检索结果-内蒙古大学图书馆

上海海洋大学学报 2022年第6期31卷 1335-1341页

作者：李雪男冯上乐王贺申晓雅陈一格白志毅李文娟上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306 上海海洋大学农业农村部淡水水产种质资源重点实验室上海201306

胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factors 2, IGF2)在多种细胞生长、分化和合成代谢的调节中发挥重要的调控作用。本研究成功构建了淡水珍珠贝三角帆蚌IGF2的重组质粒pEGFP-IGF2和pET32a-IGF2,通过pEGFP-IGF2-细胞转染,表明该蛋... 详细信息

胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factors 2, IGF2)在多种细胞生长、分化和合成代谢的调节中发挥重要的调控作用。本研究成功构建了淡水珍珠贝三角帆蚌IGF2的重组质粒pEGFP-IGF2和pET32a-IGF2,通过pEGFP-IGF2-细胞转染,表明该蛋白定位在细胞质与细胞核中。将pET32a-IGF2转化到BL21 (DE3)中进行蛋白诱导表达,成功得到其原核表达载体,SDS-PAGE检测显示,在约25ku处有一条清晰的条带,符合目的条带大小(26.27 ku),且主要表达于上清液中。为研究重组蛋白IGF2对三角帆蚌细胞活性的作用,通过CCK8细胞活性测定,进一步探讨了添加不同质量浓度重组目的蛋白(0、2.5、5.0、7.5、 12.5、17.5、 22.5μg/mL)培养的三角帆蚌外套膜细胞增殖活性。结果显示,三角帆蚌IGF2重组蛋白能显著促进三角帆蚌外套膜细胞的增殖活性(P<0.05),且在其质量浓度为12.5μg/mL时对三角帆蚌外套膜细胞的促生长效果最佳,这为促进三角帆蚌外套膜细胞传代、细胞系建立奠定了基础,也为下一步探究IGF2在贝类中的功能提供依据。

关键词：三角帆蚌 IGF2 亚细胞定位重组蛋白细胞培养生物活性

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表没食子儿茶素没食子酸酯衍生物及过硫酸氢钾复合物粉体外抑制Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒的研究

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微生物学报 2023年第4期63卷 1432-1446页

作者：徐伟闻金萱李鹏飞吕利群王浩上海海洋大学国家水生动物病原库上海201306 上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306 上海海洋大学农业农村部淡水水产种质资源重点实验室上海201306 广西科学院广西南宁530000

【目的】为了将表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate, EGCG)的2种衍生物和过硫酸氢钾复合物粉(compound potassium peroxymonosulfate powder, KMPS)运用于体外细胞实验中,以评估这3种药物对I型草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus, GCRV)的抑制和杀灭效果。【方法】利用MUSE法和CCK-8法评估表没食子儿茶素没食子酸酯棕榈酸酯(epigallocatechin gallate palmitate,EGCG-P)、乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯(peracetylated epigallocatechin gallate, Ac EGCG)和过硫酸氢钾复合物粉3种药物对细胞的安全浓度,利用体外细胞感染病毒模型,使用不同浓度测试物处理病毒或细胞后感染病毒,通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, q RT-PCR)法分析不同测试物对病毒的抑制和杀灭效果。使用不同浓度测试物处理细胞后,利用q RT-PCR法检测宿主免疫相关基因变化情况。【结果】EGCG-P和Ac EGCG对GCRV-JX01感染细胞的抑制作用呈剂量依赖性,且EGCG-P的抑制效果优于Ac EGCG,EGCG-P浓度为10μg/m L和40μg/m L时病毒量相对于对照组上清中病毒的滴度分别降低了102 copies/μL和103 copies/μL,而Ac EGCG浓度为60μg/m L和120μg/m L时才能达到相同抑制效果。杀灭实验结果表明,EGCG-P、Ac EGCG和KMPS对GCRV-I毒株均有杀灭效果,最低有效杀灭剂量KMPS (5μg/m L)

