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HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体的构建及其稳定表达细胞株的建立

细胞与分子免疫学杂志 2012年第1期28卷 94-96页

作者：白文栋席文锦王芳王丽娟杨韬彭红艳孟艳玲杨安钢第四军医大学国家肿瘤生物学重点实验室第四军医大学免疫学教研室第四军医大学微生物学教研室西安交通大学医学院第一附属医院陕西西安710061 第四军医大学西京医院内分泌科陕西西安710032

目的:构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体,并运用Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达该细胞的CHO工程细胞株。方法:应用PCR技术以pcMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pcDNA5/FRT载... 详细信息

目的:构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体,并运用Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达该细胞的CHO工程细胞株。方法:应用PCR技术以pcMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pcDNA5/FRT载体中;通过Flp-InTM定点整合表达系统将e23sFv-Fdt-tBid整合入Flp-lnTM CHO细胞的基因组中一个单拷贝位点上,以适当的潮霉素B筛选定点整合e23sFv-Fdt-tBid cDNA的细胞克隆;通过基因组PCR技术和Westernblot技术检测e23sFv-Fdt-tBid基因的整合及该蛋白表达。结果:成功构建了pcDNA5/FRT-e23sFv-Fdt-tBid表达载体;成功通过Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达e23sFv-Fdt-tBid蛋白的CHO工程细胞株;成功通过基因组PCR技术及基因组PCR技术和Western blot技术检测了e23sFv-Fdt-tBid基因的整合及该蛋白表达。结论:成功地构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体并建立了稳定表达该蛋白的CHO工程细胞株,为该蛋白的应用研究奠定了重要基础。

关键词：免疫促凋亡蛋白 HER2 真核表达定点整合 CHO工程细胞株

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长沙地区AIDS合并菌血症患者病原菌分布及耐药性

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中国感染控制杂志 2012年第5期11卷 341-344,331页

作者：易璨珺苏丽君邹海蛟王留杰左亚婵沈晖林雪迟长沙医学院临床微生物学与免疫学教研室湖南长沙410219 黄沙坪铅锌矿医院湖南郴州424421 长沙市第一医院湖南长沙410005

目的探讨艾滋病(获得性免疫缺陷综合征,AIDS)合并菌血症患者病原菌分布及其耐药性,为临床诊疗提供参考。方法对2009年1月—2010年12月某院住院患者送检标本中所有AIDS患者的血培养病原菌及其药敏资料进行回顾性分析,并与同期普通患者血... 详细信息

目的探讨艾滋病(获得性免疫缺陷综合征,AIDS)合并菌血症患者病原菌分布及其耐药性,为临床诊疗提供参考。方法对2009年1月—2010年12月某院住院患者送检标本中所有AIDS患者的血培养病原菌及其药敏资料进行回顾性分析,并与同期普通患者血培养病原菌资料进行比较。结果调查期间共收集9 554份血培养标本(其中AIDS患者标本1 522份),普通患者血培养阳性571份,AIDS患者血培养阳性77份。AIDS患者血培养病原菌主要以真菌为主(81.82%),其中马内菲青霉菌占66.23%,其次是新生隐球菌(7.79%)、克鲁维酵母菌(5.19%),细菌感染(18.18%)以散发病例为主;普通患者血培养病原菌主要以细菌为主(91.42%),真菌占8.58%;两组患者菌血症感染病原菌差异有统计学意义(χ2=254.55,P<0.01)。马内菲青霉菌对两性霉素B、氟康唑敏感性差;而新生隐球菌、克鲁维酵母菌对抗真菌药物的敏感性较高,无明显耐药。结论加强AIDS合并菌血症患者机会致病菌的流行病学监测,及早发现病原菌,是实现感染控制的关键。

关键词：艾滋病获得性免疫缺陷综合征菌血症病原菌真菌感染抗药性微生物

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人脐带间充质干细胞移植治疗CCl_4致肝硬化大鼠的病理变化

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中国医学工程 2012年第10期20卷 38-39页

作者：高象民金旭鹏李晓飞辽宁省锦州市义县人民医院辽宁锦州121001 辽宁医学院免疫与微生物学教研室辽宁锦州121001 辽宁医学院附属第一医院消化内科中国锦州121001

