检索结果-内蒙古大学图书馆

谷浓度或24小时药时曲线下面积/最低抑菌浓度引导下万古霉素在肥胖患者中的个体化给药

中国感染与化疗杂志 2025年第1期25卷 7-14页

作者：张慧芳范亚新周芳庆崔泽林朱冠华陈梦婷张菁王瑞兰上海交通大学医学院附属第一人民医院急诊危重病科上海201620 上海交通大学医学院附属第一人民医院临床检验科上海201620 上海交通大学医学院附属第一人民医院临床药剂科上海201620 复旦大学附属华山医院抗生素研究所

目的比较谷浓度和24小时药时曲线下面积/最低抑菌浓度(AUC_(24h)/MIC)引导下万古霉素在肥胖患者中的安全性和有效性,为肥胖患者的万古霉素个体化用药提供数据支持。方法回顾性收集2012—2024年上海市2所三甲医院因革兰阳性球菌引起的... 详细信息

目的比较谷浓度和24小时药时曲线下面积/最低抑菌浓度(AUC_(24h)/MIC)引导下万古霉素在肥胖患者中的安全性和有效性,为肥胖患者的万古霉素个体化用药提供数据支持。方法回顾性收集2012—2024年上海市2所三甲医院因革兰阳性球菌引起的严重感染并使用万古霉素静脉治疗的成年肥胖[体重指数(BMI)≥30 kg/m~2]患者,根据患者入组时治疗药物浓度监测(TDM)的方法分为谷浓度和AUC_(24h)/MIC监测组,比较万古霉素两种TDM监测靶标下肥胖患者的肾毒性及疗效。结果共纳入22例肥胖患者,其中谷浓度监测组12例,AUC_(24h)/MIC监测组10例。两组患者的性别、年龄、BMI、用药前肌酐清除率、基础疾病、感染类型、病原菌类型及合并用药差异均无统计学意义。AUC_(24h)/MIC监测组患者入住ICU的比例更高,但两组患者的ICU住院时间、万古霉素疗程、细菌清除率和综合有效率没有显著差异。万古霉素谷浓度监测组的平均日剂量显著低于AUC_(24h)/MIC监测组[(1.63±0.59) g对(2.29±0.72) g,P=0.026],两组患者的平均疗程差异无统计学意义[(15.33±10.28) d对(14.90±6.92) d,P=0.911]。与谷浓度监测组相比,AUC_(24h)/MIC监测组万古霉素初始峰浓度[(30.99±16.22)mg/L对(19.41±5.42)mg/L,P=0.025]和总体峰浓度[(33.67±16.53)mg/L对(22.08±3.96)mg/L,P=0.045]都更低,但两组患者初始谷浓度[(11.03±8.66)mg/L对(6.33±4.45)mg/L,P=0.139]、总体谷浓度[(13.75±9.74)mg/L对(9.74±4.24)mg/L,P=0.218]接近。两组患者均未发生万古霉素相关性肾损伤,但谷浓度监测组有41.7%的患者达到了谷浓度≥15 mg/L的肾毒性阈值。结论在当前万古霉素常规治疗剂量下,肥胖感染患者仍具有较好的临床疗效。AUC_(24h)/MIC引导下的万古霉素个体化用药可在较低浓度或暴露量下实现目标参考值,在降低万古霉素相关肾毒性方面具有一定的前景。

关键词：万古霉素谷浓度 24小时药时曲线下面积/最低抑菌浓度治疗药物监测肥胖

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全国传染病临床检验现状与发展需求调研报告

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中华检验医学杂志 2025年第1期48卷 38-48页

作者：王雅杰陈瑜关明王传新首都医科大学附属北京地坛医院检验科北京100015 浙江大学医学院附属第一医院检验科杭州310003 复旦大学附属华山医院检验科上海200040 山东大学第二医院检验医学中心济南250033

