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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：万佳宁杨瑞恒陈洪雨周陈力郭婷陈明杰汪虹鲍大鹏上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

草菇(Volvariella volvacea)又名中国蘑菇(Chinese mushroom)。进入1970年代,草菇栽培产业得到较快发展,但草菇育种研究进展一直比较缓慢,其中一个主要原因是对草菇有性生殖方式这一重要遗传背景还存在较大争议。本研究运用Steedman’s ... 详细信息

草菇(Volvariella volvacea)又名中国蘑菇(Chinese mushroom)。进入1970年代,草菇栽培产业得到较快发展,但草菇育种研究进展一直比较缓慢,其中一个主要原因是对草菇有性生殖方式这一重要遗传背景还存在较大争议。本研究运用Steedman’s wax包埋切片法制备了草菇子实体不同发育时期(小纽扣期、大纽扣期、蛋形期、伸长期、破膜期和开伞期)的菌褶切片并运用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察了担子细胞核相变化情况。结果表明该方法可清晰观察到草菇担子细胞中核相以及在减数分裂中的变化、担子上孢子幼体、孢子梗、囊状体和孢子内细胞核等结构。草菇子实体小纽扣期细胞核成对进入担子细胞中;在大纽扣和蛋形期担子细胞基部发生核融合;伸长期、破膜期和开伞期的担子细胞内可观察到符合减数分裂特征的细胞核分裂前期Ⅰ、末期Ⅰ、前期Ⅱ和间期Ⅱ。通过对草菇担子细胞内细胞核减数分裂过程的观察,丰富了对草菇生活史的微观细胞学认识,为草菇有性生活史的深入研究提供了更多的科学依据。

关键词：子实体发育减数分裂

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灵芝液态发酵中溶氧调控三萜合成及活性研究

灵芝液态发酵中溶氧调控三萜合成及活性研究

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中国菌物学会2024年学术年会

作者：冯杰姜幸怡刘艳芳唐传红颜梦秋张劲松上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

灵芝是我国珍贵的食药两用真菌,其三萜类物质具有显著的药理活性。液态发酵是获取灵芝三萜的有效途径,其中溶氧浓度是影响三萜合成的关键因素。本研究探究了溶氧调控对灵芝三萜合成的影响,并建立了基于溶氧调控的高效液态发酵技术体系... 详细信息

灵芝是我国珍贵的食药两用真菌,其三萜类物质具有显著的药理活性。液态发酵是获取灵芝三萜的有效途径,其中溶氧浓度是影响三萜合成的关键因素。本研究探究了溶氧调控对灵芝三萜合成的影响,并建立了基于溶氧调控的高效液态发酵技术体系。首先,通过振荡-静置两阶段培养方式,发现5 L发酵罐中,当通气量为1.5 vvm(相对溶氧浓度约10.5%)时,三萜含量最高达30.04 mg/g,较5.69%溶氧浓度时增加了4.4倍。空间代谢组学分析显示,溶氧条件影响糖类代谢和三萜合成途径,特别是异戊烯基焦磷酸(IPP)参与的三萜生物合成途径。其次,为了提升三萜合成效率和产量,本研究开发了振荡-静置循环培养法。通过人工神经网络和遗传算法优化,确定最佳循环培养组合为振荡2.8 d-静置7.3d-振荡0.2 d-静置0.3 d。在此条件下,灵芝三萜含量达到20.82 mg/g,产量达129.09 mg/L,较传统方法提高了324.78%,且培养周期缩短至10.6 d。再次,在3 L、5 L和50 L规模的发酵罐中验证了振荡-静置循环培养法的放大效果。结果表明,在最佳溶氧条件下(通气量1.5 vvm、转速150 r/min),各规模发酵罐中三萜产量分别为217.92 mg/L、221.43 mg/L和197.07 mg/L,较摇瓶水平分别提高了68.81%、71.53%和52.66%。最后,振荡-静置循环培养发酵产物的抗氧化和抗肿瘤作用研究表明,不同规模培养菌丝体均展现显著抗氧化和抗肿瘤活性。抗氧化活性随浓度升高而稳定,抗肿瘤活性在6.25μg/mL浓度下显著抑制L1210细胞,对K562细胞抑制效果略低。50 L发酵规模下菌丝体醇提物在体内实验中显著抑制肿瘤生长,125μg/mL浓度下效果最佳。此外,该提取物在31.2μg/mL浓度下促进肿瘤细胞凋亡能力优于阳性对照索拉非尼。

关键词：灵芝三萜液态发酵溶氧振荡-静置循环培养生物活性

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利用不同培养料栽培的草菇子实体挥发性风味成分分析

利用不同培养料栽培的草菇子实体挥发性风味成分分析

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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：余昌霞赵妍陈明杰汪虹李正鹏上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

