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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：万佳宁杨瑞恒陈洪雨周陈力郭婷陈明杰汪虹鲍大鹏上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

草菇(Volvariella volvacea)又名中国蘑菇(Chinese mushroom)。进入1970年代,草菇栽培产业得到较快发展,但草菇育种研究进展一直比较缓慢,其中一个主要原因是对草菇有性生殖方式这一重要遗传背景还存在较大争议。本研究运用Steedman’s ... 详细信息

草菇(Volvariella volvacea)又名中国蘑菇(Chinese mushroom)。进入1970年代,草菇栽培产业得到较快发展,但草菇育种研究进展一直比较缓慢,其中一个主要原因是对草菇有性生殖方式这一重要遗传背景还存在较大争议。本研究运用Steedman’s wax包埋切片法制备了草菇子实体不同发育时期(小纽扣期、大纽扣期、蛋形期、伸长期、破膜期和开伞期)的菌褶切片并运用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察了担子细胞核相变化情况。结果表明该方法可清晰观察到草菇担子细胞中核相以及在减数分裂中的变化、担子上孢子幼体、孢子梗、囊状体和孢子内细胞核等结构。草菇子实体小纽扣期细胞核成对进入担子细胞中;在大纽扣和蛋形期担子细胞基部发生核融合;伸长期、破膜期和开伞期的担子细胞内可观察到符合减数分裂特征的细胞核分裂前期Ⅰ、末期Ⅰ、前期Ⅱ和间期Ⅱ。通过对草菇担子细胞内细胞核减数分裂过程的观察,丰富了对草菇生活史的微观细胞学认识,为草菇有性生活史的深入研究提供了更多的科学依据。

关键词：子实体发育减数分裂

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毛竹笋加工废弃物栽培刺芹侧耳初探

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食用菌 2019年第3期41卷 40-41,51页

作者：李正鹏吴海云李巧珍李玉周峰陈明杰郭倩上海市农业科学院食用菌研究所/国家食用菌工程技术研究中心/农业部南方食用菌资源利用重点实验室/上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 宁波顺源农业科技有限公司浙江宁波315500

以毛竹笋壳替代部分其他原材料,工厂化栽培刺芹侧耳。结果表明,配方3与配方4(毛竹笋壳添加量15%、20%)的现原基时间、子实体发生时间、生长周期等表现均一致,单产与CK相比没有显著性差异;同时,这两个配方投产比最高,达到了1.07,栽培效... 详细信息

以毛竹笋壳替代部分其他原材料,工厂化栽培刺芹侧耳。结果表明,配方3与配方4(毛竹笋壳添加量15%、20%)的现原基时间、子实体发生时间、生长周期等表现均一致,单产与CK相比没有显著性差异;同时,这两个配方投产比最高,达到了1.07,栽培效果很好。

关键词：刺芹侧耳毛竹笋壳栽培

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利用不同培养料栽培的草菇子实体挥发性风味成分分析

利用不同培养料栽培的草菇子实体挥发性风味成分分析

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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：余昌霞赵妍陈明杰汪虹李正鹏上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

采用顶空固相微萃取（head space solid phase micro-extraction,HS-SPME）和气相色谱质谱（gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS）技术分析5种不同培养料（稻草、废棉、棉籽壳、金针菇菌渣、刺芹侧耳菌渣）栽培的草菇（Volvariella volvacea）子实体挥发性风味成分,利用相对气味活度值（relative odor activity value,ROAV）评价挥发性风味成分对草菇子实体总体风味的贡献,并采用主成分分析法明确了对不同培养料栽培的草菇香气影响较大的挥发性香味成分,通过综合评价指数（general evaluation indexes,GEI）对不同培养料栽培的草菇子实体香气进行评价,采用感官评定法验证分析草菇挥发性风味成分评价模型的准确性。结果表明:不同培养料栽培的草菇子实体中共检测到38种挥发性化合物,其中共有的化合物为26种,主要是芳香族和烯烃类、醛类化合物,其次是醇类化合物、酮类化合物。通过对主要挥发性风味物质的主成分分析发现,异戊醛、己醛、1-辛烯-3-醇、甲硫醇、2-戊基呋喃、二甲基硫醚对草菇子实体香气影响较大。GEI评价结果表明不同培养料栽培的草菇子实体香气差别显著,以刺芹侧耳菌渣栽培的草菇香气品质最优,金针菇菌渣栽培的草菇香气最差,感官评定结果与构建的挥发性风味成分评价模型结果一致。

