检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：刘宇上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室上海201306 上海高校水产养殖E-研究院上海 201306

大型经济海藻海带染色体非常小(0.57-2.61 μm)且形态相似,致使难以区分染色体并进行准确的细胞遗传学研究分析,因此相关研究工作非常重要的同时又异常困难.本研究基于海带核糖体基因序列特征分析基础上,利用双色荧光原位杂交(FISH)技术... 详细信息

大型经济海藻海带染色体非常小(0.57-2.61 μm)且形态相似,致使难以区分染色体并进行准确的细胞遗传学研究分析,因此相关研究工作非常重要的同时又异常困难.本研究基于海带核糖体基因序列特征分析基础上,利用双色荧光原位杂交(FISH)技术,将海带18S-5.8S-25Sr RNA与5Sr RNA基因分别用带有特定不同荧光碱基的生物素标记定位到配子体染色体上,通过DNA特异性荧光染料DAPI染色,在荧光显微镜不同波长激发光下,得到呈现两种特定不同颜色(红、绿)标记的荧光信号,结果显示,18S-5.8S-25S rDNA基因(红色)探针与5S rDNA基因(绿色)探针都只出现了一个杂交位点,分别定位于海带配子体第23号染色体和27号染色体上,其中通过高保真酶PCR方法表明18S-5.8S-25S rDNA与5S rDNA并不存在遗传连锁现象,而双色荧光原位杂交结果再一次证明了海带配子体18S-5.8S-25S rDNA与5S rDNA并没有遗传连锁性.据目前研究表明,这是第一次利用双色荧光原位杂交技术关于藻类研究中海带rDNA染色体定位的报道,这些数据有助于了解rRNA基因在海带配子体基因组中的定位情况,并对未来海带染色体核型分析以及系统遗传发育研究奠定研究基础.

关键词： FISH 18S-5.8S-25S rDNA 5S rDNA 遗传连锁性

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三角帆蚌eFCB1基因cDNA序列克隆及表达研究

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水产学报 2015年第7期39卷 962-970页

作者：祁晓翔李文娟尚朝周子睿尚攀施志仪上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室上海海洋大学上海市高校水产养殖学E-研究院

为了发掘更多三角帆蚌具有eF-hand结构域的功能基因及其蛋白质,本研究运用RACe-PCR技术,克隆得到了三角帆蚌包含eF-hand结构域钙结合蛋白1基因(eF-hand calcium-binding domain-containing protein 1,eFCB1)的c DNA全长并进行了生物信... 详细信息

为了发掘更多三角帆蚌具有eF-hand结构域的功能基因及其蛋白质,本研究运用RACe-PCR技术,克隆得到了三角帆蚌包含eF-hand结构域钙结合蛋白1基因(eF-hand calcium-binding domain-containing protein 1,eFCB1)的c DNA全长并进行了生物信息学分析;通过real-time Q-PCR技术,分析了eFCB1基因在三角帆蚌10个组织,以及内脏团、外套膜插核后不同时间点的时空表达特点。结果表明三角帆蚌eFCB1基因c DNA序列全长981 bp,ORF为531 bp,编码176个氨基酸残基,5’-UTR 239 bp和3’-UTR 211 bp。eFCB1分子式为C877H1348N238O270S10,分子量约19.9 ku,等电点为4.70,不稳定系数为62.65,属亲水蛋白。其序列无信号肽序列,存在1个跨膜区域和2个eF-hand结构域,eF-hand模块分别为DLNDDKLISPee(98-109)和DTNGDDKLDGee(129-140)。荧光定量结果显示三角帆蚌eFCB1基因在各组织中均有表达,其中在肠和鳃中表达量最高(P<0.05),外套膜中表达量显著高于内脏团(P<0.05)。eFCB1基因在插核后不同时期的外套膜和内脏团育珠部位组织中表达具有显著差异(P<0.05),在外套膜中的表达量均显著高于内脏团(P<0.05),在插核后第20天时表达量显著高于各时期(P<0.05)。研究表明,eFCB1在三角帆蚌Ca2+的吸收过程中发挥调节作用,在珍珠囊形成过程中以及珍珠形成初期具有重要功能。

关键词：三角帆蚌 eFCB1 eF-hand结构域有核珍珠基因表达

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三角帆蚌eF-hand基因的表达研究

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浙江农业学报 2015年第12期27卷 2078-2085页

作者：祁晓翔李文娟施志仪尚朝周子睿尚攀上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室上海201306 上海海洋大学上海市高校水产养殖学研究院上海201306

