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中药材 2012年第7期35卷 1112-1116页

作者：温鹏随晶晶李茹柳赵世清卢文彪陈蔚文广州中医药大学广东广州510006 上海市高校中医内科学E-研究院/上海中医药大学上海201203

目的:观察甘草糖提取物对小肠上皮细胞(IeC-6)迁移及细胞内多胺(腐胺、精脒和精胺)含量的影响。方法:划痕法造细胞损伤后迁移模型,柱前衍生-高效液相色谱法测定细胞内多胺含量。观察甘草糖复合物对细胞迁移及细胞内多胺含量的影响;观察... 详细信息

目的:观察甘草糖提取物对小肠上皮细胞(IeC-6)迁移及细胞内多胺(腐胺、精脒和精胺)含量的影响。方法:划痕法造细胞损伤后迁移模型,柱前衍生-高效液相色谱法测定细胞内多胺含量。观察甘草糖复合物对细胞迁移及细胞内多胺含量的影响;观察甘草糖复合物对二氟甲基鸟氨酸(DFMO)致细胞迁移抑制和多胺合成抑制的影响。结果:甘草糖提取物(50、100 mg/L)能促进细胞迁移;可逆转由DFMO所致的细胞迁移抑制;可提高细胞迁移过程中细胞内多胺含量;可逆转由DFMO所致的多胺含量降低。结论:甘草对胃肠黏膜损伤的修复作用可能与其提高细胞多胺含量、促进细胞迁移有关。

关键词：甘草糖复合物多胺小肠上皮细胞细胞迁移

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高效液相色谱法检测小肠上皮细胞多胺含量

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中国药理学通报 2011年第9期27卷 1309-1312页

作者：随晶晶卢文彪李茹柳温鹏胡灿赵世清陈蔚文广州中医药大学广东广州510405 上海市高校中医内科学E一研究院上海中医药大学上海201203

目的建立检测小肠上皮细胞(IeC-6)多胺含量的方法,为病理生理及药理研究中检测该细胞多胺含量提供参考。方法采用苯甲酰氯柱前衍生反相高效液相色谱法,以多胺(腐胺、精脒和精胺)含量为指标,苯甲酰氯为衍生化试剂,采用ODS-C18柱,考察和... 详细信息

目的建立检测小肠上皮细胞(IeC-6)多胺含量的方法,为病理生理及药理研究中检测该细胞多胺含量提供参考。方法采用苯甲酰氯柱前衍生反相高效液相色谱法,以多胺(腐胺、精脒和精胺)含量为指标,苯甲酰氯为衍生化试剂,采用ODS-C18柱,考察和优化衍生化条件以及色谱条件。结果当衍生温度为50℃,衍生时间为8 h时,各指标成分的峰面积均较大;在柱温为25℃、流动相为甲醇∶水(55∶45)、流速1.0 ***-1、检测波长234 nm的条件下,各指标成分峰分离良好。线性范围:腐胺0.054～1.35 nmol,精脒0.046～1.15 nmol,精胺0.080～2.00 nmol,r2≥0.9995;高、中、低浓度的日内精密度:腐胺RSD 1.5%～3.2%,精脒RSD 1.2%～4.5%,精胺RSD 1.3%～4.1%;日间精密度:腐胺RSD 1.2%～2.7%,精脒RSD 1.0%～3.5%,精胺RSD0.8%～3.9%;高、中、低浓度的回收率:腐胺85%～110%,精脒88%～110%,精胺90%～108%。结论建立的苯甲酰氯柱前衍生高效液相色谱法适用于小肠上皮细胞中多胺含量的测定。

关键词：多胺柱前衍生检测方法建立小肠上皮细胞反向高效液相色谱

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白术糖复合物对IeC-6细胞分化及绒毛蛋白表达的影响

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中药材 2010年第6期33卷 938-944页

作者：王洲李茹柳徐颂芬陈蔚文广州中医药大学脾胃研究所广东广州510405 上海市高校中医内科学E-研究院上海中医药大学上海201203

目的:观察白术糖复合物对小肠隐窝细胞(IeC-6)细胞分化及分化标志物之一绒毛蛋白(villin)表达的影响。方法:IeC-6细胞分为空白对照组、阳性对照药胃泌素组(250μg/L)、白术糖复合物组(62.5、125、250、500、1000 mg/L),经相应处理后。... 详细信息

