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动物学杂志 2019年第1期54卷 57-65页

作者：王丰张猛沈玉帮徐晓雁王荣泉李家乐上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室上海201306 上海海洋大学上海水产养殖工程技术研究中心上海201306 上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306 苏州市申航生态科技发展股份有限公司农业部大宗淡水鱼类繁育与健康养殖技术重点实验室苏州215221

青鱼(Mylopharyngodon piceus)是中国最为重要的淡水养殖鱼类。开发青鱼的微卫星标记能为青鱼的遗传多样性分析提供更多工具。本研究使用磁珠富集法,利用生物素探针(CA)10和(GACA)6,富集得到青鱼基因组微卫星片段,进一步通过设计微卫星... 详细信息

青鱼(Mylopharyngodon piceus)是中国最为重要的淡水养殖鱼类。开发青鱼的微卫星标记能为青鱼的遗传多样性分析提供更多工具。本研究使用磁珠富集法,利用生物素探针(CA)10和(GACA)6,富集得到青鱼基因组微卫星片段,进一步通过设计微卫星引物检验其在青鱼原种群体中的有效性和多态性水平。结果显示,所构建文库中849个克隆含有微卫星序列,通过利用PCR技术在吴江原种青鱼36个个体中进行多态性筛选,获得了25个多态性微卫星位点。其平均等位基因数(Na)和有效等位基因数(Ne)分别为7.08和3.526,平均观测杂合度(Ho)和期望杂合度(He)分别为0.602和0.619,平均多态信息含量(PIC)为0.568。其中,Mp23、Mp27和Mp35这3个位点极显著偏离哈迪-温伯格平衡(P <0.01)。本研究开发的微卫星标记能为青鱼种质资源的评价和保护等研究提供工具。

关键词：青鱼磁珠富集微卫星引物开发多态性

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RNA干扰沉默三角帆蚌HcCA3基因对贝类矿化作用的影响

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基因组学与应用生物学 2018年第2期37卷 741-747页

作者：王芹汪桂玲陈亚王雅昱徐智诚上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室上海201306 上海市水产养殖工程技术研究中心上海201306

为探究三角帆蚌基质蛋白基因HcCA3的功能,本研究根据HcCA3基因的c DNA全长序列,设计并合成特定的干扰链（siRNA）,将干扰链注射到三角帆蚌闭壳肌内,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测HcCA3基因在外套膜不同部位即前端缘膜（amp）、后端缘... 详细信息

为探究三角帆蚌基质蛋白基因HcCA3的功能,本研究根据HcCA3基因的c DNA全长序列,设计并合成特定的干扰链（siRNA）,将干扰链注射到三角帆蚌闭壳肌内,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测HcCA3基因在外套膜不同部位即前端缘膜（amp）、后端缘膜（pmp）和中央膜（mc）的表达变化。在RNA干扰预实验中,筛选了三条目的基因干扰链,其中siRNA-HcCA3-1干扰链干扰效果最好;同时筛选了4条阴性对照链,发现HcCA3基因在注射不同的阴性对照链的各个组织中的表达均呈现不同程度的显著性下降,并没有筛选到合适的阴性对照链。在RNA干扰正式实验中,随着累计注射干扰链si RNA-HcCA3-1,HcCA3基因在前端缘膜和后端缘膜内出现了相似的表达特征,12 d出现了敲降作用（分别为对照组的28%和30%）,HcCA3基因在中央膜中表达从12 d开始显著下降（为对照组的84%）,18 d为对照组的76%。本实验通过累积注射si RNAHcCA3-1,成功的抑制了HcCA3基因在外套膜不同部位的表达,推测该基因参与了贝壳和珍珠的矿化,为进一步研究HcCA3基因的功能提供了基础。

关键词：三角帆蚌 Hc CA3 RNA干扰荧光定量

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三角帆蚌LRR基因的分子特征及表达分析

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基因组学与应用生物学 2018年第1期37卷 254-260页