淡水贝类包含eF-hand结构域的蛋白质对Ca^(2+)代谢具有重要的调控作用,加强eF-hand蛋白的研究对培育大型优质珍珠具有十分重要的意义。通过三角帆蚌转录组筛选到7个eF-hand基因,并进行生物信息学分析;通过数字基因表达谱(DGe)分析了这7... 详细信息

淡水贝类包含eF-hand结构域的蛋白质对Ca^(2+)代谢具有重要的调控作用,加强eF-hand蛋白的研究对培育大型优质珍珠具有十分重要的意义。通过三角帆蚌转录组筛选到7个eF-hand基因,并进行生物信息学分析;通过数字基因表达谱(DGe)分析了这7个基因在不同育珠时间两个育珠组织(外套膜和内脏团)中的表达趋势;通过Real-time Q-PCR技术对eF-hand基因进行了表达研究。结果表明,三角帆蚌7个eFhand基因都具有经典保守的eF-hand模块。进化树分析表明,eFCB1和eFCB6进化关系最近,eFCB7和N-eFCB1进化关系较近,eFCBD2和RASeFCB进化关系较近。DGe表达趋势分析表明三角帆蚌eF-hand基因在外套膜和内脏团组织不同育珠时期表达变化趋势差异较大,说明这7个基因在珍珠形成过程中的功能可能各不相同。荧光定量PCR结果表明,eF-hand基因在插核后不同时期的外套膜和内脏团育珠部位组织中表达与DGe表达趋势分析基本一致。eFCB1在外套膜插核后20 d表达水平最高(P<0.05),eFCB6和eFCB7在内脏团插核后20 d表达水平最高(P<0.05),表明这3个基因在珍珠质最初分泌形成过程中可能起着重要的作用,为进一步探索该类蛋白调控钙代谢及在珍珠形成过程中的作用奠定了基础。

关键词：三角帆蚌 eF-hand基因外套膜内脏团有核珍珠

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三角帆蚌外套膜细胞体外培养优化及体内植入培养对细胞生长的影响

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中国水产科学 2014年第2期21卷 225-234页

作者：李倩施志仪李文娟黄凯祁晓翔上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室上海201306 上海市高校水产养殖学E-研究院上海海洋大学上海201306

以DMeM为基础培养基,通过优化改良培养基及缓冲液的配方,对三角帆蚌(Hyriopsis cumingii Lea)外套膜进行细胞培养,并且以显微观测、RNA/DNA的比值作为该细胞增殖的评价指标,分别对体外培养细胞的迁出时间、速度、数量以及增殖活力进行... 详细信息

以DMeM为基础培养基,通过优化改良培养基及缓冲液的配方,对三角帆蚌(Hyriopsis cumingii Lea)外套膜进行细胞培养,并且以显微观测、RNA/DNA的比值作为该细胞增殖的评价指标,分别对体外培养细胞的迁出时间、速度、数量以及增殖活力进行测定。分别取体外培养第24、108、120小时的细胞进行Hoechst DNA荧光标记,然后将3组标记细胞植入三角帆蚌外套膜中在蚌体内培养,在植入后第24、72、120、168、216小时运用RNA/DNA指标检测活体培养的细胞增殖活力。结果表明,经过优化后的缓冲液和培养基更有利于细胞从外套膜组织中迁出,迁出速度和细胞数量显著增加(P<0.05),且细胞的活力随着培养时间的延长而逐渐增大,培养至108 h时,细胞活力达到最大,RNA/DNA比值为24.53,在108 h后显著下降(P<0.05),显微观测的细胞生长状况与RNA/DNA指标测定相吻合。对体外培养的细胞植入蚌体外套膜中再进行培养时发现,对体外培养活力较好的细胞,活体内环境可增大细胞的活力,RNA/DNA比值最高达到25.45,但在活体培养168 h后活力显著下降(P<0.05);而对体外培养活力较差的细胞,活体内环境对细胞活力影响不显著(P>0.05)。本研究旨在为三角帆蚌外套膜细胞增殖的深入研究及建株提供基础性资料。

关键词：三角帆蚌外套膜细胞培养组织培养 RNA DNA活力检测淡水珍珠

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三角帆蚌内脏团不同部位插核育珠对珍珠囊形成的影响

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中国水产科学 2014年第6期21卷 1098-1107页

作者：李文娟黄凯李倩祁晓翔尚朝周子睿付元帅施志仪上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室上海201306 上海市高校水产养殖学E-研究院上海海洋大学上海201306

对三角帆蚌(Hyriopsis comingii)内脏团不同部位进行插核,研究各组珍珠囊形成、结构以及珍珠质沉积的差异,从而确定出有利于珍珠形成的插核核位。实验选取内脏团5个部位(I:斧足内脏团前端;II:斧足内脏团中部;III:近生殖腺部;IV:近胃部;V... 详细信息