目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HU-MSCs)移植至CCl4所致的肝硬化大鼠体内后,肝组织的病理变化。方法随机选取健康雄性SD大鼠35只,于其中随机选取8只作为正常组,另同样方法选取27只SD大鼠给予... 详细信息

目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HU-MSCs)移植至CCl4所致的肝硬化大鼠体内后,肝组织的病理变化。方法随机选取健康雄性SD大鼠35只,于其中随机选取8只作为正常组,另同样方法选取27只SD大鼠给予40%CCl4溶液每周2次腹部皮下注射,用来制备肝硬化大鼠模型,造模成功后,随机分为肝硬化组和HU-MSCs移植组,HU-MSCs移植组给予HU-MSCs 1×107经尾静脉移植,移植后3周处死所有大鼠,进行肝组织病理学检测并定量分析肝纤维化改变情况。结果正常组和肝硬化组中均未发现阳性表达的抗人EGF-R存在,HU-MSCs移植组中发现较多抗人内皮生长因子受体(EGF-R)的表达;三组中肝纤维化含量均具有差异性,肝硬化组含量明显增加,移植组纤维化含量较肝硬化组降低。结论 HU-MSCs移植到肝硬化大鼠体内,能够长期存活,并改善肝组织的纤维化程度。

关键词：肝硬化人脐带间充质干细胞大鼠病理

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猪苓多糖通过Toll样受体4对小鼠骨髓来源树突状细胞作用研究

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中草药 2011年第1期42卷 118-123页

作者：李心群许文温州医学院附属第一医院浙江温州325035 温州医学院微生物学与免疫学教研室浙江温州325035

目的研究猪苓多糖(Polyporus umbellatus polysaccharides,PPS)活化小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow dendritic cells,BMDC)功能调节的作用机制,进一步阐明PPS的免疫学活性机制。方法以3H-TdR掺入法、ELISA及流式细胞术检测BMDC表型和功能的各项指标。结果 PPS刺激小鼠BMDC表达CD11c、CD86及白细胞介素-12、-10(IL-12、IL-10)产生,并且具有剂量依赖效应。另外,较阴性对照组,经PPS诱导成熟的BMDC其活化初始T细胞的能力显著提高而吞噬能力显著下降。抗小鼠Toll样受体4(TLR4)单抗可抑制PPS刺激BMDC产生IL-12 p40及阻断荧光标记猪苓多糖(fluorescence-labeled PPS,f-PPS)与BMDC的结合,而抗TLR2及补体受体3(CR3)单抗却无此效应。结论 PPS可经TLR4活化小鼠BMDC发挥免疫调节活性。

关键词：猪苓多糖树突状细胞 Toll样受体4(TLR4) 免疫调节荧光标记

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一种高效准确定量计数噬菌体肽库目标分子的方法

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第3期29卷 236-238页

作者：王可耕曾庆仁禹正杨曾铁兵刘彦南华大学医学院寄生虫学教研室衡阳421001 中南大学医学细胞与分子生物学实验中心长沙410013 南华大学附属第一医院肿瘤外科衡阳421001 南华大学医学院微生物学和免疫学教研室衡阳421001

利用双层琼脂平板法与荧光实时定量PCR(Real-time PCR)技术分别测定少量、中量和大量噬菌体的效价。结果显示,双层琼脂平板法与Real-time PCR法均可准确测定噬菌体效价。双层琼脂平板法所得符合条件的平板约为总数的1/3,需重复测定10次... 详细信息

利用双层琼脂平板法与荧光实时定量PCR(Real-time PCR)技术分别测定少量、中量和大量噬菌体的效价。结果显示,双层琼脂平板法与Real-time PCR法均可准确测定噬菌体效价。双层琼脂平板法所得符合条件的平板约为总数的1/3,需重复测定10次,每次消耗噬菌体10μl,测得噬菌体效价的组内变异系数为4.93%～30.38%。Real-timePCR法重复测定3次即可,每次消耗噬菌体1μl,其组内变异系数仅为0.02%～0.25%,明显低于双层琼脂平板法。提示,Real-time PCR技术可简单、迅速地测定噬菌体效价。

关键词：噬菌体效价双层琼脂平板法荧光实时定量PCR

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调控CIAPIN1基因表达对食管癌细胞生长及侵袭性的影响

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第二军医大学学报 2011年第11期32卷 1258-1262页