目的调研全国各级医疗机构传染病临床检验现状与发展需求。方法横断面调查。2023年1月5日至6月1日,通过网络调查问卷对全国各级医疗机构进行调研。共收集问卷3462份,进行质量控制、无放回随机抽样后,纳入2778份问卷。调研内容涉及各级... 详细信息

目的调研全国各级医疗机构传染病临床检验现状与发展需求。方法横断面调查。2023年1月5日至6月1日,通过网络调查问卷对全国各级医疗机构进行调研。共收集问卷3462份,进行质量控制、无放回随机抽样后,纳入2778份问卷。调研内容涉及各级医疗机构基本信息、传染病实验室应急响应能力现状、法定传染病开展现状、传染病检测项目开展需求及未开展原因等方面。进一步分析参与调研各级医疗机构比例、实验室认可情况、传染病检测执行科室以及主要传染病的检测开展率。结果2778份问卷中,三级、二级、一级医院分别占39.13%(1087/2778)、53.20%(1478/2778)和4.46%(124/2778);传染病专科医疗机构比例为8.89%(247/2778);通过实验室认可的医疗机构占12.92%(359/2778);传染病检测执行科室检验科占98.56%(2738/2778)。在参与调研的传染病病原体中,乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、新型冠状病毒、人类免疫缺陷病毒、梅毒螺旋体相关检测开展率分别为97.62%(2712/2778)、94.85%(2635/2778)、93.27%(2591/2778)、96.33%(2676/2778)、96.22%(2673/2778)。在临床传染病病原体检测开展需求中,布鲁菌属细菌、结核分枝杆菌的检测需求分别为25.50%(90/353)、8.22%(29/353)。未满足临床传染病检测需求的因素主要为实验室不具备开展空间、人力不足和无收费标准,分别为44.10%(1225/2778)、42.55%(1182/2778)、36.00%(1000/2778)。结论我国传染性疾病临床检测主要在三级和二级医疗机构检验科开展,能较好满足常见传染病实验室检测需求,但也存在传染病检测项目开展有限、空间人力物力资源不足等情况,可针对各地区实际情况进行检验学科建设及方法改进。

关键词：传染病实验室,医院医疗机构问卷调查

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体位提高颅内压联合药物治疗慢性硬膜下血肿的多中心前瞻性临床研究

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中华外科杂志 2025年第3期63卷 212-218页

作者：陈嘉宇王哲臧迪郑锐哲叶相如齐曾鑫许泽宇李志强孙成丰沈良军盛罗平徐福林叶汝勇周开宇汤伟军胡跃清施大鹏王昱泉乌锡真王莹张启麟刘飞利余果陆逸平孙一睿张宁黄锋顾夏龙张浛丁建毕永延杜昊蓝张静吉海龙丁玎张嵬吴雪海复旦大学附属华山医院神经外科国家神经疾病医学中心上海200040 上海市奉贤区中心医院神经外科上海201400 宁波市医疗中心李惠利医院神经外科宁波315000 嵊州市人民医院神经外科嵊州312400 复旦大学附属中山医院青浦分院神经外科上海201700 上海市闵行区中心医院神经外科上海201112 永康市第一人民医院神经外科永康321300 台州市立医院神经外科台州318000 复旦大学附属华山医院放射科上海200040 复旦大学人类表型组研究院上海200438 复旦大学数学科学学院上海200433 宁海县第一医院神经外科宁波315600 复旦大学附属华山医院神经内科上海200040 复旦大学公共卫生学院生物统计学教研室上海200032

目的比较体位联合药物与单纯药物治疗慢性硬膜下血肿的临床效果。方法第一阶段研究为回顾性病例系列研究。回顾性收集2016年12月至2020年10月于复旦大学附属华山医院神经外科接受体位联合药物治疗的30例慢性硬膜下血肿患者的临床资料。... 详细信息

