检索结果-内蒙古大学图书馆

上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 275-278,283页

作者：许锋刘伟曹德君翟华玲魏娴崔磊曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

目的探讨利用皮肤成纤维细胞作为肌腱构建种子细胞的可行性。方法取外伤病人术中修剪的多余肌腱和皮肤组织,一部分用于石蜡包埋做组织学检测,一部分用酶消化法培养细胞,取第2代细胞进行细胞学检测。本实验采用偏光显微镜、免疫组织化... 详细信息

目的探讨利用皮肤成纤维细胞作为肌腱构建种子细胞的可行性。方法取外伤病人术中修剪的多余肌腱和皮肤组织,一部分用于石蜡包埋做组织学检测,一部分用酶消化法培养细胞,取第2代细胞进行细胞学检测。本实验采用偏光显微镜、免疫组织化学技术对人正常肌腱组织和皮肤组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达进行比较;采用免疫细胞化学、免疫细胞荧光、RT-PCR技术从蛋白水平、RNA水平比较第2代人肌腱细胞和皮肤成纤维细胞合成Ⅰ、Ⅲ型胶原的情况。结果偏光显微镜下可见肌腱组织中以粗大的Ⅰ型胶原为主,而皮肤组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原交错排列。免疫组织化学和显示石蜡包埋的肌腱组织和皮肤组织的Ⅰ型胶原染色均为强阳性,肌腱组织Ⅲ型胶原染色阴性,皮肤组织Ⅲ型胶原染色阳性。免疫细胞化学和免疫细胞荧光显示第2代肌腱细胞和皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原染色均为阳性。RT-PCR灰度分析结果示肌腱组织和皮肤组织Ⅰ型胶原灰度比值为1.25±0.03,Ⅲ型胶原肌腱组织不表达。第2代肌腱细胞与皮肤成纤维细胞Ⅰ型胶原灰度比值为1.09±0.05,Ⅲ型胶原灰度比值为0.93±0.08。结论人正常肌腱组织和皮肤组织中在胶原组成上均以Ⅰ型胶原为主。第2代人肌腱细胞和皮肤成纤维细胞的生物学特性相近,均合成Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原。皮肤成纤维细胞很有?

关键词：肌腱组织皮肤组织皮肤成纤维细胞胶原细胞培养组织工程

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TGF-β_1、IGF-I和地塞米松诱导BMSCs体外构建组织工程化软骨

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 262-266页

作者：刘天一周广东苗春雷陈付国魏娴殷德明曹颖崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

目的探讨体外联合应用TGF-β1、IGF-Ⅰ及地塞米松诱导骨髓基质干细胞(BMSCs)体外构建组织工程化软骨的可行性。方法抽取8周龄猪股骨骨髓,应用贴壁法分选单个核细胞,体外培养扩增后获得BMSCs,收集第2代细胞,以5×107/cm3的密度接... 详细信息

目的探讨体外联合应用TGF-β1、IGF-Ⅰ及地塞米松诱导骨髓基质干细胞(BMSCs)体外构建组织工程化软骨的可行性。方法抽取8周龄猪股骨骨髓,应用贴壁法分选单个核细胞,体外培养扩增后获得BMSCs,收集第2代细胞,以5×107/cm3的密度接种到聚羟基乙酸(PGA)制成的圆柱形三维支架材料上,7 d后联合应用TGF-β1、IGF-Ⅰ及地塞米松进行诱导和体外培养,未诱导组作为平行对照。4周和8周分别取材进行大体观察、组织学、组织化学及免疫组织化学检测。结果体外诱导培养4周后,形成的细胞材料复合物表面光滑,质地柔韧,保持原大小形状;组织学显示有较为明显软骨陷窝,并分布有Ⅱ型胶原及聚合蛋白多糖(GAG);8周时外观灰白色,较坚硬,软骨陷窝更为明显,并连接成片,Ⅱ型胶原染色呈强阳性,有更多甲苯胺蓝异染的软骨特异性基质成分。对照组细胞材料复合物逐渐收缩,8周时直径仅约2 mm大小,组织学检测无软骨陷窝结构,Ⅱ型胶原免疫组化结果阴性。结论TGF-β1、IGF-Ⅰ及地塞米松可以体外诱导BMSCs在三维支架上形成组织工程化软骨。