采用顶空固相微萃取（head space solid phase micro-extraction,HS-SPME）和气相色谱质谱（gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS）技术分析5种不同培养料（稻草、废棉、棉籽壳、金针菇菌渣、刺芹侧耳菌渣）栽培的草菇（Volvariella volvacea）子实体挥发性风味成分,利用相对气味活度值（relative odor activity value,ROAV）评价挥发性风味成分对草菇子实体总体风味的贡献,并采用主成分分析法明确了对不同培养料栽培的草菇香气影响较大的挥发性香味成分,通过综合评价指数（general evaluation indexes,GEI）对不同培养料栽培的草菇子实体香气进行评价,采用感官评定法验证分析草菇挥发性风味成分评价模型的准确性。结果表明:不同培养料栽培的草菇子实体中共检测到38种挥发性化合物,其中共有的化合物为26种,主要是芳香族和烯烃类、醛类化合物,其次是醇类化合物、酮类化合物。通过对主要挥发性风味物质的主成分分析发现,异戊醛、己醛、1-辛烯-3-醇、甲硫醇、2-戊基呋喃、二甲基硫醚对草菇子实体香气影响较大。GEI评价结果表明不同培养料栽培的草菇子实体香气差别显著,以刺芹侧耳菌渣栽培的草菇香气品质最优,金针菇菌渣栽培的草菇香气最差,感官评定结果与构建的挥发性风味成分评价模型结果一致。

关键词：草菇培养料挥发性风味成分相对气味活度值主成分分析

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毛头鬼伞子实体次生代谢产物的研究

毛头鬼伞子实体次生代谢产物的研究

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第九届全国食用菌学术研讨会

作者：冯娜张劲松唐庆九杨焱国家食用菌工程技术研究中心农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室上海市农业遗传育种重点开放实验室上海市农业科学院天然药用资源研究与开发中心上海市农业科学院食用菌研究所

研究了毛头鬼伞子实体中的次生代谢产物。用95%的乙醇对毛头鬼伞子实体切片等体积浸提3次,提取物依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取分部。通过正相硅胶柱层析、反相硅胶柱层析和凝胶柱层析等分离方法,对各萃取部分分离... 详细信息

研究了毛头鬼伞子实体中的次生代谢产物。用95%的乙醇对毛头鬼伞子实体切片等体积浸提3次,提取物依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取分部。通过正相硅胶柱层析、反相硅胶柱层析和凝胶柱层析等分离方法,对各萃取部分分离纯化。运用现代光谱（ESI-MS、HRTOFMS、1D NMR、2D NMR）技术鉴定了从毛头鬼伞子实体中分离得到的化合物。结果从毛头鬼伞子实体中鉴定了21个化合物。分别为:2-Acetyl-3-hydroxy-1-oxy-quinoline-6-carboxylic acid amide,γ-lactone,甘露醇（D-mannitol）,月桂酸（lauricacid）,麦角甾醇（ergosterol）,啤酒甾醇（cerevisterol）,ergosteryl-3-O-β-D-glucopyranoside,尿嘧啶（uracil）,脑苷脂B（cerebroside B）,黄嘌呤（xanthine）,tuberoside,对羟基苯乙酸甲酯（methyl 4-hydroxyphenylacetate）,酪醇（tyrosol）,对羟基苯甲酸（p-hydroxybenzoic acid）,光色素（7,8-dimethylalloxazine）,烟酰胺（nicotinamide）,甲酰肼（formylhydrazine）,癸烷（decane）,烟酸（nicotinic acid）,腺苷（adenosine）,以及尿苷（uridine）。以上化合物均为首次从毛头鬼伞子实体中分离得到,其中,2-Acetyl-3-hydroxy-1-oxy-quinoline-6-carboxylic acid amide为新化合物,γ-lactone属于天然产物中首次发现。

关键词：毛头鬼伞子实体次生代谢产物

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真姬菇全基因组重测序及生长速率的GWAS分析

真姬菇全基因组重测序及生长速率的GWAS分析

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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：龚明吴莹莹李燕杨瑞恒汪滢万佳宁鲍大鹏上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

真姬菇生长速率与产量密切相关。本文以保存的38份真姬菇种质资源为研究对象,进行全基因组重测序,并测定不同温度下的真姬菇生长速率,进而开展全基因组关联分析（GWAS）。结果表明38个样本平均比对率为83%,平均测序深度为33×,平均... 详细信息