目的:观察白术糖复合物对小肠隐窝细胞(IeC-6)细胞分化及分化标志物之一绒毛蛋白(villin)表达的影响。方法:IeC-6细胞分为空白对照组、阳性对照药胃泌素组(250μg/L)、白术糖复合物组(62.5、125、250、500、1000 mg/L),经相应处理后。光镜下观察细胞大体形态;透射电镜下观察细胞超微结构;RT-PCR法检测villin mRNA表达;免疫荧光法检测villin蛋白表达。结果:①给药7 d,光镜下空白对照组细胞处于幼稚状态;胃泌素和白术糖复合物组细胞处于分化状态;②给药20 d,电镜下空白对照组胞核较大,常染色质比例较高,细胞边缘仅见少量微绒毛;胃泌素和白术糖复合物组胞核较小,常/异染色质比例协调,细胞边缘生成大量微绒毛;③给药6 h,空白对照组细胞villin mRNA表达非常少,胃泌素组和白术糖复合物组villin mRNA表达均明显高于空白对照组;④给药7 d,免疫荧光检测发现空白对照组细胞仅有很少villin蛋白表达;胃泌素组表达非常强烈;白术糖复合物组表达稍弱于胃泌素组,但有特异性绒毛蛋白聚集点。结论:白术糖复合物有通过上调IeC-6细胞绒毛蛋白表达及分布而促其分化的作用。

关键词：白术糖复合物 IeC-6细胞分化绒毛蛋白

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白术糖复合物提取纯化工艺研究

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中药材 2009年第4期32卷 597-600页

作者：石忠峰李茹柳陈蔚文广州中医药大学脾胃研究所广东广州510405 上海市高校中医内科学E-研究院/上海中医药大学上海201203

目的：研究白术糖复合物提取纯化方法。方法：水提法提取白术糖复合物，中性氧化铝、树脂吸附法进行精制纯化，考察不同方法的除杂效果，确定工艺参数；盐酸紫外分光光度法、蒸发光散射法检测提取物中的糖含量。结果：白术提取液经中性... 详细信息

目的：研究白术糖复合物提取纯化方法。方法：水提法提取白术糖复合物，中性氧化铝、树脂吸附法进行精制纯化，考察不同方法的除杂效果，确定工艺参数；盐酸紫外分光光度法、蒸发光散射法检测提取物中的糖含量。结果：白术提取液经中性氧化铝精制后糖复合物得率与纯度分别为23％～25．5％和56％～60％；根据D900弱碱性阴离子交换树脂、D201阴离子交换树脂、AB-8大孔吸附树脂的静态脱色曲线，它们对白术提取液色素杂质的交换能力大小为D900〉AB-8〉D201；D900离子交换树脂吸附法精制白术糖复合物得率为17％以上，盐酸紫外分光光度法检测糖纯度在76％以上。结论：水提后D900离子交换树脂吸附法精制白术糖复合物效果较好，糖定量分析以盐酸紫外分光光度法较为理想。

关键词：白术糖复合物提取纯化

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四君子汤对脾虚大鼠尿木糖排泄率及肠黏膜ATP的影响

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中药材 2009年第8期32卷 1242-1245页

作者：高小玲郭文峰李茹柳陈蔚文广州中医药大学脾胃研究所广东广州510405 上海中医药大学上海市高校中医内科学E-研究院上海201203

目的:观察四君子汤对脾虚大鼠一般状态、尿D-木糖排泄率、小肠黏膜ATP含量的影响。方法:利血平所致脾虚大鼠分为模型对照组和四君子汤组,另设正常对照组。对溴苯胺法测定尿D-木糖排泄率,生物发光法测定小肠黏膜ATP含量,并分析尿木糖排... 详细信息

