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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：余冬生刘肖肖张赫男张劲松汪雯翰贾薇上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验

金针菇(Flammulina velutipes (Curtis) Singer)是世界上产销量第三位的食用菌,金针菇不仅含有丰富的蛋白质、氨基酸、维生素和矿物质等营养成分,而且含有多糖、脂类、糖蛋白、酚类、倍半萜等活性物质,具有多种生物活性。三相法作为新... 详细信息

金针菇(Flammulina velutipes (Curtis) Singer)是世界上产销量第三位的食用菌,金针菇不仅含有丰富的蛋白质、氨基酸、维生素和矿物质等营养成分,而且含有多糖、脂类、糖蛋白、酚类、倍半萜等活性物质,具有多种生物活性。三相法作为新的蛋白质分离纯化技术,是一种安全有效的绿色分离方法,该方法包括盐析、等电点沉淀及溶剂沉淀等技术。以三相法提取金针菇子实体多糖的得率为目标,结合多糖纯度分析,控制参数硫酸铵质量分数、有机溶剂种类、叔丁醇的体积比、温度、pH值和料液比进行试验;在上述的单因素实验基础上,设计筛选出对得率影响最显著的3个因素:硫酸铵质量分数、叔丁醇体积比和温度;采用中心组合设计和响应面法确定了提取金针菇多糖的最优工艺:料液比1g:12mL、叔丁醇体积比1:1.9、硫酸铵质量分数37%,温度40℃,时间30min,pH=7。在上述条件下,金针菇多糖的得率为2.3%。同时,在验证试验中接近预测值(P<0.005)。由此表明,建立的响应面模型适用于优化三相法提取金针菇子实体多糖的工艺,为金针菇多糖的提取和纯化提供了新的思路。以金针菇子实体为原料,比较三相法和传统醇沉得到的粗多糖的得率和纯度,以及理化性质和体外活性。结果表明三相法提取的金针菇多糖相比不同醇沉得率更高(2.30%),且纯度达到40.53%;通过HPLS-MALLS-RI分析,60%醇沉和三相法纯化的多糖则较为相似;不同纯化方法得到的单糖组分总体比例接近,但三相法纯化的多糖含有糖醛酸(传统醇沉不含有或含量极低);通过DPPH、TEAC、FRAP三种抗氧化模型和NO释放量模型比较抗氧化能力和免疫活性,且发现三相法提取的金针菇多糖有较好的抗氧化活性和免疫活性。以三相法提取的金针菇子实体多糖为原料,通过S-300凝胶柱子进一步分离纯化得到均一多糖FVPT1、FVPT2,通过HPLS-MALLS-RI分析多糖的分子量分别为:2.06×104,1.64×104,高效阴离子色谱分析均一多糖FVPT1、FVPT2单糖组成为:岩藻糖:半乳糖:葡萄糖:甘露糖=1:3.5:1:1.4;岩藻糖:半乳糖:葡萄糖=1:3:10。通过甲基化实验,GC-MS和核磁图谱(NMR)等方法,确定金针菇均一多糖化学结构。体外细胞实验表明,FVPT1有较好的免疫活性。

关键词：金针菇子实体三相法分离纯化抗氧化免疫活性结构解析

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不同来源的蛹虫草子实体活性成分的比较

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菌物学报 2018年第12期37卷 1695-1706页

作者：朱丽娜刘艳芳张红霞周帅张忠李传华高新华唐庆九上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 上海市农业科学院生态环境保护研究所上海201403

通过比较不同来源的蛹虫草子实体的活性成分以探讨蛹虫草品质的差异。对17个蛹虫草菌株栽培得到的子实体及16个市售样品中的多糖、核苷类成分、游离糖醇及小分子糖类的含量进行分析测定,并比较其核苷类成分HPLC指纹图谱。结果表明,因菌... 详细信息

