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Th17细胞与莱姆关节炎发病关系的研究进展

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现代免疫学 2012年第1期32卷 68-71页

作者：代旭磊董坚句红萍柳爱华陈明清宝福凯昆明医学院微生物学与免疫学教研室昆明医学院第一附属医院昆明市经开区人民医院昆明医学院生物化学与分子生物学教研室昆明650031

Th17细胞是近年来新发现的一种细胞亚群,它分泌IL-17及其他细胞因子,为研究和阐述莱姆关节炎致病机制打开了新的思路。研究发现,Th17细胞免疫应答在莱姆关节炎发病机制中发挥重要作用,本文就此方面作了总结。

关键词： Th17细胞白细胞介素17 莱姆关节炎

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刚地弓形虫China 1基因型成囊株在小鼠体内的动态分布

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第3期30卷 179-183页

作者：王林霍星星陈兆武陈鹤余莉宋晓蓉 Faustina Halm-Lai 罗庆礼沈继龙安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽中医学院第一附属医院检验中心合肥230031 Cape Coast大学微生物学教研室加纳共和国

目的观察流行我国的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)主要基因型China 1成囊株在感染小鼠体内的动态分布和包囊形成。方法采自武汉的猫源性刚地弓形虫株(TgCtwh1,基因型为China 1,即ToxoDB#9)包囊50个(约含1×104个缓殖子)经口感染SPF... 详细信息

目的观察流行我国的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)主要基因型China 1成囊株在感染小鼠体内的动态分布和包囊形成。方法采自武汉的猫源性刚地弓形虫株(TgCtwh1,基因型为China 1,即ToxoDB#9)包囊50个(约含1×104个缓殖子)经口感染SPF级CD1雌性小鼠50只,于感染后第2、4、7、10、14、21、35、50和72天,分别大体观察小鼠健康状况并测定体重;颈椎脱臼法处死小鼠,脑组织压片观察弓形虫包囊形成时间,计算成囊率,测量包囊直径;荧光定量PCR和组织接种方法检测弓形虫在血液、心、肝、脑和淋巴结组织中的动态分布。结果实验小鼠感染后第7天体重减轻(3.650±0.252)g;第10天[(1.730±0.017)g]与第14天体重差值[(-0.390±0.554)g]比较,有统计学意义(P<0.05)。感染后第21天,在脑组织中查获包囊,成囊率为80%,直径为20～40μm;至感染后第35天,小鼠成囊率增为100%,包囊直径为50～60μm。感染后第2天,TgCtwh1虫体即出现在血液、心、肝和淋巴结组织中,拷贝数分别为3.510±0.152、4.100±0.198、4.220±0.209和4.960±0.052,感染后第4天见于脑组织(3.800±0.154);血液中的虫体在第7天达峰值(5.240±0.115),随后逐渐下降,至第35天消失;心和脑组织中的虫体分别于第14天和第10天达峰值后(5.640±0.214和5.790±0.060)维持相对稳定的水平;肝和淋巴组织中的虫体分别于第7天和第10天达峰值(5.310±0.038和6.200±0.152),此后虫体逐渐减少,至第50天转阴。结论流行中国的弓形虫China 1基因型成囊株在感染小鼠体内虫血症可持续至少21 d,感染后第21天首次在小鼠脑组织内检测到包囊。

关键词：刚地弓形虫基因型动态分布荧光定量PCR

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肺炎支原体P1蛋白片段免疫学活性及黏附功能的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第8期32卷 706-710页

作者：朱翠明汪世平吴移谋高顺利余敏君陈曦中南大学湘雅医学院病原生物学系长沙410078 南华大学医学院微生物学与免疫学教研室南华大学第一附属医院儿科湖南省疾病预防控制中心