目的:观察四君子汤对脾虚大鼠一般状态、尿D-木糖排泄率、小肠黏膜ATP含量的影响。方法:利血平所致脾虚大鼠分为模型对照组和四君子汤组,另设正常对照组。对溴苯胺法测定尿D-木糖排泄率,生物发光法测定小肠黏膜ATP含量,并分析尿木糖排泄率与小肠黏膜ATP含量改变的相关性。结果:与正常对照组比较,造模后大鼠体质量和尿D-木糖排泄率下降(P<0.01);与模型组比较,经四君子汤治疗后尿D-木糖排泄率提高(P<0.05);造模后大鼠小肠黏膜ATP含量与正常对照组比较无明显差异。尿木糖排泄率改变与小肠黏膜ATP含量改变呈正相关。结论:四君子汤能改善脾虚大鼠木糖吸收功能,但对小肠能量代谢指标ATP含量无明显影响;脾虚大鼠尿木糖排泄率降低可伴随小肠黏膜ATP含量降低。

关键词：四君子汤脾虚证吸收 D-木糖排泄率 ATP

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肝炎后肝硬化中医证候与疾病信息相似度分析

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中国中西医结合杂志 2009年第5期29卷 398-402页

作者：苏越王磊张华张琴陆奕宇刘平苏式兵上海中医药大学中医复杂系统研究中心上海201203 上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所上海市公共卫生临床中心上海中医药大学上海市高校中医内科学E研究院

目的探讨肝炎后肝硬化中医证候与临床症状及生物学指标间的相似性。方法在对变量进行归一化处理的基础上,采用夹角余弦、相关系数、相似度D及谱图相似度等4种相似度分析方法对279例肝炎后肝硬化患者临床表征信息(症状)、生物学指标和证... 详细信息

目的探讨肝炎后肝硬化中医证候与临床症状及生物学指标间的相似性。方法在对变量进行归一化处理的基础上,采用夹角余弦、相关系数、相似度D及谱图相似度等4种相似度分析方法对279例肝炎后肝硬化患者临床表征信息(症状)、生物学指标和证候进行相似性分析。结果获得相应的相似度矩阵,以分别反映中医证候和症状与生物学指标之间的相似性,4种方法得到的结果基本一致,相似度D法、夹角余弦法和谱图相似度法与传统的相关系数法相比匹配度显著提高,灵敏度高、取舍定量合理,方法可靠,较切合临床实际。结论通过相似度分析方法所得证候与临床信息间的相似关系与临床实际基本相符。该技术可简化临床指标数量,为寻找中医证候特征提供简捷、可靠的方法。

关键词：相似度分析肝炎后肝硬化证候症状生物学指标

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肝纤维化肝硬化的中西医结合诊疗发展问题

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中国中西医结合杂志 2015年第3期35卷 268-271页

作者：刘平上海中医药大学上海高校中医内科学E-研究院上海201203

肝纤维化是各种慢性肝病向肝硬化发展的必经病理过程，其准确的诊断与有效治疗是改善慢性肝病预后、降低慢性肝病病死率的重要途径之一。近十多年来，随着慢性乙肝（CHB）厢肝（CHC）抗病毒治疗的研究的发展，对肝纤维化（包括早期肝硬... 详细信息

肝纤维化是各种慢性肝病向肝硬化发展的必经病理过程，其准确的诊断与有效治疗是改善慢性肝病预后、降低慢性肝病病死率的重要途径之一。近十多年来，随着慢性乙肝（CHB）厢肝（CHC）抗病毒治疗的研究的发展，对肝纤维化（包括早期肝硬化）病理组织学的可逆性及失代偿期肝硬化的肝功能改善翻开了新篇章；复方中药治疗难治性CHC肝纤维化美国Ⅱ期临床试验的成功实施为发挥中医药在治疗难治性病变中的优势打开了一扇门。

关键词：肝纤维化肝硬化中西医结合诊疗失代偿期肝硬化慢性肝病 Ⅱ期临床试验有效治疗抗病毒治疗病理组织学

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茵陈蒿汤干预二甲基亚硝胺大鼠肝硬化效应的方证病理学基础研究