对三角帆蚌(Hyriopsis comingii)内脏团不同部位进行插核,研究各组珍珠囊形成、结构以及珍珠质沉积的差异,从而确定出有利于珍珠形成的插核核位。实验选取内脏团5个部位(I:斧足内脏团前端;II:斧足内脏团中部;III:近生殖腺部;IV:近胃部;V:近肾部)进行插核,并分别在插核后第20、50、90、150天(thd)采集内脏团插核部位进行组织固定,利用石蜡切片、He染色研究不同插核部位珍珠囊结构及珍珠质沉积情况。结果表明:(1)插核施术后20 d,II组插核位点最早形成单层低柱状上皮细胞,为次生珍珠囊;(2)插核施术后50 d,I、II、III组均形成了珍珠囊上皮细胞,而IV、V组插核位点未出现类似的柱状细胞。其中II、III组珍珠囊上皮细胞前端含有大量体积较大的颗粒物;(3)插核施术后90 d,I、III组珍珠囊细胞间出现大量细胞间隙,I、II组珍珠囊表皮细胞具有多核现象的细胞数量增多,且II、III组上皮细胞中颗粒物数量增多,而IV、V组插核位点形成了复层扁平上皮细胞;(4)插核施术后150 d,I、III组珍珠囊内表皮细胞间隙变少。II组珍珠囊上皮细胞游离端存在大量的微绒毛,其与III组相似,珍珠囊上皮细胞细胞核明显增多,颗粒物减少。该时期,IV组在插核位点上形成了不连续的低柱细胞、V组插核位点仍未出现珍珠囊细胞。(5)三角帆蚌在插核术后养殖150 d后,I、II、III组珠核表面出现明显的珍珠质沉积,II、III组珍珠质沉积均匀,I组不均匀,并且II组沉积的珍珠层厚度(0.85 mm±0.06 mm)显著大于I、III组(P<0.05;0.62mm±0.07 mm,0.56 mm±0.03 mm),而IV、V组珠核表面没有珍珠质沉积。研究结果表明,三角帆蚌内脏团不同插核部位珍珠囊上皮细胞的形成存在明显差异,斧足–内脏团前端、斧足–内脏团中部以及近生殖腺部插核能形成完整的珍珠囊结构并沉积珍珠质,其中斧足–内脏团中部插核更有利于珍珠的生长。本研究旨为淡水珍珠贝的内脏团育珠研究工作提供实践基础和理论依据。

关键词：三角帆蚌内脏团插核珍珠囊珍珠质

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三角帆蚌钙调蛋白(CaM)基因的cDNA序列克隆与表达分析

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安徽农业科学 2014年第22期42卷 7310-7314页

作者：李文娟李倩祁晓翔尚朝周子睿施志仪上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室上海201306 上海市高校水产养殖学E-研究院上海海洋大学上海201306

[目的]研究三角帆蚌钙调蛋白(CaM)基因在育珠和非育珠蚌各组织中的表达和不同Ca2+浓度下外套膜中的表达变化。[方法]通过RACe技术,以我国重要的淡水珍珠贝——三角帆蚌为研究客体,克隆了CaM的cDNA全长,并通过Real-Time Q-PCR技术分析了... 详细信息

[目的]研究三角帆蚌钙调蛋白(CaM)基因在育珠和非育珠蚌各组织中的表达和不同Ca2+浓度下外套膜中的表达变化。[方法]通过RACe技术,以我国重要的淡水珍珠贝——三角帆蚌为研究客体,克隆了CaM的cDNA全长,并通过Real-Time Q-PCR技术分析了该基因在育珠和非育珠蚌各组织中的表达和不同Ca2+浓度下外套膜中的表达变化。[结果]三角帆蚌CaM基因cDNA全长659bp,包括70 bp的5'UTR,299 bp的3'UTR和447 bp的ORF,编码149个氨基酸,预测其分子量为16.8 kDa,等电点为4.14。cDNA序列比对信息表明三角帆蚌与池蝶蚌、合浦珠母贝间均具有57%的相似度,而其蛋白具有高度的保守性,除斑马鱼外,各生物CaM相似率达97%。定量数据表明,CaM基因广泛表达于三角帆蚌各组织,外套膜内膜与腮中表达量显著升高(P<0.05),其次是外套膜外膜和内脏团组织。插核育珠能增加该基因在各组织的表达,特别是在外套膜外膜和鳃组织中,育珠蚌该基因的表达显著高于非育珠蚌(P<0.05)。此外,水体Ca2+浓度的增大对CaM基因表达有显著的影响,外套膜内膜该基因的表达随Ca2+浓度升高而增加,而外套膜外膜1.25 mmol/L Ca2+浓度下该基因的表达水平显著高于0.50 mmol/L、3.00 mmol/L组(P<0.05)。[结论]为进一步深入研究钙调蛋白基因的在珍珠生长过程中的功能及其调控机理奠定了分子基础。

