯化和生物活性的研究

桑黄子实体和菌丝体中次级代谢物的分离纯化和生物活性的研究

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中国菌物学会2015年学术年会

作者：杨焱邵倩吴娜冯娜张超汪雯翰张劲松唐传红农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海市农业科学院食用菌研究所

桑黄纤孔菌Inonotus sanghuang Sheng ***,***.&***,俗称桑黄菇、桑耳,是近年来开发的一种寄生于桑树的多年生药用真菌,最早收载于李时珍《本草纲目》中,《药性论》中称桑臣、桑耳。研究发现桑黄中存在一些抗氧化和抗肿瘤的活性成分... 详细信息

桑黄纤孔菌Inonotus sanghuang Sheng ***,***.&***,俗称桑黄菇、桑耳,是近年来开发的一种寄生于桑树的多年生药用真菌,最早收载于李时珍《本草纲目》中,《药性论》中称桑臣、桑耳。研究发现桑黄中存在一些抗氧化和抗肿瘤的活性成分,在治疗癌症、保肝护肝、增强免疫、神经修复等方面有活性作用。对桑黄中次级代谢物的研究已有一些报道,但多以子实体中的为主,菌丝体中报道的较少。对于子实体和菌丝体生长过程中产生的次级代谢物有何差异,目前还鲜有报道,菌丝体的功效是否可替代子实体也尚不明确。本研究以我们收集、保藏并进行分子鉴定的桑黄菌株Inonotus sanghuang为研究对象,分别进行了子实体栽培和液体及固体发酵培养,对栽培子实体和发酵菌丝体中的次级代谢物进行了分离纯化和抑制肿瘤细胞生长、抗氧化、抗衰老及体外降血糖活性研究。分别用等体积的石油醚,氯仿,乙酸乙酯和正丁醇依次萃取桑黄子实体醇提物,得到四种有机溶剂萃取相。以体外修复受损神经细胞和清除自由基能力为指标进行有效部位的筛选。实验结果表明:四个萃取相的抗衰老能力存在一定的差异。其中乙酸乙酯相和正丁醇相的活性要好于其他两个萃取相。乙酸乙酯和正丁醇与损伤的神经细胞之间均有显著性差异(P<0.05)。乙酸乙酯相清除超氧阴离子,过氧化氢和DPPH的IC50值分别为589.17μg/mL,5.60μg/mL,209.00μg/mL。正丁醇相清除三种自由基的IC50值分别为:483.12μg/mL,0.42μg/mL,56.22μg/mL。用硅胶、Sephadex LH-20等柱层析手段对抗衰老活性较高的乙酸乙酯相进行分离纯化,经过柱层析和重结晶反复纯化,得到11个单一化合物。对纯化后的样品进行1H NMR,13C NMR,DEPT,1H-1HCOSY,HMQC等波谱分析并结合相关文献报道数据,鉴定出六种化合物,它们分别为:星鱼甾醇,麦角甾-6,22-二烯-3β,5α,8α-三醇,灵芝醇B,灵芝酸DM,Inoscavin A,麦角甾-7,22-二烯-3β-醇十五烷酸酯。除了灵芝酸DM,其余的化合物对肿瘤细胞K562的生长具有很好的抑制作用。利用液体发酵、木屑固体发酵和米饭固体发酵三种方式培养桑黄菌丝体,对菌丝体醇提物的体外抗氧化、抗肿瘤和抗衰老生物活性进行了研究。结果发现,木屑固体发酵、液体发酵和米饭固体发酵的菌丝体醇提物清除H2O2自由基的IC50值分别为78.28±0.32、27.73±0.57和7.84±0.37μg/mL;米饭培养的桑黄菌丝体醇提物在低浓度500μg/mL下对超氧阴离子自由基清除作用到达80%,在相同的浓度下对DPPH自由基清除率也明显高于其它两种方法,表现出较高的抗氧化活性。木屑以及米饭培养方法得到的菌丝体对PC12神经细胞损伤修复均有较好的效果,液体培养的桑黄菌丝体表现的修复作用较低;液体发酵培养的菌丝体醇提物浓度在100μg/mL时,对肿瘤细胞HepG2的抑制率到达70%,高于其他两种培养方法的抑制作用。采用有机溶剂萃取、硅胶柱分离和高速逆流色谱法对固体发酵培养的桑黄菌丝体中的次级代谢物进行了分离纯化,经硅胶柱分离纯化出6个化合物,利用红外光谱(IR)、紫外光谱(UV),质谱(MS)及核磁共振技术(NMR)对分离纯化出的化合物进行了结构解析。经鉴定其中2个化合物为脂肪酸,其余化合物分别为Ergosterol麦角甾醇,Ergosta-7,22-dien-3β-yl pentadecanoate,原儿茶醛Benzaldehyde,3,4-dihydroxy-,3,4-二羟基苯甲醛;经高速逆流色谱法结合硅胶柱层析纯化出7个化合物,分别为Inoscavin A,24-Ethylcholesta-5,22-dien-3beta-ol,Baicalein,Naringenine-7-rhamnosidoglucoside,Benzaldehyde,3,4-dihydroxy-,3,4-二羟基苯甲醛。对得到的化合物进行了体外抑制肿瘤细胞生长和抗氧化活性实验,结果表明:Benzaldehyde,3,4-dihydroxy-,3,4-二羟基苯甲醛,Inoscavin A,Naringenine-7-rhamnosidoglucoside和Baicalein在抗肿瘤和抗氧化实验中都表现出较好的活性,对K562细胞的抑制作用效果明显。在清除过氧化氢实验中,柚皮苷和黄芩素在浓度80μg/mL时,清除率就达到70%左右。采用细胞来源的二肽基肽酶Ⅳ抑制剂筛选模型对桑黄子实体和菌丝体中分离的化合物进行了体外降血糖活性研究,子实体化合物麦角甾-7,22-二烯-3β-醇十五酸酯和麦角甾-7,-二烯-3β-醇对DPPIV抑制效果最佳;菌丝体化合物中原儿茶醛、柚皮