关键词：骨髓基质干细胞组织工程软骨地塞米松聚合蛋白多糖胶原

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同种异体组织工程化软骨组织的生化分析

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上海第二医科大学学报 2004年第8期24卷 597-599页

作者：王健夏万尧崔磊曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

目的以胚胎来源的关节软骨细胞,体内构建同种异体组织工程化软骨组织,分析其与正常关节软骨组织糖胺多糖(GAG)和Ⅱ型胶原含量的差异。方法以酶消化法分离胚胎(100 d)山羊关节软骨细胞,与生物材料聚环氧乙烯复合,并植入异体成年山羊腹... 详细信息

目的以胚胎来源的关节软骨细胞,体内构建同种异体组织工程化软骨组织,分析其与正常关节软骨组织糖胺多糖(GAG)和Ⅱ型胶原含量的差异。方法以酶消化法分离胚胎(100 d)山羊关节软骨细胞,与生物材料聚环氧乙烯复合,并植入异体成年山羊腹部皮下。按不同时间段取材,Western-blot、MTT比色法分析测定其GAG和Ⅱ型胶原含量,并与正常关节软骨组织比较。结果新生软骨中GAG的含量比正常关节软骨显著下降(P<0.01),而Ⅱ型胶原含量与正常关节软骨无显著性差异。结论胚胎来源的同种异体组织工程化软骨与正常关节软骨有着相同的生化成分,且新生软骨中Ⅱ型胶原的含量与正常关节软骨接近。

关键词：同种异体组织工程软骨组织生化分析聚环氧乙烯糖胺多糖 Ⅱ型胶原

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碱性成纤维细胞生长因子及其受体在体外培养软骨细胞中的表达

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 267-270页

作者：陈瑾君李卿陆峻泓崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

目的探讨软骨细胞在体外传代培养过程中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其受体(FGFR)表达的变化趋势,以及它对软骨细胞增殖和细胞外基质(ECM)合成的影响。方法采用猪耳软骨细胞在体外进行扩增传代,收集第1-6代的细胞样品行RT-PCR和Wes... 详细信息

目的探讨软骨细胞在体外传代培养过程中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其受体(FGFR)表达的变化趋势,以及它对软骨细胞增殖和细胞外基质(ECM)合成的影响。方法采用猪耳软骨细胞在体外进行扩增传代,收集第1-6代的细胞样品行RT-PCR和Western blotting检测,从mRNA和蛋白水平来反映bFGF和FGFRs的表达。另取第1-6代软骨细胞,以含10ng/mL bFGF的培养液进行培养,比较其与空白对照组细胞在增殖速率和ECM合成等方面的差异。结果 bFGF、FGFR1和FG-FR2在第1-3代软骨细胞中表达减少的趋势较为平缓;第4、5代时,有大幅的向下跃迁;在第6代时仅微量表达或消失。这一现象与体外培养软骨细胞增殖速率的下降相平行,第4代及以后代次细胞对bFGF刺激无反应。结论 bFGF和FGFRs表达的减弱与软骨细胞在体外培养过程中的老化进展可能有密切的关系。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子受体体外培养软骨细胞细胞增殖细胞外基质组织工程

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内皮型一氧化氮合酶腺病毒表达载体的构建与鉴定

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上海第二医科大学学报 2004年第9期24卷 717-719页

作者：陆平蔡文玮盛净刘德莉夏万尧刘伟上海第二医科大学第九人民医院老年病科上海200011 上海市组织工程研究重点实验室整复外科

目的构建重组内皮型一氧化氮合酶(eNOS)腺病毒表达系统载体。方法 eNOS的cDNA插入pcDNA3.1(-)中,进行DNA测序、酶切鉴定;插入片段用Xbal和AflⅡ双酶切后连接到pshuttle中,并予酶切鉴定;用P1-sce Ⅰ和Ⅰ-ceu Ⅰ双酶切下pshuttle中eNOS的... 详细信息

