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上海中医药杂志 2013年第8期47卷 82-85页

作者：周秋娜尉小慧王峥涛上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室上海201210 上海中医药大学中药研究所中药新资源与质量标准综合评价国家中医药管理局重点研究室上海201210 上海中医药大学中药研究所上海市复方中药重点实验室上海201210 上海中药标准化研究中心上海201203

目的优化羟丙基-γ-环糊精(HP-γ-CD)包合黄芩素的工艺条件。方法采用冷冻干燥法,以包合物的得率、包封率和载药率为考察指标,通过L9(3)4正交设计优选黄芩素(Ba)与HP-γ-CD摩尔比、包合温度、包合时间、包合溶剂比(水∶无水乙醇),综合... 详细信息

目的优化羟丙基-γ-环糊精(HP-γ-CD)包合黄芩素的工艺条件。方法采用冷冻干燥法,以包合物的得率、包封率和载药率为考察指标,通过L9(3)4正交设计优选黄芩素(Ba)与HP-γ-CD摩尔比、包合温度、包合时间、包合溶剂比(水∶无水乙醇),综合评价确定最佳制备工艺;采用X射线衍射分析和差示扫描量热分析验证包合物。结果最优包合条件:Ba与HP-γ-CD摩尔比为1∶3,温度45℃,包合时间4 h,包合溶剂比(水∶无水乙醇)2∶3;采用最优包合条件制备的Ba-HP-γ-CD包合物得率为93.97%,包封率为95.96%,载药率为5.20%,其粉末经鉴定已形成包合物;Ba-HP-γ-CD包合物能够显著提高Ba的溶解度。结论优选的包合工艺合理可行,为黄芩素制备成各种剂型奠定了良好基础。

关键词：黄芩素羟丙基-γ-环糊精包合物工艺条件

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丹参SmERF081转录因子基因克隆与靶基因鉴定

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上海中医药大学学报 2024年第3期38卷 7-14页

作者：肖亦菽陈敏谈荣慧郑小宇赵淑娟上海中医药大学中药研究所国家中医药管理局中药新资源与品质评价重点研究室教育部中药标准化重点研究室上海市复方中药重点实验室上海201203 上海中医药大学中药学院上海201203

目的:克隆丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)转录因子SmERF081,分析SmERF081的靶基因。方法:以丹参转录组数据Unigene(c48961-g1)序列为参考,利用PCR扩增获得SmERF081基因序列;通过生物信息学预测SmERF081编码蛋白的理化性质、蛋白质结构... 详细信息

目的:克隆丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)转录因子SmERF081,分析SmERF081的靶基因。方法:以丹参转录组数据Unigene(c48961-g1)序列为参考,利用PCR扩增获得SmERF081基因序列;通过生物信息学预测SmERF081编码蛋白的理化性质、蛋白质结构等分子特征;使用MEGA 7软件构建系统进化树;对SmERF081进行异源表达和蛋白纯化;通过酵母单杂、双荧光素酶报告系统和化学发光法凝胶迁移实验(EMSA)鉴定SmERF081与SmCPS5启动子是否结合。结果:克隆得到SmERF081基因,cDNA全长453 bp(Genbank登陆号:OQ466089),编码151个氨基酸,相对分子质量16.46 kDa,等电点9.75。该蛋白不含信号肽,无跨膜区,其高级结构主要由无规则卷曲构成。进化树分析表明SmERF081与拟南芥At1G28360.1、丹参SmERF8同源关系最近。原核表达结果显示,经IPTG诱导后SmERF081在大肠杆菌中成功异源表达,并通过纯化获得目的蛋白。酵母单杂、双荧光素酶报告基因检测和EMSA确认SmERF081可与丹参SmCPS5启动子结合。结论:鉴定到丹参中一个新转录因子SmERF081,生物信息学分析及分子互作初步证实其靶基因为丹参SmCPS5二萜环化酶。

关键词：丹参 SmERF081 生物信息学靶基因

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儿茶素通过激活Nrf2抗氧化信号通路抵御野百合碱诱导大鼠肝窦阻塞综合征的研究

儿茶素通过激活Nrf2抗氧化信号通路抵御野百合碱诱导大鼠肝窦阻塞...

