检索结果-内蒙古大学图书馆

2011年全国海水养殖学术研讨会

作者：李文娟施志仪上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室上海 201306 上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室上海 201306 上海市高校水产养殖学E研究院上海海洋大学上海 201306

为了探讨淡水贝类Ca2+吸收和转运等信号传递机理，加快Ca在蚌体内的沉积，本研究首次采用非损伤微测技术(Non-invasive micro-test technology，NMT)与激光共聚焦显微镜(Confocal Lasers Scanning microscope，CLSM)技术，对组织及细胞... 详细信息

为了探讨淡水贝类Ca2+吸收和转运等信号传递机理，加快Ca在蚌体内的沉积，本研究首次采用非损伤微测技术(Non-invasive micro-test technology，NMT)与激光共聚焦显微镜(Confocal Lasers Scanning microscope，CLSM)技术，对组织及细胞内外Ca2+流量、转运方向、Ca2+沉积等进行了研究，为三角帆蚌珍珠培育提供生物学基础。

关键词：淡水贝类珍珠培育钙金属离子生理机制

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

缺刻缘绿藻ω3脂肪酸去饱和酶基因的特性及在氮饥饿过程中相对转录量的分析

引用

水产学报 2010年第9期34卷 1343-1353页

作者：李春阳杜道海于水燕李慧刘凡周志刚上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室上海市高校水产养殖学E-研究院上海海洋大学水产与生命学院

根据莱茵衣藻和普通小球藻ω3脂肪酸去饱和酶氨基酸序列(GenBank登录号分别为ABL09485和BAB78717)的保守区(TMFWALF和HHDIGTH)设计简并引物,以缺刻缘绿藻H4301总RNA为模板,通过反转录PCR和cDNA末端快速克隆技术(RACe),克隆了缺刻缘绿藻... 详细信息

根据莱茵衣藻和普通小球藻ω3脂肪酸去饱和酶氨基酸序列(GenBank登录号分别为ABL09485和BAB78717)的保守区(TMFWALF和HHDIGTH)设计简并引物,以缺刻缘绿藻H4301总RNA为模板,通过反转录PCR和cDNA末端快速克隆技术(RACe),克隆了缺刻缘绿藻ω3脂肪酸去饱和酶基因的cDNA全长序列(GenBank登录号:eU658930),它与莱茵衣藻的这个基因具有69%相似性。该基因cDNA序列长2330bp,其中5’-非翻译区长107bp;3’-非翻译区912bp,且具有明显的poly(A)尾巴;开放阅读框1311bp,编码一个436个氨基酸的蛋白质,分子量为49.06ku,等电点7.85;该基因编码的蛋白为膜结合蛋白,含有2个疏水区域和3个保守的组氨酸簇基序。将该基因的cDNA序列与其DNA序列比对后,发现该基因在其编码区存在6个内含子,剪切位点均符合'GT-AG'规则。实时荧光定量PCR结果显示,在氮饥饿培养过程中,缺刻缘绿藻ω3脂肪酸去饱和酶基因的相对转录量在4h时可能因休克显著提高(P<0.05),然后开始下调,12h开始显著下降(P<0.05),并在20h降到最低(约为完全培养基的11.6%),此后保持在低水平(为完全培养基的23.2%)波动(P<0.01)。脂肪酸组分的气相色谱结果表明,在氮饥饿培养过程中,花生四烯酸占总脂肪酸的百分含量逐步提高,而作为多不饱和脂肪酸ω3合成途径的产物,如α-亚麻酸和十六碳三烯酸(16∶3ω3)的百分含量在40h或96h后都显著降低(P<0.05)。这些结果表明缺刻缘绿藻ω3脂肪酸去饱和酶基因在氮饥饿过程中的相对低转录量,导致ω3合成途径相关产物百分含量的降低,确保了该藻沿着ω6途径来合成与积累花生四烯酸以提高其百分含量。另外,十六碳二烯酸(16∶2ω6)、亚油酸及花生四烯酸都可能是该克隆基因所编码ω3脂肪酸去饱和酶的反应底物。