关键词：草鱼出血病草鱼呼肠孤病毒表没食子儿茶素没食子酸酯棕榈酸酯乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯过硫酸氢钾复合物粉

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饲料中添加牛乳铁蛋白肽对大口黑鲈幼鱼生长性能、消化酶活力、肠道组织结构及抗病力的影响

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水生生物学报 2023年第3期47卷 505-514页

作者：黄河庄镱钟国防唐香山上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306 上海海洋大学农业部鱼类营养与环境生态研究中心上海201306 上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室上海201306 杭州眺旺生物科技有限公司杭州310030

为探讨饲料中添加不同水平牛乳铁蛋白肽(Bovine lactoferricin,LfcinB)对大口黑鲈(Micropterus salmoides)幼鱼生长性能、消化酶活力、肠道组织结构及抗病力的影响,试验选取了初均重为(19.88±0.03)g的450尾大口黑鲈,随机分成5组,每... 详细信息

为探讨饲料中添加不同水平牛乳铁蛋白肽(Bovine lactoferricin,LfcinB)对大口黑鲈(Micropterus salmoides)幼鱼生长性能、消化酶活力、肠道组织结构及抗病力的影响,试验选取了初均重为(19.88±0.03)g的450尾大口黑鲈,随机分成5组,每组3个重复,分别在基础饲料中添加0(阴性对照组)、1000、1500和2000 mg/kg牛乳铁蛋白肽,并设置基础饲料+30 mg/kg氟苯尼考为阳性对照组,共5种试验饲料。试验周期为8周。结果表明:(1)随着牛乳铁蛋白肽添加量的增加,大口黑鲈的末均重(FBW)、增重率(WGR)和特定生长率(SGR)均呈现先升高后降低的趋势,1000 mg/kg牛乳铁蛋白肽组大口黑鲈的生长性能最好且与对照组(阴性对照、阳性对照)对应数据差异显著(P<0.05)。(2)与两个对照组比,1000 mg/kg牛乳铁蛋白肽组大口黑鲈的肠道胰蛋白酶、α-淀粉酶和脂肪酶活力均显著上升(P<0.05)。(3)与两个对照组比,饲料中添加1000 mg/kg牛乳铁蛋白肽可显著提高大口黑鲈前肠、中肠及后肠的绒毛高度和宽度(P<0.05)。(4)采用嗜水气单胞菌进行攻毒后,牛乳铁蛋白肽组大口黑鲈的成活率均高于阴性对照组而与阳性对照组无显著差异(P>0.05)。综上所述,在试验条件下,饲料中添加牛乳铁蛋白肽对大口黑鲈幼鱼有促生长作用,适宜添加量为1000 mg/kg,同时牛乳铁蛋白肽能提高大口黑鲈肠道消化酶活力,改善肠道组织结构,提高抗病力。

关键词：牛乳铁蛋白肽生长消化酶肠道组织结构抗病力大口黑鲈

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基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒RAA-CRISPR/Cas12a检测方法的建立

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水生生物学报 2024年第11期48卷 1905-1914页

作者：肖思民侯泽玮刘方幸妍赵祎晨尹纪元徐伟吕利群王浩上海海洋大学国家水生动物病原库上海201306 上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室上海201306 中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔药创制重点实验室广州510380

为建立一种特异性强、灵敏度高、操作便捷的Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)检测方法,研究利用重组酶介导链置换核酸扩增技术(Recombinase-aid amplification,RAA)与成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)系统相结合,构建了GCRV-Ⅱ病毒RAA... 详细信息