通过比较不同来源的蛹虫草子实体的活性成分以探讨蛹虫草品质的差异。对17个蛹虫草菌株栽培得到的子实体及16个市售样品中的多糖、核苷类成分、游离糖醇及小分子糖类的含量进行分析测定,并比较其核苷类成分HPLC指纹图谱。结果表明,因菌株不同蛹虫草子实体的活性成分具有不同程度的差异,菌株对虫草素含量的影响最大,其次是N6-(2-羟乙基)腺苷,因菌株不同虫草素含量可相差14倍,N6-(2-羟乙基)腺苷的含量差异可达6倍以上。市售样品中的核苷类成分分析结果也证明了在测定的几种成分中,虫草素是含量差异最大的活性成分。17个蛹虫草菌株子实体的多糖含量为1.81%–4.92%,甘露醇含量为1.44%–4.47%,海藻糖含量为3.58%–25.43%。16个市售样品的多糖含量为2.84%–5.55%,甘露醇含量为0.96%–3.93%,海藻糖含量为1.04%–19.91%。采用数据归一化法进行子实体品质综合评价研究,结果表明菌株G7a、G10a、G15a综合品质较好,多数成分含量均大于平均值,是生产高品质蛹虫草的合适菌株。

关键词：蛹虫草多糖核苷甘露醇海藻糖

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灵芝β-葡聚糖硫酸化衍生物抑制脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7产生NO的活性

灵芝β-葡聚糖硫酸化衍生物抑制脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7产生N...

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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：张忠刘艳芳唐庆九周帅杨焱颜梦秋唐传红吴迪冯娜张劲松上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

采用氯磺酸法对灵芝(Ganoderma lucidum)β-葡聚糖进行硫酸化修饰,在不同反应温度下(40、50、60、70、80、90℃)得到灵芝β-葡聚糖硫酸化衍生物(SGLP1～SGLP6),随着反应温度的上升,硫酸化衍生物取代度逐渐增加,反应温度为60℃时取代度... 详细信息

采用氯磺酸法对灵芝(Ganoderma lucidum)β-葡聚糖进行硫酸化修饰,在不同反应温度下(40、50、60、70、80、90℃)得到灵芝β-葡聚糖硫酸化衍生物(SGLP1～SGLP6),随着反应温度的上升,硫酸化衍生物取代度逐渐增加,反应温度为60℃时取代度最大为1.72,之后随着反应温度上升,取代度逐渐下降;随着反应温度的增加衍生物的重均分子量逐渐下降。灵芝β-葡聚糖衍生物的溶解度为0.901～1.102g/100 mL,与硫酸化前相比溶解度提高约50倍。灵芝β-葡聚糖硫酸化衍生物具有抗炎作用,对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞释放NO有一定程度的抑制作用,并呈浓度依赖性,且随着取代度增加,抑制率增高;对LPS刺激RAW264.7细胞的吞噬活性也具有显著的抑制作用,且随着取代度增加对细胞吞噬活性的抑制作用增加;取代度相近时,重均分子量较大的硫酸化衍生物对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞释放NO的抑制率较高以及对细胞吞噬活性的抑制作用也较强,说明硫酸化多糖的体外抗炎活性与其硫酸化衍生物的取代度和重均分子量相关。

关键词：灵芝β-葡聚糖硫酸化巨噬细胞抗炎

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牛粪、平菇栽培废料和麸皮不同配方栽培杏鲍菇的研究

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上海农业学报 2019年第4期35卷 16-21页

作者：邱成书李河李传华成都师范学院化学与生命科学院成都611130 红河学院生命科学与技术学院蒙自661100 农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室上海市农业科学院食用菌研究所上海201403

利用牛粪和平菇栽培废料作为主要栽培原料进行室内杏鲍菇栽培试验,并对杏鲍菇菌丝形态、生长情况、产量等生理指标进行研究,以便筛选出以牛粪和平菇栽培废料为主要原料栽培杏鲍菇的合适培养料配方.结果表明:牛粪、栽培废料和麸皮配比为4... 详细信息

利用牛粪和平菇栽培废料作为主要栽培原料进行室内杏鲍菇栽培试验,并对杏鲍菇菌丝形态、生长情况、产量等生理指标进行研究,以便筛选出以牛粪和平菇栽培废料为主要原料栽培杏鲍菇的合适培养料配方.结果表明:牛粪、栽培废料和麸皮配比为48∶ 39∶10(另有1%蔗糖、1%过磷酸钙和1%石膏)时,从杏鲍菇接种到菌丝长满栽培瓶平均需要23 d,至原基出现需要38 d,每瓶子实体平均产量753.22 g,与对照(762.56 g)较为接近,平均菇重和生物学效率分别为28.97 g和65.5%,优于对照(23.83 g和61.1%).研究显示,用牛粪搭配平菇栽培废料和麸皮栽培杏鲍菇完全可行.

