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上海交通大学学报（医学版） 2023年第7期43卷 814-820页

作者：张如杰周广东王建博翁光东雷东龚文辉安徽医科大学第一附属医院心脏大血管外科合肥230088 上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200125

目的·探讨氟化脱细胞兔主动脉作为组织工程人工小血管的可行性。方法·联合聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)、脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,SD)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)、DNA酶、RNA酶等对获取的兔... 详细信息

目的·探讨氟化脱细胞兔主动脉作为组织工程人工小血管的可行性。方法·联合聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)、脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,SD)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)、DNA酶、RNA酶等对获取的兔主动脉进行脱细胞处理,分别对脱细胞组和未脱细胞组进行苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H-E染色)、Masson染色、Verhoff-von Gieson染色,用场发射扫描电镜鉴定脱细胞效果,观察脱细胞血管形态学变化。使用脱细胞后的兔主动脉作为动脉化人工小血管支架,利用液体全氟化碳涂层修饰脱细胞小血管内膜(氟化组)制备一种新型人工小血管,并对其特征基团进行定性且定量测定。观察血管内表面液体消散时间和液体在45°倾斜血管表面的流动情况来分析血管的疏水性。将脱细胞组和氟化组的血管置入富含血小板的血浆后孵育,在电镜下观察,评估体外抗血小板聚集性能。取未脱细胞组、脱细胞组以及氟化组的兔主动脉连接上球囊扩张压力泵进行爆破压力测试。结果·对血管进行组织学观察发现,联合脱细胞法可以有效去除细胞并保留胶原蛋白和弹性纤维,且在电镜下内膜并未出现破损。对3组进行压力爆破测试,3组间比较差异无统计学意义。在疏水性测试中,水滴在氟化组内膜上停留的时间超过5 min,且在45°斜板上未留下明显水迹。在血小板黏附性试验中,脱细胞组内膜聚集活化了血小板,而氟化组则得到抑制。结论·联合脱细胞法可使脱细胞血管具有良好力学性能和物理稳定性,氟化涂层可使血管具有抗凝血性及较好的生物相容性。

关键词：脱细胞组织工程兔小血管内膜涂层

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自体骨髓基质干细胞在齿槽裂骨缺损修复中的应用

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中华整形外科杂志 2006年第6期22卷 409-411页

作者：柴岗张艳胡晓洁王敏刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海市组织工程研究重点实验室

目的探讨人自体骨髓基质干细胞（human bone marrow stromal cells，hBMSCs）在治疗齿槽裂骨缺损中的可行性。方法2002至2005年，选择齿槽裂骨缺损患者7例（单侧6例，双侧1例），以患者自体骨髓基质干细胞为种子细胞，部分脱钙骨（partl... 详细信息

目的探讨人自体骨髓基质干细胞（human bone marrow stromal cells，hBMSCs）在治疗齿槽裂骨缺损中的可行性。方法2002至2005年，选择齿槽裂骨缺损患者7例（单侧6例，双侧1例），以患者自体骨髓基质干细胞为种子细胞，部分脱钙骨（partly demineralized bone matrix，pDBM）为支架材料构建组织工程骨，治疗齿槽裂骨缺损。从患者髂前上棘穿刺取骨髓，密度梯度离心法分离hBMSCs，经体外成骨诱导和扩增至第3代。将诱导的hBMSCs，复合部分脱钙骨体外培养1周后，手术回植骨缺损区。分别于术后1、3、6、12、24、36个月进行临床外形和三维CT检查随访。结果6例患者头部三维CT检查，结果示术后3个月能形成组织工程化骨，并修复骨组织缺损。术后1～3年的随访表明组织工程骨稳定存在，无明显骨吸收现象，临床治疗效果稳定。1例患者（双侧齿槽裂）植入物外露感染。结论以自体hBMSCs为种子细胞，部分脱钙骨为支架材料，利用组织工程技术可在人体内形成稳定的组织工程化骨组织，并临床修复齿槽裂骨缺损。

关键词：骨髓基质干细胞骨缺损组织工程齿槽裂

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Tet-on基因表达系统转染胚胎干细胞和调控效应检测

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中国科学（C辑） 2005年第3期35卷 192-195页

作者：王彦丛笑倩刘德莉张文杰崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

以荧光素酶基因为目的基因,应用Lipofectamine介导的瞬时转染方法,将pTet-on调控质粒和pTRE2hyg-luciferase表达质粒共转染小鼠胚胎干细胞,滴加系列浓度的DOX后,观察其诱导效应.结果显示,随DOX浓度升高,荧光素酶的活性也逐渐增强;而未... 详细信息

以荧光素酶基因为目的基因,应用Lipofectamine介导的瞬时转染方法,将pTet-on调控质粒和pTRE2hyg-luciferase表达质粒共转染小鼠胚胎干细胞,滴加系列浓度的DOX后,观察其诱导效应.结果显示,随DOX浓度升高,荧光素酶的活性也逐渐增强;而未转染细胞与转染细胞未加诱导剂时,其RLU值均接近空白对照.表明转染Tet-on基因表达系统的胚胎干细胞对DOX诱导有较好的反应性,目的基因的表达与DOX具有严格的剂量依赖关系.