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2018第八届药物毒理学年会——创新技术、评估风险、保障安全

作者：景骁骐张家祺黄镇林盛雨辰季莉莉药物安全评价研究中心上海中医药大学中药标准化重点实验室和上海市复方中药重点实验室中药研究所上海中医药大学

肝窦阻塞综合征（Hepatic sinusoidal obstruction syndrome,HSOS）是一种罕见却会危及生命的肝脏疾病。儿茶素是一种天然膳食黄酮醇化合物,其具有较强的抗氧化能力。目的:探索核因子E2相关因子-2 （Nuclear factor erythroid 2-related... 详细信息

肝窦阻塞综合征（Hepatic sinusoidal obstruction syndrome,HSOS）是一种罕见却会危及生命的肝脏疾病。儿茶素是一种天然膳食黄酮醇化合物,其具有较强的抗氧化能力。目的:探索核因子E2相关因子-2 （Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2）抗氧化信号通路在儿茶素（（+）-catechin hydrate,CAT）抑制野百合碱（Monocrotaline,MCT）诱导大鼠肝窦阻塞综合征中的作用。方法:SPF级雄性SD大鼠分为4组（n=9～11）:（1）溶剂对照,（2） MCT （90mg/kg）,（3） MCT （90mg/kg）+CAT （40 mg/kg）,（4） CAT（40 mg/kg）。灌胃MCT或空白溶剂后6、30 h两次给予CAT,造模48 h后取血液和肝脏。血液分离血清检测谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）、谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）活力以及总胆汁酸（total bile acid,TBA）、总胆红素（total bilirubin,TBIL）含量。肝组织分别进行病理切片、扫描电镜分析,检测肝脏谷胱甘肽抗氧化系统、基质金属蛋白酶9 （matrix metalloproteinase 9,MMP9）的表达等指标。培养原代人肝窦内皮细胞（Human hepatic sinusoidal endothelial cells,HHSECs）,分别以相关抑制剂、CAT及MCT孵育处理,同时做相关对照。MCT孵育72 h后检测细胞活力、细胞内活性氧分子（reactive oxygen species,ROS）的产生及Nrf2抗氧化系统相关基因和蛋白的表达等指标。结果:血清中AST、ALT活力以及TBA、TBIL含量,肝组织病理切片、扫描电镜分析和MMP9的表达都证明了儿茶素对野百合碱诱导的大鼠肝窦阻塞综合征有明显的改善。儿茶素抑制了野百合碱诱导的大鼠肝氧化应激损伤以及HHSEC中ROS的累积。儿茶素还能促进野百合碱诱导的大鼠及肝窦内皮细胞中Nrf2的核转位,继而上调Nrf2下游相相关基因的表达,如谷氨酸半胱氨酸连接酶催化/调节亚基（glutamate-cysteine ligase catalytic/modifier subunit,GCLC/GCLM）、醌氧化还原酶（NAD（P）H dehydrogenase（quinone 1）,NQO1）,血红素氧合酶-1 （heme oxygenase-1,HO-1）。此外,GCL的抑制剂L-buthionine-（S,R）-sulfoximine （BSO）、NQO1抑制剂diminutol （Dim）以及HO-1抑制剂zinc protoporphyrin （ZnPP）都能逆转儿茶素对野百合碱诱导内皮细胞毒性的保护作用。分子对接实验的结果提示儿茶素与Nrf2的抑制蛋白Kelch状ECH相关蛋白1 （Keap1）上Nrf2结合区域具有相互作用。结论:儿茶素对野百合碱诱导的大鼠肝窦阻塞综合征模型有明显的保护作用,而Nrf2抗氧化信号通路在其中发挥了重要作用。

关键词：儿茶素野百合碱肝窦阻塞综合征 Nrf2

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中华大蟾蜍细胞色素P450还原酶基因克隆、表达与功能鉴定

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上海中医药大学学报 2024年第1期38卷 27-33页