关键词：牛粪栽培废料配方杏鲍菇

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草菇子实体发育过程的荧光染色观察

草菇子实体发育过程的荧光染色观察

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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：万佳宁杨瑞恒陈洪雨周陈力郭婷陈明杰汪虹鲍大鹏上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

草菇(Volvariella volvacea)又名中国蘑菇(Chinese mushroom)。进入1970年代,草菇栽培产业得到较快发展,但草菇育种研究进展一直比较缓慢,其中一个主要原因是对草菇有性生殖方式这一重要遗传背景还存在较大争议。本研究运用Steedman’s ... 详细信息

草菇(Volvariella volvacea)又名中国蘑菇(Chinese mushroom)。进入1970年代,草菇栽培产业得到较快发展,但草菇育种研究进展一直比较缓慢,其中一个主要原因是对草菇有性生殖方式这一重要遗传背景还存在较大争议。本研究运用Steedman’s wax包埋切片法制备了草菇子实体不同发育时期(小纽扣期、大纽扣期、蛋形期、伸长期、破膜期和开伞期)的菌褶切片并运用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察了担子细胞核相变化情况。结果表明该方法可清晰观察到草菇担子细胞中核相以及在减数分裂中的变化、担子上孢子幼体、孢子梗、囊状体和孢子内细胞核等结构。草菇子实体小纽扣期细胞核成对进入担子细胞中;在大纽扣和蛋形期担子细胞基部发生核融合;伸长期、破膜期和开伞期的担子细胞内可观察到符合减数分裂特征的细胞核分裂前期Ⅰ、末期Ⅰ、前期Ⅱ和间期Ⅱ。通过对草菇担子细胞内细胞核减数分裂过程的观察,丰富了对草菇生活史的微观细胞学认识,为草菇有性生活史的深入研究提供了更多的科学依据。

关键词：子实体发育减数分裂

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中国美味蘑菇石油醚提取物体外抗肿瘤活性研究

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上海农业学报 2019年第3期35卷 38-43页

作者：刘培培汪雯翰贾薇李传华张亚平新疆石河子大学生命科学学院石河子832003 农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海市农业科学院食用菌研究所上海201403

采用细胞划痕方法检测中国美味蘑菇石油醚提取物对A549细胞体外迁移能力的影响,根据克隆形成的数量评估石油醚提取物对A549细胞的增殖能力的影响;并测定A549细胞增殖效率、细胞凋亡率以及BCL-2、Bcl-xl、Cyto-c、Caspase-3和AIFM1基因... 详细信息

采用细胞划痕方法检测中国美味蘑菇石油醚提取物对A549细胞体外迁移能力的影响,根据克隆形成的数量评估石油醚提取物对A549细胞的增殖能力的影响;并测定A549细胞增殖效率、细胞凋亡率以及BCL-2、Bcl-xl、Cyto-c、Caspase-3和AIFM1基因的表达水平。结果表明:中国美味蘑菇石油醚提取物可降低非小细胞肺癌A549细胞的迁移能力,且呈剂量依赖性;石油醚提取物能够抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖,同样呈剂量依赖性;石油醚提取物处理后的非小细胞肺癌A549细胞凋亡率明显增加;BCL-2和Bcl-xl基因表达水平降低,Cyto-c、Caspase-3和AIFM1表达水平提高。因此,石油醚提取物可以有效抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖,降低细胞迁移能力和克隆形成,诱导细胞凋亡。

关键词：石油醚提取物非小细胞肺癌活性

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利用不同培养料栽培的草菇子实体挥发性风味成分分析

利用不同培养料栽培的草菇子实体挥发性风味成分分析

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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：余昌霞赵妍陈明杰汪虹李正鹏上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