关键词：基因表达系统调控效应小鼠胚胎干细胞检测荧光素酶基因目的基因转染细胞表达质粒诱导效应依赖关系共转染诱导剂反应性 LU值浓度

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生物反应器构建组织工程化血管的初步研究

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上海第二医科大学学报 2005年第11期25卷 1113-1116页

作者：许志成李宏杨军刘天一刘阳崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海组织工程研究与开发中心上海200011

目的探讨生物反应器内构建具有一定力学强度的组织工程化血管的可行性。方法从6月龄毕格犬的颈总动脉、颈外静脉分别获取平滑肌细胞和内皮细胞,体外培养扩增后,将平滑肌细胞接种于聚羟基乙酸(PGA)上形成细胞—材料复合物,置于生物反应器... 详细信息

目的探讨生物反应器内构建具有一定力学强度的组织工程化血管的可行性。方法从6月龄毕格犬的颈总动脉、颈外静脉分别获取平滑肌细胞和内皮细胞,体外培养扩增后,将平滑肌细胞接种于聚羟基乙酸(PGA)上形成细胞—材料复合物,置于生物反应器内(搏动频率75次/m in;扩张量<5%)培养3周,接种内皮细胞继续培养1周后取新生血管,进行大体观察、组织学和免疫组化检测。结果生物反应器内培养的组织工程化血管大体观察具有良好的弹性,管腔圆;平滑肌纤维成分排列规则且有层次感;免疫组化染色显示,平滑肌细胞呈棕黄色层状排列,内皮细胞于血管内侧呈单层排列。结论应用生物反应器可构建具有良好弹性的组织工程化血管。

关键词：组织工程生物反应器血管

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人胚胎干细胞培养建系及其应用

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细胞生物学杂志 2005年第4期27卷 374-378页

作者：王彦丛笑倩曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整形修复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

简要概述了自1998年首次建立hES细胞系以来近6￣7年国内外的现况、分离培养建系、鉴定标准和冻存技术发展、定向诱导分化及其应用等方面的研究进展。

关键词：人胚胎干细胞内细胞团培养建系定向分化细胞干细胞培养应用建系人胚胎定向诱导分化 ES细胞系

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人胚胎干细胞程序降温保存的实验研究

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实验生物学报 2005年第3期38卷 247-256页

作者：杨鹏飞丛笑倩程启康华泽钊吴春芳曹谊林上海理工大学低温生物医学技术研究所上海200093 上海第二医科大学第九人民医院整形外科上海市组织工程重点实验室上海200011

本文采用升降式程序降温仪对人胚胎于细胞进行了程序降温保存,并探讨和比较了降温速率、置核温度、保护剂和投入液氮前温度对冻存复苏后胚胎干细胞的存活率、活力及分化特性的影响。结果表明:采用Me_2SO+血清+DMEM(体积比为1∶3∶6)的... 详细信息

本文采用升降式程序降温仪对人胚胎于细胞进行了程序降温保存,并探讨和比较了降温速率、置核温度、保护剂和投入液氮前温度对冻存复苏后胚胎干细胞的存活率、活力及分化特性的影响。结果表明:采用Me_2SO+血清+DMEM(体积比为1∶3∶6)的保护剂,从0℃开始,以0.5℃/min的速率对细胞悬液降温;至-10℃时对其进行置核,并于-35℃时将其快速投入液氮中保存,复温后效果最佳。冻存复温后细胞存活率可达81.8%,复苏后的胚胎干细胞形态和集落生长方式都与冻前的生长形态相同,且胚胎干细胞标志之一碱性磷酸酶(AKP)反应阳性,同时染色体组型仍正常。

关键词：人胚胎干细胞实验研究保存程序细胞存活率碱性磷酸酶染色体组型降温速率细胞悬液生长形态生长方式细胞形态保护剂升降式核温度体积比 min 复苏冻存液氮投入复温分化活力血清集落

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组织工程骨修复颅颌面骨缺损预塑形技术的研究

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中国美容医学 2005年第5期14卷 587-589页

作者：柴岗张艳袁捷胡晓洁王敏刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海市组织工程研发中心上海市200011

目的:采用快速成型技术对组织工程支架材料进行预塑形,探讨其在治疗颅颌面骨缺损中的应用前景。方法:选择10只成年杂交犬,均拟行组织工程骨修复颅颌面骨缺损实验研究(下颌骨节段缺损,颅骨全层缺损),螺旋CT连续薄层容积扫描,数据传至工... 详细信息

