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第15次全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：沈毅珺刘彦君郑海音潘卫许燕王征杨彤谭靖伟吴劲松吴芳曹峰第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 上海复旦张江生物医药股份有限公司上海201203 上海复旦张江生物医药股份有限公司上海201203 上海市中医医院上海200032 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

淋巴毒素(lymphotoxin,LT)通过TNFR1受体传递凋亡信号,从而发挥抗肿瘤活性.对LT的受体结合区域进行多点随机突变,利用噬菌体展示重组人淋巴毒素(rhLT)R46,S106,L130三点随机突变组合文库和S106～F110区域随机突变体库.噬菌体库与固相化T... 详细信息

淋巴毒素(lymphotoxin,LT)通过TNFR1受体传递凋亡信号,从而发挥抗肿瘤活性.对LT的受体结合区域进行多点随机突变,利用噬菌体展示重组人淋巴毒素(rhLT)R46,S106,L130三点随机突变组合文库和S106～F110区域随机突变体库.噬菌体库与固相化TNFR1受体进行亲和筛选,富集了能与TNFR1受体结合的rhLT突变体.随机挑选20个单克隆噬菌体进行ELISA受体结合鉴定,其中80％的克隆与TNFR1受体特异性结合,25％的克隆与TNFR1受体的结合能力高于野生型序列的rhLT.将结合力高的4个突变体克隆于pET32a(+)载体,经过大肠杆菌表达和纯化操作后,检测这些突变体蛋白与TNTR1受体的结合活性和对L929细胞的杀伤活性,发现3个克隆的受体结合性质与其展示于噬菌体上时基本吻合,其中C199克隆与TNFR1的结合活性比野生型序列的rhLT提高了近30％,且其对L929细胞的杀伤活性提高了近90％.应用噬菌体展示技术对淋巴毒素进行体外进化研究的尝试,为下一步的蛋白质结构和功能研究提供了思路,可成为大分子药物开发的有效工具.

关键词：淋巴毒素随机突变噬菌体亲和筛选

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家兔小腿三头肌内神经和血管分布的研究

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第二军医大学学报 2005年第1期26卷 38-40页

作者：陈刚江华林子豪党瑞山第二军医大学长征医院整形外科上海200003 基础医学部解剖学教研室上海200433

目的:通过对家兔小腿三头肌内神经、血管分布关系的研究,探讨如何选择和切取理想的部分肌肉移植重建运动功能的方法。方法:家兔一侧的小腿三头肌完整剥离后用Sihler’s染色法行肌内神经的染色,同时另一侧行30%硫酸钡乳胶混悬液血管灌注... 详细信息

目的:通过对家兔小腿三头肌内神经、血管分布关系的研究,探讨如何选择和切取理想的部分肌肉移植重建运动功能的方法。方法:家兔一侧的小腿三头肌完整剥离后用Sihler’s染色法行肌内神经的染色,同时另一侧行30%硫酸钡乳胶混悬液血管灌注并进行钼靶摄片。而后对照观察神经、血管在肌肉内分布的关系。结果:经Sihler’s染色,家兔的一侧小腿三头肌肌质呈透明或半透明状,肌肉外形完整,肌肉内各级神经分支被染成蓝紫色,清晰可见神经在肌肉内的分布。兔小腿三头肌分为3个神经肌肉室,腓肠肌外侧头可再分为3 个亚部。经软X线摄影后的小腿三头肌,清晰可见肌肉内血管的分布,神经和血管分支在肌内的分布区域大致吻合。结论:Sihler’s染色可以显示兔小腿三头肌肌内神经分布的原始三维图像,结合肌内的血管造影,可直观地观察肌内神经和血管分布的关系。根据神经血管在肌内分布的不同情况,可将其分为不同的亚单位即肌亚部,作为独立的功能单位。按肌亚部设计取材,适宜于肌肉部分移植手术的要求。

关键词：肌内神经分布血管造影神经肌肉室希勒染色小腿三头肌

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肌肉游离移植后烟碱型乙酰胆碱受体ε和γ亚单位表达的变化及意义

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中华显微外科杂志 2005年第2期28卷 156-158页