真姬菇生长速率与产量密切相关。本文以保存的38份真姬菇种质资源为研究对象,进行全基因组重测序,并测定不同温度下的真姬菇生长速率,进而开展全基因组关联分析（GWAS）。结果表明38个样本平均比对率为83%,平均测序深度为33×,平均覆盖度超过89%;全部样本SNP数量均值为1441147.605（s.e.=31444.86）,纯合SNP数量均值为426967.76（s.e.=43779.760）,杂合SNP数量均值为1014179.842（s.e.=31370.60）,其中6株菌株的纯和SNP数量显著低于其它菌株的数量;SNP位点主要位于外显子,内含子,上游区域,下游区域,基因间隔区,比例均值分别为0.4534,0.1751,0.099,0.0904和0.0667。系统发生分析显示群体为4大类群,并且类群的尺寸变化较大,其中6株较低纯和SNP数量的菌株聚集成一个簇,暗示这些菌株具有相同的遗传背景。群体结构分析显示群体组成的亚群个数为4,其中类群3和类群4具有明显的基因混合现象。PCA分析显示主要组分呈线性分布,暗示了群体的迁移历史;每个组分都存在部分菌株位置重叠,提示它们具有相同的遗传背景。生长速率试验显示在10℃、15℃、20℃、25℃和30℃培养的菌丝平均生长速率（mm/day）分别为1.66,2.80,4.92,5.13和2.51,提示20-25℃为真姬菇合适的栽培温度。GWAS分析显示存在10个与20℃培养下的菌丝生长速率显著关联的SNPs位点（P ＜1E-04）,其中2个位于外显子区域。外显子SNP位点功能性预测分析显示存在1个对蛋白功能影响较大的潜在功能性SNP位点（L49F,Deleterious,-4.000）。对于不同温度下进行真姬菇材料的利用,有助于真姬菇产量和适应性相关性状的遗传改良;对关联SNPs位点的深入研究,有利于深入了解真姬菇生长和发育的遗传机制。

关键词：真姬菇生长速率 SNP GWAS

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金耳子实体多糖硫酸化修饰研究

金耳子实体多糖硫酸化修饰研究

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中国菌物学会2018年学术年会

作者：张忠刘艳芳周帅唐庆九杨焱冯娜唐传红吴迪张劲松上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

采用氯磺酸法对金耳(Tremella aurantia)子实体多糖进行硫酸化修饰,通过单因素实验考察了溶剂、氯磺酸用量、反应温度及时间对多糖硫酸化的影响,并研究了不同取代度的硫酸化金耳多糖清除自由基和体外抑制L1210肿瘤细胞增殖的作用。以取... 详细信息

采用氯磺酸法对金耳(Tremella aurantia)子实体多糖进行硫酸化修饰,通过单因素实验考察了溶剂、氯磺酸用量、反应温度及时间对多糖硫酸化的影响,并研究了不同取代度的硫酸化金耳多糖清除自由基和体外抑制L1210肿瘤细胞增殖的作用。以取代度为指标,金耳多糖硫酸化的最佳条件是反应溶剂为N, N-二甲基甲酰胺,多糖残基与氯磺酸的摩尔比为1:4,反应温度为60℃,反应时间为3 h,在此条件下,产物取代度为1.48。此外,随着多糖取代度的增加,硫酸化金耳多糖对过氧化氢、羟自由基的清除率显著的提高和对L1210细胞的抑制率也明显升高,说明硫酸化多糖的抗氧化活性和体外抑制肿瘤细胞的活性与其硫酸化取代度相关。

关键词：氯磺酸法取代度抗氧化 L1210细胞

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虫草素的纯化工艺及生物活性研究

虫草素的纯化工艺及生物活性研究

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第九届全国食用菌学术研讨会

作者：唐庆九刘艳芳薛俊杰杨焱张劲松冯娜国家食用菌工程技术研究中心农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室上海市农业遗传育种重点开放实验室上海市农业科学院天然药用资源研究与开发中心上海市农业科学院食用菌研究所

北冬虫夏草（Cordyceps militaris）是我国传统的名贵药用真菌,有益肺肾、补精髓、止血化痰的功效。北冬虫夏草的化学成分复杂,含有核苷类、多糖类、虫草酸、甾醇类等多种成分,其中核苷类成分虫草素（Cordycepin）是其重要的活性物质,... 详细信息

北冬虫夏草（Cordyceps militaris）是我国传统的名贵药用真菌,有益肺肾、补精髓、止血化痰的功效。北冬虫夏草的化学成分复杂,含有核苷类、多糖类、虫草酸、甾醇类等多种成分,其中核苷类成分虫草素（Cordycepin）是其重要的活性物质,对虫草素的活性已有大量的研究,发现具有免疫调节、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗炎、抗衰老等多种生物活性。虫草素在美国已进入Ⅱ期临床研究,用于白血病的治疗,在我国也有大量虫草素的研究与开发。随着虫草素活性研究越来越多,市场需求量将会大增。目前虫草素分离纯化主要来源于北冬虫夏草子实体或菌丝体,相对产量低。因此有必要优化生产虫草素的条件,以提高虫草素的产量,降低制备成本。