作者：徐智诚王芹汪桂玲李家乐上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室上海201306 上海市水产养殖工程技术研究中心上海201306

近年来珠蚌养殖业一直饱受病害困扰,现有资料表明富亮氨酸重复序列（leucine-rich repeat,LRR）蛋白在无脊椎动物的蛋白互作、识别过程和免疫反应中都起到至关重要的作用,本实验通过RACE法克隆并表达了三角帆蚌LRR基因,全长为3 492 bp,... 详细信息

近年来珠蚌养殖业一直饱受病害困扰,现有资料表明富亮氨酸重复序列（leucine-rich repeat,LRR）蛋白在无脊椎动物的蛋白互作、识别过程和免疫反应中都起到至关重要的作用,本实验通过RACE法克隆并表达了三角帆蚌LRR基因,全长为3 492 bp,其中开放阅读框2 142 bp,编码713个氨基酸,其中5个氨基酸组成信号肽,而其余688个氨基酸则形成成熟肽,氨基酸序列经相关软件预测存在跨膜结构。运用荧光定量PCR技术分析LRR在正常组织中及受到嗜水气单胞菌侵染后相关组织表达量的变化,分析发现,在非胁迫状态下,LRR基因在斧足中高表达,在其他组织中几乎不表达。嗜水气单胞菌刺激侵染后可以看到斧足和肝胰腺中LRR基因表达显著下调,而其他组织表达量在不同时间点均出现表达峰值,显示能被显著诱导,说明LRR基因表达可能与抵挡病原体入侵有关。

关键词：三角帆蚌富亮氨酸重复序列 cDNA末端快速克隆技术表达分析

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L-色氨酸和褪黑激素对中华绒螯蟹血清血糖水平及肝胰腺抗氧化能力的影响

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水产学报 2018年第1期42卷 91-99页

作者：徐敏杰张佳鑫黄根勇张聪成永旭杨筱珍上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室上海水产养殖工程技术研究中心上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心

为探究L-色氨酸和褪黑激素(MT)对中华绒螯蟹血糖水平及肝胰腺抗氧化能力的影响。实验选取初始体质量为(16.58±2.20)g的雌性中华绒螯蟹,随机分成8组(L-色氨酸和MT处理各4组),实验周期均为30 d。(1)L-色氨酸饲料投喂实验4组:L-色氨... 详细信息

为探究L-色氨酸和褪黑激素(MT)对中华绒螯蟹血糖水平及肝胰腺抗氧化能力的影响。实验选取初始体质量为(16.58±2.20)g的雌性中华绒螯蟹,随机分成8组(L-色氨酸和MT处理各4组),实验周期均为30 d。(1)L-色氨酸饲料投喂实验4组:L-色氨酸所占饲料比重分别为0.36%(基础饲料即对照组)、0.47%、0.73%和1.05%(分别记为1、2、3和4组),30 d后分别测定各组蟹的血糖水平及肝胰腺的T-AOC和SOD活性;(2)MT注射实验4组:每组分别在第1天和15天时注射生理盐水(即对照组,C组)和不同剂量的MT 10–6 mol/只(μM组)、10–9 mol/只(n M组)和10–12 mol/只(p M组)。分别于第1天和15天时,收集血淋巴和肝胰腺,分别测定血糖水平、T-AOC和SOD活性。于第30天时,再次收集血淋巴以测定血糖水平。结果显示:不同含量L-色氨酸对中华绒螯蟹血糖水平无明显影响,其血糖含量约为(4.62±0.20)mmol/L。此外,0.73%L-色氨酸的饲料能显著提高肝胰腺SOD活性(82.86±1.07)U/m L;注射MT仅在第1天时对中华绒螯蟹的血糖水平有促进作用,并呈剂量依赖性的方式升高,其中μM组蟹血糖水平高达(7.56±0.36)mmol/L,其值显著高于C、p M和n M组。此外注射MT在第1天时,对肝胰腺T-AOC和SOD活性也有明显的促进作用。其中,μM组蟹肝胰腺T-AOC和SOD活性均显著高于C、p M和n M组。研究表明,饲喂0.73%L-色氨酸的饲料能够提高中华绒螯蟹的抗氧化能力,但对血糖水平的影响不明显;注射10–6 mol/只MT可以在短时间内(1 d)提高中华绒螯蟹的血糖水平和抗氧化能力。