目的了解肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniace，Mp）P1蛋白第1125～1395氨基酸片段（P1C蛋白）的免疫学活性及其细胞黏附作用。方法构建用于表达重组P1C片段（rP1C）的原核表达载体pGEX6p-2／p1c，采用SDS-PAGE和Westernblot鉴定rP1C。... 详细信息

目的了解肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniace，Mp）P1蛋白第1125～1395氨基酸片段（P1C蛋白）的免疫学活性及其细胞黏附作用。方法构建用于表达重组P1C片段（rP1C）的原核表达载体pGEX6p-2／p1c，采用SDS-PAGE和Westernblot鉴定rP1C。采用基于GST的亲和层析法提纯rPIC，提纯的rPC免疫BALB／c小鼠，ELISA检测小鼠抗rP1C血清的效价。采用Westernblot检测rPIC对Mp感染患者血清的免疫反应性。采用间接免疫荧光法检测rP1C黏附HeLa细胞及其免疫血清黏附抑制作用。结果所构建的原核表达系统能有效表达相对分子质量约为66×10^3的可溶性rP1C。rP1C免疫小鼠后，其抗血清ELISA效价高达1：64000。rPIC能被Mp感染者血清及小鼠抗rPIC血清识别并与之结合。rP1C能黏附HeLa细胞，其抗血清可阻断Mp对HeLa细胞的黏附，该黏附阻断作用随抗血清浓度增高而增强。结论rP1C具有良好的免疫原性和免疫反应性及黏附细胞功能，可作为Mp疫苗及血清学检测的候选抗原。

关键词：肺炎支原体 P1蛋白片段免疫学活性黏附

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腺病毒siRNA沉默TGF-β1对肺间质纤维化大鼠TGF-β1的表达及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的影响

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郑州大学学报（医学版） 2012年第6期47卷 785-790页

作者：刘绍霞张立英赵国强张国俊郑州大学第一附属医院呼吸内科郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001

目的:研究肺间质纤维化大鼠肺组织中TGF-β1基因表达沉默对疾病进展的影响。方法:构建TGF-β1腺病毒siRNA载体。75只大鼠随机分为空白对照组15只,模型对照组、无关siRNA组和siRNA干预组各20只,后3组大鼠气管内滴入博莱霉素建立肺间质纤... 详细信息

目的:研究肺间质纤维化大鼠肺组织中TGF-β1基因表达沉默对疾病进展的影响。方法:构建TGF-β1腺病毒siRNA载体。75只大鼠随机分为空白对照组15只,模型对照组、无关siRNA组和siRNA干预组各20只,后3组大鼠气管内滴入博莱霉素建立肺间质纤维化模型,24h后,空白对照组、模型对照组分别经鼻滴入100μL的生理盐水,无关siRNA组、siRNA干预组分别滴入等体积的重组腺病毒pAdeno-X-siCon和pAdeno-X-siTGF。第7、14、28天,采用免疫组化法检测肺组织TGF-β1蛋白的表达;第14天,采用Real-timePCR和Westernblot分别检测肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1mRNA和蛋白的表达;第7、14、28天,采用ELISA法检测肺泡灌洗液和外周血中TGF-β1的表达水平。结果:第7、14、28天,4组大鼠肺组织中TGF-β1蛋白的表达和肺泡灌洗液中TGF-β1的水平差异均有统计学意义,第14天,4组大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1mRNA的表达差异亦有统计学意义(P均<0.05),且模型对照组、无关siRNA组和siRNA干预组以上指标均高于正常对照组,siRNA干预组以上指标低于模型对照组、无关siRNA组(P<0.05)。结论:沉默TGF-β1对大鼠肺间质纤维化的形成和发展可能有抑制作用。

关键词：肺间质纤维化转化生长因子-β1 siRNA 腺病毒大鼠

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TNF-α基因siRNA真核表达载体的构建及其对A549细胞TNF-α和TGF-β1表达的影响

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郑州大学学报（医学版） 2012年第5期47卷 629-632页

作者：张立英刘绍霞赵国强张国俊郑州大学第一附属医院呼吸内科郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001