关键词：北冬虫夏草虫草素工艺生物活性

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灵芝三萜的HPLC检测方法的研究

灵芝三萜的HPLC检测方法的研究

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第九届全国食用菌学术研讨会

研究建立了灵芝三萜的HPLC指纹图谱分析方法及灵芝酸A的HPLC测定方法,确定了灵芝（赤芝和紫芝）中三萜类成分的提取方法和HPLC指纹图谱检测方法。提取方法:取灵芝子实体粉末2.5 g,于100 mL氯仿中静置提取6 h,重复2次,合并滤液将其旋干,... 详细信息

研究建立了灵芝三萜的HPLC指纹图谱分析方法及灵芝酸A的HPLC测定方法,确定了灵芝（赤芝和紫芝）中三萜类成分的提取方法和HPLC指纹图谱检测方法。提取方法:取灵芝子实体粉末2.5 g,于100 mL氯仿中静置提取6 h,重复2次,合并滤液将其旋干,用62.5 mL饱和NaHCO溶液溶解该干物质。将溶液过滤后旋干,再用甲醇溶出后定容至2 mL,离心后取上清液稀释使用。HPLC分析方法:系统:Waters2487,Waters 2414,Waters 2690/5;色谱柱:YMC-pack ODS-AQ（250 mm×4.6 mm,5μm）;上样量:10μL;流动相比例:甲醇:0.5%醋酸水溶液=46:54（V/V）;柱温:35℃;紫外波长检测:254 nm;流速:1 mL/min;洗脱时间:130 min。进一步对HPLC方法的线性范围、稳定性、精密度、重现性和加样回收率等因素进行了验证,均达到药典的要求。该提取方法简单,灵芝酸A的提取率高,杂质较少。用该指纹图谱方法对赤芝和紫芝共20个批次样品进行了检验,获得了灵芝中灵芝酸A的最低含量,即以干燥品计,灵芝中含灵芝酸A不得少于0.02%。

关键词：灵芝三萜 HPLC指纹图谱灵芝酸A

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香菇135菌株特异SCAR标记的分布和遗传特性

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食用菌学报 2008年第4期15卷 1-10页

作者：张美彦尚晓冬谭琦陈明杰潘迎捷中华人民共和国农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室上海市食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室上海市农业科学院食用菌研究所上海201106 上海海洋大学上海200090

用香菇(Lentinula edodes)135菌株的特异SCAR(Sequence Characterized Amplified Region)引物135F/R(扩增601bp的条带)对135菌株的58个原生质体单核体和97个孢子单核体的基因组DNA进行扩增.检验此特异标记在单核体中的分布和遗传规律。... 详细信息

用香菇(Lentinula edodes)135菌株的特异SCAR(Sequence Characterized Amplified Region)引物135F/R(扩增601bp的条带)对135菌株的58个原生质体单核体和97个孢子单核体的基因组DNA进行扩增.检验此特异标记在单核体中的分布和遗传规律。原生质体单核体分为两种交配型A1B1和A2B2,此标记仅存在于后一种核中;另外,此标记在四种交配型的孢子单核体后代中随机分布,显示这个SCAR标记可以稳定遗传到后代,而且与交配型A、B因子之间没有连锁关系。

关键词：遗传规律香菇交配型特异SCAR标记

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金针菇尿嘧啶营养缺陷型菌株的筛选与分子鉴定

金针菇尿嘧啶营养缺陷型菌株的筛选与分子鉴定

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中国菌物学会2016年学术年会

作者：卢绪志万佳宁马元伟鲍大鹏上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海海洋大学食品学院

通过原生质体单核化技术从金针菇双核体菌株‘G1’中获得原生质体单核化菌株‘DG1-1’,根据5-氟乳清酸敏感性试验,可知当5-氟乳清酸浓度为0.5g/L时,‘DG1-1’菌株菌丝生长完全受到抑制。采用原生质体紫外诱变技术,在含有5-氟乳清酸的筛... 详细信息

通过原生质体单核化技术从金针菇双核体菌株‘G1’中获得原生质体单核化菌株‘DG1-1’,根据5-氟乳清酸敏感性试验,可知当5-氟乳清酸浓度为0.5g/L时,‘DG1-1’菌株菌丝生长完全受到抑制。采用原生质体紫外诱变技术,在含有5-氟乳清酸的筛选培养基上筛选获得了1株尿嘧啶营养缺陷型的突变菌株。通过基因型的分子验证,发现该菌株的尿嘧啶合成代谢路径中的pyr F基因第39位40位之间插入T,导致pyr F基因编码的乳清酸磷酸核糖转移酶氨基酸序列第13位氨基酸后编码混乱。

关键词：金针菇尿嘧啶营养缺陷型 5-氟乳清酸 PyrF基因 pyrG基因

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