关键词：三角帆蚌 CaM 序列克隆基因表达

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三角帆蚌内脏团不同插核部位对机体生理代谢的影响

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水生生物学报 2013年第6期37卷 1085-1093页

作者：黄凯施志仪李文娟李倩上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室上海201306 上海海洋大学上海市高校水产养殖学E-研究院上海201306

研究旨在探明内脏团不同插核部位对三角帆蚌机体生理代谢的影响。试验选取2龄三角帆蚌180只,随机分成5个实验组和1个对照组,实验组按内脏团5个部位(Ⅰ.斧足内脏团前端;Ⅱ.斧足内脏团中部;Ⅲ.近生殖腺部;Ⅳ.近胃部;Ⅴ.近肾部)进行插核,... 详细信息

研究旨在探明内脏团不同插核部位对三角帆蚌机体生理代谢的影响。试验选取2龄三角帆蚌180只,随机分成5个实验组和1个对照组,实验组按内脏团5个部位(Ⅰ.斧足内脏团前端;Ⅱ.斧足内脏团中部;Ⅲ.近生殖腺部;Ⅳ.近胃部;Ⅴ.近肾部)进行插核,并分别在插核后第5、10、20、50天(thd)采集蚌体淋巴血样,检测机体的尿酸及肝、肾生理指标的变化,以及插核对珍珠质沉积相关的钙含量和碱性磷酸酶活力的影响。结果表明:(1)与对照组相比,插核手术处理的蚌体与对照组机体生理指标有显著差异(P<0.05)。(2)5个插核组试验蚌术后5—20thd尿酸含量显著高于50thd时(P<0.05),且Ⅴ组尿酸含量在10—50thd显著高于其余各组。(3)各插核组尿素氮、肌酐含量5thd时均显著高于50thd(P<0.05),其中Ⅰ、Ⅲ组20—50thd无显著变化,Ⅴ组的尿素氮含量除5thd外,其余各个时期均显著高于其他各组(P<0.05)。(4)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组谷丙和谷草转氨酶活性在20thd前均显著低于50thd时(P<0.05),Ⅳ组谷丙和谷草转氨酶活力除了10thd外,均显著高于其余插核组,Ⅴ组的谷丙和谷草转氨酶活力,在20thd之后均仅次于Ⅳ组,并显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组。(5)Ⅰ组插核后10thd血液钙含量显著低于5thd时,10—50thd间无显著变化;Ⅱ、Ⅲ组血液钙含量变化呈先增大后降低的趋势,在20thd达到峰值;Ⅳ组血液钙含量随着试验期的延长显著降低,Ⅴ组血液钙含量10、50thd时显著高于其余4组。Ⅱ、Ⅲ组碱性磷酸酶活力无显著变化,Ⅰ、Ⅳ组显著降低(P<0.05),而Ⅴ组在5—20thd显著升高,20—50thd显著降低,20thd时出现峰值。研究结果显示,三角帆蚌内脏团插核后20d内机体各生理指标显著变化,之后趋于稳定,表明其术后20d可能是机体损伤的修复和功能恢复以及钙性磷酸酶含量逐步稳定的关键时期。

关键词：三角帆蚌内脏团插核生理代谢钙含量碱性磷酸酶

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海带染色体的DAPI染色及核型初步分析

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水产学报 2012年第1期36卷 50-54页

作者：刘宇毕燕会周志刚上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室上海市高校水产养殖E-研究院

鉴于海带染色体比较小且数目存在分歧等原因,利用0.2%秋水仙素对海带配子体及孢子体处理10 h左右,经过卡诺试剂固定、多种酶组合处理及30 cm的高位滴片,可以获得质量比较高的海带染色体;使用灵敏度高、特异性强的DNA荧光染料DAPI进行染... 详细信息