目的:构建靶向肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,观察其对人肺腺癌A549细胞中TNF-α和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:依据GenBank中人TNF-α(NM_000594)序列和siRNA靶序列设计原则,设计并合成一... 详细信息

目的:构建靶向肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,观察其对人肺腺癌A549细胞中TNF-α和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:依据GenBank中人TNF-α(NM_000594)序列和siRNA靶序列设计原则,设计并合成一对针对TNF-α的特异性序列(siTNF-α)和一对无关序列(siCon)。退火合成DNA双链,再分别重组入pRNAT-U6.1载体,经过PCR和DNA测序鉴定。将构建好的重组载体pRNAT-U6.1-siTNF-α、pRNAT-U6.1-siCon及空载体pRNAT-U6.1用脂质体介导转染A549细胞株,分别采用RealtimePCR和Westernblot方法检测细胞中TNF-α和TGF-β1mRNA和蛋白的表达水平。结果:PCR和DNA测序鉴定证实载体构建成功;转染pRNAT-U6.1-siTNF-α的A549细胞中TNF-α和TGF-β1mRNA和蛋白表达水平均低于其他3组(FmRNA=478.663,4.081;F蛋白=123.420,6.312,P均<0.05)。结论:成功构建了靶向TNF-α基因的siRNA真核表达载体,该载体能够有效沉默A549细胞中TNF-α的表达,TGF-β1基因表达亦受到抑制。

关键词：肿瘤坏死因子α 转化生长因子-β1 RNA干扰肺腺癌 A549细胞

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中国猕猴CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞抑制抗结核分枝杆菌特异性T淋巴细胞免疫反应

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郑州大学学报（医学版） 2012年第4期47卷 472-475页

作者：秦洁龚光明杜英孙石磊杨璇朱沙轩小燕刘萍萍王娜许予明郑州大学第一附属医院神经内三科郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001

目的:体外观察中国猕猴CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)对T淋巴细胞产生的抗PPD抗原特异性扩增的影响。方法:分离6只3月内人工感染过结核分枝杆菌卡介苗的雄性中国猕猴外周血单个核细胞(PB-MCs),免疫磁珠法分选纯化出Tregs,并用PKH26红标... 详细信息

目的:体外观察中国猕猴CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)对T淋巴细胞产生的抗PPD抗原特异性扩增的影响。方法:分离6只3月内人工感染过结核分枝杆菌卡介苗的雄性中国猕猴外周血单个核细胞(PB-MCs),免疫磁珠法分选纯化出Tregs,并用PKH26红标记。将去除Tregs的剩余PBMCs标记上CFSE,然后单独或与纯化的Tregs混合,分别给予结核杆菌纯化蛋白衍生物(PPD)或CD3/CD28单克隆抗体刺激,体外培养7d,用流式细胞术分析含或不含Tregs的PBMCs中CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞对PPD抗原和CD3/CD28抗体刺激的反应。结果:PPD不仅能引起CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞扩增,而且引起Vγ2Vδ2T淋巴细胞也发生扩增。Tregs不仅能抑制CD3/CD28抗体诱导的CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞的抗原非特异性扩增,而且还可抑制PPD抗原刺激引起的CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞的抗原特异性扩增。结论:中国猕猴Tregs对T淋巴细胞产生的抗结核杆菌特异性免疫反应有负调节作用。

关键词： CD4^+CD25^+调节性T细胞抗结核分枝杆菌中国猕猴

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鲍曼不动杆菌生物膜形成与耐药的相关性初探

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中国病原生物学杂志 2012年第7期7卷 500-502页

作者：游洋顾伟杰王铮李晓霞牛辰天津医科大学微生物学教研室天津300070 复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