目的构建重组内皮型一氧化氮合酶(eNOS)腺病毒表达系统载体。方法 eNOS的cDNA插入pcDNA3.1(-)中,进行DNA测序、酶切鉴定;插入片段用Xbal和AflⅡ双酶切后连接到pshuttle中,并予酶切鉴定;用P1-sce Ⅰ和Ⅰ-ceu Ⅰ双酶切下pshuttle中eNOS的cDNA插入腺病毒载体,通过PCR鉴定。结果正确构建重组eNOS腺病毒表达系统,并被目的基因的PCR鉴定证实。结论重组腺病毒表达载体构建正确,为其在预防经皮腔内动脉成形术术后再狭窄基因转染奠定基础。

关键词：腺病毒 NOS 内皮型一氧化氮合酶鉴定动脉成形术腔内 PCR 表达系统酶切表达载体

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荧光活性染料DiI标记观察人骨髓基质干细胞与部分脱钙骨粘附的实验研究

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中华创伤骨科杂志 2004年第3期6卷 311-314页

作者：李东崔磊舒朝锋柳向东张英柴岗刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海市组织工程研究重点实验室上海市200011

目的通过荧光活性染料DiI标记观察骨髓基质干细胞在部分脱钙骨上的粘附。方法用DiI标记人骨髓基质干细胞,接种于部分脱钙骨上,测定细胞的粘附率。于接种后第2、4、7天激光共聚焦显微镜观察细胞在支架材料上的生长状况。结果DiI标记的骨... 详细信息

目的通过荧光活性染料DiI标记观察骨髓基质干细胞在部分脱钙骨上的粘附。方法用DiI标记人骨髓基质干细胞,接种于部分脱钙骨上,测定细胞的粘附率。于接种后第2、4、7天激光共聚焦显微镜观察细胞在支架材料上的生长状况。结果DiI标记的骨髓基质干细胞的粘附率为(99.9±0.2)%,未标记的骨髓基质干细胞粘附率为(99.1±1)%,两者无统计学差异(P>0.05);第7天时细胞脱钙骨内孔覆盖。结论荧光活性染料DiI标记不影响骨髓基质干细胞在部分脱钙骨支架上的粘附,是观察骨髓基质干细胞在脱钙骨支架上粘附状况的较好方法。

关键词：荧光活性染料 DiI 骨髓基质干细胞脱钙骨支架材料组织工程

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角质干细胞及其在皮肤组织工程中的应用前景

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中国实用美容整形外科杂志 2004年第1期15卷 40-43页

作者：张杰刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海200011 上海市组织工程研究重点实验室

表皮是一种持续更新的组织，其更新过程始于基底层的角质干细胞的增殖与定向分化。在向上迁移的过程中，经历程序化的终末分化，最后成为死亡的角化扁平细胞从皮肤表面脱落。在正常稳定状态下，干细胞的增殖与表层细胞的丢失保持着精确... 详细信息

表皮是一种持续更新的组织，其更新过程始于基底层的角质干细胞的增殖与定向分化。在向上迁移的过程中，经历程序化的终末分化，最后成为死亡的角化扁平细胞从皮肤表面脱落。在正常稳定状态下，干细胞的增殖与表层细胞的丢失保持着精确的平衡^[1]。角质干细胞有两个重要特征：一是在体内属于静止的或慢细胞周期的细胞；二是具有无限的增

关键词：角质干细胞皮肤组织工程表皮生物学基因治疗

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端粒酶基因真核表达载体pEGFP-hTRT构建及表达

端粒酶基因真核表达载体pEGFP-hTRT构建及表达

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中华口腔医学会第六届全国口腔黏膜病学术会

作者：周海文周曾同杨雯君刘德莉刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科上海第二医科大学口腔医学院口腔颌面外科上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室

目的:构建具绿色荧光蛋白报道系统的端粒酶基因真核质粒载体,并研究其在293细胞中的表达情况,为基因转染、延长细胞寿命奠定基础。方法:酶切含人端粒酶逆转录酶(hTRT)基因的pGRN145质粒获取hTRT片段,插入经酶切及磷酸化处理的绿色荧光... 详细信息