关键词：缺刻缘绿藻 ω3脂肪酸去饱和酶基因氮饥饿实时荧光定量PCR 脂肪酸

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

日本沼虾VASA蛋白的原核表达、抗体制备及其免疫鉴定

引用

水产学报 2010年第10期34卷 1495-1501页

作者：崔峥朱小玲邱高峰上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室上海市高校水产养殖学E-研究院上海海洋大学水产与生命学院

Vasa基因具有在性腺中特异表达的特点,在生殖细胞分化与发育过程中起重要作用。从日本沼虾精巢cDNA中克隆了vasa基因的阅读框,连接到peT-32a载体,构建重组表达质粒peT32a-vasa,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导融合表达,表达产物经SDS-PAGe... 详细信息

Vasa基因具有在性腺中特异表达的特点,在生殖细胞分化与发育过程中起重要作用。从日本沼虾精巢cDNA中克隆了vasa基因的阅读框,连接到peT-32a载体,构建重组表达质粒peT32a-vasa,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导融合表达,表达产物经SDS-PAGe分析表明,融合蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约85ku,表达量约占包涵体总蛋白的48.7%,Western-blotting检测表明,融合蛋白可特异地被anti-HIS标签抗体识别。用Ni2+-NTA纯化后的融合蛋白免疫家兔,制备获得多克隆抗体,eLISA显示该抗体效价达1∶160000,Western免疫鉴定显示该抗体不仅能识别融合蛋白,而且也能识别日本沼虾性腺粗提液中的内源性VASA蛋白,免疫组化进一步显示,VASA蛋白主要分布在卵母细胞核周围和精原细胞质中,成熟精子中无信号,暗示VASA在日本沼虾生殖细胞发育分化过程中扮演重要角色。

关键词：日本沼虾 VASA蛋白原核表达多克隆抗体免疫鉴定

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

海带配子体中孢子形成相关蛋白(SRP)基因的克隆及其原核表达

引用

水产学报 2010年第8期34卷 1165-1173页

作者：陈晶王丽丽石微微周志刚上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室上海市高校水产养殖学E-研究院上海海洋大学水产与生命学院

从已构建好的海带雄配子体抑制消减cDNA文库中,通过Southern点杂交及序列分析,发现一未知功能的差异表达基因片段(克隆b9)。首先根据该克隆序列设计基因特异性引物,利用cDNA末端快速扩增技术,自雄配子体中克隆了一条长831bp的cDNA序列,... 详细信息

从已构建好的海带雄配子体抑制消减cDNA文库中,通过Southern点杂交及序列分析,发现一未知功能的差异表达基因片段(克隆b9)。首先根据该克隆序列设计基因特异性引物,利用cDNA末端快速扩增技术,自雄配子体中克隆了一条长831bp的cDNA序列,其中开放阅读框450bp,5’-非翻译区182bp,3’-非翻译区199bp且具有明显的poly(A)尾巴。同样利用PCR方法自雌配子体中克隆了该基因的cDNA序列,它与雄配子体的完全一致。蛋白同源搜索结果显示,该基因编码蛋白与点形念珠藻含有SpoIID/LytB结构域蛋白(SpoIID/Lyt Bdomain-containing protein:一种孢子形成时起作用的蛋白质)具有30%相似性,故暂命名为孢子形成相关蛋白基因(sporulation-related protein gene,srp)(GenBank登录号:eF490313)。然后构建了srp基因原核表达载体peT-28a-srp,并将其转化至大肠杆菌BL21中进行表达,获得了分子量大小约19.3ku的目的蛋白,且表达量与诱导物IPTG的量成正比。通过高效液相色谱-质谱分析证实,重组蛋白的氨基酸序列与推测的目的蛋白一致。最后纯化重组了SRP蛋白并制备其多克隆抗体,利用该抗体并运用Western印迹技术,在海带配子体中证实SRP蛋白的存在。

