超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用技术(ultra-highperformanceliquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS),具有灵敏度高、精准性好、可微量检测的优势。利用该技术优势,研究建立了灵芝三萜的系列靶向检测方法。该...
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超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用技术(ultra-highperformanceliquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS),具有灵敏度高、精准性好、可微量检测的优势。利用该技术优势,研究建立了灵芝三萜的系列靶向检测方法。该方法选取了灵芝中含量较高、活性较好的灵芝酸、烯酸、醇、醛、酯等共计43种三萜作为标准对照品,采用两种反相色谱柱,在两种电离模式下分别建立了动态多反映监测(DynamicMultipleReactionMonitoring,DMRM)模式分析方法。经方法学验证,两种方法的日间与日内精密度、样品重复性、稳定性及加样回收率均符合要求。方法建成后,对国内主要灵芝栽培种赤芝、紫芝、松杉灵芝、白肉灵芝和无柄灵芝进行了三萜种类和含量的分析。结果表明,作为主栽品种和国家法规种,代料栽培的赤芝中总三萜含量普遍高于椴木栽培的赤芝,但椴木栽培的灵芝的中性三萜含量相对高于代料栽培。对赤芝不同生长时期采集的子实体的三萜含量检测结果均发现,随着子实体生长至成熟,酸性三萜含量有降低的趋势,而中性三萜含量逐渐增加。松杉灵芝、白肉灵芝和无柄灵芝中主要含有中性三萜化合物,但含量明显低于赤芝。人工栽培的灵芝中,紫芝子实体中含有最少种类和最低含量的被检测三萜化合物。此外,研究还对采集自各地的30个批次的赤芝孢子粉中的三萜进行了定性定量分析,发现孢子粉中三萜种类丰富,但含量普遍较低,在0-267μg/g之间。
采用磷酸盐法对灵芝(Ganoderma lucidum)β-葡聚糖进行磷酸化修饰,在不同反应温度下(60、70、80、90、100℃)得到灵芝β-葡聚糖磷酸化衍生物(PGLP1~5),随着反应温度的上升,衍生物取代度(degree of substitution,DS)逐渐增大,重均分子量(...
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采用磷酸盐法对灵芝(Ganoderma lucidum)β-葡聚糖进行磷酸化修饰,在不同反应温度下(60、70、80、90、100℃)得到灵芝β-葡聚糖磷酸化衍生物(PGLP1~5),随着反应温度的上升,衍生物取代度(degree of substitution,DS)逐渐增大,重均分子量(average molecular weight,Mw)逐渐下降,反应温度为100℃时取代度最大为1.02。灵芝β-葡聚糖磷酸化衍生物体外对肿瘤细胞K562和L1210的增殖均有抑制作用,随着取代度增加,抑制率增高,且呈浓度依赖性;取代度最大的磷酸化衍生物PGLP5(DS=1.02,Mw=0.8×10^4)在200μg·mL^-1浓度下,对K562和L1210细胞增殖的抑制率分别为58.74%和50.05%,其IC50值分别为99.61μg·mL^-1和187.52μg·mL^-1。研究结果表明,灵芝β-葡聚糖磷酸化衍生物具有体外抗肿瘤活性,且抗肿瘤活性强弱与其取代度大小有关,取代度越大,抗肿瘤活性越强。
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