目的比较体位联合药物与单纯药物治疗慢性硬膜下血肿的临床效果。方法第一阶段研究为回顾性病例系列研究。回顾性收集2016年12月至2020年10月于复旦大学附属华山医院神经外科接受体位联合药物治疗的30例慢性硬膜下血肿患者的临床资料。男性27例,女性3例,年龄[M(IQR)]66(16)岁(范围:28~84岁)。其中19例为单侧血肿,11例为双侧血肿。患者均接受体位治疗,方法为平卧位时使用脚垫抬高下肢20~30 cm,并通过定制的腹带进行腹部加压,每日维持体位时间争取达到目标16~18 h。对于单侧硬膜下血肿患者,头部偏向患侧,避免偏向对侧;对双侧硬膜下血肿患者无头位偏侧要求。患者同时联合口服地塞米松和阿托伐他汀治疗。通过Clopper-Pearson方法分析患者的血肿改善率,初步观察体位联合药物治疗的临床效果。于2020年8月至2021年11月开展二期多中心、前瞻性、随机对照研究,采用分层区组随机化法,将我国9个临床试验中心的慢性硬膜下血肿的患者按1∶1比例随机分配至药物治疗组(对照组)和体位联合药物治疗组(试验组),共治疗3个月,并随访至治疗后6个月。治疗有效定义为血肿完全吸收或血肿体积减小>10 ml,同时Markwalder评分系统评分较治疗前改善≥1分。观察并计算3个月的治疗有效率、转手术率和6个月血肿复发率。组间比较采用配对样本t检验、Mann-Whitney U检验、χ^(2)检验、校正χ^(2)检验或Fisher确切概率法。采用Logistic回归比较两组的治疗有效和转手术治疗率。结果回顾性研究中,30例患者在接受治疗后13~353 d完成复查。末次复查时,28例(93.3%)患者血肿完全吸收或明显改善(血肿体积明显减少伴随明显症状的缓解),Clopper-Pearson方法获得血肿改善率的双侧95%CI为77.9%~99.2%。多中心研究共纳入106例患者,其中体位联合药物治疗组55例,男性39例,女性16例,年龄74(17)岁(范围:26~92岁)。药物治疗组51例,男性37例,女性14例,年龄69(12)岁(范围:48~84岁)。联合治疗组患者在日记卡上记录的每日体位治疗时间为(15.7±2.3)h(范围:7.6~19.3 h)。治疗第3个月时,联合治疗组和药物治疗组的治疗有效率分别为83.6%(46/55)和56.9%(29/51),Logistic回归结果显示,联合治疗组治疗有效率优于药物治疗组(OR=3.88,95%CI:1.57~9.58,P=0.003)。联合治疗组和药物治疗组的转手术率分别为5.5%(3/55)和21.6%(11/51),Logistic回归结果显示,药物治疗组更易转手术治疗(OR=0.21,95%CI:0.05~0.80,P=0.023)。随访6个月时,体位联合药物治疗组无复发,药物治疗组的复发率为6.3%(3/48),组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论体位联合药物治疗慢性硬膜下血肿的效果优于单纯药物治疗。

关键词：血肿,硬膜下,慢性颅内压体位治疗地塞米松阿托伐他汀

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子宫颈癌PAX1联合JAM3双基因甲基化检测流程、报告及临床应用专家共识

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中华检验医学杂志 2025年第2期48卷 192-200页

作者：中国中西医结合学会检验医学专业委员会中华医学会检验医学分会中国医师协会检验医师分会中国妇幼保健协会中国医疗保健国际交流促进会基层检验技术标准化分会谢小兵李雷陈飞关明刘禹利邱丽华汪俊军不详湖南中医药大学第一附属医院医学检验中心中国医学科学院北京协和医院妇产科复旦大学华山医院检验科广东药科大学附属第一医院精准医学中心上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科东部战区总医院检验科

基于子宫颈癌筛查现状以及筛查方法、策略的发展,中国中西医结合学会检验医学专业委员会联合4个学(协)会,组织检验、病理、妇产多学科专家共同制定了甲基化检测与临床应用的共识。共识全面梳理了PAX1联合JAM3双基因甲基化(PAX1m/JAM3m)... 详细信息