采用顶空固相微萃取（head space solid phase micro-extraction,HS-SPME）和气相色谱质谱（gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS）技术分析5种不同培养料（稻草、废棉、棉籽壳、金针菇菌渣、刺芹侧耳菌渣）栽培的草菇（Volvariella volvacea）子实体挥发性风味成分,利用相对气味活度值（relative odor activity value,ROAV）评价挥发性风味成分对草菇子实体总体风味的贡献,并采用主成分分析法明确了对不同培养料栽培的草菇香气影响较大的挥发性香味成分,通过综合评价指数（general evaluation indexes,GEI）对不同培养料栽培的草菇子实体香气进行评价,采用感官评定法验证分析草菇挥发性风味成分评价模型的准确性。结果表明:不同培养料栽培的草菇子实体中共检测到38种挥发性化合物,其中共有的化合物为26种,主要是芳香族和烯烃类、醛类化合物,其次是醇类化合物、酮类化合物。通过对主要挥发性风味物质的主成分分析发现,异戊醛、己醛、1-辛烯-3-醇、甲硫醇、2-戊基呋喃、二甲基硫醚对草菇子实体香气影响较大。GEI评价结果表明不同培养料栽培的草菇子实体香气差别显著,以刺芹侧耳菌渣栽培的草菇香气品质最优,金针菇菌渣栽培的草菇香气最差,感官评定结果与构建的挥发性风味成分评价模型结果一致。

关键词：草菇培养料挥发性风味成分相对气味活度值主成分分析

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真姬菇全基因组重测序及生长速率的GWAS分析

真姬菇全基因组重测序及生长速率的GWAS分析

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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：龚明吴莹莹李燕杨瑞恒汪滢万佳宁鲍大鹏上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

真姬菇生长速率与产量密切相关。本文以保存的38份真姬菇种质资源为研究对象,进行全基因组重测序,并测定不同温度下的真姬菇生长速率,进而开展全基因组关联分析（GWAS）。结果表明38个样本平均比对率为83%,平均测序深度为33×,平均... 详细信息

真姬菇生长速率与产量密切相关。本文以保存的38份真姬菇种质资源为研究对象,进行全基因组重测序,并测定不同温度下的真姬菇生长速率,进而开展全基因组关联分析（GWAS）。结果表明38个样本平均比对率为83%,平均测序深度为33×,平均覆盖度超过89%;全部样本SNP数量均值为1441147.605（s.e.=31444.86）,纯合SNP数量均值为426967.76（s.e.=43779.760）,杂合SNP数量均值为1014179.842（s.e.=31370.60）,其中6株菌株的纯和SNP数量显著低于其它菌株的数量;SNP位点主要位于外显子,内含子,上游区域,下游区域,基因间隔区,比例均值分别为0.4534,0.1751,0.099,0.0904和0.0667。系统发生分析显示群体为4大类群,并且类群的尺寸变化较大,其中6株较低纯和SNP数量的菌株聚集成一个簇,暗示这些菌株具有相同的遗传背景。群体结构分析显示群体组成的亚群个数为4,其中类群3和类群4具有明显的基因混合现象。PCA分析显示主要组分呈线性分布,暗示了群体的迁移历史;每个组分都存在部分菌株位置重叠,提示它们具有相同的遗传背景。生长速率试验显示在10℃、15℃、20℃、25℃和30℃培养的菌丝平均生长速率（mm/day）分别为1.66,2.80,4.92,5.13和2.51,提示20-25℃为真姬菇合适的栽培温度。GWAS分析显示存在10个与20℃培养下的菌丝生长速率显著关联的SNPs位点（P ＜1E-04）,其中2个位于外显子区域。外显子SNP位点功能性预测分析显示存在1个对蛋白功能影响较大的潜在功能性SNP位点（L49F,Deleterious,-4.000）。对于不同温度下进行真姬菇材料的利用,有助于真姬菇产量和适应性相关性状的遗传改良;对关联SNPs位点的深入研究,有利于深入了解真姬菇生长和发育的遗传机制。