为建立一种特异性强、灵敏度高、操作便捷的Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)检测方法,研究利用重组酶介导链置换核酸扩增技术(Recombinase-aid amplification,RAA)与成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)系统相结合,构建了GCRV-Ⅱ病毒RAA结合CRISPR/Cas12a可视化“一步”快速检测方法。首先选择GCRV-Ⅱ毒株间序列保守,不同基因型GCRV间差异明显的s6基因(GQ896337)的保守区设计5对RAA候选引物和2对crRNA,合成并筛选出特异性引物和crRNA组合。其次测试反应的特异性、灵敏度和准确性。最后建立下层扩增相、上层检测相的“一步法”反应体系。该检测方法在37℃恒温下反应可检测出GCRV-Ⅱ,最低检测限为10^(2) copies/μL。对24份临床样本进行检测,该检测方法阳性检出率高于现行国标PCR法。研究建立的GCRV-Ⅱ检测方法操作便捷、特异性高、灵敏度好、可重复性强、与设备兼容性好、在蓝光灯下可通过肉眼判断检测结果。

关键词： GCRV-Ⅱ RAA CRISPR/Cas12a 现场诊断

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基于线粒体Cyt b基因序列的4个黄尾鲴养殖群体遗传多样性分析

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江苏农业学报 2024年第2期40卷 342-347页

作者：刘士力陈大伟朱鹏灿郑建波夏冯博程顺蒋文枰迟美丽杭小英李飞浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室/浙江省淡水水产遗传育种重点实验室浙江湖州313001 上海海洋大学农业农村部淡水水产种质资源重点实验室上海201306 湖州融晟渔业科技有限公司浙江湖州313105

黄尾鲴(Xenocypris davidi)是浙江省自然水域增殖放流的主要鱼类,为了解人工繁育对黄尾鲴遗传多样性的影响,利用线粒体DNA细胞色素b基因(Cyt b)对4个养殖群体的遗传多样性进行研究,旨在为黄尾鲴增殖放流策略制定和实施提供基础数据。结... 详细信息

黄尾鲴(Xenocypris davidi)是浙江省自然水域增殖放流的主要鱼类,为了解人工繁育对黄尾鲴遗传多样性的影响,利用线粒体DNA细胞色素b基因(Cyt b)对4个养殖群体的遗传多样性进行研究,旨在为黄尾鲴增殖放流策略制定和实施提供基础数据。结果显示,在编码Cyt b的1 140 bp序列中,检测到157个变异位点,界定了21种单倍型,其中长兴、双浦、八里店和醴陵群体的单倍型数目分别为10个、11个、7个和2个,单倍型多样性介于0.226~0.794,核苷酸多样性介于0.006 14~0.023 86。除醴陵群体遗传多样性较低外,其余3个养殖群体的遗传多样性具有高单倍型数和高核苷酸多样性的特点。4个黄尾鲴养殖群体间的遗传距离为0.018 74~0.092 74,遗传分化指数为0.808 63(P<0.01),其中长兴和八里店群体的分化程度较低,双浦和醴陵群体的分化程度较高,且遗传变异主要发生在群体间。本研究结果可从分子水平为黄尾鲴的资源保护和人工增殖放流提供参考依据。

关键词：黄尾鲴养殖群体 Cyt b基因遗传多样性

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三角帆蚌外套膜有核珍珠质量与育珠蚌生长性状相关和通径分析

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渔业科学进展 2024年第5期45卷 204-212页

作者：高金平李家乐白志毅上海海洋大学、农业农村部淡水水产种质资源重点实验室上海201306 上海海洋大学、上海市水产动物良种创制与绿色养殖协同创新中心上海201306 无锡金珍珠科技有限公司江苏无锡214000

三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)外套膜有核珍珠培育是新兴的珍珠培育技术。为了鉴定影响外套膜有核珍珠质量相关的生长性状,本研究以2龄三角帆蚌为育珠蚌,每蚌植入10颗规格为5 mm的珠核,培育19个月至商品珠,对珍珠质量性状(产珠数/成珠... 详细信息

