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卫生研究 2009年第2期38卷 153-158页

作者：万旭英朱玉平马玺里朱江波侯娟刘真王飞张天宝第二军医大学基础部卫生毒理学教研室上海200433

目的建立可供毒理学研究的小鼠腔前卵泡体外培养方法。方法采用机械方法分离出生后12～14天(C57B1/6JxCBA/Ca)小鼠卵巢内直径为100～130μm的腔前卵泡,96孔板单个卵泡连续培养12天后诱导排卵16h,观察卵泡发育、激素分泌和卵子形成,并将... 详细信息

目的建立可供毒理学研究的小鼠腔前卵泡体外培养方法。方法采用机械方法分离出生后12～14天(C57B1/6JxCBA/Ca)小鼠卵巢内直径为100～130μm的腔前卵泡,96孔板单个卵泡连续培养12天后诱导排卵16h,观察卵泡发育、激素分泌和卵子形成,并将体外卵母细胞的成熟情况(IVG)与体内卵母细胞的生长情况(IVM)进行比较,以判断体外培养方法是否成功。结果分离完整卵泡率为89.74%(376/419);培养12天卵泡存活率为96.81%(364/376),有腔形成率为48.94%(184/376);卵泡和卵母细胞直径显著增加。诱导排卵后卵丘细胞-卵母细胞复合体排出率为56.38%(212/376);培养卵泡经历从腔前卵泡到卵母细胞成熟和极体排出的形态学变化,也有部分卵泡不发生腔样结构改变。体外培养卵泡分泌E2和P激素与体内分泌特征一致。IVG组4.61%(10/217)卵母细胞不能恢复成熟[停止在生发泡期(GV期)],76.50%(166/217)停止减数分裂在生发泡破裂期(GVBD期),18.89%(41/217)卵母细胞停止在第2次减数分裂(MII期)(PB);而IVM组1.24%(3/241)的卵母细胞不能恢复成熟(停止在GV期),45.23%(109/241)停止减数分裂在GVBD,53.53%(41/241)卵母细胞停止在MII期(PB);卵母细胞染色体核型完整,无染色体数目和结构异常。结论本研究建立的小鼠腔前卵泡体外培养方法基本成功,可作为卵泡发育生理研究和毒理学研究的模型。

关键词：腔前卵泡体外培养小鼠

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荧光标记对纳米聚苯乙烯细胞毒性和细胞内变化过程的影响

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卫生研究 2010年第5期39卷 531-535页

作者：王飞刘珍许桂凤侯娟张天宝第二军医大学基础部卫生毒理学教研室上海200433

目的探讨荧光标记纳米材料代替未标记纳米材料用于细胞动力学研究的可行性。方法在一定浓度范围(500、250、125、63、32和16μg/ml)和一定时间范围(48、24、16、8、4和1h)内,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测荧光标记与未标记纳米聚苯乙... 详细信息

目的探讨荧光标记纳米材料代替未标记纳米材料用于细胞动力学研究的可行性。方法在一定浓度范围(500、250、125、63、32和16μg/ml)和一定时间范围(48、24、16、8、4和1h)内,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测荧光标记与未标记纳米聚苯乙烯对人支气管上皮细胞系BEAS-2B和人单核细胞系THP-1存活率的影响;激光共聚焦显微镜和透射电镜分别观察不同时间内荧光标记与未标记纳米聚苯乙烯在细胞内的分布。结果荧光标记与未标记纳米聚苯乙烯对BEAS-2B和THP-1两种细胞存活率的变化趋势相同,均随着剂量增加细胞存活率降低;而且在相同的剂量组内,荧光标记与未标记纳米聚苯乙烯的细胞存活率差异无显著性(P>0.05);两种纳米材料的细胞存活率剂量-效应曲线趋势和时间-效应曲线趋势也一致;两种纳米材料均可在接触BEAS-2B和THP-1细胞1h后进入细胞,在4h时已经进入细胞核内,在细胞内分布广泛。结论荧光标记对纳米聚苯乙烯细胞毒性和细胞内动力学过程无明显影响,可以代替同尺寸未标记纳米聚苯乙烯用于细胞动力学研究。

关键词：荧光标记纳米聚苯乙烯细胞毒性毒征细胞分布细胞动力学

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Toll样受体抗体抑制脂多糖激活巨噬细胞的吞噬活性

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生物化学与生物物理进展 2001年第3期28卷 367-371页

作者：王梁华冯煜钟山朱玉平娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433

应用脂多糖 (LPS)激活巨噬细胞后其吞噬能力大大增强 ,以此为模型发现TLR2的多抗能部分抑制LPS激活巨噬细胞吞噬金葡萄球菌的能力 ,也能部分阻断对U937细胞的吞噬活性 .TRAIL或TNFα多克隆抗体同样能起到类似作用 .实验还发现低浓度血... 详细信息