作者：肖传光胡耀廷杨莉赵淑娟王峥涛上海中医药大学中药研究所中药新资源与品质评价国家中医药管理局重点研究室中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海201203

目的:从中华大蟾蜍(Bufo gargarizans Cantor)肝脏组织中克隆细胞色素P450还原酶基因(BgCPR,GenBank登录号:OQ572435)进行生物信息学分析,并进行功能验证。方法:基于中华大蟾蜍转录组数据库挖掘BgCPR基因序列,使用SnapGene软件设计BgCP... 详细信息

目的:从中华大蟾蜍(Bufo gargarizans Cantor)肝脏组织中克隆细胞色素P450还原酶基因(BgCPR,GenBank登录号:OQ572435)进行生物信息学分析,并进行功能验证。方法:基于中华大蟾蜍转录组数据库挖掘BgCPR基因序列,使用SnapGene软件设计BgCPR基因两端特异性引物,以蟾蜍肝脏组织总RNA逆转录成的cDNA为模板进行PCR扩增。利用生物信息学分析BgCPR蛋白理化性质、空间结构并构建系统进化树;基于CRISPR/Cas9基因编辑系统将蟾蜍BgCPR基因表达框经同源重组整合进入酿酒酵母基因组,利用聚乙二醇法制备转化子微粒体,验证其对细胞色素C的还原功能。结果:克隆得到全长2043 bp的BgCPR基因cDNA,编码680个氨基酸,相对分子质量77852 Da。结构预测显示,BgCPR蛋白为非分泌蛋白;有一段跨膜螺旋区,位于蛋白的第24~46位氨基酸之间;亚细胞定位预测显示该蛋白定位于内质网上。采用体外酶活实验证明其具有传递电子功能。结论:本研究克隆得到中华大蟾蜍BgCPR基因,并构建了表达具有生物活性的BgCPR的酿酒酵母工程细胞,为进一步研究蟾蜍CYP450基因功能乃至解析蟾蜍二烯内酯类化合物的生物合成途径奠定了基础。

关键词：中华大蟾蜍细胞色素P450还原酶细胞色素P450 蟾蜍二烯内酯

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中药黄芪皂苷类成分生物合成研究进展

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上海中医药大学学报 2021年第5期35卷 80-88,96页

作者：肖亦菽王如锋赵淑娟上海中医药大学中药研究所中药新资源与品质评价国家中医药管理局重点研究室中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海201203

作为常用中药,黄芪具有补气升阳、固表利水、托毒排脓等功效。黄芪皂苷类化合物是其主要活性成分,具有抗炎、抗肿瘤、免疫调节、代谢调节、器官保护等药理作用。从黄芪皂苷的化学结构与药理活性、生物合成途径与代谢调控、生物转化与合... 详细信息

作为常用中药,黄芪具有补气升阳、固表利水、托毒排脓等功效。黄芪皂苷类化合物是其主要活性成分,具有抗炎、抗肿瘤、免疫调节、代谢调节、器官保护等药理作用。从黄芪皂苷的化学结构与药理活性、生物合成途径与代谢调控、生物转化与合成生物学等方面进行综述,并对其生物合成前景进行展望,以期为应用生物技术实现黄芪皂苷的规模化生产提供参考。

关键词：黄芪皂苷生物合成生物转化综述

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黄草类石斛的薄层色谱鉴别研究

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中国药品标准 2010年第2期11卷 99-103页

作者：徐蓓杨莉陈崇崇王峥涛徐珞珊中国药科大学生药学研究室南京210038 上海中医药大学中药研究所教育部中药标准化重点实验室上海201203 上海中医药大学中药研究所上海市复方中药重点实验室上海201203

目的:建立黄草类石斛的薄层色谱(TLC)定性鉴别方法。方法:采用薄层色谱法,考察不同基源石斛及商品药材中专属性成分联苄类化合物毛兰素(erianin)、石斛酚(gigantol)、杓唇石斛素(moscatilin)和3,4',5-三羟基-3'-甲氧基联苄(tris... 详细信息