关键词：海带配子体 srp基因原核表达高效液相色谱-质谱法

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

海带cbbX基因序列特征及在雌、雄配子体之间的差异表达

引用

水产学报 2010年第1期34卷 80-88页

作者：石微微王丽丽陈晶欧阳珑玲周志刚上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室上海市高校水产养殖学E-研究院国家海洋局海洋环境监测中心

根据海带雄配子体抑制消减cDNA文库中筛选出的克隆18序列设计基因特异性引物,利用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACe),克隆了一条长2087bp的cDNA序列(GenBank登陆号:eF490312),其中开放阅读框1275bp,5′-非... 详细信息

根据海带雄配子体抑制消减cDNA文库中筛选出的克隆18序列设计基因特异性引物,利用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACe),克隆了一条长2087bp的cDNA序列(GenBank登陆号:eF490312),其中开放阅读框1275bp,5′-非翻译区(untranslated region,UTR)长118bp,3′-UTR长694bp且具有明显的polyA尾巴。蛋白同源搜索显示,它编码的蛋白与Guillardiatheta这种隐藻核型体编码的CbbX蛋白(GenBank登录号:CAB65663)具有66%同源性。推测的海带配子体cbbX基因编码一个含有424个氨基酸的前体蛋白,前19个氨基酸为信号肽序列。酶切后的成熟蛋白由405个氨基酸组成,分子量为45.26ku,等电点为5.28。海带配子体cbbX基因被8个内含子隔离开,它们的剪切位点都遵循"GT-AG"规则。无论在cDNA或者DNA序列上,雌、雄配子体cbbX基因都没有差异。自编码蛋白的第184位Gly开始,具有一个典型的Walker ATP-结合motif。通过与其它物种共14个CbbX蛋白序列构建的neighbor-joining系统演化树可知,它与隐藻核型体及红藻核基因组编码的蛋白聚成一类,而区别于叶绿体编码蛋白。因此,推测该克隆的海带配子体,cbbX基因可能是由核基因组编码的。荧光定量PCR(Q-RT-PCR)结果证实,cbbX基因在海带雄配子体的表达量明显高于雌配子体的,且在雌、雄配子体之间存在不同的日转录图谱。实验为海带配子体cbbX这个差异表达基因的功能研究和亚细胞定位奠定了基础。

关键词：海带配子体 cbbX基因核甘酸序列转录

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

大菱鲆胰岛素样生长因子-I成熟肽的克隆、重组表达及活性分析

引用

水产学报 2010年第1期34卷 1-7页

作者：赵晓杰陈松林王娜王贤丽邢士超中国海洋大学海洋生命学院中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室上海海洋大学上海高校水产养殖学E-研究院

通过RT-PCR方法从大菱鲆肝组织克隆了胰岛素样生长因子-I(IGF-I)成熟肽片段,分析表明,此成熟肽由70个氨基酸残基组成,含有3个链内二硫键。将扩增片段克隆到原核表达载体pGeX-4T-1上,实现了IGF-I成熟肽和GST蛋白在escherichia coli BL21(... 详细信息

通过RT-PCR方法从大菱鲆肝组织克隆了胰岛素样生长因子-I(IGF-I)成熟肽片段,分析表明,此成熟肽由70个氨基酸残基组成,含有3个链内二硫键。将扩增片段克隆到原核表达载体pGeX-4T-1上,实现了IGF-I成熟肽和GST蛋白在escherichia coli BL21(De3)plysS中的融合表达。融合蛋白分子量约为34ku,诱导4h时占菌体总蛋白的59%,主要以包涵体形式存在。Western-blotting免疫印迹表明,融合蛋白可以特异性地被anti-GST抗体识别。包涵体经6mol/L盐酸胍变性溶解及脉冲法稀释复性后,通过GSTrapFF亲和预装柱纯化,获得了电泳分析纯的融合蛋白。以细胞增殖实验检测蛋白生物活性,结果显示,纯化蛋白能促进大菱鲆肾脏细胞的增殖。