关键词：桑黄子实体菌丝体发酵培养次级代谢物生物活性

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桑黄活性化合物的分离纯化及抗氧化和降血糖活性的研究

桑黄活性化合物的分离纯化及抗氧化和降血糖活性的研究

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2012年中国菌物学会学术年会

作者：杨焱王钦博冯娜汪雯翰吴娜刘艳芳张劲松农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海市农业科学院食用菌研究所

研究采用四种不同极性的有机溶剂对桑黄（Phellinus Baumii）子实体乙醇提取液依次萃取得到石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相、正丁醇相和醇水相;对五种萃取相分别进行了清除NO自由基、超氧阴离子、羟基自由基、HO自由基、DPPH自由基及还... 详细信息

研究采用四种不同极性的有机溶剂对桑黄（Phellinus Baumii）子实体乙醇提取液依次萃取得到石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相、正丁醇相和醇水相;对五种萃取相分别进行了清除NO自由基、超氧阴离子、羟基自由基、HO自由基、DPPH自由基及还原力测定和抗脂质过氧化实验,结果表明乙酸乙酯相的抗氧化活性均高于其它萃取相。采用硅胶、Sephadex LH-20和聚酰胺等对抗氧化活性较高的乙酸乙酯相继续分离纯化,得到5个单一化合物:PB-EA-1、PB-EA-2、PB-EA-3、PB-EA-4和PB-EA-5。对PB-EA-2、PB-EA-3、PB-nB三种样品进行抗氧化和修复损伤神经细胞实验,结果发现分离得到的化合物PB-EA-3抗氧化活性显著,对其进行核磁共振及质谱等波谱分析并结合相关文献报道数据,解析得到其化学式(CHO)和化学结构。对桑黄醇提物和乙酸乙酯萃取物进行了链脲佐菌素糖尿病小鼠的降血糖实验,结果表明,与模型组相比,给药后第7天,桑黄醇提取物高剂量组和乙酸乙酯萃取物中高剂量组均能明显地降低糖尿病小鼠的空腹血糖（P<0.05）;给药后第14天,桑黄醇提取物中剂量组和乙酸乙酯萃取物低剂量组能明显降低了糖尿病小鼠的空腹血糖（P<0.05）,醇提取物高剂量组和乙酸乙酯萃取物中高剂量组极明显地降低糖尿病小鼠的空腹血糖（P<0.01）和糖化血清蛋白（P<0.01）,增加了血清胰岛素水平（P<0.01）。桑黄醇提物中高剂量组和乙酸乙酯萃取物高中低剂量组的视野平均胰岛面积明显增多,能增大糖尿病小鼠的胰岛体积、增加胰岛细胞数目;胰岛素阳性表达的β细胞增多、胰岛素阳性区域IOD均极明显增加。试验说明桑黄醇提取物和乙酸乙酯萃取物均有降低链脲佐菌素糖尿病小鼠的血糖作用,作用效果与增加胰岛β细胞、提高血清胰岛素水平有关。

