检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：刘东汤琳琳张德福陈晓宇上海市农业科学院畜牧兽医研究所(上海) 上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室(上海) 西北农林科技大学动物科技学院(陕西杨凌)

猪的体细胞核移植研究在生物医学领域具有重大意义.本试验对克隆技术中关键步骤之一的去核方法作了较深入的研究.试验结果表明,由本实验室改进的Willadsen去核法——二步挤压去核法无论在去核操作成功率(73.9﹪)上还是在去核效率(81.2﹪... 详细信息

猪的体细胞核移植研究在生物医学领域具有重大意义.本试验对克隆技术中关键步骤之一的去核方法作了较深入的研究.试验结果表明,由本实验室改进的Willadsen去核法——二步挤压去核法无论在去核操作成功率(73.9﹪)上还是在去核效率(81.2﹪)上都显著的好于McGrath-Solter去核法(42.5﹪、67.4﹪,0.05).同时,本试验还发现,卵母细胞成熟培养36h后去核组去核效率(89.1﹪)显著地高于成熟培养44h后去核组(55.8﹪,0.05).

关键词：猪卵母细胞核移植去核方法繁殖生物技术

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不同收集方法对猪卵母细胞体外成熟培养的影响

不同收集方法对猪卵母细胞体外成熟培养的影响

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中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第12届学术研讨会

本实验就猪卵母细胞的三种采集方法:抽吸法、剖解法和机械破碎法进行了对比研究.结果表明,1)机械破碎法所采集细胞数目显著高于剖解法(P<0.05),剖解显著高于抽吸法(P<0.05);而所用时间则与此相反(P<0.05).2)A级卵母细胞的比例... 详细信息

本实验就猪卵母细胞的三种采集方法:抽吸法、剖解法和机械破碎法进行了对比研究.结果表明,1)机械破碎法所采集细胞数目显著高于剖解法(P<0.05),剖解显著高于抽吸法(P<0.05);而所用时间则与此相反(P<0.05).2)A级卵母细胞的比例在剖解法中显著高于抽吸法(P<0.05),同时抽吸法也显著高于机械破碎法(P<0.05).机械破碎法采集的B级细胞比例显著高于其余两法(P<0.05);抽吸法所采集的C级细胞也显著高于其余两法(P<0.05).3)剖解法中卵丘扩散率要显著高于其它两法(P<0.05);而机械破碎法中第一极体排出率要显著低于另两法(P<0.05).

关键词：猪卵母细胞采集方法体外成熟培养繁植生物技术

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口蹄疫病毒非结构蛋白3B真核表达载体的构建及表达

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中国预防兽医学报 2003年第3期25卷 168-171页

作者：尤永进葛艳陈波饶忠徐泉兴朱彩珠张强卢永干上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究分室中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046

设计、合成FMDV非结构蛋白 3B基因的PCR引物 ,并在引物 5’端和 3’端分别加入含BamHI和HindⅢ限制性酶切位点序列。以FMDV基因组RNA为模板 ,利用RT_PCR技术扩增 3B基因 ,得到的基因片段经BamHI/HindⅢ双酶切后与转座载体pFASTBACHTa连... 详细信息

设计、合成FMDV非结构蛋白 3B基因的PCR引物 ,并在引物 5’端和 3’端分别加入含BamHI和HindⅢ限制性酶切位点序列。以FMDV基因组RNA为模板 ,利用RT_PCR技术扩增 3B基因 ,得到的基因片段经BamHI/HindⅢ双酶切后与转座载体pFASTBACHTa连接 ,转化宿主菌DH10BAC ,在含庆大霉素、卡那霉素、X_gal、IPTG的LB平板上 37℃培养 2 4h ,提取白色菌落 ,从中提取重组穿梭载体Bacmid 3B ,与脂质体共同转染昆虫细胞sf9,得到重组杆状病毒 ,病毒经传代扩增后感染High 5细胞 ,表达目的蛋白———FMDV非结构蛋白 3B。SDS_PAGE及WesternBlot结果显示 ,本研究成功构建了Bacmid_3B重组表达载体 ,并在昆虫细胞中表达了NSP_3B蛋白 ,该表达产物可与FMDV感染的猪、牛血清产生免疫反应。

关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白真核表达载体克隆表达

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口蹄疫病毒非结构蛋白3abc基因的克隆与表达

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中国病毒学 2003年第2期18卷 155-158页

作者：尤永进朱彩珠葛艳陈波张强饶忠徐泉兴卢永干上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究分室上海201106 中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046

口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus , FMDV)非结构蛋白(NSP)-3ABC可用于注苗与感染动物的鉴别诊断,合成该基因的PCR引物,并在引物5 端和3 端分别加入含BamH I和Hind III限制性酶切位点序列。以FMDV毒株基因组RNA为模板,利用RT-PC... 详细信息