作者：张盈帆江华林子豪蔡在龙吴包金上海市第二军医大学附属长征医院整形外科 200003 上海市第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

目的在基因水平上定量的观察肌肉游离移植后冲经肌肉接头烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)ε和γ亚单位基因表达的动态变化情况,探讨移植后肌肉功能减退与nAChRγ和ε亚单位基因变化之间的可能关系。方法以正常Wistar大鼠股薄肌为对照,利用荧... 详细信息

目的在基因水平上定量的观察肌肉游离移植后冲经肌肉接头烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)ε和γ亚单位基因表达的动态变化情况,探讨移植后肌肉功能减退与nAChRγ和ε亚单位基因变化之间的可能关系。方法以正常Wistar大鼠股薄肌为对照,利用荧光定量RT-PCR的方法分别检测肌肉移植术后不同时间肌肉样本内ε和γ亚单位mRNA的表达。结果肌肉移植后ε和γ亚单位mRNA表达的拷贝数均是先增高后减少。ε亚单位mRNA表达的拷贝数存术后第3周降到最低后又逐渐增高,但到术后晚期仍低于对照组的水平,差异有统计学意义(P<0.05),而γ亚单位mRNA的拷贝数自术后第2周后开始减少,到术后30周时未完全消失,仍保持低水平的表达。结论终板区亚单位基因的表达变化可能与肌肉游离移植后nAChR的数量减少及功能降低有关系。

关键词：烟碱型乙酰胆碱受体移植后亚单位表达游离 Wistar大鼠 mRNA表达 nAChR 神经肌肉接头亚单位基因拷贝数变化情况基因表达基因水平基因变化功能减退不同时间移植术后荧光定量完全消失表达变化股薄肌 PCR 对照组

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氦氖激光对体外培养神经元生长发育的影响

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中国临床康复 2005年第1期9卷 88-90,i002页

作者：张顺清吴爱群张伟宏岳新灿曾光伟郑州大学基础医学院人体解剖学教研室河南省郑州市450052 解放军第二军医大学人体解剖学教研室上海市200433

目的:研究氦氖激光照射对神经元的影响。方法:采用无血清培养的新生大鼠海马神经元和额前叶皮质神经元,观察氦氖激光照射对神经元生长发育的影响。结果:氦氖激光照射能促进体外培养神经元的神经突起生长,增加神经元胞体面积及直径,提高... 详细信息

目的:研究氦氖激光照射对神经元的影响。方法:采用无血清培养的新生大鼠海马神经元和额前叶皮质神经元,观察氦氖激光照射对神经元生长发育的影响。结果:氦氖激光照射能促进体外培养神经元的神经突起生长,增加神经元胞体面积及直径,提高神经元存活率。用Nissle染色法分析证明,氦氖激光照射能明显增加神经元内氏体的含量。结论:氦氖激光照射对神经元生长发育有重要促进作用。

关键词：大脑皮质神经元氦氖激光

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氦氖激光对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠学习记忆能力的影响

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中国临床康复 2005年第9期9卷 102-103页

作者：陈雪梅张伟宏吴爱群牛建刚曾光伟张顺清郑州大学基础医学院人体解剖学教研室河南省郑州市450052 解放军第二军医大学人体解剖学教研室上海市200433 郑州市精神病防治医院河南省郑州市450052

目的:研究氦氖激光穴位照射疗法对缺氧缺血性脑损伤(hypoxiais-chemiabraindamage,HIBD)新生大鼠学习记忆和脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotrophicfactor,BDNF)的影响。方法:实验于2003-12/2004-05在郑州大学基础医学院人体解剖学教研室完成。7日龄Wistar大鼠56只随机分为假手术组、HIBD组、HIBD激光穴位照射组、HIBD激光非穴位照射组。用Y型迷宫检测新生大鼠HIBD后学习记忆能力以及取左脑进行BDNF免疫组织化学染色。结果:HIBD激光穴位照射组大鼠与HIBD组和HIBD激光非穴位照射组相比学习和记忆能力明显提高,BDNF免疫阳性细胞明显增加(35.67±4.32)个/视野,差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:激光穴位照射提高HIBD新生大鼠学习记忆能力。