应用脂多糖 (LPS)激活巨噬细胞后其吞噬能力大大增强 ,以此为模型发现TLR2的多抗能部分抑制LPS激活巨噬细胞吞噬金葡萄球菌的能力 ,也能部分阻断对U937细胞的吞噬活性 .TRAIL或TNFα多克隆抗体同样能起到类似作用 .实验还发现低浓度血清培养亦在一定程度上抑制LPS激活巨噬细胞的吞噬作用 .结果证实TLR2能介导LPS的功能 ,而某些血清因子参与了介导LPS的信号转导过程。

关键词：脂多糖 TLR2 抗体巨噬细胞 TRAIL TNFα 吞噬活性激活抑制作用

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邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯及其代谢产物MEHP对体外大鼠卵泡发育的影响

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卫生研究 2010年第3期39卷 268-270,274页

作者：万旭英朱玉平马玺里朱江波郑怡文侯娟王飞刘珍张天宝第二军医大学基础部卫生毒理学教研室上海200433

目的利用大鼠腔前卵泡体外培养方法研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)及其代谢产物邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(MEHP)对卵泡体外发育的影响。方法机械性分离大鼠腔前卵泡,单个卵泡在96孔板中连续培养。MEHP设2.5、5、10、20、40和80... 详细信息

目的利用大鼠腔前卵泡体外培养方法研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)及其代谢产物邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(MEHP)对卵泡体外发育的影响。方法机械性分离大鼠腔前卵泡,单个卵泡在96孔板中连续培养。MEHP设2.5、5、10、20、40和80μg/ml6个浓度,DEHP设33.7、67.5、125、250、500、1000nmol/L6个浓度,同时设二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照和阴性对照。每组16～20个卵泡,3次重复。隔天换1/2液,在培养第10天诱导排卵,观察卵泡体外发育情况。结果DEHP对第11天卵泡存活率、有腔形成率、异常卵泡形成率和卵丘-卵母细胞复合体(COCs)排出率无明显的影响,与溶剂对照组差异无显著性(P>0.05)。第2天暴露>10μg/ml以上剂量的MEHP48h后,第11天卵泡存活率明显下降(54.76%±3.37%),与对照组(91.57%±1.32%)比较差异有显著性(P<0.05),剂量与卵泡存活率之间存在一定相关性(R2=0.92);COCs排出(24.99%±3.95%)明显减少,与对照组(52.78%±8.45%)比较差异有显著性(P<0.05);异常卵泡出现率(45.24%±3.37%)明显升高,与对照组比较差异有显著性(P<0.05);暴露>20μg/mlMEHP有腔形成率(46.18%±1.67%)减少,与对照组(85.91%±5.03%)比较差异有显著性(P<0.05),且有明显剂量-反应关系。结论MEHP可以抑制体外大鼠腔前卵泡的生长发育。

关键词：邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯卵泡发育环境毒理

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纳米级二氧化钛对体外大鼠腔前卵泡生长发育成熟的影响

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第二军医大学学报 2009年第8期30卷 869-873页

作者：侯娟万旭英王飞许桂凤刘珍张天宝第二军医大学基础部卫生毒理学教研室上海200433

目的:采用大鼠腔前卵泡体外培养方法研究纳米级二氧化钛(TiO2)对大鼠卵泡发育及卵母细胞成熟的影响,揭示纳米TiO2有无雌性生殖毒性,为其安全性评价提供依据。方法:机械性分离大鼠腔前卵泡,单个卵泡在96孔板中连续培养。将卵泡随机分为5... 详细信息

目的:采用大鼠腔前卵泡体外培养方法研究纳米级二氧化钛(TiO2)对大鼠卵泡发育及卵母细胞成熟的影响,揭示纳米TiO2有无雌性生殖毒性,为其安全性评价提供依据。方法:机械性分离大鼠腔前卵泡,单个卵泡在96孔板中连续培养。将卵泡随机分为5组:3个25nmTiO2(12.5、25和50μg/ml)组、阴性对照组、微米级TiO2对照组。培养第10天诱导排卵,观察卵泡发育和卵母细胞成熟情况。结果:随着纳米级TiO2剂量增加,卵泡存活率、有腔形成率及卵丘-卵母细胞复合体(COCs)排出率呈下降趋势(P<0.05);与阴性对照组相比,微米级TiO2组对卵泡发育与卵母细胞成熟无明显影响;25μg/ml以上剂量纳米级TiO2组卵泡形态学明显异常,卵泡存活率及有腔形成率明显下降;50μg/ml纳米级TiO2可使处于成熟阶段的卵母细胞数减少。结论:25μg/ml剂量以上25nmTiO2可以抑制体外大鼠腔前卵泡的生长发育与卵母细胞成熟,而微米级TiO2在相同剂量下对卵泡的生长发育和卵母细胞的成熟无明显影响。提示纳米级TiO2有不同于微米级TiO2的毒作用性质,可能有雌性生殖毒性,应引起关注。