作者：王健赵国强韩娜王海莉张中冕樊青霞郑州大学第一附属医院肿瘤科郑州450052 郑州大学第二附属医院肿瘤科郑州450014 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001

目的采用重组慢病毒CIAPIN1表达载体和CIAPIN1沉默载体感染食管癌EC9706细胞,观察调控CIAPIN1基因表达对细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡及体外侵袭转移的影响。方法构建CIAPIN1表达慢病毒载体和CIAPIN1 siRNA慢病毒载体,包装得到重组慢病... 详细信息

目的采用重组慢病毒CIAPIN1表达载体和CIAPIN1沉默载体感染食管癌EC9706细胞,观察调控CIAPIN1基因表达对细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡及体外侵袭转移的影响。方法构建CIAPIN1表达慢病毒载体和CIAPIN1 siRNA慢病毒载体,包装得到重组慢病毒;分别感染食管癌EC9706细胞,筛选得到稳定CIAPIN1基因高表达和低表达的细胞。实验分为CIAPIN1表达组、CIAPIN1 siRNA组、无关siRNA对照组和空白对照组。采用RT-PCR和蛋白质印迹法分析CIAPIN1基因和蛋白的表达,MTT实验检测细胞增殖,流式细胞术(FCM)分析细胞周期及细胞凋亡的变化,Boy-den小室检测细胞侵袭转移。结果与空白对照组、无关siRNA对照组和CIAPIN1 siRNA组比较,CIAPIN1高表达组细胞生长受到抑制(P<0.05);S和G2/M期细胞比例减少,G0/G1期细胞比例增加(P<0.05);平均细胞凋亡率增加(P<0.05),穿透Matrigel的平均细胞数减少(P<0.05)。结论以慢病毒为载体介导的CIAPIN1基因高表达可有效抑制食管癌EC9706细胞增殖、促进细胞凋亡和降低细胞侵袭迁移能力。

关键词：细胞因子诱导的凋亡抑制分子1 慢病毒食管肿瘤细胞增殖细胞凋亡

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重组人生长激素对人巨噬细胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α的影响

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郑州大学学报（医学版） 2011年第5期46卷 684-686页

作者：丁培杰段长恩张世杰赵国强漯河医学高等专科学校免疫学教研室漯河462000 新乡医学院免疫学教研室新乡453003 郑州大学第一附属医院检验科郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001

目的:观察重组人生长激素(rhGH)对人巨噬细胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α的影响。方法:以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子体外诱导从人外周血中分离的单个核细胞,使其分化为巨噬细胞,并用流式细胞术鉴定;诱导获得细胞分为6组,分别用1mg/L脂多糖... 详细信息

目的:观察重组人生长激素(rhGH)对人巨噬细胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α的影响。方法:以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子体外诱导从人外周血中分离的单个核细胞,使其分化为巨噬细胞,并用流式细胞术鉴定;诱导获得细胞分为6组,分别用1mg/L脂多糖和0、1、4、20及50μg/L的rhGH培养4、8和12h,采用ELISA法测定各组巨噬细胞上清液中IL-1、IL-6和TNF-α的分泌情况。结果:诱导的细胞经鉴定为巨噬细胞。不同质量浓度的rh-GH均可促进所诱导的巨噬细胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α;随培养时间的延长,各组巨噬细胞以上细胞因子的分泌量增加。结论:rhGH对人单核巨噬细胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α有促进作用,提示其可能参与免疫调节作用。

关键词：生长激素 IL-1 IL-6 TNF-α 巨噬细胞

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乙醇对兔骨髓间充质干细胞6种神经递质mRNA表达的影响

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郑州大学学报（医学版） 2011年第3期46卷 357-360页

作者：王义生张振张鑫赵国强李月白郑州大学第一附属医院骨科郑州450052 郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州450001 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001

目的:探讨乙醇对骨髓间充质干细胞(BMSCs)中神经生长因子(NGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、降钙素相关基因肽受体(CGRPR)、血管活性肠肽受体(VIPR)、P物质受体(SPR)及过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPARγ)表达的影响。方法:收集第3代... 详细信息

