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HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体的构建及其稳定表达细胞株的建立

细胞与分子免疫学杂志 2012年第1期28卷 94-96页

作者：白文栋席文锦王芳王丽娟杨韬彭红艳孟艳玲杨安钢第四军医大学国家肿瘤生物学重点实验室第四军医大学免疫学教研室第四军医大学微生物学教研室西安交通大学医学院第一附属医院陕西西安710061 第四军医大学西京医院内分泌科陕西西安710032

目的:构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体,并运用Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达该细胞的CHO工程细胞株。方法:应用PCR技术以pcMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pcDNA5/FRT载... 详细信息

目的:构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体,并运用Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达该细胞的CHO工程细胞株。方法:应用PCR技术以pcMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pcDNA5/FRT载体中;通过Flp-InTM定点整合表达系统将e23sFv-Fdt-tBid整合入Flp-lnTM CHO细胞的基因组中一个单拷贝位点上,以适当的潮霉素B筛选定点整合e23sFv-Fdt-tBid cDNA的细胞克隆;通过基因组PCR技术和Westernblot技术检测e23sFv-Fdt-tBid基因的整合及该蛋白表达。结果:成功构建了pcDNA5/FRT-e23sFv-Fdt-tBid表达载体;成功通过Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达e23sFv-Fdt-tBid蛋白的CHO工程细胞株;成功通过基因组PCR技术及基因组PCR技术和Western blot技术检测了e23sFv-Fdt-tBid基因的整合及该蛋白表达。结论:成功地构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体并建立了稳定表达该蛋白的CHO工程细胞株,为该蛋白的应用研究奠定了重要基础。

关键词：免疫促凋亡蛋白 HER2 真核表达定点整合 CHO工程细胞株

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铜绿假单胞菌耐氨基糖苷类相关耐药基因的检测

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新乡医学院学报 2012年第7期29卷 502-504页

作者：屈艳张崇张春晓新乡医学院微生物学教研室河南新乡453003 新乡医学院药学院河南新乡453003 新乡医学院第一附属医院结核内科河南卫辉453100

目的了解对氨基糖苷类抗生素耐药的铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因和甲酰化酶基因的存在情况。方法用聚合酶链反应(PCR)测定临床分离的170株对氨基糖苷类抗生素耐药的铜绿假单胞菌5种主要的AMEs基因和2种甲酰化酶基因。结果铜... 详细信息

目的了解对氨基糖苷类抗生素耐药的铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因和甲酰化酶基因的存在情况。方法用聚合酶链反应(PCR)测定临床分离的170株对氨基糖苷类抗生素耐药的铜绿假单胞菌5种主要的AMEs基因和2种甲酰化酶基因。结果铜绿假单胞菌的AMEs基因携带率较高(94.71%),其修饰酶基因检出率分别为aac(3)-Ⅱ 77.6%、aac(6')-Ⅰ 41.2%、ant(3″)-Ⅰ 40.0%、aph(3')-Ⅵ 21.8%、aac(3)-Ⅰ 0.0%,同时携带2种或2种以上AMEs基因的菌株占63.53%,甲酰化酶基因检出率分别为rmtD 1.8%、rmtA 0.0%。结论铜绿假单胞菌中AMEs基因携带率较高,同一菌株携带多个不同的AMEs基因现象较多;甲酰化酶基因携带率极低。

关键词：铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶甲酰化酶基因型耐药

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MiR-29c在大鼠肾间质成纤维细胞中的抗纤维化作用

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温州医学院学报 2012年第5期42卷 413-418页

作者：黄慧雅苏震薛向阳谢媚媚余业成温州医学院附属第一医院肾内科浙江温州325000 温州医学院微生物学与免疫学教研室浙江温州325000 温州医学院仁济学院临床医学系浙江温州325000

目的:在细胞水平探索miR-29c在肾脏纤维化中的作用。方法:检测TGF-β1对大鼠肾间质成纤维细胞的促纤维化作用及该过程中miR-29c表达的变化。miRanda和高通量测序找出miR-29c的靶基因。通过转染miR-29c mimics(高表达),检测其对胶原I(Col... 详细信息

目的:在细胞水平探索miR-29c在肾脏纤维化中的作用。方法:检测TGF-β1对大鼠肾间质成纤维细胞的促纤维化作用及该过程中miR-29c表达的变化。miRanda和高通量测序找出miR-29c的靶基因。通过转染miR-29c mimics(高表达),检测其对胶原I(Col I)表达的影响。结果:TGF-β1能刺激大鼠肾间质成纤维细胞转分化;大鼠肾间质成纤维细胞转分化后miR-29c表达下调;上调miR-29c能抑制TGF-β1的促转分化作用。结论:miR-29c mimics通过有效抑制TGF-β1刺激NRK-49F细胞株Col I表达起到抗纤维化作用,人工合成的miR-29c mimics转染NRK-49F细胞株有效提高miR-29c表达量从而抑制Col I表达,为治疗肾间质纤维化提供了一个新的靶点。