关键词：桑黄子实体抗氧化降血糖活性化合物

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香菇单孢杂交及耐高温杂交子的ISSR分析

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微生物学杂志 2015年第4期35卷 35-39页

作者：王丽宁赵妍陈明杰上海海洋大学食品学院上海201306 上海市农业科学院食用菌研究所上海市农业遗传育种重点开放实验室农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海201403

以香菇菌株L135和P18N44为亲本进行单孢杂交,通过显微镜镜检锁状联合以及与亲本的拮抗试验初步获得123个杂交子。以47℃热激3 h后菌丝在PDA培养基中的恢复生长情况进行初筛,菌丝在木屑培养基中经历33℃高温后的恢复长速进行复筛,共筛选... 详细信息

以香菇菌株L135和P18N44为亲本进行单孢杂交,通过显微镜镜检锁状联合以及与亲本的拮抗试验初步获得123个杂交子。以47℃热激3 h后菌丝在PDA培养基中的恢复生长情况进行初筛,菌丝在木屑培养基中经历33℃高温后的恢复长速进行复筛,共筛选获得耐高温杂交子12个。选用8条引物对12个耐高温杂交子和2个亲本进行了ISSR标记分析,结果表明这12株耐高温杂交子与亲本都存在一定的遗传差异,说明与亲本相比杂交子在基因水平上发生了不同程度的重组,是新的香菇耐高温菌株。

关键词：香菇单孢杂交耐高温 ISSR分析

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液态发酵灵芝多糖的优势菌株筛选及定向发酵研究

液态发酵灵芝多糖的优势菌株筛选及定向发酵研究

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第十二届药用真菌学术研讨会

作者：冯杰刘艳芳唐传红张劲松农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海市农业科学院食用菌研究所

灵芝是我国著名的药用真菌,研究历史悠久。灵芝多糖作为灵芝的重要代谢产物之一,具有多种药理活性,因此是众多灵芝产品的主要功效成分和标志性成分,产品中多糖含量的多少会显著影响灵芝产品的质量和市场潜力。从液态发酵原料胞外液和菌... 详细信息

灵芝是我国著名的药用真菌,研究历史悠久。灵芝多糖作为灵芝的重要代谢产物之一,具有多种药理活性,因此是众多灵芝产品的主要功效成分和标志性成分,产品中多糖含量的多少会显著影响灵芝产品的质量和市场潜力。从液态发酵原料胞外液和菌丝体获得多糖具有周期短、可定向产生目标产物和易实现规模化生产等优势,是获取灵芝多糖更有效的途径。然而,我国灵芝种质资源丰富,质量参差不齐,缺少适用于液态发酵的优势菌株。本研究对实验室保藏的41株灵芝菌株进行筛选,分别筛选出高产胞内外多糖的菌株,然后在50L发酵罐中进行放大发酵,进一步探究其液态发酵中多糖的生长变化,为多糖的产业化应用提供科学数据。主要研究结果如下:(1)筛选出液态发酵高产灵芝菌丝体多糖的优势菌株。通过液态发酵的方式对实验室保藏的41株灵芝杂交菌株在菌丝体干重、胞内多糖含量、多糖得率、分子量分布特征和细胞免疫活性等方面进行了系统分析。筛选出菌丝体干重最高的菌株GZ04,菌丝体干重为29.86 g/L,比亲本G0130、G0154分别提高95%、63%;胞内多糖得率最高的菌株GZ02,胞内多糖得率为1.34 g/L,比亲本G0130、G0154分别提高64%、101%。(2)高稳定性液体菌种最优制作工艺研究:通过研究液体菌种制备工艺流程,发现平板培养、初级摇瓶培养、摇瓶制备和发酵罐制备等过程中的影响因素。通过优化平板装液量和选择最佳菌丝体位置,以及初级摇瓶培养时间和还原率,结合人工神经网络和遗传算法优化碳源和氮源浓度,获得最优液体菌种制作工艺参数。在最优条件下,生物量和还原糖得率分别提高18.03%和27.41%。比较不同摇瓶规模和发酵罐制备液体菌种的代谢活力,发现250 mL摇瓶和50 L发酵罐制备的液体菌种最佳,综合生物量和代谢活力考虑,液体菌种选择培养5天。(3)研究胞内高分子量多糖的最优培养基,以灵芝为指标,通过筛选碳源和氮源并探究氮源浓度影响。最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为酵母自溶粉。分子量和含量随氮源浓度升高而增加和下降。BP神经网络结合遗传算法优化得到最佳培养基配方:葡萄糖29.0 g/L、酵母自溶粉4.0 g/L、七水硫酸镁0.3 g/L,优化后含量提高40.8%。(4)研究接种量、通气量和不同规模发酵等因素对灵芝胞内高分子量多糖的影响。最佳接种量为0.5 g/100 mL,通气量为1.0 vvm时菌丝体生物量和多糖含量最高。不同发酵规模下,胞内多糖含量由高到低为250 mL摇瓶、50 L发酵罐和3 L发酵罐。补料方法可提高菌丝体生物量和多糖含量。该方法可减少工业化生产成本并提高底物利用率。