鉴于海带染色体比较小且数目存在分歧等原因,利用0.2%秋水仙素对海带配子体及孢子体处理10 h左右,经过卡诺试剂固定、多种酶组合处理及30 cm的高位滴片,可以获得质量比较高的海带染色体;使用灵敏度高、特异性强的DNA荧光染料DAPI进行染色,结果显示,海带雌、雄配子体的染色体各为31条,孢子体染色体为62条,大多为短杆状或者点状;雌配子体染色体的大小为0.78～2.61μm,稍大于雄配子体(大小为0.57～2.17μm)。根据染色体的大小,对海带配子体的染色体核型进行了初步分析。这些结果为分子标记的染色体定位等细胞学研究奠定了技术基础。

关键词：海带配子体 DAPI 染色体核型孢子体

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缢蛏ScHsc70 cDNA的分子特性和表达分析

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中国水产科学 2012年第1期19卷 33-44页

作者：冯冰冰牛东红钟玉民陈慧林国文李家乐上海海洋大学水产与生命学院农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室上海201306 福建省闽东水产研究所福建宁德352100 上海市高校水产养殖学E研究院上海海洋大学水产与生命学院上海201306

从缢蛏(Sinonovacula constricta Lamarck)cDNA文库中筛选出一条热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)同源序列,采用eST扩增和5′RACe(rapid amplification of cDNA ends,RACe)扩增方法获得全长cDNA序列,共2 335 bp,包括76 bp的5′非翻译区和309 bp的3′非翻译区,以及1 950 bp的开放阅读框。阅读框共编码649个氨基酸,推算的分子量约为70.89 kD,理论等电点为5.28。氨基酸序列分析结果表明,该基因的氨基酸序列含有HSP70家族的3个签名序列,2个糖基化位点,1个ATP-GTP结合位点,且C末端具有GGXP四肽重复序列以及细胞质特异性调控基序eeVD。该基因是组成型HSC70(Heat shock cognate 70)亚家族基因成员,被命名为ScHsc70。基于氨基酸序列的双壳贝类聚类分析表明,缢蛏与南极帽贝(Laternula elliptica)、文蛤(Meretrix meretrix)的亲缘关系最近。荧光定量表达分析显示,ScHsc70 mRNA在缢蛏水管、鳃、斧足、外套膜、肝和性腺等组织中以不同水平存在,其中在外套膜中的表达量最低,而在水管和肝中的表达量最高。经副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)和副鳗弧菌(***)诱导后,ScHsc70 mRNA在缢蛏肝中的水平呈现先升高后下降的变化趋势,且分别在感染后的第20小时和第30小时达到最高。结果提示,缢蛏ScHsc70基因可能参与了对细菌感染的防御反应。

关键词：缢蛏热休克蛋白70 序列分析基因表达

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缢蛏铁蛋白基因的分子特性及其表达分析

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上海海洋大学学报 2012年第5期21卷 641-649页

作者：牛东红冯冰冰李家乐上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室上海201306 江苏省水产技术推广站江苏南京210036 上海海洋大学上海市高校水产养殖学E研究院上海201306

从缢蛏(Sinonovacula constricta)cDNA文库中筛选出一条铁蛋白同源序列,直接扩增质粒获得全长cDNA序列,共1 106 bp,包括128 bp的5'非翻译区和309 bp的3'非翻译区,以及669 bp的开放阅读框。阅读框共编码222个氨基酸,N端含有17个... 详细信息

从缢蛏(Sinonovacula constricta)cDNA文库中筛选出一条铁蛋白同源序列,直接扩增质粒获得全长cDNA序列,共1 106 bp,包括128 bp的5'非翻译区和309 bp的3'非翻译区,以及669 bp的开放阅读框。阅读框共编码222个氨基酸,N端含有17个氨基酸的信号肽序列,推算的分子量约为25.47 ku,理论等电点为5.48。氨基酸序列分析结果表明,该基因含有保守的铁氧化酶活性中心的7个氨基酸残基,但是不具有糖基化位点(NQS)和5'非编码区铁蛋白的铁反应元件(iron response element,IRe),属于H型铁蛋白基因,该基因被命名为ScFeRs。系统进化显示,基本上同一个物种的不同亚型铁蛋白首先聚在一起,然后和其他物种的铁蛋白聚在一起。缢蛏ScFeRs首先与日本花棘石鳖(Liolophura japonica)LjFeRs聚在一起,然后与缢蛏另一种ScFeR以及文蛤(Meretrix meretrix)MmFeRs聚在一起。荧光定量PCR检测结果显示ScFeRs基因在肝胰腺中高度表达,肝胰腺与其它组织间的表达量存在着极显著差异。经鳗弧菌(Vibrioanguillarum)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)诱导后,ScFeRs基因表达水平呈显著上调。为进一步研究缢蛏铁蛋白基因的结构和功能奠定了基础。

关键词：缢蛏铁蛋白基因序列分析基因表达

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