关键词：草菇培养料挥发性风味成分相对气味活度值主成分分析

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真姬菇全基因组重测序及生长速率的GWAS分析

真姬菇全基因组重测序及生长速率的GWAS分析

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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：龚明吴莹莹李燕杨瑞恒汪滢万佳宁鲍大鹏上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

真姬菇生长速率与产量密切相关。本文以保存的38份真姬菇种质资源为研究对象,进行全基因组重测序,并测定不同温度下的真姬菇生长速率,进而开展全基因组关联分析（GWAS）。结果表明38个样本平均比对率为83%,平均测序深度为33×,平均... 详细信息

真姬菇生长速率与产量密切相关。本文以保存的38份真姬菇种质资源为研究对象,进行全基因组重测序,并测定不同温度下的真姬菇生长速率,进而开展全基因组关联分析（GWAS）。结果表明38个样本平均比对率为83%,平均测序深度为33×,平均覆盖度超过89%;全部样本SNP数量均值为1441147.605（s.e.=31444.86）,纯合SNP数量均值为426967.76（s.e.=43779.760）,杂合SNP数量均值为1014179.842（s.e.=31370.60）,其中6株菌株的纯和SNP数量显著低于其它菌株的数量;SNP位点主要位于外显子,内含子,上游区域,下游区域,基因间隔区,比例均值分别为0.4534,0.1751,0.099,0.0904和0.0667。系统发生分析显示群体为4大类群,并且类群的尺寸变化较大,其中6株较低纯和SNP数量的菌株聚集成一个簇,暗示这些菌株具有相同的遗传背景。群体结构分析显示群体组成的亚群个数为4,其中类群3和类群4具有明显的基因混合现象。PCA分析显示主要组分呈线性分布,暗示了群体的迁移历史;每个组分都存在部分菌株位置重叠,提示它们具有相同的遗传背景。生长速率试验显示在10℃、15℃、20℃、25℃和30℃培养的菌丝平均生长速率（mm/day）分别为1.66,2.80,4.92,5.13和2.51,提示20-25℃为真姬菇合适的栽培温度。GWAS分析显示存在10个与20℃培养下的菌丝生长速率显著关联的SNPs位点（P ＜1E-04）,其中2个位于外显子区域。外显子SNP位点功能性预测分析显示存在1个对蛋白功能影响较大的潜在功能性SNP位点（L49F,Deleterious,-4.000）。对于不同温度下进行真姬菇材料的利用,有助于真姬菇产量和适应性相关性状的遗传改良;对关联SNPs位点的深入研究,有利于深入了解真姬菇生长和发育的遗传机制。

关键词：真姬菇生长速率 SNP GWAS

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基于公共数据库信息对中国野生香菇种质资源地理分布的再分析

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菌物学报 2018年第3期37卷 335-351页

作者：杨瑞恒吴莹莹宋春艳田果廷李传华唐利华谭琦鲍大鹏国家食用菌工程技术研究中心农业部南方食用菌资源利用重点实验室上海市农业遗传育种重点实验室上海市农业科学院食用菌研究所上海201403 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所云南昆明650221

本文基于野生香菇资源的文献以及公共数据库中的序列信息,调查了香菇在我国以及世界范围内的地理分布,同时利用ITS序列进行了遗传多样性分析。结果显示香菇在我国的21个省市有分布,其中对云南、四川和湖北等省香菇资源的研究最为密集。... 详细信息