基于子宫颈癌筛查现状以及筛查方法、策略的发展,中国中西医结合学会检验医学专业委员会联合4个学(协)会,组织检验、病理、妇产多学科专家共同制定了甲基化检测与临床应用的共识。共识全面梳理了PAX1联合JAM3双基因甲基化(PAX1m/JAM3m)检测的实验室操作流程及质控标准、样本采集与处理,提出了PAX1m/JAM3m检测意义及功能、实验室检测流程、质量控制、检测报告及临床应用建议。共识旨在推动子宫颈癌甲基化在实验室检测与临床的规范化应用,为检测结果的准确性和可靠性,并为明确临床应用场景,提供具备实践性与前瞻性的指导。

关键词：子宫颈癌 DNA甲基化临床实验室技术临床应用共识

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Duchenne型肌营养不良(不能独走期)家庭照护专家共识

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临床儿科杂志 2025年第1期43卷 1-7页

作者：无高赛张淑刘华吴士文季星中国研究型医院学会神经科学专业委员会解放军总医院第一医学中心神经内科上海交通大学医学院附属新华医院发育行为儿童保健科

Duchenne型肌营养不良(DMD)是一种常见的X连锁隐性遗传致死性神经肌肉病。近年来基因相关治疗药物相继进入临床,全病程照护管理对提高患者生活质量和延长患者生命至关重要。为此,本共识通过系统查阅文献、专家论证、结合临床,最终形成对... 详细信息

Duchenne型肌营养不良(DMD)是一种常见的X连锁隐性遗传致死性神经肌肉病。近年来基因相关治疗药物相继进入临床,全病程照护管理对提高患者生活质量和延长患者生命至关重要。为此,本共识通过系统查阅文献、专家论证、结合临床,最终形成对DMD不能独走期患者呼吸、心脏、康复、骨骼、营养、消化、皮肤、认知及心理等8个方面家庭照护的专家意见和建议,为DMD不能独走期患者的家庭照护提供指导与参考。

关键词： Duchenne型肌营养不良家庭照护专家共识

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益气祛白颗粒联合毫火针治疗稳定期非节段性白癜风的临床疗效及机制研究

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上海中医药杂志 2025年第3期59卷 61-63,93页

作者：谭希陈连军伍洲炜聂舒陈彬李霞宋瑜上海交通大学医学院附属第一人民医院皮肤科上海200080 复旦大学附属华山医院皮肤科上海200040 上海交通大学医学院附属瑞金医院皮肤科上海200025 上海中医药大学附属龙华医院皮肤科上海200032

目的观察口服益气祛白颗粒联合外用毫火针治疗稳定期非节段性白癜风的临床疗效。方法将62例稳定期非节段性白癜风患者随机分为试验组32例、对照组30例。对照组口服益气祛白颗粒,试验组在对照组基础上联合局部毫火针治疗,两组疗程均为12... 详细信息

目的观察口服益气祛白颗粒联合外用毫火针治疗稳定期非节段性白癜风的临床疗效。方法将62例稳定期非节段性白癜风患者随机分为试验组32例、对照组30例。对照组口服益气祛白颗粒,试验组在对照组基础上联合局部毫火针治疗,两组疗程均为12周。观察临床疗效,比较治疗前后皮肤病生活质量指数(DLQI)评分、抑郁症筛查量表(PHQ-9)评分以及外周血C-X-C基序趋化因子10(CXCL10)表达水平的变化情况。结果①试验组、对照组临床总显效率分别为43.8%、26.7%,白斑复色率分别为(49.8±27.7)%、(34.8±24.4)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。②治疗前后组内比较,两组DLQI评分均有所降低(P<0.05),试验组PHQ-9评分下降(P<0.05),对照组PHQ-9评分下降,但无统计学意义(P>0.05)。③治疗前后组内比较,两组外周血CXCL10表达水平均下降(P<0.05);组间治疗后比较,试验组CXCL10表达水平低于对照组(P<0.05)。结论益气祛白颗粒联合毫火针治疗稳定期非节段性白癜风,能够有效促进白斑复色,提升患者生活质量,并减轻其抑郁症状。