关键词：肾脏纤维化转化生长因子β1 微RNAs

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铜绿假单胞菌对18种抗菌药物的耐药性变迁

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新乡医学院学报 2012年第2期29卷 113-115页

作者：屈艳张崇张春晓新乡医学院基础医学院微生物学教研室河南新乡453003 新乡医学院药学院药理学教研室河南新乡453003 新乡医学院第一附属医院结核内科河南卫辉453100

目的调查铜绿假单胞菌的临床分布及耐药性变迁,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法采用VITEK-32全自动微生物鉴定系统鉴定细菌,参照美国临床和实验室标准化协会推荐的方法,应用K-B法进行药物敏感(药敏)试验,用WHONET 5.4软件分析铜... 详细信息

目的调查铜绿假单胞菌的临床分布及耐药性变迁,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法采用VITEK-32全自动微生物鉴定系统鉴定细菌,参照美国临床和实验室标准化协会推荐的方法,应用K-B法进行药物敏感(药敏)试验,用WHONET 5.4软件分析铜绿假单胞菌的耐药性。结果 382株铜绿假单胞菌主要分布在重症监护病房(36.9%),标本主要来自痰液标本(69.9%);药敏试验结果显示:铜绿假单胞菌对18种临床常用抗菌药物的耐药率呈逐年上升的趋势;耐药率<30.0%的抗菌药物有多黏菌素E、环丙沙星、左氧氟沙星、亚胺培南、美罗培南、头孢曲松和头孢他啶;耐药率>50.0%的有庆大霉素、替卡西林、氨苄西林和复方新诺明。结论铜绿假单胞菌耐药性比较严重,应对其加强耐药性监测,根据药敏试验结果合理谨慎地使用抗菌药物。

关键词：铜绿假单胞菌抗菌药物耐药性

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慢病毒介导的Clusterin基因沉默抑制肾癌786-O细胞增殖并促进细胞凋亡

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中山大学学报（医学科学版） 2012年第5期33卷 603-609页

作者：石华邓军洪郑少斌王铸曹开源周亮万华南方医科大学南方医院泌尿外科广东广州510515 广州医学院附属广州市第一人民医院泌尿外科广东广州510180 中山大学临床检验标准化研究中心//中山医学院微生物学教研室广东广州510080

【目的】应用慢病毒介导的RNA干扰技术,检测clusterin(CLU)基因沉默在人肾癌786-O细胞的干扰效果及其对人肾癌786-O细胞增殖、迁移和凋亡的影响。【方法】构建靶向CLU基因的慢病毒干扰载体,利用包装细胞293T获得重组慢病毒,感染人肾癌78... 详细信息

【目的】应用慢病毒介导的RNA干扰技术,检测clusterin(CLU)基因沉默在人肾癌786-O细胞的干扰效果及其对人肾癌786-O细胞增殖、迁移和凋亡的影响。【方法】构建靶向CLU基因的慢病毒干扰载体,利用包装细胞293T获得重组慢病毒,感染人肾癌786-O细胞株。实验分5组:CLU-RNAi-LV1(KD1)、CLU-RNAi-LV2(KD2)、CLU-RNAi-LV3(KD3)为加入靶向CLU基因的慢病毒感染的肾癌细胞组,未处理的慢病毒感染的肾癌细胞组(NC组),肾癌786-O细胞为空白对照组(CON组)。应用Real time-PCR及Western blot检测不同组别干扰前后CLU mRNA及蛋白表达的变化。用细胞划痕实验、MST-1、流式细胞仪等方法检测CLU沉默后肾癌786-O细胞在增殖、迁移、凋亡等生物学行为的改变。【结果】成功构建CLU shRNA慢病毒载体clu-RNAi-LV并获得相应慢病毒。Real time-PCR显示不同感染复数CLU-RNAi-LV处理的KD1、KD2、KD3组CLU mRNA表达水平与对照组相比分别下调69.4%～96.5%和0。Western blot结果显示KD1、KD2、KD3组CLU蛋白表达水平与CON组相比分别下降35.24%、46.26%和58.91%,KD3能显著抑制786-O细胞中CLU基因的表达。划痕实验显示24 h时KD3(si-CLU)组细胞迁移相对距离(408.43±25.92)小于NC组(101.35±6.05)和CON组(68.13±6.64,P<0.05)。WST-1法检测转染后72 h KD3(si-CLU)组细胞生长速度较NC组及CON组明显下降(P<0.05),各组间差异(P<0.05),均有统计学意义。流式细胞仪检测KD3(si-CLU)组与NC组、CON组细胞凋亡率分别为(6.23±2.51)%、(1.05±0.30)%和(1.17±0.29)%,KD3(si-CLU)组与NC组、CON组相比凋亡率增加(P<0.05),差异有统计学意义。肾癌786-O细胞的增殖、迁移受到抑制,而凋亡率增加。【结论】筛选出能稳定干扰CLU基因表达的siRNA序列和肾癌786-O细胞株。CLU慢病毒干扰载体可有效沉默肾癌786-O细胞的内源性CLU基因,抑制肾癌786-O细胞的增殖、迁移并促进细胞凋亡。

