检索结果-内蒙古大学图书馆

第四军医大学学报 2007年第12期28卷 1065-1068页

作者：李敏臧文巧付庆李文涛董子明郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室河南郑州450052 郑州大学第一附属医院普外科河南郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室河南郑州450052

目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系及稳定高表达人野生型DNA聚合酶beta(polβ)的食管癌细胞系,分析polβ高表达与食管癌细胞耐药的相关性.方法:顺铂(cDDP)中等浓度、间歇作用法历时9mo建立耐药细胞系Ec9706/cDDP;同时脂质体转染法将人野... 详细信息

目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系及稳定高表达人野生型DNA聚合酶beta(polβ)的食管癌细胞系,分析polβ高表达与食管癌细胞耐药的相关性.方法:顺铂(cDDP)中等浓度、间歇作用法历时9mo建立耐药细胞系Ec9706/cDDP;同时脂质体转染法将人野生型polβ重组绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-AC3转染入Ec9706细胞,经G418筛选得到稳定转染细胞系.荧光显微镜观察转染效果,普通倒置显微镜观察细胞形态变化.RT-PCR方法分别检测耐药细胞与转染细胞中polβmRNA的表达水平,MTT法检测各组细胞对cDDP的敏感性.结果:荧光显微镜下转染细胞荧光强,转染效率高,倒置显微镜下耐药细胞与转染前后细胞形态无明显改变.RT-PCR结果表明耐药细胞Ec9706/cDDP中polβ表达较亲本细胞增加,转染细胞的polβ表达较空载体转染细胞、对照细胞也增加.Ec9706/cDDP细胞耐药指数为15.70;转染后细胞对cDDP的敏感性降低,耐药指数为1.78.结论:成功建立了耐药细胞系Ec9706/cDDP与稳定高表达人野生型polβ的Ec9706细胞系,polβ的高表达可引起耐药性的产生,耐药细胞中polβ的表达也增高.polβ的表达与食管癌细胞的耐药性有一定相关性.

关键词： DNA聚合酶β 转染食管肿瘤肿瘤细胞培养的抗药性肿瘤四甲基偶氮唑蓝

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钾离子通道阻滞剂对SD大鼠前列腺上皮细胞的增殖作用

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中华男科学杂志 2007年第2期13卷 138-142页

作者：周正兴梁朝朝唐智国郝宗耀郭清奎胡勇赵俊安徽医科大学第一附属医院泌尿外科安徽合肥230022 安徽医科大学基础医学院微生物学教研室安徽合肥230022

目的:观察钾离子通道阻滞剂四乙胺(TEA)、四氨基吡啶(4-AP)、格列本脲(Glib)对体外培养SD大鼠前列腺上皮细胞增殖的调节作用。方法:胶原酶消化组织建立原代SD大鼠前列腺上皮细胞株,角化蛋白免疫组织化学染色(Pan-keratin)鉴定培养细胞,... 详细信息

目的:观察钾离子通道阻滞剂四乙胺(TEA)、四氨基吡啶(4-AP)、格列本脲(Glib)对体外培养SD大鼠前列腺上皮细胞增殖的调节作用。方法:胶原酶消化组织建立原代SD大鼠前列腺上皮细胞株,角化蛋白免疫组织化学染色(Pan-keratin)鉴定培养细胞,分别加入TEA(1、5、10mmol/L)、4-AP(1、5、10mmol/L)、Glib(10、50、100mol/L),培养24、48、72h后计数并绘制细胞生长柱形图,运用MTT方法和Hoechst33258细胞核染色法观察传代后细胞生长状况。对照组不加钾离子通道阻制剂。结果:培养细胞具有典型的上皮细胞形态特征,Pan-Keratin染色阳性,MTT法和Hoechst33258染色法均显示随着TEA、4-AP及Glib浓度的递增,作用于细胞24、48、72h后,与对照组相比,前列腺上皮细胞有不同程度的增殖(P<0.05或P<0.01)。结论:钾离子通道阻滞剂对体外培养的SD大鼠前列腺上皮细胞有增殖作用。