关键词：脑缺血激光缺氧学习记忆

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肿瘤坏死因子α基因多态性对强直性脊柱炎发病易感性和临床病变程度的影响(英文)

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中国临床康复 2005年第22期9卷 252-254页

作者：韩星海陈蕊雯段世伟杨波蔡青林懿孙树汉解放军第二军医大学长海医院风湿免疫科上海市200433 解放军第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海市200433 上海交通大学生命科学研究中心中国科学院营养研究所上海市200031

背景:肿瘤坏死因子α基因多态性与强直性脊柱炎发生与发展的关系是近年强直性脊柱炎遗传学研究的热点。目的:探讨肿瘤坏死因子α基因启动子-238和-308位点多态性对强直性脊柱炎发病易感性和病变程度的影响。设计:病例-对照观察。单位:... 详细信息

背景:肿瘤坏死因子α基因多态性与强直性脊柱炎发生与发展的关系是近年强直性脊柱炎遗传学研究的热点。目的:探讨肿瘤坏死因子α基因启动子-238和-308位点多态性对强直性脊柱炎发病易感性和病变程度的影响。设计:病例-对照观察。单位:第二军医大学长海医院风湿免疫科。对象:随机选择1999-01/2003-12在第二军医大学长海医院风湿免疫科就诊的强直性脊柱炎患者108例,各对象间均无血缘关系。男女比为5.3∶1;年龄13～71(30±12)岁,根据骶髂关节破坏程度X射线片评估为Ⅰ～Ⅳ级。另从解放军上海血站(长海医院)随机选取100名健康献血者作为对照,年龄19～56(33±9)岁,男女比为4.9∶1,参与者均知情同意。方法:每例参与者取外周血,加乙二胺四乙酸A抗凝后进行肿瘤坏死因子-α基因启动子的聚合酶链反应扩增和纯化;对聚合酶链反应产物测序,并用Chromas1.62软件展示分析DNA测序结果。②以X射线骶髂关节片分级和肿瘤坏死因子α-308位点(G/C)和(G/A)的对应值评估其对疾病程度的影响。主要观察指标:以DNA直接测序法对-238和-308位点进行基因分型,并分析基因类型与疾病临床表现之间的关系。结果:①肿瘤坏死因子α-238G/G基因型和-238G/A基因型:强直性脊柱炎组有106例(98.1%)和2例(1.9%),正常对照组有95例(95.0%)和5例(5.0%),两组间比较无显著性差异。②肿瘤坏死因子α-308.1.1(G/G)基因型和-308.1.2(G/A)基因型:强直性脊柱炎组有89例(82.4%)和19例(17.6%),正常对照组中有85例(85.0%)和14例(14.0%)。两组比较亦无显著性差异。③根据骶髂关节X射线分级判定疾病严重程度与肿瘤坏死因子α-308位点G/G和G/A基因型之间的关系:强直性脊柱炎患者X射线片Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级时,(G/G)型为3/35/40/11例,(G/A)型为1/12/6/0例。两组差异比较意义显著(χ2GMH=4.77,P<0.05)。结论:在观察对象中未发现肿瘤坏死因子α基因启动子-238和-308位点多态性与强直性脊柱炎发病易感性相关,但根据骶髂关节损害程度X射线分级说明肿瘤坏死因子α基因启动子-308位点的多态性对强直性脊柱炎的严重程度有影响。

关键词：脊柱炎,强直性肿瘤坏死因子多态现象(遗传学) 基因疾病易感性

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氦氖激光穴位照射后缺氧缺血新生大鼠脑组织中超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的变化

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中国临床康复 2005年第23期9卷 196-197页

作者：李宛青陈雪梅吴爱群刘伟刘华郑州师范高等专科学校生命科学系河南省郑州市450044 郑州大学基础医学院人体解剖学教研室河南省郑州市450052 解放军第二军医大学解剖学教研室上海市200433 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所解剖与组织胚胎学系北京市100005 郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室河南省郑州市450052