关键词： RNA干扰慢病毒 clusterin 肾细胞癌 786-O

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癌胚抗原T、B细胞表位短肽诱导特异性体液免疫反应研究

癌胚抗原T、B细胞表位短肽诱导特异性体液免疫反应研究

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2012年浙江省外科学学术年会

作者：陈江肖德双吴乐蒋佩佩邵欢义应江辉朱冠保朱珊丽薛向阳张丽芳温州医学院附属第一医院胃肠外科温州医学院分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室

目的筛选癌胚抗原含T、B细胞表位的短肽并分析其诱导机体产生体液免疫的特性。方法利用免疫信息学方法预测CEA CTL表位,结合我们早期对CEA B表位预测的结果,选择含多个CTL表位肽和B表位肽的CEA氨基酸序列580-598处短肽作为目的基因。目... 详细信息

目的筛选癌胚抗原含T、B细胞表位的短肽并分析其诱导机体产生体液免疫的特性。方法利用免疫信息学方法预测CEA CTL表位,结合我们早期对CEA B表位预测的结果,选择含多个CTL表位肽和B表位肽的CEA氨基酸序列580-598处短肽作为目的基因。目的基因密码子优化后采用pET32a(+)原核表达系统表达融合蛋白,经SDS-PAGE和Western Blot鉴定融合蛋白的抗原性;经镍螯合亲和层析柱(Ni-NTAAgarose)纯化CEA580-598全长融合蛋白,纯化蛋白用佐剂乳化后经日本大耳白家兔背部皮下多点免疫注射,采用Western blot检测血清抗体的特异性,采用EL ISA法检测血清抗体水平及变化趋势。结果含多个T、B细胞表位的短CEA580-598在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量占总蛋白的25.6%;表达产物的相对分子质量(Mr)约21×103Da,与预期Mr相符;Western Blot分析结果显示,在21×103Da处出现特异性条带。日本大耳白兔经CEA580-598融合蛋白免疫后产生高水平的特异性抗体,与空载体和PBS对照组比较具有显著性差异(p<0.05),制备的免疫血清不但能特异识别CEA580-598短肽,而且能特异识别天然CEA抗原。结论 CEA580-598短肽融合蛋白具有较强的免疫原性,诱导的兔免疫血清能特异性结合CEA抗原,为基于CEA表位疫苗的研究奠定理论和实验基础。

关键词：癌胚抗原预测 ELISA 融合蛋白 CTL

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长沙地区AIDS合并菌血症患者病原菌分布及耐药性

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中国感染控制杂志 2012年第5期11卷 341-344,331页

作者：易璨珺苏丽君邹海蛟王留杰左亚婵沈晖林雪迟长沙医学院临床微生物学与免疫学教研室湖南长沙410219 黄沙坪铅锌矿医院湖南郴州424421 长沙市第一医院湖南长沙410005

目的探讨艾滋病(获得性免疫缺陷综合征,AIDS)合并菌血症患者病原菌分布及其耐药性,为临床诊疗提供参考。方法对2009年1月—2010年12月某院住院患者送检标本中所有AIDS患者的血培养病原菌及其药敏资料进行回顾性分析,并与同期普通患者血... 详细信息

目的探讨艾滋病(获得性免疫缺陷综合征,AIDS)合并菌血症患者病原菌分布及其耐药性,为临床诊疗提供参考。方法对2009年1月—2010年12月某院住院患者送检标本中所有AIDS患者的血培养病原菌及其药敏资料进行回顾性分析,并与同期普通患者血培养病原菌资料进行比较。结果调查期间共收集9 554份血培养标本(其中AIDS患者标本1 522份),普通患者血培养阳性571份,AIDS患者血培养阳性77份。AIDS患者血培养病原菌主要以真菌为主(81.82%),其中马内菲青霉菌占66.23%,其次是新生隐球菌(7.79%)、克鲁维酵母菌(5.19%),细菌感染(18.18%)以散发病例为主;普通患者血培养病原菌主要以细菌为主(91.42%),真菌占8.58%;两组患者菌血症感染病原菌差异有统计学意义(χ2=254.55,P<0.01)。马内菲青霉菌对两性霉素B、氟康唑敏感性差;而新生隐球菌、克鲁维酵母菌对抗真菌药物的敏感性较高,无明显耐药。结论加强AIDS合并菌血症患者机会致病菌的流行病学监测,及早发现病原菌,是实现感染控制的关键。