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中国中西医结合杂志 2010年第8期30卷 845-850页

作者：刘成刘平陶庆孙明瑜陈高峰王高强王磊都金星仝欣都广礼慕永平刘成海胡义扬上海中医药大学附属曙光医院上海市中医药研究院肝病研究所肝肾疾病病证教育部重点实验室上海201203 上海中医药大学上海高校中医内科学E研究院

目的基于清热利湿与滋养肝肾不同功效古典方剂的干预效应,探讨二甲基亚硝胺(dimethylni-trosamine,DMN)诱导大鼠肝硬化的方证病理学基础。方法腹腔注射DMN4周制备大鼠肝硬化模型,造模2周末取6只模型大鼠作给药前观察,其余模型大鼠随机... 详细信息

目的基于清热利湿与滋养肝肾不同功效古典方剂的干预效应,探讨二甲基亚硝胺(dimethylni-trosamine,DMN)诱导大鼠肝硬化的方证病理学基础。方法腹腔注射DMN4周制备大鼠肝硬化模型,造模2周末取6只模型大鼠作给药前观察,其余模型大鼠随机分为模型对照组、茵陈蒿汤(yinchenhao Decoc-tion,YCHD)组及一贯煎(yiguanjian,YGJ)组;各组于继续造模同时给予不同方剂的煎剂经口灌胃2周,正常大鼠与模型对照组给予同量等渗盐水,4周末处死大鼠,获取血清与肝组织样品,观测肝功能、肝组织病理学、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)与羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,检测肝组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferase,GST)活性;免疫印迹检测肝组织α-SMA、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、血小板衍生生长因子(platelete-derived growth factor,PDGF)以及肝脂肪酸结合蛋白(liver fatty acid bindingprotein,L-FABP)、转铁蛋白(transferrin,Tf)表达的变化。结果与模型对照组比较,YCHD组肝功能显著改善;肝组织Hyp含量与α-SMA蛋白表达显著降低(P<0.05),显著抑制DMN大鼠肝硬化的形成,而YGJ无明显作用。肝组织TNF-α与PDGF表达在YCHD组显著减少,而YGJ组TNF-α进一步增加,PDGF无明显变化;YCHD组肝组织MDA含量与GST活性显著降低(P<0.01或P<0.05),GSH含量、L-FABP及Tf蛋白表达显著增加(P<0.05),而YGJ组仅见GSH显著增加(P<0.05)。结论茵陈蒿汤显著抑制DMN大鼠肝硬化的形成;DMN大鼠肝硬化形成期的肝组织炎性病变及其过氧化损伤是茵陈蒿汤清热利湿效应的方证病理学基础。

关键词：二甲基亚硝胺肝硬化肿瘤坏死因子-α 脂质过氧化茵陈蒿汤

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基于以方测证的四氯化碳所致大鼠肝纤维化模型的证型探讨

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中国中西医结合杂志 2009年第3期29卷 246-250页

作者：陶庆孙明瑜冯琴彭景华刘成胡义扬刘平上海中医药大学附属曙光医院上海201203 上海中医药大学肝肾疾病病证教育部重点研究室上海市高校中医内科学E-研究院

目的在既往发现一贯煎和下瘀血汤对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化和肝硬化模型有显著效应,并从以方测证角度提出该模型可能以"肝阴虚损、瘀血阻络"表现为特征基础上,进一步进行论证。方法采用皮下注射CCl412周诱导的大鼠... 详细信息