关键词：真姬菇生长速率 SNP GWAS

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灵芝孢子粉中麦角甾醇的测定分析及其脂溶性成分指纹图谱

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菌物学报 2018年第9期37卷 1215-1223页

作者：王金艳冯娜刘艳芳严培兰唐庆九上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 上海瑞丰农业科技有限公司上海201403

运用建立的高效液相色谱条件,首次实现在完成灵芝孢子粉中麦角甾醇含量测定的同时,对灵芝孢子粉中脂溶性成分的指纹图谱进行研究。结果表明,该方法测定麦角甾醇准确、稳定、特异性好,脂溶性成分指纹图谱基线平直、色谱峰丰富且具备较好... 详细信息

运用建立的高效液相色谱条件,首次实现在完成灵芝孢子粉中麦角甾醇含量测定的同时,对灵芝孢子粉中脂溶性成分的指纹图谱进行研究。结果表明,该方法测定麦角甾醇准确、稳定、特异性好,脂溶性成分指纹图谱基线平直、色谱峰丰富且具备较好的分离度,该方法适合在分析测定灵芝孢子粉中麦角甾醇(282nm)含量的同时,对其脂溶性成分(245nm)的指纹图谱进行分析,为整体评价灵芝孢子粉及其产品的质量提供依据。运用建立的方法对收集的各孢子粉样品进行分析,表明破壁与否及破壁时间长短对灵芝孢子粉中麦角甾醇及脂溶性成分的溶出有显著的影响,实验认为最佳的破壁时间为20–30min;低温冻藏可以有效地保护样品中的成分;随着产粉时间的延长,孢子粉中麦角甾醇的含量变化不大,脂溶性成分总体上有所增加;不同原料来源孢子粉中麦角甾醇的含量和脂溶性成分指纹图谱的差异都很大,且麦角甾醇的含量与指纹图谱色谱峰的丰富程度没有一定的相关性,因此不能仅以麦角甾醇的含量来表征灵芝孢子粉的质量,二者的综合分析对灵芝孢子粉质量的评价才更有意义。

关键词：灵芝孢子粉高效液相色谱法麦角甾醇指纹图谱脂溶性成分

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构建高效糖配体再生重组菌生物催化合成莱鲍迪苷D

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食品科学 2018年第22期39卷 116-122页

作者：费理文王勇上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所上海200032

利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)蔗糖合酶AtSUS3构建活化糖配体尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate glucose,UDPG)再生体系,与高效催化莱鲍迪苷D(rebaudioside D,RD)合成的糖基转移酶协同偶联完成RD的高效生物催化。从拟南芥cDNA... 详细信息

利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)蔗糖合酶AtSUS3构建活化糖配体尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate glucose,UDPG)再生体系,与高效催化莱鲍迪苷D(rebaudioside D,RD)合成的糖基转移酶协同偶联完成RD的高效生物催化。从拟南芥cDNA克隆获得AtSUS3基因,将其装配至pET28a获得表达质粒pLW105,随后pLW105与携带糖基转移酶EUGT11基因的质粒共转化大肠杆菌BL21(DE3)构建双酶共表达工程菌。在不添加UDPG或者尿核苷二磷酸(uridine diphosphate,UDP)的条件下,以上述双酶共表达工程菌全细胞催化莱鲍迪苷A(RA)获得的底物摩尔转化率大于80%,RD产量达到930 mg/L。随后构建双酶基因串连质粒pLW108及双酶共表达大肠杆菌BL21(DE3)工程菌。用串连质粒构建的工程菌催化效果与双质粒共转化相同。采用共表达双酶工程菌的发酵破碎粗酶进行催化,结果显示以粗酶催化可简化催化体系,并可将细胞催化体系所需高质量浓度蔗糖用量降至质量浓度5 g/100 mL,同时在不添加外源UDPG的条件下实现RD的高效生物催化,RA底物摩尔转化率达到93%,RD产量约为1 051 mg/L。

关键词：甜菊糖苷莱鲍迪苷D 尿苷二磷酸葡萄糖蔗糖合酶 UDP-糖基转移酶生物催化

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