目的:采用快速成型技术对组织工程支架材料进行预塑形,探讨其在治疗颅颌面骨缺损中的应用前景。方法:选择10只成年杂交犬,均拟行组织工程骨修复颅颌面骨缺损实验研究(下颌骨节段缺损,颅骨全层缺损),螺旋CT连续薄层容积扫描,数据传至工作站后行三维重建,按实验设计方案进行模拟手术,并转换成*.stl文件格式,快速成型机制造骨缺损三维实体模型,据此制作阴模,填充磷酸三钙高温烧结后制成多孔支架,复合骨髓基质细胞后回植,螺旋CT检测组织工程骨和骨缺损完全匹配情况。结果:10例均按预设计制备骨缺损三维实体模型,据此制备个性化组织工程支架材料,手术回植和骨缺损完全匹配。结论:采用快速成型技术可对组织工程骨支架材料进行预塑形,对未来组织工程技术治疗复杂性颅颌面骨缺损具有重要的临床实用价值。

关键词：骨缺损组织工程预塑形

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组织工程软骨构建的临床初步研究

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中国美容医学 2005年第5期14卷 530-531页

作者：张艳柴岗刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海组织工程研究开发中心上海市200011

目的:探讨利用组织工程技术在人体内构建软骨组织的可行性。方法:将体外培养扩增的第二代人肋软骨细胞,以细胞浓度50×106/ml与30%Pluronic-F127混匀,注入人耳后皮下或耳屏部位,3～6个月后在二期手术时部分取材,通过大体观察、组织... 详细信息

目的:探讨利用组织工程技术在人体内构建软骨组织的可行性。方法:将体外培养扩增的第二代人肋软骨细胞,以细胞浓度50×106/ml与30%Pluronic-F127混匀,注入人耳后皮下或耳屏部位,3～6个月后在二期手术时部分取材,通过大体观察、组织学、电镜以及免疫组化等方法对新生软骨进行初步评价。结果:在3～6个月的随访中,观察到注射于耳后皮下的患者皮下有明显隆起,组织学检测显示有软骨陷窝和同源软骨细胞现象为成熟软骨组织,免疫组化染色有特异性的Ⅱ型胶原分泌。结论:采用体外培养的第二代人肋软骨细胞和Pluronic在人体内可构建组织工程软骨,证实了组织工程技术在人体内构建软骨组织的可行性。

关键词：组织工程人软骨细胞种子细胞

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人骨髓基质细胞表面标志的研究

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组织工程与重建外科杂志 2005年第5期1卷 263-264,277页

作者：柴岗张艳刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室 200011

目的研究人骨髓基质干细胞经体外培养后细胞的表型。方法8例成年志愿者(无系统性疾病,20～40岁)髂前上嵴骨穿法得人骨髓,密度梯度法分离骨髓基质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cell,hMSC),单纯DMEM培养液,分别培养至第2代... 详细信息

目的研究人骨髓基质干细胞经体外培养后细胞的表型。方法8例成年志愿者(无系统性疾病,20～40岁)髂前上嵴骨穿法得人骨髓,密度梯度法分离骨髓基质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cell,hMSC),单纯DMEM培养液,分别培养至第2代细胞,免疫荧光和流式细胞仪鉴定hMSCs细胞表型,CD105,CD166,CD29的表达。结果第二代细胞可见明显CD105,CD166,CD29表达,第二代细胞CD105阳性率78±6％,CD166阳性率43±7％,CD29阳性率69±12％。结论人MSC体外经传代培养后可表达干细胞特征表型。

关键词：骨髓基质干细胞组织工程表面标志

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中国组织工程学研究现状与未来

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组织工程与重建外科杂志 2005年第4期1卷 185-188页

作者：张文杰周广东曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海市组织工程研究重点实验室 200011

组织工程学(tissue engineering)从1987年正式提出到目前,在短短不到二十年中已取得了突飞猛进的发展,不仅在免疫缺陷的小动物体内构建出各种组织工程化组织,而且成功地修复了免疫功能完全的大型哺乳类动物各种组织缺损,更重要的是部分... 详细信息

组织工程学(tissue engineering)从1987年正式提出到目前,在短短不到二十年中已取得了突飞猛进的发展,不仅在免疫缺陷的小动物体内构建出各种组织工程化组织,而且成功地修复了免疫功能完全的大型哺乳类动物各种组织缺损,更重要的是部分组织工程化组织已在初步的临床应用中取得了稳定而持久的疗效。

关键词：组织工程材料种子细胞组织工程学组织构建骨髓基质干细胞胚胎干细胞缺损修复生物材料工程技术成体干细胞

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