关键词：前列腺上皮细胞钾离子通道阻滞剂细胞增殖体外研究大鼠

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解脲脲原体的耐药性分析及其耐氟喹诺酮的分子机制研究

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中国皮肤性病学杂志 2007年第8期21卷 487-489页

作者：吴利先王国富陶娅玲蔡涛大理学院基础医学院微生物学教研室云南大理671000 重庆医科大学附属第一医院妇产科重庆400016 重庆医科大学附属第一医院皮肤性病科重庆400016

目的检测128株临床分离解脲脲原体(UU)对9种药物的敏感性,并检测喹诺酮类耐药UU对5种喹诺酮药物的MIC以及gyrA和parC基因突变情况。方法应用支原体分离鉴定、计数药敏试剂盒检测UU对9种药物的敏感性,用微量肉汤稀释法检测耐药UU菌株对5... 详细信息

目的检测128株临床分离解脲脲原体(UU)对9种药物的敏感性,并检测喹诺酮类耐药UU对5种喹诺酮药物的MIC以及gyrA和parC基因突变情况。方法应用支原体分离鉴定、计数药敏试剂盒检测UU对9种药物的敏感性,用微量肉汤稀释法检测耐药UU菌株对5种喹诺酮类药物的MIC,用PCR和DNA测序及序列比较检测基因突变。结果UU对多西环素最敏感,其次为米诺环素、交沙霉素、司帕沙星及克林霉素,对大环内酯类药物阿奇霉素和罗红霉素高度耐药。而司帕沙星、加替沙星和左氧氟沙星的MIC范围在0.25～8μg/mL,抑制UU活性强于氧氟沙星和环丙沙星。10株喹诺酮类耐药UU中有3株只有parC基因第80位TCA→TTA的突变,氨基酸由丝氨酸→亮氨酸,1株GyrA基因第95位密码子GAC→GAA的突变,氨基酸由天冬氨酸→谷氨酸。6株两者同时存在。结论在UU治疗中可首选多西环素,其次为米诺环素和交沙霉素。gyrA基因95位密码子和parC基因80位的突变密码子与UU耐喹诺酮类药物密切相关。

关键词：解脲脲原体氟喹诺酮类药物耐药机制

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短发夹状RNA介导的RNAi对白血病细胞株HL-60的抑制作用

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肿瘤基础与临床 2007年第3期20卷 197-199页

作者：王琰孙玲赵国强王业生郑州大学第一附属医院血液科郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室河南郑州450052

目的为探讨RNA干扰对HL-60细胞的抑制作用,构建survivin的短发夹状RNA真核表达载体并将其导入白血病细胞株HL-60细胞。方法设计、合成两对针对survivin的短发夹状RNA序列,连接到带有人U6启动子的载体质粒pSINsi-hU6中,将构建重组质粒命... 详细信息

目的为探讨RNA干扰对HL-60细胞的抑制作用,构建survivin的短发夹状RNA真核表达载体并将其导入白血病细胞株HL-60细胞。方法设计、合成两对针对survivin的短发夹状RNA序列,连接到带有人U6启动子的载体质粒pSINsi-hU6中,将构建重组质粒命名为pSIN/shRNA1和pSIN/shRNA2。pSIN/shRNA1转染HL-60细胞,应用四唑盐(MTT)比色法观察细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果酶切分析和测序证实pSIN/shRNA1和pSIN/shRNA2构建成功。MTT测定显示转染重组质粒pSIN/shRNA1进入HL-60细胞48、72、96 h后细胞增殖明显受到抑制,分别与阴性对照组、空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪分析pSIN/shRNA1细胞凋亡率达(20.21±0.75)%,明显高于阴性对照组的(2.58±0.48)%和空白对照组的(1.26±0.30)%(P<0.05)。结论构建survivin基因RNAi真核表达载体成功;pSIN/shRNA1序列可特异性地抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡。

关键词： survivin基因 RNA干扰短发夹状RNA 白血病 HL-60细胞

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人脐血树突状细胞分泌外来体的特性及其增强CTL杀伤活性的研究

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第1期22卷 33-36页

作者：杜英陈绍倩黄玉敏董子明郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室河南郑州450052 郑州大学第一附属医院血液科河南郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室河南郑州450052