目的:探讨乙醇对骨髓间充质干细胞(BMSCs)中神经生长因子(NGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、降钙素相关基因肽受体(CGRPR)、血管活性肠肽受体(VIPR)、P物质受体(SPR)及过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPARγ)表达的影响。方法:收集第3代兔BMSCs,随机分为2组,实验组加入终浓度为0.09mol/L的乙醇,对照组正常培养,于培养的第4、7天,采用荧光定量PCR测定2组细胞中上述基因mRNA的表达。结果:第4和7天,实验组BMSCs中FGF、CGRPR、VIPR、NGF和SPR的mRNA表达均较对照组降低(第4天:t=5.327、34.773、12.036、28.660和22.584,P均<0.01;第7天:t=4.664、44.965、8.461、12.809和35.163,P均<0.01),PPARγmRNA表达增高(t=31.107和36.775,P均<0.001)。结论:乙醇可以抑制兔BMSCs中成骨相关神经递质或其受体的表达,促进PPARγ的表达,从而参与酒精性股骨头坏死的发病。

关键词：乙醇股骨头坏死骨髓间充质干细胞神经递质兔

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巨噬细胞抑制因子-1及尿激酶型纤容酶原激活剂在胃癌组织中的表达及临床病理意义

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世界华人消化杂志 2011年第2期19卷 138-142页

作者：曹征曲蕴慧杜英郑州大学第一附属医院检验科河南省郑州市450052 郑州大学基础医学院微生物学及免疫学教研室河南省郑州市450052

目的:探讨巨噬细胞抑制因子-1(macrophageinhibitory cytokine-1,MIC-1)及尿激酶型纤容酶原激活剂(urokinase plasminogen activator,uPA)在胃癌组织中的蛋白表达及其临床意义.方法:收集郑州大学第一附属医院2009-01/2010-05胃癌存档蜡块55例,采用免疫组织化学方法检测55例胃癌及正常胃黏膜上皮组织中MIC-1及uPA的蛋白表达情况,并分析其表达与胃癌临床病理特征的关系.结果:MIC-1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率显著高于正常胃黏膜上皮,组间比较差异均具有统计学意义(56.4%vs20.0%,χ2=7.792,P<0.05),并且其在胃癌组织中的阳性表达率与癌的组织学分级、浸润深度及淋巴结转移均相关(χ2=6.781,11.071,12.806,均P<0.05).uPA蛋白在胃癌组织中的阳性表达率显著高于正常胃黏膜上皮,组间比较差异均具有统计学意义(61.8%vs25.0%,χ2=7.965,P<0.05),并且其在胃癌组织中的阳性表达率与癌的组织学分级、浸润深度及淋巴结转移均相关(χ2=13.803,14.561,10.668,均P<0.05).MIC-1与uPA蛋白表达呈正相关关系(γp=0.591,P<0.05).结论:MIC-1及uPA的过表达可能与胃癌的发生发展有关,并对判断胃癌患者的生物学行为具有一定的意义.

关键词：胃癌巨噬细胞抑制因子-1 尿激酶型纤容酶原激活剂免疫组织化学

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LPS诱导大脑皮质胶质细胞自噬基因Beclin-1蛋白表达的研究

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中国当代医药 2011年第24期18卷 12-14页

作者：苏芸谢泽锋辛岗许燕璇李康生汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室广东汕头515041 汕头大学医学院第一附属医院广东汕头515041

目的:探讨脂多糖(lipppolys accride,LPS)刺激对大脑皮质胶质细胞自噬相关基因Beclin-1蛋白表达的影响。方法:体外分离新生小鼠大脑皮质混合胶质细胞,采用1 μg/ml LPS刺激24h后收集细胞与培养上清。Western blotting检测Beclin-1蛋白... 详细信息

目的:探讨脂多糖(lipppolys accride,LPS)刺激对大脑皮质胶质细胞自噬相关基因Beclin-1蛋白表达的影响。方法:体外分离新生小鼠大脑皮质混合胶质细胞,采用1 μg/ml LPS刺激24h后收集细胞与培养上清。Western blotting检测Beclin-1蛋白表达水平;CCK-8试剂盒检测细胞增殖率。结果:LPS刺激后,大脑皮质混合胶质细胞Beclin-1蛋白表达水平增高,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);细胞增殖率下降,与对照组比较差异亦具有统计学意义(P<0.05)。结论:LPS能激活神经胶质细胞自噬相关基因Beclin-1,这种变化参与调节了胶质细胞的存活情况。

关键词：自噬 Beclin-1蛋白脂多糖神经胶质细胞

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