目的:观察缺氧缺血新生大鼠经过氦氖激光穴位照射后脑组织中的活性物质超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的变化情况。方法:实验于2003-03/11在郑州大学基础医学院人体解剖学教研室完成。选择30只7d龄健康Wistar大鼠,体质量12～15g,雌雄... 详细信息

目的:观察缺氧缺血新生大鼠经过氦氖激光穴位照射后脑组织中的活性物质超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的变化情况。方法:实验于2003-03/11在郑州大学基础医学院人体解剖学教研室完成。选择30只7d龄健康Wistar大鼠,体质量12～15g,雌雄不拘。随机分为3组,即假手术对照组、缺氧缺血组和激光穴位照射组,每组10只。缺氧缺血组与激光穴位照射组动物均制作成缺氧缺血模型,在清醒状态下实施左侧颈总动脉结扎术,术后在室温中恢复1～4h后,置于常压缺氧仓中,通入8mL/L氧气、920mL/L氮气(体积比)的混合气体,2h后将动物取出。缺氧缺血组不加任何治疗。激光穴位照射组于缺氧缺血后第2天,采用氦氖激光照射百会、大椎两穴,功率4mW,光斑直径3mm,每次照射10min,1次/d,同一时间进行,10d为1个疗程,共3个疗程,各疗程间隔2d。百会穴在颅顶正中,大椎穴在C7～T1之间,背部正中。假手术组仅分离左侧颈总动脉,不结扎,不缺氧。各组大鼠常规饲养34d后,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶活性,比色法测定丙二醛含量。结果:因缺氧缺血对动物造成了伤害,缺氧缺血组死亡3只,激光穴位照射组死亡2只。进入结果分析,假手术对照组、缺氧缺血组和激光穴位照射组分别为10,7和8只。①大鼠脑组织超氧化物歧化酶活性:缺氧缺血组显著低于假手术对照组和激光穴位照射组[(59.70±4.03)NU/mL,(76.24±2.43)NU/mL,(72.56±5.60)NU/mL,(t=5.03,4.83,P<0.05)]。②大鼠脑组织丙二醛含量:缺氧缺血组显著高于假手术对照组和激光穴位照射组[(267.58±30.55)mmol/L,(99.87±15.48)mmol/L,(135.29±32.76)mmol/L,(t=10.68,8.81,P<0.05)]。结论:氦氖激光穴位照射能提高、诱发缺氧缺血大鼠脑组织中超氧化物歧化酶的生成和活力,降低丙二醛水平。新生大鼠未成熟脑的可塑性较大,如果利用此关键时期进行氦氖激光穴位照射,可能对脑功能的恢复有一定帮助。

关键词：脑缺氧脑缺血氦氖激光超氧化物歧化酶丙二醛

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人胚胎间充质干细胞向平滑肌细胞定向分化标志蛋白的选择

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第二军医大学学报 2004年第8期25卷 822-826页

作者：李红华刘厚奇刘太华汤淑萍熊俊惠宁第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部人体解剖学教研室长海医院妇产科

目的:选择平滑肌细胞(smooth musele cell,SMC)特异性标志蛋白,作为判断人胚胎间充质干细胞(mesenchymalstem cell,MSC)是否向SMC方向分化的指标。方法:采用免疫细胞化学、免疫荧光、Western印迹和RT-PCR等方法,检测SMC分化早、中、晚... 详细信息

目的:选择平滑肌细胞(smooth musele cell,SMC)特异性标志蛋白,作为判断人胚胎间充质干细胞(mesenchymalstem cell,MSC)是否向SMC方向分化的指标。方法:采用免疫细胞化学、免疫荧光、Western印迹和RT-PCR等方法,检测SMC分化早、中、晚期标志蛋白smooth muscle(SM)-α-actin、calponin、SM-myosin heavy chain(SM-MHC)在人胚MSC中的表达情况。结果:各实验均证明SM-α-actin和calponin蛋白在人胚MSC中表达。各种实验方法在人胚MSC中均检测不到SM-MHC蛋白及其mRNA的表达。结论:SM-MHC是一个有价值的SMC特异性标志物,可以做为判断人胚MSC向SMC方向分化与否的指标。