目的探讨脐血树突状细胞(UBDC)及其分泌的亚细胞结构外来体(exosomes)的特性,以及他们对细胞毒性T细胞(CTL)杀伤活性的增强作用。方法分离脐血单个核细胞(UBMC),用rhSCF、rhGM-CSF及rhIL-4诱导12d,加入经反复冻融提取的肿瘤细胞膜抗原,... 详细信息

目的探讨脐血树突状细胞(UBDC)及其分泌的亚细胞结构外来体(exosomes)的特性,以及他们对细胞毒性T细胞(CTL)杀伤活性的增强作用。方法分离脐血单个核细胞(UBMC),用rhSCF、rhGM-CSF及rhIL-4诱导12d,加入经反复冻融提取的肿瘤细胞膜抗原,继续培养2d。收集DC并从其培养上清中通过离心(1×105g)分离外来体。用流式细胞术、SDS-PAGE、透射电子显微镜(TEM)和MTT比色法,对DC和外来体的特性及其对CTL杀伤活性的增强作用进行分析。结果用3种细胞因子体外诱导UBMC12d,可使其扩增10倍,并出现DC典型的形态特征。负载肿瘤抗原后,细胞表面可高表达MHC-I、MHC-II、CD40、CD80、CD86、CD11c和CD54。利用超速离心法能从DC培养上清中分离出外来体。混合淋巴细胞反应(MLR)和CTL杀伤活性的分析表明,脐血DC分泌的外来体能有效地刺激T细胞增殖并增强CTL的杀伤活性。结论由UBMC可诱导出大量的DC并分泌外来体。后者可有效地向CTL细胞递呈肿瘤抗原使之活化并增强其杀伤活性。

关键词：脐血树突状细胞外来体细胞毒效应

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树突状细胞及exosomes体外诱导抗脑胶质瘤细胞毒活性的研究

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免疫学杂志 2006年第6期22卷 664-667页

作者：杜英陈绍倩黄玉敏孙蕾王鑫顾巧丽杨波董子明郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学第一附属医院血液科郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052 郑州大学第一附属医院神经外科郑州450052

目的探讨负载肿瘤抗原的树突状细胞(DCs)及其衍生exosomes诱导T细胞活化和特异性肿瘤杀伤的作用。方法将患者静脉血单个核细胞经GM-CSF、IL-4诱导产生DCs,收集培养上清液,超速离心法制备exosomes。流式细胞术检测DCs表面标志表达,用SDS-... 详细信息

目的探讨负载肿瘤抗原的树突状细胞(DCs)及其衍生exosomes诱导T细胞活化和特异性肿瘤杀伤的作用。方法将患者静脉血单个核细胞经GM-CSF、IL-4诱导产生DCs,收集培养上清液,超速离心法制备exosomes。流式细胞术检测DCs表面标志表达,用SDS-PAGE和western-blot检测exosomes携带MHC和共刺激分子的情况。MTT法观察DCs及exosomes对T细胞促增殖作用和CTL体外杀伤活性。结果肿瘤抗原致敏的DC高表达MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、CD54、CD80和CD86,与抗原致敏前相比有显著差异,P<0.05。DC衍生的exosomes表达MHC-Ⅱ、CD54和CD86,并显著引起T细胞扩增和细胞毒效应,与对照组相比有显著差异,P<0.01。结论从脑胶质瘤患者静脉血诱导出高表达MHC和共刺激分子的DCs以及exosomes,具有活化T细胞并产生特异性细胞毒活性的功能,有望成为临床治疗脑胶质瘤有效的新疫苗。

关键词：树突状细胞 Exosomes 脑胶质瘤细胞毒活性

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人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的建立及其生物学特征

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世界华人消化杂志 2006年第34期14卷 3257-3260页

作者：李敏王志举李文涛董子明郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室河南省郑州市450052 郑州大学基础医学院生理学教研室河南省郑州市450052 郑州大学第一附属医院普外科河南省郑州市450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室河南省郑州市450052

目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,探讨其生物学特征.方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇作用方法历时9mo建立耐药细胞系Ec9706/cDDP,采用MTT法测定其对cDDP的耐药指数,观察冻存、撤药对耐药性的影响,比较耐药与亲本细胞生... 详细信息