关键词：中华绒螯蟹 L-色氨酸褪黑激素血糖水平抗氧化能力

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克氏原螯虾染色体及其核型

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水产学报 2018年第10期42卷 1513-1519页

作者：张莎俞树惠邱高峰上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室上海水产养殖工程技术研究中心水产科学国家级实验教学示范中心

染色体是遗传物质的载体,是研究细胞遗传学的基础,为研究克氏原螯虾染色体及其核型,实验以性未成熟雄性个体的精巢为材料,采用低渗和空气干燥常规方法制备细胞分裂中期染色体标本,研究了克氏原螯虾染色体及核型。Giemsa和DAPI染色后在... 详细信息

染色体是遗传物质的载体,是研究细胞遗传学的基础,为研究克氏原螯虾染色体及其核型,实验以性未成熟雄性个体的精巢为材料,采用低渗和空气干燥常规方法制备细胞分裂中期染色体标本,研究了克氏原螯虾染色体及核型。Giemsa和DAPI染色后在显微镜下观察到清晰的精母细胞减数分裂中期二价体和精原细胞有丝分裂中期染色体时相。对减数分裂中期二价体及有丝分裂中期染色体进行了数目上的统计。结果显示,克氏原螯虾二倍与单倍染色体数目分别为2N=188和N=94。由于有丝分裂染色体形状微小,核型分析困难,故选取减数分裂中期二价体,根据长度及着丝点位置对其进行了初步核型分析,核型公式为N=55M+22(SM,ST)+17T,未发现异形性染色体。

关键词：克氏原螯虾染色体核型分析空气干燥法

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蟹类附肢的自切与再生研究进展

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生态学杂志 2018年第5期37卷 1584-1588页

作者：张聪黄根勇徐敏杰庞杨洋成永旭杨筱珍水产科学国家级实验教学示范中心农业部淡水水产种质资源重点实验室上海水产养殖工程技术研究中心上海海洋大学上海201306

蟹类附肢的自切与再生作为一种自我保护机制,是其应对极端条件(如捕食者、竞争者或恶劣环境等压力)的有效行为策略,通常以自切单条附肢最为常见。蟹类附肢自切后,会通过再生和蜕皮,重新长出健全的肢体。生长阶段中等规格蟹(4~6 g)附肢... 详细信息

蟹类附肢的自切与再生作为一种自我保护机制,是其应对极端条件(如捕食者、竞争者或恶劣环境等压力)的有效行为策略,通常以自切单条附肢最为常见。蟹类附肢自切后,会通过再生和蜕皮,重新长出健全的肢体。生长阶段中等规格蟹(4~6 g)附肢自切律较高且与性别差异无关;自切一条附肢的蟹数量较多,附肢自切通常发生在身体的一侧,自切后侧附肢的概率显著高于前侧的附肢;附肢自切与种间、种内差异和生境条件有关;附肢自切影响蟹的生长与存活及摄食习性等。本文阐述了自切与再生的主要动物种类与部位,以蟹类为主要对象,对其附肢自切的规律、自切原因和附肢自切对蟹类生长的影响及再生进行了综述,对今后相关研究提出展望。

关键词：蟹类附肢自切再生

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草鱼野生与选育群体遗传变异微卫星分析

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水产学报 2018年第8期42卷 1273-1284页

作者：王沈同沈玉帮孟新展王荣泉李家乐上海海洋大学上海水产养殖工程技术研究中心上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室苏州市申航生态科技发展股份有限公司农业部大宗淡水鱼类繁育与健康养殖技术重点实验室

