检索结果-内蒙古大学图书馆

冷冻保存对猪耳成纤维细胞H19和IGF2R基因DNA甲基化和基因表达的影响

中国畜牧杂志 2018年第7期54卷 86-90页

作者：张宏丽陈晓戴建军姚惠娟张树山张德福上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106 上海种猪工程技术研究中心上海201302

为探索冷冻保存对猪体细胞H19和IGF2R基因DNA甲基化的影响,本研究以梅山猪耳成纤维细胞为材料,采用亚硫酸氢盐测序和RT-PCR技术,检测了新鲜和冷冻保存细胞中H19和IGF2R基因的DNA甲基化状态和表达量,并对甲基化相关基因的表达水平进行分... 详细信息

为探索冷冻保存对猪体细胞H19和IGF2R基因DNA甲基化的影响,本研究以梅山猪耳成纤维细胞为材料,采用亚硫酸氢盐测序和RT-PCR技术,检测了新鲜和冷冻保存细胞中H19和IGF2R基因的DNA甲基化状态和表达量,并对甲基化相关基因的表达水平进行分析。结果表明:冷冻组中H19基因DMR1和DMR3的甲基化率极显著高于新鲜组(P<0.01),H19基因DMR2表现为去甲基化,极显著低于新鲜组中的甲基化率(P<0.01),且该基因表达量极显著高于新鲜组(P<0.01);冷冻组IGF2R基因DMR2表现为超甲基化,冷冻组极显著高于新鲜组中的甲基化率(P<0.01),但IGF2R基因表达量无显著差异(P>0.05);冷冻组中DNMT3A和DNMT1的基因表达量极显著高于新鲜组(P<0.01),DNMT3B基因表达量则无显著差异(P>0.05)。本实验条件下,冷冻保存影响了H19和IGF2R基因甲基化控制区的DNA甲基化状态,从而影响了该基因的表达水平。

关键词：梅山猪耳成纤维细胞冷冻保存 DNA甲基化基因表达

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大豆卵磷脂与卵黄在山羊精液冷冻过程中的联合作用研究

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中国畜牧杂志 2020年第9期56卷 100-104页

作者：范文华戴建军张树山孙玲伟吴彩凤张德福上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

试验旨在探究在山羊精液冷冻保存过程中单独使用大豆卵磷脂(SL)、卵黄(EY)及其联合使用的效果。以20%EY(V/V)和2%SL(m/V)为对照,在山羊冻精基础稀释液中分别添加10%EY+2%SL、20%EY+1%SL、20%EY+2%SL,冷冻解冻后分别对精子活率、精子活... 详细信息

试验旨在探究在山羊精液冷冻保存过程中单独使用大豆卵磷脂(SL)、卵黄(EY)及其联合使用的效果。以20%EY(V/V)和2%SL(m/V)为对照,在山羊冻精基础稀释液中分别添加10%EY+2%SL、20%EY+1%SL、20%EY+2%SL,冷冻解冻后分别对精子活率、精子活力、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性进行检测,同时利用试剂盒检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量变化。结果表明:当冷冻稀释液中联合添加10%EY+2%SL,解冻后该组的精子活力、精子活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性与20%EY和2%SL对照组无显著性差异,较20%EY+1%SL和20%EY+2%SL联合添加组显著提高;与20%EY和2%SL组相比,联合添加10%EY+2%SL组精子解冻后ROS和MDA含量和SOD活性无显著性差异,但精子抗氧化能力较另外2个联合添加组显著提高。综上,山羊精液冷冻基础稀释液中添加SL可替代或者部分替代EY,EY和SL的联合添加对山羊冻精无协同作用,20%EY联合添加不同浓度的SL则会加大对冷冻精子的氧化损伤。

关键词：山羊精液冷冻大豆卵磷脂卵黄联合作用

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影响哺乳动物睾丸下降的若干因素及其研究进展

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上海农业学报 2014年第4期30卷 144-147页

作者：李芳芳张树山吴彩凤戴建军张德福上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

睾丸下降是雄性生殖器官发育的一个重要方面,相关因素主要包括激素调节、环境因素和基因表达。本文综述了影响哺乳动物睾丸下降的若干因素及其研究进展。

关键词：隐睾雄激素苗勒氏管抑制物胰岛素样激素3 环境因素

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猪卵母细胞去核方法的改进

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中国兽医学报 2006年第5期26卷 574-577页

作者：张德福刘东汤琳琳陈晓宇 Lin Cailu 上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 Animal Breeding Institute Bonn UniversityBonn 53121 Germany

对猪体细胞克隆技术中关键步骤之一的去核方法作了较深入的研究。结果表明,由本实验室改进的Willadsen去核法———二步挤压去核法,无论在去核操作成功率(73.9%)上还是在去核效率(81.2%)上都明显好于McGrath-Solter去核法(42.5%、67.4%,... 详细信息