目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,探讨其生物学特征.方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇作用方法历时9mo建立耐药细胞系Ec9706/cDDP,采用MTT法测定其对cDDP的耐药指数,观察冻存、撤药对耐药性的影响,比较耐药与亲本细胞生长曲线、群体倍增时间及贴壁率的不同,流式细胞仪测细胞周期,软琼脂实验测细胞的恶性增殖能力,罗丹明实验测其对药物的摄入、排出能力.结果:人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的耐药指数为15.7,冻存对耐药性影响不大,撤药培养可使耐药性降低,耐药细胞群体倍增时间延长(29.79±0.48hvs25.79±0.45h,P<0.05),生长缓慢,G0/G1、S期细胞比例增加(63.18%±5.21%vs52.81%±4.36%,P<0.05;36.49%±3.93%vs26.70%±2.62%,P<0.05),G2期细胞减少(0.33%±0.02%vs20.49%±3.71%,P<0.05),克隆形成率明显高于亲本细胞(69%vs24%,P<0.05),对罗丹明的摄入减少,排出增多.结论:成功建立了人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,且耐药性较稳定.

关键词：食管癌耐药细胞系顺铂细胞周期四甲基偶氮唑蓝流式细胞术

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趋化性细胞因子MIP-1α动员DC前体细胞的体内抗胃癌效应

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世界华人消化杂志 2006年第4期14卷 387-391页

作者：何宋兵汪良黄瑞张雁云苏州大学附属第一医院普外科江苏省苏州市215006 苏州大学医学院微生物学教研室江苏省苏州市215006 上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海市200025

目的:研究趋化性细胞因子巨噬细胞炎症蛋白-1α(macrophage inflammation protein-1α, MIP-1α)在外周血中快速动员树突状细胞 (DC)前体细胞,并荷载小鼠前胃癌(MFC)抗原后,其体内的抗肿瘤免疫效应．方法:B6小鼠尾静脉注射MIP-1α,分选... 详细信息

目的:研究趋化性细胞因子巨噬细胞炎症蛋白-1α(macrophage inflammation protein-1α, MIP-1α)在外周血中快速动员树突状细胞 (DC)前体细胞,并荷载小鼠前胃癌(MFC)抗原后,其体内的抗肿瘤免疫效应．方法:B6小鼠尾静脉注射MIP-1α,分选出外周血B220-CD11c+细胞,以GM-CSF、IL-4及 mTNF-α培养5-6 d,检测其表型和混合淋巴细胞反应;B220-CD11c+细胞荷载MFC抗原后制备成DC疫苗,经皮下回输MFC荷瘤小鼠,观察小鼠瘤体生长和存活时间,检测其体内抗肿瘤效应．未荷载肿瘤抗原的MIP-1α动员的胃癌DC疫苗、MFC肿瘤可溶性抗原和PBS缓冲液作为对照．结果:MIP-1α注射B6小鼠4 h后外周血中 B220-CD11c+细胞即升高,48 h达到高峰,占外周血单个核细胞(MNC)13．7％±0．8％．新鲜分离的B220-CD11c+细胞不具有成熟DC的特征, 经过细胞因子培养的B220-CD11c+细胞具有典型的DC表面标志,在混合淋巴细胞反应中具有极强的刺激T细胞增殖的能力．当荷载MFC 抗原后制成的DC疫苗皮下回输MFC荷瘤小鼠后,观察至第27天,MIP-1α动员的胃癌DC 疫苗和骨髓源性的胃癌DC疫苗实验组小鼠的瘤体大小分别为(2．7±0．6)cm3和(2．8±0．8) cm3,两者之间无显著性差异(P>0．05);而对照组小鼠瘤体迅速生长,瘤体大小分别为23．7± 1．7 cm3、26．4±1．9 cm3和31．2±2．2 cm3,实验组与对照组之间有显著性差异(P<0．05)．此外, 对照组小鼠在荷瘤后25 d内全部死亡,而实验组小鼠的生存期则明显延长,且治疗组小鼠在无瘤存活35 d后,再次接受MFC细胞冲击,继续观察小鼠至60 d仍存活,实验组和对照组的差异有统计学意义(P<0．05)．结论:注射MIP-1α可以直接快速动员B220- CD11c+DC前体细胞进入小鼠外周血,这些 DC前体细胞荷载MFC抗原后制成的胃癌DC 疫苗,可激活机体T细胞,产生明显的体内抗肿瘤效应．