关键词：卵泡卵母细胞纳米级二氧化钛毒性试验

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外周血粒淋比联合肿瘤相关中性粒细胞对术后胃癌患者预后的影响

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中国肿瘤临床 2018年第2期45卷 77-82页

作者：黄晓培朱江波常文军张晓芳张天宝康争春薛伟第二军医大学卫生毒理学教研室上海市200433 第二军医大学环境卫生学教研室第二军医大学附属长海医院胃肠外科

目的:探讨胃癌患者外周血中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)和胃癌间质肿瘤相关中性粒细胞(tumor-associated neutrophils,TANs)对胃癌患者预后的预测价值。方法:选取第二军医大学附属长海医院2006年6月至2... 详细信息

目的:探讨胃癌患者外周血中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)和胃癌间质肿瘤相关中性粒细胞(tumor-associated neutrophils,TANs)对胃癌患者预后的预测价值。方法:选取第二军医大学附属长海医院2006年6月至2011年5月收治的126例胃癌患者,根据术前外周血NLR及胃癌患者TANs的浸润情况,将其分为4个组,比较全组胃癌患者的术后生存率,并分析其与临床病理学特征及预后的相关性。结果:NLR高合并TANs低浸润组肿瘤分化程度较低(P<0.001)且肿瘤体积较大(P=0.026)。4个组中NLR高合并TANs低浸润组生存率最低,NLR低合并TANs高浸润组生存率最高,且差异具有统计学意义(P<0.05)。单因素及多因素Cox回归分析均显示:NLR高合并TANs低浸润(P<0.05)是影响胃癌预后的独立危险因素。结论:术前外周血NLR联合胃癌组织中TANs浸润可作为判断胃癌患者预后的指标,且术前外周血NLR高联合胃癌组织中TANs低浸润胃癌患者的预后较差。

关键词：胃癌中性粒细胞/淋巴细胞比值肿瘤相关中性粒细胞预后

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虎杖3种主要化合物单体对大鼠痛风性关节炎的预防及治疗作用

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海军军医大学学报 2022年第3期43卷 270-277页

作者：侍雯婧毛晶晶严朗李劲锋陈云马裕清耿丙杰高方圆海军军医大学(第二军医大学)海军医学系卫生毒理学教研室上海200433

目的研究虎杖提取物中虎杖苷、白藜芦醇、大黄素3种主要化合物单体对痛风性关节炎模型大鼠的抗炎作用。方法72只SD大鼠按体重随机分为12组(空白对照组,模型组,阳性对照组,虎杖苷低、中、高剂量组,白藜芦醇低、中、高剂量组及大黄素低、... 详细信息

目的研究虎杖提取物中虎杖苷、白藜芦醇、大黄素3种主要化合物单体对痛风性关节炎模型大鼠的抗炎作用。方法72只SD大鼠按体重随机分为12组(空白对照组,模型组,阳性对照组,虎杖苷低、中、高剂量组,白藜芦醇低、中、高剂量组及大黄素低、中、高剂量组),每组6只。空白对照组、模型组大鼠予生理盐水,阳性对照组予吲哚美辛10 mL/kg,3种化合物单体低、中、高剂量组分别予对应药物125、250、500 mg/kg,各组大鼠均连续灌胃给药14 d。除空白对照组外,其余各组均于给药第12天时在大鼠右后足趾关节注射尿酸钠溶液建立痛风性关节炎大鼠模型。建模后第3天对大鼠右后足趾关节组织进行组织病理学检查,以评价关节的炎症反应和结晶体病变情况。采用ELISA检测大鼠血清中TNF-α、IL-6和IL-10的水平。结果造模后4~48 h各组大鼠的关节肿胀程度均高于空白对照组(P均<0.05),除空白对照组外,其余各组大鼠的关节肿胀程度均随时间推移先升高后降低。组织病理结果显示,虎杖苷低剂量组及白藜芦醇、大黄素3个剂量组大鼠关节部位仍可见以炎症反应为主的病理变化,但与模型组相比,上述各组发生炎症反应和结晶体沉积的大鼠只数减少、炎症反应和结晶体沉积的严重程度降低。此外,与模型组比较,虎杖中的虎杖苷、白藜芦醇和大黄素3种化合物单体对痛风性关节炎大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-10的影响不同,但均具有一定的抗炎效果。结论虎杖中的虎杖苷、白藜芦醇和大黄素3种单体均对痛风性关节炎模型大鼠具有预防及治疗炎症的作用。

关键词：痛风性关节炎虎杖苷白藜芦醇大黄素组织病理学炎症因子

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热休克蛋白47和热休克蛋白60在小鼠胚胎器官形成过程中的表达