为探究经过2个选育世代后选育群体遗传多样性和遗传结构的变化,实验采用多重PCR技术对4个野生草鱼群体(邗江、九江、石首、吴江)和2个选育群体(F1和F2)进行了微卫星序列遗传变异分析。结果显示,6个草鱼群体遗传多样性水平较高,2个选育... 详细信息

为探究经过2个选育世代后选育群体遗传多样性和遗传结构的变化,实验采用多重PCR技术对4个野生草鱼群体(邗江、九江、石首、吴江)和2个选育群体(F1和F2)进行了微卫星序列遗传变异分析。结果显示,6个草鱼群体遗传多样性水平较高,2个选育群体除了平均等位基因数外,其他遗传多样性参数均小于4个野生群体。哈迪—温伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium)检测显示,在120个群体—位点组合中有62个位点显著偏离哈迪—温伯格平衡,62个群体—位点组合中只有11个组合其近交系数值为负值,其余的51个组合的Fis均为正值。6个草鱼群体AMOVA分析结果显示,3.75%的变异来自于群体间,96.25%的变异来自于群体内,整体的遗传分化指数值为0.038。进一步分析各个群体间Fst,只有石首群体与F1、F2群体之间的Fst大于0.05,处于中等分化,其余群体间分化程度较低,且F2群体与4个野生群体之间Fst比F1群体与4个野生群体之间的Fst大。奈氏标准遗传距离分析结果显示,2个选育群体与野生群体之间的遗传距离大于野生群体之间的遗传距离。基于Dn建立的UPGMA系统发育树得出了相同的结果,即2个选育群体与野生群体之间的亲缘关系比4个野生群体之间的亲缘关系要远。研究表明,经过2个世代选育后,相比4个野生群体,2个选育群体遗传多样性虽有部分下降,但仍处于较高的水平,2个选育群体的遗传结构已发生变化,但其遗传分化程度尚不明显。本研究结果为制定出更加完善有效的选育方案提供了重要参考。

关键词：草鱼选育群体野生群体微卫星遗传变异

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中华绒螯蟹蜕壳周期内蜕皮激素和蜕壳相关基因的表达动态分析

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农业生物技术学报 2018年第1期26卷 150-158页

作者：黄姝陈娇陈晓雯陈义培岳武成王军王成辉上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室/水产科学国家级实验教学示范中心/上海水产养殖工程技术研究中心

蜕壳是甲壳动物重要的生物学现象,中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的生长发育和断肢再生都是通过蜕壳完成的。为了解中华绒螯蟹蜕壳生长的调控机制,本研究对不同蜕壳阶段的蜕皮激素(ecdysteroid hormone,EH)含量、蜕皮激素受体基因(ecdy... 详细信息

蜕壳是甲壳动物重要的生物学现象,中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的生长发育和断肢再生都是通过蜕壳完成的。为了解中华绒螯蟹蜕壳生长的调控机制,本研究对不同蜕壳阶段的蜕皮激素(ecdysteroid hormone,EH)含量、蜕皮激素受体基因(ecdysone receptor,EcR)与蜕皮抑制激素基因(moltinhibiting hormone,MIH)的表达量进行了测定,并分析了其与生长性状的关联性。结果表明,EH含量在蜕壳周期内呈规律地波动性变化,当其含量达到约12 U/mL且持续上升时,中华绒螯蟹将启动蜕壳;EH含量与EcR的表达量呈极显著正相关(P<0.01),但与MIH的表达量呈极显著负相关(P<0.01);在蜕壳前期,EH的含量和EcR的表达量均显著高于蜕壳后期和间期(P<0.05),随着蜕壳的进行,EH含量和EcR表达量逐步降低,蜕壳后期显著低于蜕壳前期(P<0.05),到蜕壳间期最低,显著低于其他时期(P<0.05);而MIH在不同蜕壳阶段的表达模式正好与两者相反。通过与生长性状的关联性分析表明,蜕壳前期和间期的EH含量与体重呈显著正相关(P<0.05);不同蜕壳阶段的EcR表达量与体重均呈显著正相关(P<0.05),且蜕壳间期的表达量还与壳长、壳宽呈显著正相关(P<0.05);MIH在脱壳前期和脱壳间期的表达量与体重呈极显著负相关(P<0.01),且蜕壳间期的表达量与壳长、壳宽呈极显著负相关(P<0.01)。本结果为中华绒螯蟹蜕壳生长的分子机制及其蜕壳后增重差异的分子与生理基础提供了理论依据。