对猪体细胞克隆技术中关键步骤之一的去核方法作了较深入的研究。结果表明,由本实验室改进的Willadsen去核法———二步挤压去核法,无论在去核操作成功率(73.9%)上还是在去核效率(81.2%)上都明显好于McGrath-Solter去核法(42.5%、67.4%,P<0.05);同时,本试验还发现,卵母细胞成熟培养36 h后去核组去核效率(89.1%)显著地高于成熟培养44 h后去核组(55.8%,P<0.05),而核移植重构胚的发育率2个组间无显著差异。

关键词：猪卵母细胞去核核移植

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崇明白山羊超数排卵和胚胎冷冻初步研究

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上海农业学报 2010年第2期26卷 14-17页

作者：戴建军吴彩凤张廷宇吴华莉乔建宁黄丽欣黄松明张德福上海农业科学院畜牧兽医研究所上海农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106 上海市崇明县动物疫病预防控制中心上海202150

采用CIDR-FSH-PG-hCG法对崇明白山羊进行超数排卵,比较不同来源FSH的超数排卵效果,并对获得的胚胎进行冷冻保存和解冻后胚胎移植。结果表明:新西兰和宁波产FSH组分别获得75.0%和85.7%的发情率。新西兰FSH组左右卵巢平均分别获得8.67个和... 详细信息

采用CIDR-FSH-PG-hCG法对崇明白山羊进行超数排卵,比较不同来源FSH的超数排卵效果,并对获得的胚胎进行冷冻保存和解冻后胚胎移植。结果表明:新西兰和宁波产FSH组分别获得75.0%和85.7%的发情率。新西兰FSH组左右卵巢平均分别获得8.67个和9.67个排卵点,宁波FSH组平均获得7.33和6.33个排卵点。新西兰FSH和宁波FSH组分别平均获得9.67枚和8.00枚可用胚胎。OPS冷冻胚胎经解冻后,获得了80.77%的形态正常率,经胚胎移植,3头(3/5)山羊顺利妊娠,产下5头小羊。

关键词：崇明白山羊超数排卵冷冻保存胚胎移植

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口蹄疫病毒非结构蛋白3abc基因的克隆与表达

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中国病毒学 2003年第2期18卷 155-158页

作者：尤永进朱彩珠葛艳陈波张强饶忠徐泉兴卢永干上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究分室上海201106 中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046

口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus , FMDV)非结构蛋白(NSP)-3ABC可用于注苗与感染动物的鉴别诊断,合成该基因的PCR引物,并在引物5 端和3 端分别加入含BamH I和Hind III限制性酶切位点序列。以FMDV毒株基因组RNA为模板,利用RT-PC... 详细信息

口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus , FMDV)非结构蛋白(NSP)-3ABC可用于注苗与感染动物的鉴别诊断,合成该基因的PCR引物,并在引物5 端和3 端分别加入含BamH I和Hind III限制性酶切位点序列。以FMDV毒株基因组RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增3abc基因,得到的基因片段与T载体连接,转化DH5α。提取重组载体pT-3ABC,经BamH I/Hind III双酶切后与载体pET32a连接,转化宿主菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导表达目的蛋白。SDS-PAGE及Western Blotting检测和鉴定结果表明,在大肠杆菌中成功表达了NSP-3ABC蛋白,分子量约56kDa,且该表达产物可与FMDV感染的动物血清产生免疫反应。ELISA试验结果显示,表达蛋白可用于FMDV注苗与感染动物的鉴别诊断。

关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白 3abc基因基因克隆基因表达口蹄疫鉴别诊断 RT-PCR

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羊口疮病毒上海流行株的分离鉴定及其保护性抗原基因遗传进化分析

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中国兽医学报 2018年第4期38卷 655-661页

作者：陈晓李丽葛雷李垚戴建军王书全张树山吴彩凤张德福锦州医科大学畜牧兽医学院辽宁锦州121001 上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106 上海交通大学医学院上海200025

为了解上海地区羊口疮病毒（ORFV）流行毒株的分子生物学特性与遗传变异情况，采集疑似0RFV感染的羔羊唇部结痂组织，应用PCR、MDBK细胞分离培养、电子显微镜观察、间接免疫荧光技术等方法，进行分离鉴定，并对这2个分离毒株保护性抗原... 详细信息

为了解上海地区羊口疮病毒（ORFV）流行毒株的分子生物学特性与遗传变异情况，采集疑似0RFV感染的羔羊唇部结痂组织，应用PCR、MDBK细胞分离培养、电子显微镜观察、间接免疫荧光技术等方法，进行分离鉴定，并对这2个分离毒株保护性抗原基因F1L、B2L进行克隆与序列分析。结果表明，成功分离到2株ORFV，将其分别命名为ORFuF416、ORFV-F429。其中，2株分离株F1L基因与参考毒株核苷酸序列同源性分别为95．2％～99．4％，推导氨基酸序列与参考毒株氨基酸序列同源性分别为94．4％～99．4％，遗传进化树分析均显示2株均属于同一分支，且与福建株FJ—YX（KC568410）亲缘关系最近。但与相关参考毒株相比，分离株FIL基因编码的氨基酸在44～66位不存在核苷酸的缺失，表明上海流行株与FJ—YX株存在一定的变异。2株分离株B2L基因与参考毒株核苷酸序列同源性为96．7％～99．6％，氨基酸序列同源性为94．7％～98．9％，且在遗传进化树上均与广西株GX—YB（JQ904793）有较近的亲缘关系，但与中国疫苗株（JQ904789）亲缘关系较远。表明从上海地区分离得到的2个毒株与流行于中国南方地区的0RFV毒株有较近的亲缘关系，但分离株的FIL基因和B2L基因存在一定变异。