本文基于野生香菇资源的文献以及公共数据库中的序列信息,调查了香菇在我国以及世界范围内的地理分布,同时利用ITS序列进行了遗传多样性分析。结果显示香菇在我国的21个省市有分布,其中对云南、四川和湖北等省香菇资源的研究最为密集。不同菌株的聚类与地域来源有一定的相关性,进一步通过多样性分析显示我国野生香菇的多样性中心分布于西北和西南地区。本文有助于指导我们进行香菇野生资源的调查,进一步挖掘香菇种质资源的多样性。

关键词：文献调查 ITS 遗传多样性野生信息

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暗褐网柄牛肝菌生长发育过程中覆土微生物动态变化研究

暗褐网柄牛肝菌生长发育过程中覆土微生物动态变化研究

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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：杨瑞恒鲍大鹏郭婷李燕纪光燕纪开萍谭琦国家食用菌工程技术研究中心农业部南方食用菌资源利用重点实验室上海市农业遗传育种重点实验室上海市农业科学院食用菌研究所宏臻农业科技发展有限公司

暗褐网柄牛肝菌Phlebopus portentosus (Berk. and Broome) Boedijin是一种珍稀食用菌,在中国和泰国广被人们喜爱,它也是目前为止唯一可以栽培的牛肝菌(牛肝菌目)。在暗褐网柄牛肝菌栽培的过程中,添加覆土材料是一个必须的步骤,不添加... 详细信息

暗褐网柄牛肝菌Phlebopus portentosus (Berk. and Broome) Boedijin是一种珍稀食用菌,在中国和泰国广被人们喜爱,它也是目前为止唯一可以栽培的牛肝菌(牛肝菌目)。在暗褐网柄牛肝菌栽培的过程中,添加覆土材料是一个必须的步骤,不添加和添加无菌土都不能形成子实体,这也就说明了覆土中的微生物对暗褐网柄牛肝菌子实体的形成具有重要的作用。但是到目前为止,对于覆土材料中的微生物动态变化研究的还不够。本研究利用高通量测序Miseq平台测定了覆土材料中的16S rRNA的V3-V4区域,来揭示牛肝菌栽培过程中微生物的动态变化过程。本实验共采集了114个样品包含了覆土原始材料(OS),灭菌后培养料(上层SU和下层SD),长满菌丝后培养料(上层HU和下层HD),覆土后长满菌丝覆土(FHCS)和培养料(上层FHU和下层FHD),原基时期覆土(PCS)和培养料(上层PU和下层PD),子实体时期子实体(FB)、覆土(FCS)和培养料(上层FU和下层FD),每个样品6个重复,经过Miseq测序获得了3950816条序列,以灭菌后的样品(SU和SD)为对照,过滤数据后保留了38个样品的424200条序列,过滤掉了76个样品,仅仅剩下6个OS,6个FHCS,5个FHCU,6个PCS,5个PCU,6个FCS和4个FCU,为了保持数据的平衡,每个样品取7906条序列进行后续分析。在97%的相似度下聚类共获得了231个OTUs,所有样品中OTUs数量变化范围为128到184,细菌多样性在菌丝体时期到原基时期是一个增长的过程,随后慢慢下降。NMDS和Anosim分析显示不同时期的覆土中微生物组成有很大的差异。在所有样品中Proteobacteria、Chloroflexi、Acidobacteria、 Actinobacteria、Saccharibacteria和Bacteroidetes丰度最高,Burkholderia是丰度最高的属(OS样品除外,Chloroflexi丰度最高),Burkholderia一般被认为是双孢菇等蘑菇的致病菌,但是此结果与松茸和一些牛肝菌科物种周系土壤微生物的群落结构相似,Burkholderia在FHCS样品中百分含量为55.79%,在PCS中就下降为35.14%,随后又在FCS样品中上升至45.60%。在形成原基的过程中Acidobacterium、Rhizobium、Acidisphaera、Bradyrhizobium和Bacillus丰度升高,LefSe分析也显示Acidobacterium和Acidisphaera是原基时期的标志微生物,Bradyrhizobium、Roseiarcus和Pseudolabrys与子实体的形成有关系。进一步利用丰度前20 OTUs进行网络分析显示有23edges包含了4反作用和19正作用的edges,覆土中的细菌之间可能发生广泛的相互作用对牛肝菌的生长具有重要的作用。揭示覆土中微生物的动态变化过程有助于我们了解微生物与暗褐网柄牛肝菌菌丝伸长、原基形成和子实体形成的关系,有助于我们进行无覆土栽培流程的设计。