关键词：胰岛素样生长因子-I cDNA克隆重组表达包涵体融合蛋白

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

光对海带雌、雄配子体lhcf5和lhcf6基因相对转录量的影响

引用

中国水产科学 2009年第6期16卷 850-858页

作者：邹丹燕毕燕会周志刚上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室上海高校水产养殖学E-研究院上海201306

利用实时荧光定量PCR(Q-RT-PCR)方法分析了在不同光照强度、光质及有利于配子产生的条件下,lhcf5和lhcf6基因在海带(Laminaria japonica)雌、雄配子体中转录量的变化。不同光照强度条件下(光源为白光),lhcf5和lhcf6基因在黑暗中接近不转... 详细信息

利用实时荧光定量PCR(Q-RT-PCR)方法分析了在不同光照强度、光质及有利于配子产生的条件下,lhcf5和lhcf6基因在海带(Laminaria japonica)雌、雄配子体中转录量的变化。不同光照强度条件下(光源为白光),lhcf5和lhcf6基因在黑暗中接近不转录;雌配子体在光照强度40μmol·m-2·s-1时转录量最高,而雄配子体的最高转录量出现在80μmol·m-2·s-1的光照强度处;高于此光照强度,2个基因的转录量都会随光照强度增加而降低。相对于同强度的白光来说,红光照射无论是短时间(3d)还是长时间(7d),都会促进2个基因的相对转录水平;蓝光对雌配子体中2个基因转录的促进作用不明显,而对它们在雄配子体中的转录有一定的促进作用。将海带配子体从营养生长转至有利于配子发生的条件下,雌、雄配子体lhcf5和lhcf6基因在第1天的转录量都明显增加;雌配子体在第4天以及第12天(lhcf6)或第14天(lhcf5)均显著增加,第6天及第10天接近不转录;雄配子体在第8天及第14天增加,第10天也近似不转录;发育阶段其他时间内的转录量都低于营养生长期的。结果表明,海带配子体lhcf5和lhcf6的转录受光诱导,其中红光的促进作用最明显;其转录可能因有利于配子体细胞叶绿体结构的完善及物质与能量的积累而利于细胞分裂与营养生长。

关键词：海带配子体 lhcf基因光照强度光质转录量

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

海带雄配子体抑制消减cDNA文库的生物信息学分析

引用

中国水产科学 2009年第2期16卷 221-229页

作者：陆广琴欧阳珑玲周志刚上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室上海高校水产养殖学E-研究院上海201306

对海带(Laminaria japonica Aresch).雄配子体抑制消减cDNA文库进行生物信息学分析,并通过Northern印迹杂交进一步验证了雄配子体2个优先表达的基因。结果表明,(1)由627个克隆产生的618条高质量cDNA可聚类成187条非冗余序列(NRS);其中93... 详细信息

对海带(Laminaria japonica Aresch).雄配子体抑制消减cDNA文库进行生物信息学分析,并通过Northern印迹杂交进一步验证了雄配子体2个优先表达的基因。结果表明,(1)由627个克隆产生的618条高质量cDNA可聚类成187条非冗余序列(NRS);其中93条Contig由524条cDNA拼接而成,剩下的94条为Singleton(只有单条cDNA),冗余率达69.74%。(2)5条NRS因与rRNA基因相匹配而不进行分析;60条NRS与GenBank中注释蛋白基因显著匹配;122条NRS无显著匹配。(3)大部分已知功能的基因与物质和能量代谢(26.7%)、生长发育(13.3%)有关,其中与叶绿体光捕获蛋白复合体有关的基因有106条cDNA,所涉及的有lhcf6基因(62条cDNA)与fcp基因(12条cDNA)等。(4)经Northern印迹杂交证实lhcf6和fcp2个基因在处于营养生长期的雄配子体中优先表达。(5)90条Contig的总G+C含量平均值为52.58%,表明了密码子的使用对G、C有明显的倾向性;20个推测功能蛋白(1520密码子)密码子第三位碱基的使用偏好C(40.7%),其次是G(33.9%);终止密码子的使用偏好TGA(54.5%)。本研究为海带雌、雄配子体差异表达基因克隆、分析和功能基因组学等研究提供了信息。