关键词：艾滋病获得性免疫缺陷综合征菌血症病原菌真菌感染抗药性微生物

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荔枝核抗肿瘤及其作用机制研究进展

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广东药学院学报 2012年第6期28卷 693-696页

作者：葛如意卢文菊张萃广东药学院微生物学与免疫学教研室广东广州510006 广州医学院第一附属医院/呼吸疾病国家重点实验室广东广州510230

荔枝核属于南方中药材之一,其生物活性成分和药理研究是目前的热点。近年来多数研究发现荔枝核水提物及其分离物具有抗肿瘤作用,并对其作用机制做了初步探究。本文从荔枝核抗肿瘤免疫、促肿瘤细胞凋亡、影响端粒酶活性、调节激素受体水... 详细信息

荔枝核属于南方中药材之一,其生物活性成分和药理研究是目前的热点。近年来多数研究发现荔枝核水提物及其分离物具有抗肿瘤作用,并对其作用机制做了初步探究。本文从荔枝核抗肿瘤免疫、促肿瘤细胞凋亡、影响端粒酶活性、调节激素受体水平及调控生长因子和受体表达5个方面对其抗肿瘤机制进行综述,为将来荔枝核的进一步开发利用提供新途径。

关键词：荔枝核抗肿瘤机制

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医学免疫学课程群实验教学改革探析

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中华医学教育杂志 2012年第4期32卷 584-585,605页

作者：丁剑冰王红英罗莉王松魏晓丽徐琦马秀敏新疆医科大学基础医学院免疫学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院微生物学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院类风湿科

为了探讨医学免疫学课程群实验教学的整合与模式改革，本研究分析了传统的以单一课程为中心的实验教学模式的弊端，构建了以课程群为特点的免疫学教学团队和医学免疫学相关课程群“递进学习”实验教学模式。新的教学模式注重相关课程实... 详细信息

为了探讨医学免疫学课程群实验教学的整合与模式改革，本研究分析了传统的以单一课程为中心的实验教学模式的弊端，构建了以课程群为特点的免疫学教学团队和医学免疫学相关课程群“递进学习”实验教学模式。新的教学模式注重相关课程实验教学的系统关联与知识整合，重视前期课程知识技能贮备与后期课程综合应用实践之间的辩证关系，有利于培养学生科研能力与创新素质，有助于促进学生综合应用能力的提高。

关键词：实验教学医学免疫学教学改革

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人脐带间充质干细胞移植治疗CCl_4致肝硬化大鼠的病理变化

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中国医学工程 2012年第10期20卷 38-39页

作者：高象民金旭鹏李晓飞辽宁省锦州市义县人民医院辽宁锦州121001 辽宁医学院免疫与微生物学教研室辽宁锦州121001 辽宁医学院附属第一医院消化内科中国锦州121001

目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HU-MSCs)移植至CCl4所致的肝硬化大鼠体内后,肝组织的病理变化。方法随机选取健康雄性SD大鼠35只,于其中随机选取8只作为正常组,另同样方法选取27只SD大鼠给予... 详细信息

目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HU-MSCs)移植至CCl4所致的肝硬化大鼠体内后,肝组织的病理变化。方法随机选取健康雄性SD大鼠35只,于其中随机选取8只作为正常组,另同样方法选取27只SD大鼠给予40%CCl4溶液每周2次腹部皮下注射,用来制备肝硬化大鼠模型,造模成功后,随机分为肝硬化组和HU-MSCs移植组,HU-MSCs移植组给予HU-MSCs 1×107经尾静脉移植,移植后3周处死所有大鼠,进行肝组织病理学检测并定量分析肝纤维化改变情况。结果正常组和肝硬化组中均未发现阳性表达的抗人EGF-R存在,HU-MSCs移植组中发现较多抗人内皮生长因子受体(EGF-R)的表达;三组中肝纤维化含量均具有差异性,肝硬化组含量明显增加,移植组纤维化含量较肝硬化组降低。结论 HU-MSCs移植到肝硬化大鼠体内,能够长期存活,并改善肝组织的纤维化程度。

关键词：肝硬化人脐带间充质干细胞大鼠病理

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