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解剖学杂志 2005年第4期28卷 425-427,467页

作者：朱勇飞朱江波周宏元张天宝第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

目的:研究小鼠胚胎器官形成过程中热休克蛋白47(Hsp47)和热休克蛋白60(Hsp60)的表达情况。方法:于GD11- GD18,取得小鼠胚胎脑、眼、心、肺、胃、肝、四肢,于GD13-GD18取得肾,利用RT-PCR方法半定量检测Hsp47和Hsp60在各器官的表达丰度。... 详细信息

目的:研究小鼠胚胎器官形成过程中热休克蛋白47(Hsp47)和热休克蛋白60(Hsp60)的表达情况。方法:于GD11- GD18,取得小鼠胚胎脑、眼、心、肺、胃、肝、四肢,于GD13-GD18取得肾,利用RT-PCR方法半定量检测Hsp47和Hsp60在各器官的表达丰度。结果:Hsp47在GD11-GD12和GD18的脑、GD11-GD12和GD17-GD18的眼、GD11-GD12和GD16- GD18的肺、GD11-GD18的肝脏不表达,在其余时间和其余器官均有表达;Hsp60在GD11-GD18时段胚胎的脑、眼、心、肺、胃、肝、肾(GD13-GD18)、四肢中均有表达。结论:Hsp47和Hsp60在小鼠胚胎器官形成过程中有不同的表达丰度,其表达模式也不一致;Hsp47在小鼠胚胎发育过程中可能有重要功能,Hsp60则具有广泛表达的特点。

关键词：热休克蛋白47 热休克蛋白60 小鼠胚胎器官基因表达

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雷公藤提取物对大鼠致畸敏感期毒性试验研究

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中国新药杂志 2004年第S1期13卷 1334-1336页

作者：陈蓉芳朱玉平马玺里郑怡文朱江波张天宝第二军医大学卫生毒理学教研室第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

目的:研究雷公藤提取物(LLZ)对受孕SD大鼠在致畸敏感期的致畸作用。方法:孕鼠随机分为0,10,30和***-1体重4个剂量组,于妊娠d6～15(胎鼠器官形成期)每日灌胃染毒1次,妊娠d20处死母鼠,剖宫观察对胚胎的影响。结果:雷公藤提取物在***-1剂... 详细信息

目的:研究雷公藤提取物(LLZ)对受孕SD大鼠在致畸敏感期的致畸作用。方法:孕鼠随机分为0,10,30和***-1体重4个剂量组,于妊娠d6～15(胎鼠器官形成期)每日灌胃染毒1次,妊娠d20处死母鼠,剖宫观察对胚胎的影响。结果:雷公藤提取物在***-1剂量时出现明显的母体毒性和胚胎毒性,表现为母鼠体重增加值比对照组小;死胎率及吸收胎率增高,活胎率降低;***-1剂量时出现胎儿毒性,表现为胎儿体重、身长较小、胸骨缺失和骨化迟缓;未观察到胎儿畸形。结论:LLZ对SD大鼠在有母体毒性(***-1)时有胚胎毒性,在无明显的母体毒性(***-1)时也有一定的胎儿毒性,但均无致畸作用。

关键词：雷公藤提取物致畸性大鼠

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视黄酸致小鼠腭裂分子机制的研究

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卫生研究 2004年第6期33卷 690-693页

作者：朱江波印木泉朱玉平陈蓉芳万旭英马玺里郭苗莉张天宝第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

目的　探讨化学物致小鼠腭裂的分子机制。方法　以视黄酸 (RA)为受试物 ,采用抑制消减杂交技术 (SSH)从全基因组水平上对RA致腭裂相关差异表达基因进行筛选。结果　得到RA逆向差异表达片断14个 ,正向差异表达片断 9个。经测序和GeneBan... 详细信息

目的　探讨化学物致小鼠腭裂的分子机制。方法　以视黄酸 (RA)为受试物 ,采用抑制消减杂交技术 (SSH)从全基因组水平上对RA致腭裂相关差异表达基因进行筛选。结果　得到RA逆向差异表达片断14个 ,正向差异表达片断 9个。经测序和GeneBank比对后得到已知基因 7条 ,余者为未知功能基因或未知基因。结论　Gpc3和胰岛素诱导蛋白 1可能通过调节腭发生过程中某些基因干扰间充质细胞正常增殖 ;Ptprs的表达抑制影响了某种腭突发生中细胞信号转导通路 ;腱生蛋白的抑制表达可能使细胞粘连力的去除失败或者由于基质中MMPs的表达降低而使腭中缝消除受阻。还可能影响细胞对营养物质的摄取而引起Rps2 5的上调诱发过度的细胞凋亡而在腭裂发生中发挥作用。

关键词：腭裂视黄酸基因筛选分子机制

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