关键词：海带配子体抑制消减杂交 cDNA 基因表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

日本囊对虾卵母细胞发育过程中组织蛋白酶C比活性测定

引用

水产学报 2009年第3期33卷 417-423页

作者：邱高峰朱琴蔡生力山野惠佑上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室上海高校水产养殖学E-研究院上海海洋大学日本国立水产研究综合中心养殖研究所

组织蛋白酶C是一种溶酶样半胱氨酸蛋白酶,近年报道了组织蛋白酶C的表达与日本囊对虾卵母细胞最后成熟阶段密切相关。对卵母细胞发育主要不同时相特别是卵母细胞最后生理成熟过程进行了连续观察,测定了组织蛋白酶C在卵母细胞发育过程中... 详细信息

组织蛋白酶C是一种溶酶样半胱氨酸蛋白酶,近年报道了组织蛋白酶C的表达与日本囊对虾卵母细胞最后成熟阶段密切相关。对卵母细胞发育主要不同时相特别是卵母细胞最后生理成熟过程进行了连续观察,测定了组织蛋白酶C在卵母细胞发育过程中的比活性。结果显示,日本囊对虾卵母细胞发育可划分为9个时相,即卵原细胞时相、核仁时相、周边核仁时相、初级卵黄发生时相、次级卵黄发生时相、皮质棒早期时相、皮质棒中期时相、皮质棒晚期时相、排卵期时相,生发泡的破裂是在排卵之前就已经发生;免疫印迹实验结果显示,组织蛋白酶C蛋白只在卵母细胞最后成熟阶段即皮质棒发生时期表达,但酶活性测定结果显示,组织蛋白酶C比活力在皮质棒发生前后没有变化,酶活性较低。以上数据提示组织蛋白酶C可能与受精时皮质棒的释放以及受精卵外胶膜的形成有关。

关键词：日本囊对虾卵母细胞发育组织蛋白酶C

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

新一代生物柴油原料——微藻

新一代生物柴油原料——微藻

引用

2009'全国可再生能源—生物质能利用技术交流研讨会

作者：童牧周志刚上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室上海高校水产养殖E-研究院

生物柴油指的是来自生物体的油脂经转酯作用而形成的单烷基脂肪酸酯。随着化石能源资源的枯竭及环境与气候的恶化,世界各国对可再生能源越来越重视,并致力于生物质能源尤其是生物柴油的大力开发和利用。从目前的情况来看,以高等植物、... 详细信息

生物柴油指的是来自生物体的油脂经转酯作用而形成的单烷基脂肪酸酯。随着化石能源资源的枯竭及环境与气候的恶化,世界各国对可再生能源越来越重视,并致力于生物质能源尤其是生物柴油的大力开发和利用。从目前的情况来看,以高等植物、动物等油脂等为原料生产的生物柴油根本无法满足人们的需求。某些微藻因含油量高、易于培养、单位面积产量大等优点,而被视为新一代的、甚至是唯一能实现完全替代石化柴油的生物柴油原料。本文结合中国生物柴油的发展状况,剖析了利用微藻生产生物柴油的优势,并就其存在的劣势重点地从优良藻种的筛选、产油培养条件与技术的改进、生物柴油提炼方法与过程系统化等方面,提出了应对措施以及展望其应用的前景。

关键词：微藻生物柴油中性脂可再生能源转酯作用

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：