关键词：白癜风中药针灸毫火针抑郁生活质量临床试验

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肝硬化患者粪菌移植治疗指南

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临床肝胆病杂志 2025年第3期41卷 424-431页

作者：中国研究型医院学会肝病(中西医结合)专业委员会病毒性肝炎学组浙江省慢性肝病重症化精准诊治与规模转化重点实验室陈永平王晓东丁惠国马雄王辉卢洁邬小萍许烂漫张文宏杨长青杨永平李用国张发明杨永峰陈达之张明香张继明南月敏徐小元唐小平党双锁高峰潘红英不详温州医科大学附属第一医院肝病中心浙江省慢性肝病重症化精准诊治与规模转化重点实验室北京佑安医院消化科上海仁济医院消化科上海瑞金医院感染科上海市第一人民医院消化科南昌大学第一附属医院感染科宁波大学附属人民医院感染科上海华山医院感染科上海同济医院消化科中国人民解放军第五医学中心肝病科重庆医科大学附属第一医院感染科南京医科大学第二附属医院微生态医学科南京市第二医院肝病科杭州医学院附属第二医院消化科沈阳市第九人民医院感染科河北医科大学第三医院感染科北京大学第一医院感染科广州医科大学西安交通大学第二附属医院感染科临沂市人民医院感染科浙江省人民医院感染科

粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)是指通过将健康供体的粪便菌群移植到患者肠道内,直接重建具有正常功能的肠道微生态系统,达到治疗疾病目的的一种方法~([1])。该疗法最早被用于炎症性肠病和帕金森病的治疗,并显示出良... 详细信息

粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)是指通过将健康供体的粪便菌群移植到患者肠道内,直接重建具有正常功能的肠道微生态系统,达到治疗疾病目的的一种方法~([1])。该疗法最早被用于炎症性肠病和帕金森病的治疗,并显示出良好的效果~([2-5])。

关键词：肝硬化粪菌移植诊疗准则

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恶性肿瘤患者术中自体血回输的临床实践指南

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中国输血杂志 2025年第2期38卷 149-167页

作者：朱长太李玲李志强宛新建陈世耀潘健张奕任翔韩坤邹锋文爱清戎瑞明夏荣钱宝华马昕上海交通大学医学院附属上海第六人民医院输血科上海200233 上海交通大学医学院附属上海第六人民医院骨科上海200233 上海交通大学医学院附属上海第六人民医院消化内科上海200233 上海交通大学医学院附属上海第六人民医院肿瘤科上海200233 上海交通大学医学院附属上海第六人民医院麻醉科上海200233 海军军医大学第一附属医院输血医学科上海200433 复旦大学附属华山医院输血医学科上海200040 复旦大学附属中山医院输血医学科上海200032 西南交通大学附属医院/成都市第三人民医院输血科四川成都610031 中国科学技术第一附属医院《临床输血与检验》编辑部安徽合肥230001 复旦大学循证医学中心上海200032 陆军军医大学大坪医院输血医学科创伤与化学中毒全国重点实验室重庆400042 上海市医学会输血专科分会上海200040 中国输血协会临床输血管理专委会北京100088

术中自体血回输(IOCS)作为1种重要的血液保护措施在外科手术中得到了广泛地应用。但目前国内外尚缺乏恶性肿瘤患者实施IOCS的临床实践指南。本研究旨在根据对现有证据的查阅和评估,为临床在恶性肿瘤患者手术中应用IOCS提供建议。研究数... 详细信息