目的:建立黄草类石斛的薄层色谱(TLC)定性鉴别方法。方法:采用薄层色谱法,考察不同基源石斛及商品药材中专属性成分联苄类化合物毛兰素(erianin)、石斛酚(gigantol)、杓唇石斛素(moscatilin)和3,4',5-三羟基-3'-甲氧基联苄(tristin)的薄层色谱行为,对石斛药材进行定性鉴别。结果:通过21种不同基源的石斛及11批商品石斛的薄层色谱鉴别,证明此方法专属性强,操作简单,重复性好,为石斛的鉴别提供了一种准确、有效的新方法。结论:本方法可用于黄草类石斛的鉴别,为中药石斛的质量标准研究提供科学依据。

关键词：石斛联苄类化合物薄层色谱法鉴别质量控制

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肾康宁胶囊的薄层色谱定性鉴别质量控制方法研究

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上海中医药杂志 2021年第10期55卷 66-72页

作者：刘世欣陈良妮程雪梅季莉莉李小锋刘胜康兴东尉小慧王长虹上海中医药大学中药研究所上海市复方中药重点实验室中药标准化教育部重点实验室上海201203 江西普正制药股份有限公司江西吉安331409

目的建立肾康宁胶囊中泽泻、丹参、茯苓和锁阳的薄层色谱定性鉴别质量控制方法。方法采用单因素试验方法,对不同的展开系统、显色剂、点样量、温湿度进行系统考察,确定鉴定泽泻、丹参、茯苓和锁阳的最佳薄层色谱条件。结果泽泻、丹参采... 详细信息

目的建立肾康宁胶囊中泽泻、丹参、茯苓和锁阳的薄层色谱定性鉴别质量控制方法。方法采用单因素试验方法,对不同的展开系统、显色剂、点样量、温湿度进行系统考察,确定鉴定泽泻、丹参、茯苓和锁阳的最佳薄层色谱条件。结果泽泻、丹参采用硅胶G薄层板,以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(7∶4∶0.6)为展开剂,展开、取出、晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视荧光斑点,再喷以2%磷钼酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;茯苓采用硅胶G薄层板,以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(7∶4∶0.4)为展开剂,展开、取出、晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视荧光斑点;锁阳采用硅胶G薄层板,以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(8∶6∶1∶1)为展开剂,展开、取出、晾干,用0.04%DPPH无水乙醇溶液浸板,取出、晾干,置日光下检视斑点显色清晰。结论薄层色谱特征鉴别斑点清晰、专属性强、阴性对照无干扰。该方法简单方便,重复性好,可用于肾康宁胶囊的质量控制。

关键词：肾康宁胶囊薄层鉴别泽泻丹参茯苓锁阳

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长春花吲哚萜类生物碱代谢途径研究进展

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药物生物技术 2012年第3期19卷 278-282页

作者：章津赵淑娟胡之璧上海中医药大学中药研究所中药新资源与质量标准综合评价国家中医药管理局重点研究室上海市复方中药重点实验室上海201203

长春花(Catharanthus roseus(L.)***.)含有130余种生物碱,既是抗癌药物长春碱和长春新碱的唯一植物来源,也是研究吲哚萜类生物碱代谢途径的模式植物。生成长春花生物碱的前体环烯醚萜主要来源于2-C-甲基-D-赤藓醇4-磷酸途径(MEP),甲羟... 详细信息

长春花(Catharanthus roseus(L.)***.)含有130余种生物碱,既是抗癌药物长春碱和长春新碱的唯一植物来源,也是研究吲哚萜类生物碱代谢途径的模式植物。生成长春花生物碱的前体环烯醚萜主要来源于2-C-甲基-D-赤藓醇4-磷酸途径(MEP),甲羟戊酸途径(MVA)可能在此过程中起辅助作用。吲哚生物碱代谢途径受茉莉酸甲酯正调控。文多灵途径过去被认为在长春花悬浮细胞中没有文多灵产生,而目前的研究发现文多灵在长春花C20hi细胞中可以微量合成。文章对近年来长春花吲哚生物碱代谢途径及部分关键酶研究进展进行了综述。