关键词：灵芝液态发酵菌株筛选菌丝体多糖

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草菇VH3菌株及其单孢后代间的差异分析

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生物学杂志 2015年第4期32卷 11-15页

作者：林锋赵妍陈明杰颜素雅王丽宁黄金丽国家食用菌工程技术研究中心农业部南方食用菌资源利用重点实验室上海市农业遗传育种重点开放实验室上海市农业科学院食用菌研究所上海201403 上海海洋大学食品学院上海201306

从菌落形态、菌丝生长速度及RAPD分析等方面，研究草菇菌株VH3及其14个单孢菌株间的生长与遗传差异。研究结果显示，这些供试菌株的菌落形态、菌丝长势、菌丝生长速度存在较大差异；通过RAPD指纹分析，发现VH3及其单孢菌株的遗传相似系... 详细信息

从菌落形态、菌丝生长速度及RAPD分析等方面，研究草菇菌株VH3及其14个单孢菌株间的生长与遗传差异。研究结果显示，这些供试菌株的菌落形态、菌丝长势、菌丝生长速度存在较大差异；通过RAPD指纹分析，发现VH3及其单孢菌株的遗传相似系数在0.50~0.96之间，在基因水平上供试菌株间的遗传差异较大。草菇菌株VH3及其单孢后代的表型与基因型均存在显著性差异，表明VH3菌株借助有性生殖过程获得了丰富的生物学变异。

关键词：草菇表型 RAPD分析遗传差异

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甘露醇对低温下草菇菌丝的保护效应研究

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上海农业学报 2017年第4期33卷 6-9页

作者：陈明杰宋晓霞马丹丹郭力刚赵妍王晨光余昌霞上海市农业科学院食用菌研究所上海市农业遗传育种重点开放实验室农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海201403 上海百信生物科技有限公司上海201403

以草菇菌丝恢复生长情况和基因指纹图谱方法,研究了采用甘露醇溶液低温保藏草菇菌种的效果。结果表明:不耐受低温的草菇菌种在甘露醇溶液的保护下,能够在4℃保藏后快速恢复生长,且10%甘露醇溶液的低温保藏效果要明显优于20%海藻糖溶液;... 详细信息

以草菇菌丝恢复生长情况和基因指纹图谱方法,研究了采用甘露醇溶液低温保藏草菇菌种的效果。结果表明:不耐受低温的草菇菌种在甘露醇溶液的保护下,能够在4℃保藏后快速恢复生长,且10%甘露醇溶液的低温保藏效果要明显优于20%海藻糖溶液;遗传稳定性试验结果显示,经甘露醇低温保藏的草菇菌种的基因指纹图谱未发生改变。

关键词：草菇恢复生长基因指纹图谱低温甘露醇

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低温胁迫下草菇海藻糖磷酸化酶基因表达变化研究

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生物学杂志 2014年第5期31卷 14-18页

作者：李亚鹏陈明杰赵妍汪虹上海海洋大学食品学院上海201306 国家食用菌工程技术研究中心农业部南方食用菌资源利用重点实验室上海市农业遗传育种重点开放实验室上海市农业科学院食用菌研究所上海201403

海藻糖是真菌抵御逆境的重要渗透调节物质之一,其合成与分解受海藻糖磷酸化酶(trehalose phosphorylase,TP)调控。以草菇低温敏感型菌株V23和耐低温型菌株VH3为试验材料,研究了低温胁迫对草菇海藻糖磷酸化酶基因的影响,并比较了海藻糖... 详细信息