目的:构建具绿色荧光蛋白报道系统的端粒酶基因真核质粒载体,并研究其在293细胞中的表达情况,为基因转染、延长细胞寿命奠定基础。方法:酶切含人端粒酶逆转录酶(hTRT)基因的pGRN145质粒获取hTRT片段,插入经酶切及磷酸化处理的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C1,形成8.1Kb质粒,经HindⅢ、NotⅠ酶切电泳筛选、鉴定、测序并转染293细胞检测绿色荧光蛋白表达及外源性端粒酶活性。结果:酶切电泳分析,得到3.4Kb及4.7Kb大小的2个片段;测序结果接头两端序列正确;质粒在293细胞中正确表达,测得细胞外源性端粒酶表达。结论:端粒酶基因pEGFP-hTRT质粒成功构建,并可在真核细胞中表达,可用于研究组织工程种子细胞的衰老问题。

关键词：端粒酶绿色荧光蛋白基因转染

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骨形成蛋白-7基因逆转录病毒载体的构建及其表达

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第4期19卷 329-331页

作者：祝联刘伟陈兵刘德莉刘方军吴娟娟陆俊弘曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

目的 :实现骨形成蛋白 7(BMP 7)基因在骨髓基质干细胞中的稳定、长久表达。方法 :构建重组BMP 7逆转录病毒表达载体。通过PT6 7包装细胞克隆 ,嘌呤霉素筛选、扩增 ,获得含BMP 7基因的逆转录病毒液 ,直接感染骨髓基质干细胞 ,用免疫组化... 详细信息

目的 :实现骨形成蛋白 7(BMP 7)基因在骨髓基质干细胞中的稳定、长久表达。方法 :构建重组BMP 7逆转录病毒表达载体。通过PT6 7包装细胞克隆 ,嘌呤霉素筛选、扩增 ,获得含BMP 7基因的逆转录病毒液 ,直接感染骨髓基质干细胞 ,用免疫组化方法检测BMP 7的表达。结果 :成功地构建了重组BMP 7逆转录病毒表达载体 ,并可在骨髓基质干细胞中表达BMP 7。结论 :重组逆转录病毒表达载体转染的靶细胞可表达BMP 7,为组织工程中骨和软骨种子细胞的研究奠定了基础。

关键词：重组逆转录病毒载体骨形成蛋白—7 组织工程骨髓基质干细胞

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小鼠FasL基因的克隆和在软骨细胞中表达

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第4期19卷 326-328,337页

作者：胡洪亮曹谊林刘阳刘伟崔磊商庆新上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

目的 :获得小鼠FasL(mFasL)的cDNA克隆 ,通过逆转录病毒表达系统 pLNCX2 在软骨细胞中进行表达 ,并分析其功能。方法 :应用RT PCR和T A克隆技术 ,从激活的小鼠脾脏淋巴细胞总RNA中 ,扩增mFasLcDNA并克隆到T载体中 ,再亚克隆到 pLNCX2 ... 详细信息

目的 :获得小鼠FasL(mFasL)的cDNA克隆 ,通过逆转录病毒表达系统 pLNCX2 在软骨细胞中进行表达 ,并分析其功能。方法 :应用RT PCR和T A克隆技术 ,从激活的小鼠脾脏淋巴细胞总RNA中 ,扩增mFasLcDNA并克隆到T载体中 ,再亚克隆到 pLNCX2 中。转染软骨细胞后 ,以流式细胞仪检测mFasL蛋白的表达 ,以单向混合淋巴细胞反应鉴定其活性。结果 :成功地克隆了 0 .85 5kb的mFasLcDNA ,并经测序确证。通过 pLNCX2 转染软骨细胞 ,转染率为 6 0 .6 4 %。流式细胞仪检测到FasL蛋白的表达 ,并能显著抑制同种异体的单向混合淋巴细胞反应 ,刺激指数下调到未转染软骨细胞的11.71%。结论 :克隆到的mFasL基因 ,并能通过 pLNCX2 有效表达。

关键词：逆转录病毒 FasL RT—PCR 软骨细胞 T—A克隆

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