关键词：长春花吲哚萜类生物碱文多灵长春碱长春新碱代谢途径

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微生物莽草酸代谢途径的研究进展

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江苏农业科学 2019年第7期47卷 19-23页

作者：陈园赵淑娟上海中医药大学中药研究所/中药新资源与品质评价国家中医药管理局重点研究室/中药标准化教育部重点实验室/上海市复方中药重点实验室上海201203

莽草酸是莽草酸代谢途径的中间产物,是合成手型药物的关键原料,也是合成芳香族类氨基酸(L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-色氨酸)、泛醌、叶酸、维生素K_2等芳香族化合物的关键中间体。通过基因改造微生物莽草酸代谢途径,可以使其大量积累莽草... 详细信息

莽草酸是莽草酸代谢途径的中间产物,是合成手型药物的关键原料,也是合成芳香族类氨基酸(L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-色氨酸)、泛醌、叶酸、维生素K_2等芳香族化合物的关键中间体。通过基因改造微生物莽草酸代谢途径,可以使其大量积累莽草酸,进而为生物体内合成芳香族氨基酸奠定基础。本文综述了莽草酸代谢途径在重组大肠杆菌中的生物合成途径的研究进展,分析了莽草酸合成过程中关键酶基因改造对莽草酸积累的影响、辅因子再生对目的产物的影响,还讨论了减少莽草酸工程菌代谢副产物产生量的措施。随着代谢工程技术和合成生物学技术的发展,通过基因技术定向改造代谢途径,构建理想的高产菌株已经成为研究的新热点。

关键词：莽草酸代谢途径基因改造关键酶基因辅因子

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杜仲总提物对大鼠成骨细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

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上海中医药杂志 2014年第7期48卷 95-98页

作者：关钧声郭海玲张紫佳李涛王峥涛中国药科大学生药学研究室江苏南京211198 上海中医药大学附属曙光医院上海201203 上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海201203

目的观察杜仲总提取物(DZCE)对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖、分化及分泌Ⅰ型胶原能力的影响。方法体外分离培养大鼠成骨细胞,分为对照组、地塞米松(DEX)10-8mol/L组、杜仲总提取物不同剂量组(10μg/L、1μg/L、0.1μg/L)共5个组,CCK-8(c... 详细信息

目的观察杜仲总提取物(DZCE)对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖、分化及分泌Ⅰ型胶原能力的影响。方法体外分离培养大鼠成骨细胞,分为对照组、地塞米松(DEX)10-8mol/L组、杜仲总提取物不同剂量组(10μg/L、1μg/L、0.1μg/L)共5个组,CCK-8(cell counting Kit-8)检测细胞增殖情况。由Pierce BCA蛋白分析试剂盒进行蛋白定量,然后由碱性磷酸酶(ALP)活性测定试剂盒检测成骨细胞的分化情况。用In cell western方法测定成骨细胞中Ⅰ型胶原蛋白(Col1αI)分泌随时间的变化情况。各组干预24 h后,实时荧光定量法检测成骨细胞Col1αI mRNA的表达情况。结果 1杜仲总提取物各剂量均能刺激成骨细胞的细胞增殖(P<0.01),同时也都能使成骨细胞的分化能力增强(P<0.05)。2药物干预后,Ⅰ型胶原蛋白的分泌随时间的变化情况是第1天的高中剂量,第3天的中低剂量能使成骨细胞的I型胶原蛋白表达提高(P<0.05),第5天、第7天、第9天,各组Ⅰ型胶原蛋白的分泌量均增加,但杜仲总提取物各剂量组与空白组差异无统计学意义(P>0.05)。3PCR检测发现,杜仲总提取物各剂量组的I型胶原基因的表达增加,而且这种促进I型胶原分泌的能力有量效趋势。结论杜仲总提取物能显著提高成骨细胞增殖、分化和Col1αⅠ的表达。

关键词：杜仲总提取物成骨细胞碱性磷酸酶 Ⅰ型胶原蛋白

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