目的探索鲍曼不动杆菌生物膜的形成与耐药的相关性。方法采用96孔板培养法模拟体内生物膜形成,结晶紫染色法鉴定各菌株生物膜生长情况。将鲍曼不动杆菌于黑色聚碳酸酯膜上形成生物膜,其上覆盖药敏纸片,然后将此结构置于涂有大肠埃希菌AT... 详细信息

目的探索鲍曼不动杆菌生物膜的形成与耐药的相关性。方法采用96孔板培养法模拟体内生物膜形成,结晶紫染色法鉴定各菌株生物膜生长情况。将鲍曼不动杆菌于黑色聚碳酸酯膜上形成生物膜,其上覆盖药敏纸片,然后将此结构置于涂有大肠埃希菌ATCC25922菌株的M-H平板上,通过测量抑菌圈直径观察生物膜对氯霉素和氧氟沙星的渗透限制作用。结果结晶紫染色测定各菌株均能于体外形成生物膜。除85号菌株外,各菌株与对照组相比,对氯霉素均有明显渗透限制作用,而对氧氟沙星无明显作用。结论生物膜对某些药物的渗透限制作用是细菌耐药的重要机制之一。

关键词：鲍曼不动杆菌生物膜耐药渗透性

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抑制组织蛋白酶B表达对胃癌BGC-823细胞黏附、增殖和侵袭的影响

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中国现代医学杂志 2012年第24期22卷 15-19页

作者：王涛李敏臧文巧赵国强河南中医学院第一附属医院血液肿瘤科河南郑州450000 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室河南郑州450052

目的探讨抑制组织蛋白酶B表达对胃癌BGC-823细胞黏附、增殖和侵袭的影响。方法构建针对CB的siRNA表达载体,脂质体LipofectAmineTM2000转染胃癌细胞株BGC-823。荧光定量RT-PCR和免疫印迹检测CB在各组胃癌细胞中的表达水平;细胞黏附实验... 详细信息

目的探讨抑制组织蛋白酶B表达对胃癌BGC-823细胞黏附、增殖和侵袭的影响。方法构建针对CB的siRNA表达载体,脂质体LipofectAmineTM2000转染胃癌细胞株BGC-823。荧光定量RT-PCR和免疫印迹检测CB在各组胃癌细胞中的表达水平;细胞黏附实验检测各组胃癌细胞的黏附能力;细胞侵袭性实验检测各组胃癌细胞的侵袭能力;细胞增殖实验检测各组胃癌细胞的增殖能力。结果与空白对照组和无关siRNA对照组相比,沉默1组和沉默2组细胞中,CB mRNA的相对表达量显著降低(P<0.01);CB蛋白表达被显著抑制;纤维粘连蛋白和基质胶黏附的胃癌细胞数目以及穿透基质胶的胃癌细胞数显著降低(P<0.05);并且在2 d、3 d、4 d及5 d细胞孔内的吸光度值亦显著减少,差异有显著性(P<0.05)。而在无关siRNA对照组和空白对照组之间,CB mRNA的相对表达量、两组的黏附细胞数目以及两组穿透基质胶的细胞数都无显著性差异(P>0.05)。结论设计针对CB基因的siRNA片段构建的siRNA载体能够有效干扰胃癌BGC-823细胞中CB mRNA和蛋白的表达。抑制胃癌BGC-823细胞CB基因表达,可以降低胃癌细胞的生长速度、降低胃癌细胞与基质黏附能力、降低胃癌细胞侵袭和转移的能力。

关键词：胃癌组织蛋白酶B 增殖侵袭黏附

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沉默CXCR4基因对食管鳞癌EC9706细胞中VEGF基因表达的影响

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中国现代医学杂志 2012年第21期22卷 54-58页

作者：王涛轩小燕臧文巧李敏河南中医学院第一附属医院血液肿瘤科河南郑州450000 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室河南郑州450052