关键词：树突状细胞巨噬细胞炎症蛋白-1α 抗肿瘤胃癌

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HCV核心蛋白在酵母双杂交系统中的表达及自激活作用检测

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第四军医大学学报 2006年第3期27卷 241-244页

作者：刘敏张伟陈天艳蔺淑梅刘锦锋叶峰赵英仁张树林西安交通大学医学院第一附属医院传染科陕西西安710061 第四军医大学基础部微生物学教研室陕西西安710033

目的检测用含丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的cDNA片段构建的酵母双杂交诱饵载体的表达产物对酵母细胞有无毒性作用及对报告基因有无激活作用.方法PCR扩增含HCV核心蛋白不同大小的cDNA片段,分别克隆入pUC19质粒,经测序正确后,再分别亚克隆... 详细信息

目的检测用含丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的cDNA片段构建的酵母双杂交诱饵载体的表达产物对酵母细胞有无毒性作用及对报告基因有无激活作用.方法PCR扩增含HCV核心蛋白不同大小的cDNA片段,分别克隆入pUC19质粒,经测序正确后,再分别亚克隆入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中.将重组质粒导入酵母菌AH109,检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因有无激活作用.结果成功获得含HCV核心蛋白的cDNA片段,HCV核心蛋白对酵母菌AH109无毒性,且对报告基因无激活作用.结论利用酵母双杂交Gal4系统3研究与HCV核心蛋白相互作用的蛋白,证实了HCV核心蛋白无自激活功能.

关键词： HCV核心蛋白酵母双杂交报告基因

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人神经干细胞移植治疗大鼠脑创伤观察

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郑州大学学报（医学版） 2006年第1期41卷 94-97页

作者：李红伟杨波宋来君杜英孙剑瑞张志强冯祖荫河南省肿瘤医院神经外科郑州450008 郑州大学第一附属医院神经外科郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052

目的:探讨人神经干细胞(NSCs)移植治疗大鼠脑创伤的可行性。方法:取孕14周流产胎儿脑组织,进行NSCs培养及鉴定,并应用Hoechest33258标记细胞。54只大鼠随机等分为假损伤组(A组)、治疗对照组(B组)及NSCs移植组(C组)。采用自由落体撞击法... 详细信息

目的:探讨人神经干细胞(NSCs)移植治疗大鼠脑创伤的可行性。方法:取孕14周流产胎儿脑组织,进行NSCs培养及鉴定,并应用Hoechest33258标记细胞。54只大鼠随机等分为假损伤组(A组)、治疗对照组(B组)及NSCs移植组(C组)。采用自由落体撞击法制作大鼠脑创伤模型后,C组给予NSCs移植,B组给予生理盐水,A组不打击脑组织。3组分别于移植术后2d及7d进行大鼠行为学评分,分别于植术后2周和4周行Y迷宫试验测学习和记忆评分。移植后3d、7d脑组织切片荧光显微镜下观察移植细胞存活情况,移植后2周、4周行GFAP、NSE免疫组织化学染色。结果:NSCs移植后2d行为学评分3组之间差异有统计学意义(P=0.00),B、C组间差异无统计学意义(P=0.09);移植后7d行为学评分3组间差异有统计学意义(P=0.00),A、C组间差异无统计学意义(P=0.10);移植后2周学习评分和4周记忆评分3组间差异均有统计学意义(P=0.00),B、C组间差异均有统计学意义(P=0.00);C组脑组织GFAP、NSE染色阳性,可见标记的NSCs。结论:人NSCs植入大鼠创伤脑内后,可存活并和宿主组织融合在一起,促进大鼠行为学恢复,提高学习和记忆能力,并分化为神经元和神经胶质细胞。NSCs移植为治疗脑创伤提供了新的方法。

关键词：移植神经干细胞脑损伤大鼠

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