术中自体血回输(IOCS)作为1种重要的血液保护措施在外科手术中得到了广泛地应用。但目前国内外尚缺乏恶性肿瘤患者实施IOCS的临床实践指南。本研究旨在根据对现有证据的查阅和评估,为临床在恶性肿瘤患者手术中应用IOCS提供建议。研究数据来源于PubMed、Embase、Cochrane图书馆、万方等数据库。指南制定团队根据证据质量、利弊权衡、患者意愿和卫生经济学评估形成建议。本研究构建了7个临床问题,指南主要结论如下:1)与无围手术期异体输血(NPABT)相比,围手术期异体输血(PABT)会引起恶性肿瘤患者更为不利的预后(推荐);2)同输入异体血或未输血比较,实施IOCS不会引起恶性肿瘤患者更为不利的预后(推荐);3)肿瘤患者实施IOCS是经济可行的(推荐);4)恶性肿瘤患者实施IOCS应该使用去白细胞过滤器(LDF)(强推荐);5)恶性肿瘤患者实施IOCS可以使用射线照射处理待回输的自体血(推荐);6)实施IOCS前应详细评估恶性肿瘤患者病情(符合适应证并排除禁忌证),方可实施IOCS(强推荐);7)恶性肿瘤患者实施IOCS应取得患者的知情同意,充分地对患者病情和失血可能性进行预评估并遵守经内部审核的标准化管理流程,满足相应的条件,并应取得相应的资质(推荐)。总之,目前的证据表明:对某些需要输异体血的恶性肿瘤患者经过医师充分评估后可实施IOCS,实施过程中应使用LDF或者射线照射。

关键词：术中自体血回输(IOCS) 自体输血恶性肿瘤手术指南

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肝细胞癌靶向联合免疫转化序贯肝切除术后辅助治疗预后分析的多中心研究

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中华消化外科杂志 2025年第1期24卷 103-112页

作者：林孔英林佳赖子森赖永平王葵陈进宏张志波李敬东邰升王石枫郑四鸣张建溪郑璐王恺张嘉成吕嘉辉黄理铭曾永毅福建医科大学孟超肝胆医院肝胆外科福州350001 海军军医大学第三附属医院肝外三科上海200433 复旦大学附属华山医院普通外科上海200031 福建医科大学附属第一医院肝胆胰外科福州350001 川北医学院附属医院肝胆胰外科南充637503 哈尔滨医科大学附属第二医院肝胆胰外科哈尔滨150001 赣州市第五人民医院肝胆胰外科赣州341007 宁波大学附属第一医院肝胆胰外科宁波315016 北京中医药大学东直门医院厦门医院肝胆胰外科厦门361015 陆军军医大学第二附属医院肝胆外科重庆400037 南昌大学第二附属医院肝胆胰外科南昌330000

目的分析肝细胞癌行靶向联合免疫转化序贯肝切除术后辅助治疗的预后。方法采用回顾性队列研究方法。收集2019年11月至2023年5月福建医科大学孟超肝胆医院等全国11家医学中心收治的103例初始不可切除肝细胞癌患者的临床病理资料;男83例,... 详细信息