口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus , FMDV)非结构蛋白(NSP)-3ABC可用于注苗与感染动物的鉴别诊断,合成该基因的PCR引物,并在引物5 端和3 端分别加入含BamH I和Hind III限制性酶切位点序列。以FMDV毒株基因组RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增3abc基因,得到的基因片段与T载体连接,转化DH5α。提取重组载体pT-3ABC,经BamH I/Hind III双酶切后与载体pET32a连接,转化宿主菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导表达目的蛋白。SDS-PAGE及Western Blotting检测和鉴定结果表明,在大肠杆菌中成功表达了NSP-3ABC蛋白,分子量约56kDa,且该表达产物可与FMDV感染的动物血清产生免疫反应。ELISA试验结果显示,表达蛋白可用于FMDV注苗与感染动物的鉴别诊断。

关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白 3abc基因基因克隆基因表达口蹄疫鉴别诊断 RT-PCR

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脂质体pGH的缓释及促增重作用初探

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上海农业学报 2003年第4期19卷 107-108页

作者：李震高明于瑞嵩张德福刘惠莉周智爱上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106 沈阳农业大学

初步研究了采用脂质体包裹产物的处理方法进行pGH的缓释。去垂体大鼠的实验结果表明 ,pGH/脂质体可在 3～

关键词：猪生长激素脂质体pGH 缓释增重作用蛋白类激素垂体剂量生长饲料转化

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猪细胞核移植中卵母细胞激活方法的研究进展

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国外畜牧学（猪与禽） 2002年第4期22卷 28-31页

作者：刘东张德福沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161 上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106

猪的克隆 (核移植 )是当今的热点研究之一 ,研究意义重大。本文就猪核移植中卵母细胞的激活方法、原理及相关研究等作一综述。

关键词：猪细胞核移植卵母细胞激活方法

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应用胚胎冷冻技术保存小型猪品种资源

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国外畜牧学（猪与禽） 2001年第5期21卷 21-22页

作者：张德福徐平上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 中国科学院上海实验动物中心上海200233

一、研究意义我国幅员辽阔,地方猪种资源十分丰富,以小型猪为例,有贵州香猪、广西巴马小型猪、海南五指山猪、版纳微型猪和藏猪等,它们各具特点,是较为理想的医学实验动物模型,已引起国内外医学工作者、畜牧工作者的高度重视.由于小型... 详细信息

一、研究意义我国幅员辽阔,地方猪种资源十分丰富,以小型猪为例,有贵州香猪、广西巴马小型猪、海南五指山猪、版纳微型猪和藏猪等,它们各具特点,是较为理想的医学实验动物模型,已引起国内外医学工作者、畜牧工作者的高度重视.由于小型猪原产地大都位于偏远地区,其饲养范围越来越小,加之杂交改良等原因,有些类群已濒临绝种,因此如何有效地保存这一优良的地方猪种显得尤为迫切,而传统的群体保种方法因保种费用过高等原因难以长期持续.

关键词：小型猪实验动物胚胎冷冻技术玻璃化冷冻法

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雏番鸭细小病毒病病毒分离鉴定

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上海农业学报 2001年第1期17卷 54-58页

作者：刘惠莉李震王英张平丁卫星韦涛荣上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室动物基因工程研究室上海201106 上海市农业科学院瑞丰科技公司上海201106 南京农业大学动物医学院南京210095

采集以腹泻、呼吸困难为主要症状的雏番鸭肝、脾病料 ,接种 14d龄非免疫番鸭胚 ,80 %胚在 3～ 7d死亡 ,胚体呈弥漫性充血、出血。接种番鸭胚成纤维原代细胞 72h可见细胞圆缩、聚团等变化。收集尿囊液及细胞培养物 ,以番鸭细小病毒 (Musc... 详细信息

采集以腹泻、呼吸困难为主要症状的雏番鸭肝、脾病料 ,接种 14d龄非免疫番鸭胚 ,80 %胚在 3～ 7d死亡 ,胚体呈弥漫性充血、出血。接种番鸭胚成纤维原代细胞 72h可见细胞圆缩、聚团等变化。收集尿囊液及细胞培养物 ,以番鸭细小病毒 (Muscovyducklingparvovirus ,MDPV)阳性血清进行聚苯乙烯乳胶凝集 ,病料培养物均呈阳性反应 ,提取病料接种的尿囊液及细胞基因组DNA ,用自行设计引物PCR扩增到与设计相符的 60 0bp片段 ,经酶切鉴定 ,结果表明克隆到的片段为雏番鸭细小病毒特异性片段。

关键词：雏番鸭细小病毒病 PCR 病毒分离鉴定

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浅谈转基因克隆动物技术

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生物学通报 2000年第4期35卷 6-7页

作者：张德福王建荣上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106

根据现有理论和技术发展趋势 ,提出了转基因克隆动物的概念 ,即将克隆动物与转基因克隆动物技术有机地结合起来 ,认为转基因克隆动物制作技术将有望成为下一世纪创建遗传工程动物的主导性技术。

关键词：克隆动物胚胎细胞体细胞转基因克隆动物

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转基因克隆动物技术及其应用

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生物工程进展 2000年第5期20卷 25-27页

作者：张德福王建荣上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106

克隆动物是目前生物技术领域研究的热点之一 ,其科学意义和应用价值重大。根据现有理论和技术发展趋势 ,本文提出了转基因克隆动物的概念 ,即将转基因动物技术与克隆动物技术有机地结合 ,认为转基因克隆动物制作技术有望成为 2

关键词：克隆动物胚胎细胞体细胞转基因克隆动物

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