关键词：间充质干细胞胚胎平滑肌细胞细胞分化

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人髂腰肌神经的显微解剖和大鼠髂腰肌的复合动作电位研究

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第二军医大学学报 2004年第11期25卷 1216-1219页

作者：麻文谦张少成张传森党瑞山崔毅第二军医大学长海医院骨科第二军医大学基础医学部解剖学教研室上海200433 第二军医大学长海医院肌电图室上海200433

目的 :了解髂腰肌的神经支配及电生理学特征。方法 :在 30侧经甲醛溶液固定的成人尸体标本上进行显微解剖观察与测量 ,于手术显微镜下操作 ,剥离神经外膜 ,分离出神经束 ,研究髂腰肌神经的走行、分布及其神经纤维的来源 ,通过逆行追踪... 详细信息

目的 :了解髂腰肌的神经支配及电生理学特征。方法 :在 30侧经甲醛溶液固定的成人尸体标本上进行显微解剖观察与测量 ,于手术显微镜下操作 ,剥离神经外膜 ,分离出神经束 ,研究髂腰肌神经的走行、分布及其神经纤维的来源 ,通过逆行追踪观察各分支的神经纤维在神经干内的分布定位的特征 ;对大鼠髂腰肌神经进行电生理学测定 ,依次刺激 L2 ～ L5神经根 ,于髂腰肌记录其复合肌肉动作电位 (CMAP) ,观察并计算其运动潜伏期 (motor latency)、动作电位的波幅及波幅下面积以判定神经功能的状况 ,研究各腰神经根对髂腰肌支配的不同效应。结果 :支配腰大肌的神经纤维主要来源于 L2 ,其次是 L3,肌支纤维在 L2 神经干的外上侧束走行 ,部位较恒定。髂肌肌支则在股神经起始处发出 ,其神经纤维主要来源于 L4 ,其次为 L3及L2 ,一部分集中于 L4 神经根近侧端 (靠近脊神经节 )的下内象限 ,来源于 L2 、L3的神经纤维在股神经起始处断面的内上象限集中。电生理检测运动传导中复合肌肉动作电位发现对 L2 、L4 神经根刺激后测得波幅下面积分别为 (7.4 6± 2 .2 3)、(2 1.4 8± 1.87) m V· ms,与其他神经根所测相比有明显差异 (P<0 .0 5 )。结论 :腰大肌的神经纤维来源主要是 L2 ,肌支纤维在 L2 神经干的外上部走行。

关键词：髂腰肌神经支配显微解剖神经电生理

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组织工程血管脱细胞支架主要组织相容性复合体Ⅰ抗原性的免疫组化观察

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 72-74,F004页

作者：刘太华张炎姜宗来李玉泉刘波张秀花第二军医大学基础医学部人体解剖学教研室上海200433 上海交通大学医学院上海200030

目的 :探讨组织工程血管全生物支架的免疫原性的检测方法。方法 :取猪颈总动脉 ,剥离外膜 ,剪成 2 cm长的血管段 ,随机分为 3组 :对照组、脱细胞组和脱细胞加碱处理组 ,每组 5段。以免疫组化方法检测血管脱细胞处理前后主要组织相容性... 详细信息

目的 :探讨组织工程血管全生物支架的免疫原性的检测方法。方法 :取猪颈总动脉 ,剥离外膜 ,剪成 2 cm长的血管段 ,随机分为 3组 :对照组、脱细胞组和脱细胞加碱处理组 ,每组 5段。以免疫组化方法检测血管脱细胞处理前后主要组织相容性复合体 (MHC )的变化情况 ,并将检测结果作图像分析。结果 :对照组血管壁 MHC 高表达 ,脱细胞处理后 MHC 明显减少。图像分析得出阳性颗粒面积与视场面积比 :对照组为 (2 4 .0 9± 6 .0 9) % ,脱细胞组为 (6 .71± 2 .1 8) % ,脱细胞加碱处理组为 (1 .6 2± 0 .76 ) % ,组间比较差别均有显著意义 (P<0 .0 1 )。结论 :MHC

关键词：组织工程血管脱细胞支架免疫组织化学免疫原性主要组织相容性复合体I 免疫排斥反应

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