关键词：覆土去污染细菌多样性动态变化 Miseq

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金耳子实体多糖硫酸化修饰研究

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食用菌学报 2018年第1期25卷 67-73页

作者：张忠刘艳芳周帅唐庆九杨焱冯娜唐传红吴迪张劲松上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403

采用氯磺酸法对金耳(Tremella aurantia)子实体多糖进行硫酸化修饰,通过单因素实验考察了溶剂、氯磺酸用量、反应温度及时间对多糖硫酸化的影响并研究了不同取代度的硫酸化金耳多糖体外抗氧化活性和抑制L1210肿瘤细胞增殖的作用。以取... 详细信息

采用氯磺酸法对金耳(Tremella aurantia)子实体多糖进行硫酸化修饰,通过单因素实验考察了溶剂、氯磺酸用量、反应温度及时间对多糖硫酸化的影响并研究了不同取代度的硫酸化金耳多糖体外抗氧化活性和抑制L1210肿瘤细胞增殖的作用。以取代度为指标,金耳多糖硫酸化的最佳条件是反应溶剂为N,N-二甲基甲酰胺,多糖残基与氯磺酸的摩尔比为1∶4,反应温度为60℃,反应时间为3h,在此条件下,产物取代度为1.48。此外,随着多糖取代度的增加,硫酸化金耳多糖对过氧化氢、羟自由基的清除率显著提高,对L1210细胞的抑制率也明显升高,说明硫酸化多糖的抗氧化活性和体外抑制肿瘤细胞的活性与其硫酸化的取代度相关。

关键词：氯磺酸法取代度抗氧化 L1210细胞

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构建高效糖配体再生重组菌生物催化合成莱鲍迪苷D

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食品科学 2018年第22期39卷 116-122页

作者：费理文王勇上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所上海200032

利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)蔗糖合酶AtSUS3构建活化糖配体尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate glucose,UDPG)再生体系,与高效催化莱鲍迪苷D(rebaudioside D,RD)合成的糖基转移酶协同偶联完成RD的高效生物催化。从拟南芥cDNA... 详细信息

利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)蔗糖合酶AtSUS3构建活化糖配体尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate glucose,UDPG)再生体系,与高效催化莱鲍迪苷D(rebaudioside D,RD)合成的糖基转移酶协同偶联完成RD的高效生物催化。从拟南芥cDNA克隆获得AtSUS3基因,将其装配至pET28a获得表达质粒pLW105,随后pLW105与携带糖基转移酶EUGT11基因的质粒共转化大肠杆菌BL21(DE3)构建双酶共表达工程菌。在不添加UDPG或者尿核苷二磷酸(uridine diphosphate,UDP)的条件下,以上述双酶共表达工程菌全细胞催化莱鲍迪苷A(RA)获得的底物摩尔转化率大于80%,RD产量达到930 mg/L。随后构建双酶基因串连质粒pLW108及双酶共表达大肠杆菌BL21(DE3)工程菌。用串连质粒构建的工程菌催化效果与双质粒共转化相同。采用共表达双酶工程菌的发酵破碎粗酶进行催化,结果显示以粗酶催化可简化催化体系,并可将细胞催化体系所需高质量浓度蔗糖用量降至质量浓度5 g/100 mL,同时在不添加外源UDPG的条件下实现RD的高效生物催化,RA底物摩尔转化率达到93%,RD产量约为1 051 mg/L。