目的在既往发现一贯煎和下瘀血汤对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化和肝硬化模型有显著效应,并从以方测证角度提出该模型可能以"肝阴虚损、瘀血阻络"表现为特征基础上,进一步进行论证。方法采用皮下注射CCl412周诱导的大鼠慢性肝损伤模型,以功效相近的六味地黄丸以及功效不同的茵陈蒿汤作为参比对象,与已证实有抗肝损伤肝纤维化作用一贯煎进行同步治疗观察。在造模第9周起,随机分模型组、一贯煎组、六味地黄丸组和茵陈蒿汤组,灌胃给药4周。观察大鼠肝功能、肝组织羟脯氨酸(Hyp)及肝组织病理变化。实时定量PCR法观察肝组织α白蛋白(Afamin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达变化。结果模型组出现显著的肝损伤和肝纤维化,较之正常组,肝组织Hyp含量显著升高,肝功能显著异常。肝组织Afamin mRNA表达显著降低,α-SMA mRNA表达显著升高。一贯煎可显著降低肝组织Hyp含量及肝脏胶原增生程度(P<0.05),改善肝功能;而六味地黄丸组肝组织Hyp有降低趋势(P=0.09),并显著降低丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,两方均可提高Afamin mRNA表达,降低α-SM AmRNA表达(P<0.05,P<0.01);茵陈蒿汤则无相关药效学效应。结论六味地黄丸和一贯煎的干预效应有一定的"趋同性",支持CCl4所致大鼠慢性肝损伤证属"阴虚"的推测。

关键词：慢性肝损伤四氯化碳六味地黄丸一贯煎阴虚

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黄芪汤组分抑制胆汁淤积性肝纤维化大鼠胆管上皮细胞增殖及其转分化的效应

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中华肝脏病杂志 2010年第1期18卷 13-18页

作者：都金星邱冰峰刘平孙明瑜陈高峰刘佳上海中医药大学肝肾疾病病证教育部重点实验室、上海中医药大学附属曙光医院、上海市中医药研究院肝病研究所、上海高校中医内科学E-研究院 201203

目的探讨胆管上皮细胞增殖及其转分化在肝纤维化形成过程中的作用及黄芪汤组分抑制肝纤维化的效应和机制。方法30只SD雄性大鼠采用胆总管结扎制备胆汁淤积性肝纤维化模型，假手术对照组仅对胆总管作分离，不结扎。胆管结扎术后1周随机... 详细信息

目的探讨胆管上皮细胞增殖及其转分化在肝纤维化形成过程中的作用及黄芪汤组分抑制肝纤维化的效应和机制。方法30只SD雄性大鼠采用胆总管结扎制备胆汁淤积性肝纤维化模型，假手术对照组仅对胆总管作分离，不结扎。胆管结扎术后1周随机分为模型对照组和药物干预组（经灌胃给予黄芪汤组分4周），5周后麻醉下处死大鼠，获取肝组织与血清标本。检测肝功能、肝组织学及羟脯氨酸（Hyp）含量；激光共聚焦显微镜观察肝组织角蛋白-7（CK7）与α-平滑肌肌动蛋白（仅SMA）共定位，Westernblot检测CK7、α-SMA蛋白表达。计量资料比较采用单因素方差分析中的LSD法或非参数检验中的H检验进行统计学分析，计数资料采用Radit检验，CK7与α—SMA蛋白表达间关系采用直线回归与相关分析。结果与假手术对照组比较，模型对照组大鼠病死率33．3％，腹水出现率90％，肝功能显著异常，肝组织肝细胞显著减少，胆管上皮细胞及纤维组织大量增生，肝组织Hyp含量、CK7及α-SMA蛋白表达显著增加（尸值均〈0．01），并有大量的CK7及OCSMA共定位阳性细胞表达。与模型对照组比较，药物干预组大鼠病死率、腹水出现率及脾脏质量均显著降低（P值均〈0．05），肝功能显著改善，肝组织肝细胞减少及胆管上皮细胞与纤维增生程度轻，CK7与αSMA共定位阳性细胞显著臧少。药物干预组与模型对照组大鼠肝Hyp含量分别为（1026．8±132．47）ug／g和（887．4±95．56）μg／g，CK7表达量分别为0．812±0．298和0．318±0．143，dSMA蛋白表达量分别为0．787±0．277和0．341±0．119，差异均有统计学意义（JD值均〈0．01）。结论黄芪汤组分可有效抑制胆管结扎大鼠胆管上皮细胞增生及胆管上皮细胞向α-SMA阳性的肌成纤维细胞的转分化。

关键词：胆汁淤积肝硬化胆管上皮细胞上皮间质转分化黄芪汤

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