三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)外套膜有核珍珠培育是新兴的珍珠培育技术。为了鉴定影响外套膜有核珍珠质量相关的生长性状,本研究以2龄三角帆蚌为育珠蚌,每蚌植入10颗规格为5 mm的珠核,培育19个月至商品珠,对珍珠质量性状(产珠数/成珠率、最大直径、最小直径、圆度、珍珠层厚度)与育珠蚌生长性状(壳长、壳宽、壳高、活体质量、壳质量、软组织质量)、珠核(最大直径、最小直径、圆度)进行相关及通径分析。结果显示,该批育珠蚌平均成珠率为(70.00±10.82)%,珍珠平均大小(最小直径)为(6.91±0.67)mm,珍珠平均圆度(直径差百分比)为(6.74±7.78)%。珍珠大小、珍珠层厚度与育珠蚌的壳宽、活体质量和壳质量极显著正相关(P<0.01),与育珠蚌的壳高和软组织质量显著正相关(P<0.05);壳宽与珍珠大小和珍珠层厚度的相关系数最大,均为0.69;而成珠率、珍珠圆度与育珠蚌各生长性状均不相关(P>0.05)。壳宽对珍珠大小和珍珠层厚度的直接作用(0.69)及直接决定系数(0.50)最大。研究表明,三角帆蚌的壳宽是提升外套膜有核珍珠的大小和珍珠层厚度品质的关键性状。

关键词：三角帆蚌外套膜有核珍珠质量性状生长性状相关分析通径分析

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鱼类视觉胁迫与利它素对大型溞生长繁殖的影响

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上海海洋大学学报 2022年第1期31卷 97-106页

作者：彭久赞王丽卿王奕君徐夏吟王庭悦季高华上海海洋大学农业农村部鱼类营养与环境生态研究中心上海201306 上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室上海201306

使用长江中下游地区常见的麦穗鱼及大型溞作为研究对象,在避免直接摄食的情况下将麦穗鱼与大型溞在同一容器中培养,设计视觉胁迫与利它素影响的交叉实验,对照组为无视觉胁迫无利它素组、实验组分别是无视觉胁迫有利它素组、有视觉胁迫... 详细信息

使用长江中下游地区常见的麦穗鱼及大型溞作为研究对象,在避免直接摄食的情况下将麦穗鱼与大型溞在同一容器中培养,设计视觉胁迫与利它素影响的交叉实验,对照组为无视觉胁迫无利它素组、实验组分别是无视觉胁迫有利它素组、有视觉胁迫有利它素组、有视觉胁迫无利它素组,研究其对大型溞生长、体型和繁殖的影响。结果发现:无利它素组的大型溞体长增长更快;无利它素影响的大型溞壳刺生长较快,在视觉胁迫有无的实验组中表现出不同的反应,无利它素影响有视觉胁迫处理组的壳刺长度较无视觉胁迫更长;无利它素组繁殖量的均值与有利它素组相比较,高出了2.89倍,并且有利它素有视觉胁迫组的死亡速率最快。虽然生物操纵技术使枝角类的捕食者减少,但是水体中残留的鱼类利它素对水生态系统中的枝角类依旧存在抑制作用。研究表明麦穗鱼对枝角类不仅有直接摄食的压力,还可通过视觉胁迫与利它素对枝角类体型、生长和繁殖产生间接的影响。

关键词：鱼类大型枝角类捕食压力生物操纵形态变化

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日本沼虾细胞自噬基因ATG13和ATG101的克隆及其低氧胁迫下表达分析

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水产学报 2021年第6期45卷 846-861页

作者：孙盛明陈寅翔郑诚赵倩倩薛程上海海洋大学农业农村部淡水水产种质资源重点实验室上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室

为研究自噬相关基因(autophagy-related genes, ATG) ATG13和ATG101在甲壳动物应答低氧胁迫过程中的调节作用,实验采用RACE PCR技术通过克隆测序和基因序列拼接,首次克隆了日本沼虾的细胞自噬基因ATG13和ATG101的全长cDNA序列,日本沼虾... 详细信息