目的分析肝细胞癌行靶向联合免疫转化序贯肝切除术后辅助治疗的预后。方法采用回顾性队列研究方法。收集2019年11月至2023年5月福建医科大学孟超肝胆医院等全国11家医学中心收治的103例初始不可切除肝细胞癌患者的临床病理资料;男83例,女20例;年龄为(54±12)岁。103例患者均行酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)联合免疫检查点抑制剂(ICIs)成功转化治疗后序贯肝切除术,其中72例术后行辅助治疗设为辅助治疗组,31例术后行随访监测设为随访监测组。观察指标:(1)随访及预后情况。(2)患者无复发生存时间影响因素分析。(3)分层分析。计数资料组间比较采用χ^(2)检验或Fisher确切概率法。采用R软件绘制生存曲线,Log-rank检验进行生存分析。单因素和多因素分析采用Cox比例风险模型。结果(1)随访及预后情况。103例患者术后均获得随访,随访时间为21.0(1.9~47.2)个月,中位无复发生存时间为28.7个月,1、2、3年无复发生存率分别为68.6%、55.6%、41.2%;中位总生存时间未达到,1、2、3年总生存率分别为90.9%、82.1%、69.6%。辅助治疗组患者中位无复发生存时间为33.1个月,1、2年无复发生存率分别为77.2%、61.5%;随访监测组患者中位无复发生存时间为11.1个月,1、2年无复发生存率分别为46.6%、40.8%;两组患者无复发生存情况比较,差异有统计学意义(χ^(2)=5.492,P<0.05)。(2)患者无复发生存时间影响因素分析。多因素分析结果显示:病理学完全缓解和术后辅助治疗均是肝细胞癌患者行靶向联合免疫转化序贯肝切除术后无复发生存时间的独立影响因素(风险比=0.297、0.492,95%可信区间为0.137~0.647、0.268~0.903,P<0.05)。(3)分层分析。71例非病理学缓解患者中,48例辅助治疗组患者中位无复发生存时间为24.0个月,1、2年无复发生存率分别为67.4%、48.8%;23例随访监测组患者中位无复发生存时间为7.4个月,1、2年无复发生存率分别为35.0%、26.3%;两组患者无复发生存情况比较,差异有统计学意义(χ^(2)=5.241,P<0.05)。结论对于行TKIs联合ICIs转化序贯肝切除术的肝细胞癌患者,与术后行随访监测比较,术后辅助治疗可延长患者无复发生存时间,其中非病理学完全缓解患者可以从辅助治疗中获益。

关键词：肝肿瘤酪氨酸激酶抑制剂免疫检查点抑制剂转化治疗肝切除术辅助治疗预后

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PTD-Calbindin D28K融合蛋白的表达、纯化及其穿膜功能的鉴定

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复旦学报（医学版） 2004年第3期31卷 231-234,F002页

作者：樊永峰吕传真乔健任惠民复旦大学上海医学院神经病学系-华山医院神经科上海200040

目的　构建融合蛋白PTD CalbindinD2 8K(CaBP2 8)的表达质粒 ,并进行诱导表达、纯化 ,在体外初步鉴定其跨膜转运功能。方法　提取大鼠脑组织总RNA ,反转录后用聚合酶链反应 (PCR)法扩增编码CaBP2 8的全长cD NA序列 ,重组入 pET 32a及含... 详细信息

目的　构建融合蛋白PTD CalbindinD2 8K(CaBP2 8)的表达质粒 ,并进行诱导表达、纯化 ,在体外初步鉴定其跨膜转运功能。方法　提取大鼠脑组织总RNA ,反转录后用聚合酶链反应 (PCR)法扩增编码CaBP2 8的全长cD NA序列 ,重组入 pET 32a及含有PTD的pTransVector表达载体中 ,测序鉴定后转化大肠埃希菌BL2 1(DE3) ,构建重组体的表达菌株。IPTG诱导表达后 ,以NTA Ni亲和层析柱进行分离纯化 ,SDS PAGE以及Westernblot鉴定。纯化的CaBP2 8及PTD CaBP2 8用FITC标记 ,分别以一定的浓度孵育体外培养的cos7细胞 ,最后荧光显微镜下观察两者在细胞中的分布情况 ,并用流式细胞仪 (FCM)做定量分析。结果　成功地构建了含有及不含有PTD的CaBP2 8表达载体 ,插入片断 783bp ,表达产物相对分子质量分别约 30 0 0 0、5 0 0 0 0 ,经Weternblot鉴定 ,与抗CaBPD2 8K抗体均有特异性反应。孵育培养的cos7细胞后 ,CaBP2 8 FITC仅少量吸附于细胞膜表面 ,而PTD CaBP2 8 FITC则分布于胞质内 ;FCM定量分析发现 ,细胞荧光强度随着目的蛋白的孵育浓度或孵育时间增加而增加 ,并且孵育时间为 1h时荧光达到最强。结论　重组PTD CaBP2

关键词： PTD-Calbindin D28K融合蛋白表达纯化穿膜功能鉴定蛋白质治疗神经系统疾病

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