关键词：甜菊糖苷莱鲍迪苷D 尿苷二磷酸葡萄糖蔗糖合酶 UDP-糖基转移酶生物催化

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灵芝孢子粉中麦角甾醇的测定分析及其脂溶性成分指纹图谱

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菌物学报 2018年第9期37卷 1215-1223页

作者：王金艳冯娜刘艳芳严培兰唐庆九上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 上海瑞丰农业科技有限公司上海201403

运用建立的高效液相色谱条件,首次实现在完成灵芝孢子粉中麦角甾醇含量测定的同时,对灵芝孢子粉中脂溶性成分的指纹图谱进行研究。结果表明,该方法测定麦角甾醇准确、稳定、特异性好,脂溶性成分指纹图谱基线平直、色谱峰丰富且具备较好... 详细信息

运用建立的高效液相色谱条件,首次实现在完成灵芝孢子粉中麦角甾醇含量测定的同时,对灵芝孢子粉中脂溶性成分的指纹图谱进行研究。结果表明,该方法测定麦角甾醇准确、稳定、特异性好,脂溶性成分指纹图谱基线平直、色谱峰丰富且具备较好的分离度,该方法适合在分析测定灵芝孢子粉中麦角甾醇(282nm)含量的同时,对其脂溶性成分(245nm)的指纹图谱进行分析,为整体评价灵芝孢子粉及其产品的质量提供依据。运用建立的方法对收集的各孢子粉样品进行分析,表明破壁与否及破壁时间长短对灵芝孢子粉中麦角甾醇及脂溶性成分的溶出有显著的影响,实验认为最佳的破壁时间为20–30min;低温冻藏可以有效地保护样品中的成分;随着产粉时间的延长,孢子粉中麦角甾醇的含量变化不大,脂溶性成分总体上有所增加;不同原料来源孢子粉中麦角甾醇的含量和脂溶性成分指纹图谱的差异都很大,且麦角甾醇的含量与指纹图谱色谱峰的丰富程度没有一定的相关性,因此不能仅以麦角甾醇的含量来表征灵芝孢子粉的质量,二者的综合分析对灵芝孢子粉质量的评价才更有意义。

关键词：灵芝孢子粉高效液相色谱法麦角甾醇指纹图谱脂溶性成分

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草菇子实体发育过程中担子细胞内的核相变化观察

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食用菌学报 2018年第4期25卷 29-34,135,136页

作者：万佳宁杨瑞恒陈洪雨周陈力郭婷陈明杰汪虹鲍大鹏上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403

运用Steedman's wax包埋切片法制备了草菇(Volvariella volvacea)子实体不同发育时期(小纽扣期、大纽扣期、蛋形期、伸长期、破膜期和开伞期)的菌褶切片并运用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察了担子细胞核相变化情况。结果表明该... 详细信息

运用Steedman's wax包埋切片法制备了草菇(Volvariella volvacea)子实体不同发育时期(小纽扣期、大纽扣期、蛋形期、伸长期、破膜期和开伞期)的菌褶切片并运用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察了担子细胞核相变化情况。结果表明该方法可清晰观察到草菇担子细胞中核相以及在减数分裂中的变化、担子上孢子幼体、孢子梗、囊状体和孢子内细胞核等结构。草菇子实体小纽扣期细胞核成对进入担子细胞中;在大纽扣和蛋形期担子细胞基部发生核融合;伸长期、破膜期和开伞期的担子细胞内可观察到符合减数分裂特征的细胞核分裂前期Ⅰ、末期Ⅰ、前期Ⅱ和间期Ⅱ。通过对草菇担子细胞内细胞核减数分裂过程的观察,丰富了对草菇生活史的微观细胞学认识,为草菇有性生活史的深入研究提供了更多的科学依据。

关键词：草菇 Steedman's wax包埋切片担子核相

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