目的探讨沉默CXCR 4基因对食管鳞癌EC9706细胞中VEGF基因表达的影响,初步阐明CX-CR 4在食管鳞癌细胞系EC9706浸润转移中的作用机制。方法利用R T-PCR检测转染有两对CXCR 4siR NA的食管鳞癌EC9706细胞中VEGF基因mR NA的表达,Western Blo... 详细信息

目的探讨沉默CXCR 4基因对食管鳞癌EC9706细胞中VEGF基因表达的影响,初步阐明CX-CR 4在食管鳞癌细胞系EC9706浸润转移中的作用机制。方法利用R T-PCR检测转染有两对CXCR 4siR NA的食管鳞癌EC9706细胞中VEGF基因mR NA的表达,Western Blot和免疫细胞化学技术检测转染有两对CXCR4 siRNA的食管鳞癌EC9706细胞中VEGF基因蛋白的表达,同时以未转染细胞和转染阴性siR-NA细胞作为空白对照和阴性对照。结果转染两对CXCR 4 siR NA后48 h,R T-PCR结果显示,转染组VEGF mR NA的表达较未转染空白对照组和转染阴性对照siR NA组相比明显下降,差异具有显著性(P<0.05);Western Blot结果显示CXCR 4 siR NA转染后48 h,CXCR 4 siR NA不仅能抑制VEGF mR NA的表达,对VEGF蛋白的表达同样有明显的抑制作用,差异具有显著性(P<0.05);免疫细胞化学技术检测结果进一步证实,与未转染空白对照组和转染阴性对照siRNA组相比,CXCR siRNA对VEGF蛋白表达具有显著抑制作用,差异有显著性(P<0.05)。结论特异性阻断CXCR4基因的表达可以抑制VEGF基因的表达,说明CX-CR 4基因有可能通过调控VEGF的表达参与食管鳞癌的浸润转移,CXCR 4有望成为肿瘤基因治疗的新靶点。

关键词：食管鳞癌趋化因子受体血管内皮生长因子基因调控浸润转移

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LPSp对HBV宫内感染脐血单个核细胞分泌IL-4、IFN-γ及TLR4表达的影响

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中国妇幼保健 2012年第12期27卷 1856-1858页

作者：李常虹陈悦黄星王启辉广西医科大学第一附属医院产科广西南宁530021 广西医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室

目的:观察不同浓度LPSp对HBV宫内感染孕妇的脐血单个核细胞分泌IL-4、IFN-γ及细胞表面TLR4表达的影响。方法:选择外周血HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性且脐血HBV-DNA阳性孕妇25例为试验组,根据加入LPSp的不同分为:无LPSp组、LPSp 1μg/L组、L... 详细信息

目的:观察不同浓度LPSp对HBV宫内感染孕妇的脐血单个核细胞分泌IL-4、IFN-γ及细胞表面TLR4表达的影响。方法:选择外周血HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性且脐血HBV-DNA阳性孕妇25例为试验组,根据加入LPSp的不同分为:无LPSp组、LPSp 1μg/L组、LPSp 10μg/L组、LPSp 100μg/L组;以外周血HBV标志物为阴性的正常分娩孕妇20例为对照组。分离CBMC并培养,采用ELISA法检测培养上清液中的IFN-γ、IL-4的浓度,用流式细胞仪检测CBMC表面TLR4表达。结果:①LPSp各组中IFN-γ、IL-4水平与无LPSp组比较差异均有统计学意义(P<0.01),IFN-γ水平与LPSp浓度呈正相关(r=0.778),IL-4水平与LPSp浓度呈负相关(r=-0.927)。②TLR4表达与IFN-γ水平呈正相关(P<0.05),TLR4与IL-4呈负相关(P<0.05);TLR4表达水平与LPSp浓度呈正相关(r=0.754)。结论:不同浓度的LPSp可能通过影响TLR4信号传导通路诱导CBMC分泌不同细胞因子,选择性调控Th1/Th2型应答。

关键词： LPSp 乙型肝炎病毒宫内感染 IFN-γ IL-4 TLR4

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