Wnt信号通路在机体多种生理过程中均具有重要作用,已证明有多种蛋白质参与其调节,包括DKK(Dickkopf)家族成员。然而,DKK4在乳腺癌中的生物学功能和分子机制尚不清楚。本研究通过在线数据库TCGA(the cancer genome atlas)和UALCAN(***/)...
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Wnt信号通路在机体多种生理过程中均具有重要作用,已证明有多种蛋白质参与其调节,包括DKK(Dickkopf)家族成员。然而,DKK4在乳腺癌中的生物学功能和分子机制尚不清楚。本研究通过在线数据库TCGA(the cancer genome atlas)和UALCAN(***/)分析发现,DKK4在乳腺癌中的表达与其甲基化程度负相关,并影响其肿瘤分期和患者生存率。MethHC数据库分析显示,DKK4在多数乳腺癌组织中的表达低于癌旁组织。RT-PCR检测发现,DKK4在8种人乳腺癌细胞株中不表达或低表达,在2种人正常乳腺细胞中表达;qPCR分析发现,13对组织标本中有11对癌组织的表达低于癌旁组织(P<0.0001)。构建过表达DKK4的人乳腺癌细胞株MCF7和YCCB1,克隆形成的结果显示,MCF7和YCCB1稳定细胞株形成的细胞集落数量分别为对照组的28.66%和37.26%,增殖能力明显低于对照组细胞(P<0.001);Transwell实验结果显示,细胞迁移能力减弱(590 vs. 2 052;1 310 vs. 5 137,P<0.001);侵袭能力也明显减弱(220 vs. 872;2 532 vs. 5 089;P<0.001)。流式细胞仪分析发现,DKK4可将乳腺癌细胞周期阻滞于G0/G1期((57.06±0.64)%vs.(50.13±1.08)%;(51.94±0.93)%vs.(31.00±1.03)%,P<0.001),细胞凋亡率明显增高((31.55±0.77)%vs.(9.85±0.58)%;(28.19±0.99)%vs.(17.92±0.58)%,P<0.001)。进一步采用Western印迹检测结果显示,DKK4能够使细胞周期调控蛋白P53、P27、P21和细胞凋亡因子胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-9表达上调。Western印迹检测过表达DKK4对Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果表明,细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、C-Myc蛋白、环氧合酶2 (cyclooxygenase 2,Cox 2)、C-Jun蛋白、磷酸化应激活化蛋白激酶(p-JNK)和活化的β-联蛋白(activeβ-catenin)等的表达下调,而上皮型钙黏着蛋白(E-Cadherin)表达上调。综上所述,DKK4通过负调控Wnt/β-catenin信号通路抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,阻滞细胞周期,并促进其凋亡。
目的探讨多房棘球蚴不同感染时间小鼠肝组织细胞外基质蛋白1(extracellular matrix protein 1,ECM1)的表达水平以及与肝纤维化过程的相关性。方法将40只雌性C57BL/6小鼠随机分为多房棘球蚴感染组和对照组(20只/组),感染组经肝门静脉接种...
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目的探讨多房棘球蚴不同感染时间小鼠肝组织细胞外基质蛋白1(extracellular matrix protein 1,ECM1)的表达水平以及与肝纤维化过程的相关性。方法将40只雌性C57BL/6小鼠随机分为多房棘球蚴感染组和对照组(20只/组),感染组经肝门静脉接种2000个原头节/鼠,对照组注射等量生理盐水。分别于感染后第1、6、12和24周,两组各取5只小鼠采集肝组织,切片后HE染色观察多房棘球蚴感染后小鼠肝组织病理学变化;天狼星红染色以及α-SMA染色检测小鼠肝纤维化程度;免疫组织化学染色检测肝组织中ECM1的表达水平与分布。采用Pearson相关系数法分析ECM1表达水平与肝纤维化水平的相关性。结果HE染色结果显示,多房棘球蚴感染后6周,小鼠肝组织内可见具有明显生发层结构的病灶形成,周围炎性细胞浸润明显且伴有纤维组织增生。天狼星红染色结果显示,感染组小鼠肝组织内病灶周围胶原沉积面积占比在感染后1、6、12和24周分别为(6.97±0.07)%、(10.39±0.02)%、(17.31±1.78)%和(22.24±1.07)%,均高于对照组(P<0.05);α-SMA染色结果显示,感染组肝组织病灶周围α-SMA阳性染色面积占比在感染后1、6、12和24周分别为(5.31±0.39)%、(9.97±1.3)%、(16.16±0.17)%和(19.01±0.49)%,均高于对照组(P<0.05);且随着多房棘球蚴感染小鼠时间的延长病灶周围肝纤维化程度不断加重。免疫组化检测结果显示,ECM1主要表达在病灶周围的炎性细胞带中,少量表达在肝窦;感染组ECM1阳性染色面积占比在感染后1、6、12和24周分别为(8.60±0.44)%、(13.90±0.57)%、(16.37±0.77)%和(19.50±0.50)%,均高于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,ECM1表达水平与天狼星红阳性染色区域面积(r=0.900,P<0.01)及α-SMA阳性染色区域面积占比(r=0.941,P<0.01)均呈正相关。结论ECM1在多房棘球蚴不同感染时间小鼠肝组织的表达均较对照组升高,并与肝纤维化程度呈正相关。
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