为研究自噬相关基因(autophagy-related genes, ATG) ATG13和ATG101在甲壳动物应答低氧胁迫过程中的调节作用,实验采用RACE PCR技术通过克隆测序和基因序列拼接,首次克隆了日本沼虾的细胞自噬基因ATG13和ATG101的全长cDNA序列,日本沼虾的细胞自噬基因ATG13 cDNA全长2 043 bp (NCBI登录号为MT084347),包括211 bp的5′末端非翻译区(untranslated region,UTR),449 bp的3′UTR和1 383 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),开放阅读框编码460个氨基酸;ATG101 cDNA全长1 051 bp(NCBI登录号为MT084348),包括18 bp的5′末端非翻译区,373 bp的3′UTR和660 bp的开放阅读框,开放阅读框编码219个氨基酸。通过软件和生物信息网站对其序列进行分析,氨基酸相似度比对显示,日本沼虾的细胞自噬基因ATG13富含高度保守的LC3作用结构域(LIR);系统进化树分析显示,日本沼虾的细胞自噬基因ATG13与凡纳滨对虾ATG13具有最近的亲缘关系;通过实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)实验分析发现,日本沼虾ATG13和ATG101在其肝胰腺和脑组织表达量较高,而在肌肉中表达量较低;利用qRT-PCR追踪其在肝胰腺组织低氧胁迫过程中出现的表达差异情况,结果显示,实验组日本沼虾在低氧胁迫6和24 h时,其细胞自噬基因ATG13和ATG101表达量显著高于对照组,而在复氧12 h后,实验组与对照组的ATG13和ATG101表达量差异不显著;Western blot分析结果显示,日本沼虾ATG13和ATG101表达丰度基本与基因表达模式相似。透射电镜分析结果显示,在低氧胁迫6和24 h后,肝胰腺组织中的溶酶体开始出现自噬空泡,表明急性低氧胁迫会诱导自噬体的形成,本研究结果可为了解日本沼虾应对低氧胁迫下的调控机制提供理论参考。

关键词：日本沼虾 ATG13 ATG101 细胞自噬低氧胁迫

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溶解氧昼夜变化对鳜血液生理生化指标及血红蛋白基因表达的影响

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南方农业学报 2024年第5期55卷 1493-1501页

作者：郑佳姚晓丽罗文斌黄小鹏赵金良农业农村部淡水水产种质资源重点实验室(上海海洋大学) 上海201306 水产动物遗传育种中心上海市协同中心(上海海洋大学) 上海201306 水产科学国家级实验教学示范中心(上海海洋大学) 上海201306

【目的】探究养殖水体溶解氧昼夜变化下鳜(Siniperca chuatsi)血液生理生化指标及血红蛋白基因(Hb)应答的变化规律,为揭示鱼类的短期低氧适应机制提供理论依据。【方法】以健康的鳜幼鱼为研究对象,通过转录组测序和基因组测序数据匹配,... 详细信息