海藻糖是真菌抵御逆境的重要渗透调节物质之一,其合成与分解受海藻糖磷酸化酶(trehalose phosphorylase,TP)调控。以草菇低温敏感型菌株V23和耐低温型菌株VH3为试验材料,研究了低温胁迫对草菇海藻糖磷酸化酶基因的影响,并比较了海藻糖磷酸化酶基因在两个菌株中的转录表达差异。实时荧光定量RT-PCR结果显示:耐低温型菌株VH3的TP基因在低温处理2 h时表达量升高,此后逐渐下降,低温敏感型菌株V23的TP基因在整个低温处理过程中一直呈下降趋势,并且在相同低温处理时间下,该基因在VH3中的表达量下降幅度要小于V23中的。初步推测TP基因的高表达与草菇的耐低温能力相关。

关键词：草菇低温海藻糖磷酸化酶基因 RT-PCR

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基于食用菌的固体有机废弃物利用现状及展望

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中国农学通报 2014年第14期30卷 305-309页

作者：于海龙吕贝贝陈辉宋春艳章炉军尚晓冬谭琦上海市农业科学院食用菌研究所/农业部南方食用菌资源利用重点实验室/国家食用菌工程技术研究中心/国家食用菌加工技术研发分中心/上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 上海市农业科学院生物技术研究所上海201403

从现阶段中国固体有机废弃物利用现状出发,结合食用菌自身生长特性以及目前国内食用菌产业的发展现状,讨论了食用菌在固体有机废弃物利用中的可行性、便利性和高效性。从食用菌对动植物生产中废弃物的利用、生物转化率的高低、菌体蛋白... 详细信息

从现阶段中国固体有机废弃物利用现状出发,结合食用菌自身生长特性以及目前国内食用菌产业的发展现状,讨论了食用菌在固体有机废弃物利用中的可行性、便利性和高效性。从食用菌对动植物生产中废弃物的利用、生物转化率的高低、菌体蛋白生产的高效性以及生产食用菌后菌渣的循环利用等方面,证实了食用菌生产能够实现生物链中生物质的多层级高效循环利用。

关键词：固体有机废弃物食用菌高效循环

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工厂化生产条件下猴头菌株品比试验

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中国农学通报 2013年第12期29卷 145-149页

作者：于海龙杨焱吕贝贝李巧珍陈辉马丹丹尚晓冬上海市农业科学院食用菌研究所/农业部南方食用菌资源利用重点实验室/国家食用菌工程技术研究中心/国家食用菌加工技术研发分中心/上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 上海市农业科学院生物技术研究所上海201403

为了筛选出适合工厂化周年生产要求的猴头菇菌株,为工厂化生产提供生产用种,以11株不同来源的猴头菌株为试验材料,以菌丝生长速度、菌丝拮抗情况、工厂化生长条件下栽培周期、子实体形态、菌刺形状以及产量等为筛选指标,观察各菌株的菌... 详细信息

为了筛选出适合工厂化周年生产要求的猴头菇菌株,为工厂化生产提供生产用种,以11株不同来源的猴头菌株为试验材料,以菌丝生长速度、菌丝拮抗情况、工厂化生长条件下栽培周期、子实体形态、菌刺形状以及产量等为筛选指标,观察各菌株的菌丝生长特性以及工厂化生产条件下栽培出菇情况。结果表明,通过试验发现在相同的试验条件下各菌株的菌丝生长速度、菌丝拮抗情况、工厂化生长条件下的栽培周期、子实体形态、菌刺形状以及产量等指标有较大差别;其中0608菌株的菌丝生长速度最快;0605菌株的产量最高并且生长周期相对较短,最适用于工厂化条件下;刺长猴头的畸形率最低、子实体颜色和菇型最好但其生长周期最长。食用菌工厂化栽培与传统大棚式栽培对生产菌株的要求有很大差异,通过本试验的筛选0605菌株最适宜于工厂化生产;刺长猴头菌株可以作为工厂化猴头菇菌株育种的优良母本。其中0605菌株菌丝在PDA平板上的生长速度达到了0.2865cm/d,生产周期可以控制在60天以内(采收两批子实体),产量达到了217.52g/袋。

关键词：猴头菌丝特性工厂化栽培产量品比试验

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