关键词： ORFV 分离鉴定 F1L基因 B2L基因进化分析

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精子载体法获得植酸酶转基因猪

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上海农业学报 2013年第5期29卷 6-9页

作者：吴斌戴建军张廷宇张树山吴彩凤顾晓龙陈会兰张德福上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106 四川农业大学生命科学与理学院雅安625014

将带有植酸酶基因的重构质粒酶切纯化后,与去除精浆的猪新鲜精液按比例混合,17℃孵育处理使重构质粒结合到精子头部,通过人工授精对6头受体母猪进行配种,4头受孕,产仔38头。经PcR对特异性片段扩增,结果表明:有6头PcR结果为阳性,阳性率为... 详细信息

将带有植酸酶基因的重构质粒酶切纯化后,与去除精浆的猪新鲜精液按比例混合,17℃孵育处理使重构质粒结合到精子头部,通过人工授精对6头受体母猪进行配种,4头受孕,产仔38头。经PcR对特异性片段扩增,结果表明:有6头PcR结果为阳性,阳性率为15.8%。扩增片段经克隆、测序、比对,与阳性对照组序列相似率均在99%以上,说明目的基因已转入阳性个体体内。

关键词：精子载体法植酸酶基因转基因猪

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体细胞克隆小型猪主要性能指标的测定

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中国兽医学报 2013年第3期33卷 462-465页

作者：张德福陈会兰顾晓龙戴建军张廷宇张树山吴彩凤吴斌上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106 上海海洋大学水产与生命学院上海201306 四川农业大学动物医学院四川雅安625014

通过与普通巴马小型猪的生长发育规律、繁殖性能、生理生化指标和屠宰肉质性能等的比较,了解小型克隆猪的主要性能指标,以期为克隆猪安全性评估及其产业化健康发展提供借鉴。结果表明,体细胞克隆巴马小型猪与普通猪的各项性能指标差异... 详细信息

通过与普通巴马小型猪的生长发育规律、繁殖性能、生理生化指标和屠宰肉质性能等的比较,了解小型克隆猪的主要性能指标,以期为克隆猪安全性评估及其产业化健康发展提供借鉴。结果表明,体细胞克隆巴马小型猪与普通猪的各项性能指标差异不显著。这种相似性在一定程度上说明了体细胞克隆猪的产业健康性和安全性。

关键词：克隆猪性能指标安全性

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高压均质(HPH)处理鸡蛋卵黄对猪冻精质量的影响

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中国兽医科学 2021年第7期51卷 932-938页

作者：汪俊跃何孟纤张树山戴建军孙玲伟吴彩凤张德福上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106 上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306

为探究高压均质(HPH)处理鸡蛋卵黄对猪精液冷冻效果的影响。选取Tris—柠檬酸—葡萄糖基础稀释液,以未处理的鸡蛋卵黄(20%EY)为对照组,添加经HPH处理后的鸡蛋卵黄(20%EY)为试验组,制成Ⅰ液和Ⅱ液,冷冻-解冻后分别对猪精子活力、活率、... 详细信息

为探究高压均质(HPH)处理鸡蛋卵黄对猪精液冷冻效果的影响。选取Tris—柠檬酸—葡萄糖基础稀释液,以未处理的鸡蛋卵黄(20%EY)为对照组,添加经HPH处理后的鸡蛋卵黄(20%EY)为试验组,制成Ⅰ液和Ⅱ液,冷冻-解冻后分别对猪精子活力、活率、顶体完整率、质膜完整率、线粒体活性、抗氧化指标及DNA完整率和凋亡指标进行检测。结果显示,经HPH处理能有效提高猪精子冻后质量。精液解冻后精子活力、活率、顶体完整率、质膜完整率分别为84.32%、86.71%、68.92%、59.09%,较对照组分别提高了13.7%、16.58%、6.5%、4.88%(P<0.05)。与对照组相比,试验组的MDA和ROS较对照组均有所上升(P>0.05),SOD较对照组有所下降(P>0.05)。但冻后精子NO和NOS含量显著降低(P<0.05)。试验组的精子解冻后DNA片段完整性较对照组明显提高(P<0.05),凋亡率下降(P<0.05)。结果表明,HPH处理鸡蛋卵黄能有效提高猪精液冷冻后质量。

关键词：高压均质猪卵黄精液冷冻

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