【目的】探究养殖水体溶解氧昼夜变化下鳜(Siniperca chuatsi)血液生理生化指标及血红蛋白基因(Hb)应答的变化规律,为揭示鱼类的短期低氧适应机制提供理论依据。【方法】以健康的鳜幼鱼为研究对象,通过转录组测序和基因组测序数据匹配,鉴定出鳜Hb基因序列,并进行生物信息学分析。在7:00、11:00、17:00和23:00等4个时间点采集鳜血液样品,使用PROCANPE-6800血细胞分析仪测定红细胞数、血红蛋白含量、红细胞压积、平均红细胞血红蛋白浓度和平均红细胞体积,采用实时荧光定量PCR检测Hb基因的表达变化。【结果】共鉴定获得11个鳜Hb基因,包括6个α型Hb基因(hbae4、hbae、hbae1.1、hbae5、hbaa1和hbaa1.1)及5个β型Hb基因(hbbe2、hbba2.1、hbba1、hbba1.1和hbba2);除hbae4基因序列由6个外显子和5个内含子构成外,其余10个基因序列均由3个外显子和2个内含子构成。11个鳜血红蛋白均不存在跨膜结构和信号肽,亚细胞定位于细胞质,其二级结构由α-螺旋、β-折叠、延伸链和无规则卷曲构成。池塘水体溶解氧含量存在周期性的昼夜变化;溶解氧含量最低时(7:00),鳜血液红细胞数、红细胞压积、血红蛋白含量和平均红细胞血红蛋白浓度均最高,显著高于其他3个时间点(P<0.05,下同);溶解氧含量最高时(17:00),红细胞数、红细胞压积和血红蛋白含量则显著低于其他3个时间点;平均红细胞体积在4个时间点无显著变化(P>0.05)。hbae4、hbae、hbae1.1、hbae5、hbaa1.1、hbbe2、hbba2.1、hbba1和hbba2基因的相对表达量均随溶解氧昼夜变化呈先上升后下降趋势,于17:00时达最高值,且这9个Hb基因在4个时间点的表达模式基本一致,即低溶解氧时相对表达量最低,高溶解氧时相对表达量最高;而hbaa1和hbba1.1基因相对表达量与溶解氧含量成反比。【结论】鳜通过调节红细胞数、血红蛋白含量和平均红细胞血红蛋白浓度等机制及调控Hb基因表达,以适应溶解氧的昼夜变化,从而保持机体供氧稳定。

关键词：鳜血红蛋白 Hb基因溶解氧昼夜变化

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恩诺沙星及其代谢物环丙沙星在牛蛙体内的残留消除规律研究

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淡水渔业 2024年第1期54卷 66-75页

作者：董军张思雨房迪苏泽辉舒锐雷小婷胡鲲水产科学国家级实验教学示范中心(上海海洋大学) 上海201306 国家水生动物病原库(上海海洋大学) 上海201306 农业部淡水水产种质资源重点实验室(上海海洋大学) 上海201306 广东省星蛙农业科技有限公司广东肇庆526000

为研究恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星在牛蛙(Lithobates catesbeiana)体内药代动力学及分布,明确恩诺沙星在牛蛙体内的最大残留限量及休药期。本实验进行牛蛙单次口灌10%恩诺沙星粉混悬液(20 mg/kg·bw),在0.5、1、2、4、8、12、24... 详细信息

为研究恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星在牛蛙(Lithobates catesbeiana)体内药代动力学及分布,明确恩诺沙星在牛蛙体内的最大残留限量及休药期。本实验进行牛蛙单次口灌10%恩诺沙星粉混悬液(20 mg/kg·bw),在0.5、1、2、4、8、12、24、48、96、192、336、480 h分组织取样检测实验。研究显示:恩诺沙星和环丙沙星在牛蛙血液中的达峰时间(T_(max))相同为1 h,峰浓度(C_(max))分别为26.592μg/mL、2.256μg/mL;恩诺沙星在牛蛙肌肉、肝脏、肾脏、脑中的T_(max)均为8 h,C_(max)分别为10.21、13.84、17.52、3.95 mg/kg;环丙沙星在牛蛙肌肉、肝脏、肾脏的T_(max)分别为12、8、12 h,C_(max)分别为1.362、20.46、4.07 mg/kg,在脑中未检测出环丙沙星。结果表明:恩诺沙星在牛蛙体内吸收迅速,21.90%~40.35%恩诺沙星转化为环丙沙星,与鱼类和甲壳类生物相比,环丙沙星在牛蛙体内更易消除;恩诺沙星在牛蛙体内的最大残留限量MRL为108.22μg/kg;单剂量10%恩诺沙星粉(20 mg/kg bw)适用于治疗由于嗜水气单胞菌(MIC:0.1μg/mL)患病牛蛙;牛蛙在室温为25℃左右的饲养环境下,建议休药期不低于514.24 h(22 d)。

关键词：恩诺沙星牛蛙(Lithobates catesbeiana) 残留休药期

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