关键词：中华绒螯蟹蜕壳阶段蜕皮激素基因表达

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复合营养液对中华绒螯蟹单体养殖试验效果

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淡水渔业 2018年第6期48卷 94-100页

作者：黄坚陈义培岳武成陈晓雯刘庆华彭智文王军王成辉上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室水产科学国家级实验教学示范中心上海水产养殖工程技术研究中心上海201306

为了解水中添加营养液对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)成熟单体养殖的效果,利用自行开发的"个体养殖系统"设施进行了成蟹30 d的单体暂养试验。暂养A组为自来水中添加1‰的葡萄糖和1‰的谷氨酸钠作为营养液,暂养B组为不添加... 详细信息

为了解水中添加营养液对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)成熟单体养殖的效果,利用自行开发的"个体养殖系统"设施进行了成蟹30 d的单体暂养试验。暂养A组为自来水中添加1‰的葡萄糖和1‰的谷氨酸钠作为营养液,暂养B组为不添加营养液的自来水。结果显示:暂养期间的成活率为71. 43%～73. 21%;与暂养前相比,体重、肥满度和水煮前的背甲颜色色度值均有极显著增加(P <0. 01),且暂养A组的肝胰腺甜度也有极显著提高。"个体养殖系统"暂养前、后的肝胰腺氨基酸和脂肪酸含量不存在显著差异,但暂养后的性腺氨基酸含量有显著提高,其中必需氨基酸、鲜味氨基酸和氨基酸总量分别比暂养前提高31. 10%～49. 11%、51. 75%～89. 99%和50. 70%～80. 71%。在暂养方式方面,A组的增重率和甜度均极显著高于B组(P <0. 01); A组性腺的饱和脂肪酸总量(SFA)、单不饱和脂肪酸(MUFA)和多不饱和脂肪酸(PUFA)均显著高于B组(P <0. 05)。研究表明,在"个体养殖系统"水体中添加营养液对中华绒螯蟹的成熟个体体重、甜度,以及性腺的脂肪酸营养品质是有明显提高的。

关键词：中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis) 个体养殖系统肥满度氨基酸脂肪酸

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中华绒螯蟹MSTN基因SNPs多态性及与生长性状的关联分析

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水生生物学报 2018年第2期42卷 293-299页

作者：陈义培吴廉陈晓雯岳武成黄姝王军王成辉上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海水产养殖工程技术研究中心农业部淡水水产种质资源重点实验室上海201306

为研究中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)肌肉生长抑制素基因(myostatin,MSTN)的多态性及其与生长性状的相关性,对中华绒螯蟹3个群体(育种群体、大赛群体、野生群体)共321个个体MSTN基因的多态性进行筛选,发现该基因的第1外显子存在3个多... 详细信息

为研究中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)肌肉生长抑制素基因(myostatin,MSTN)的多态性及其与生长性状的相关性,对中华绒螯蟹3个群体(育种群体、大赛群体、野生群体)共321个个体MSTN基因的多态性进行筛选,发现该基因的第1外显子存在3个多态性SNP位点(S1:C714T;S2:G729A;S3:G753T),均为处于HardyWeinberg平衡(P>0.05)的中、高度多态性位点。利用一般线性模型分析3个位点及其基因型组合与生长性状的相关性,发现S1位点对中华绒螯蟹的体重和壳长等生长性状有显著影响(P≤0.05),而其余2个位点与生长性状无显著关联性。结果表明S1位点的TT基因型对中华绒螯蟹的生长最为有利,可作为分子标记辅助育种的候选标记。

关键词：中华绒螯蟹 MSTN SNP 生长性状关联分析

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