检索结果-内蒙古大学图书馆

科技通报 2002年第1期18卷 20-23页

作者：李植峰高丽杰施庆国曹韫旭孙树秦陆德如解放军北京军医学院生物化学教研室北京100071 第二军医大学分子遗传学研究所上海200433

萤火虫荧光素酶基因 c DNA真核表达载体 p GL2 可在原核细胞中高效表达 .该载体中含有 SV4 0早期启动子及荧光素酶基因 c DNA 5’端总长共 75 8bp的 DNA碱基序列 ,经计算机分析发现 ,在 SV4 0早期启动子中含有 SV4 0基因组 Hind B片断... 详细信息

萤火虫荧光素酶基因 c DNA真核表达载体 p GL2 可在原核细胞中高效表达 .该载体中含有 SV4 0早期启动子及荧光素酶基因 c DNA 5’端总长共 75 8bp的 DNA碱基序列 ,经计算机分析发现 ,在 SV4 0早期启动子中含有 SV4 0基因组 Hind B片断中一段长为 4 9bp的 DNA序列 ,且荧光素酶基因 c DNA编码区的 5’端含有一个原核细胞基因表达调控区相似序列 .将 p GL2 中的荧光素酶基因 c DNA(L uc)克隆入真核表达载体 p ED中 ,构建成 p ED- Luc.该载体经表达测定后 ,只在真核细胞中表达 ,在原核细胞中不表达 .这说明荧光素酶基因 c DNA编码区的 5’端的原核细胞基因表达调控区相似序列不具表达有活性的荧光素酶的功能 .经 DNA序列对比研究 ,认为 p GL2 含有的 SV4 0基因组 Hind B片段 5 12 3bp～ 5 171bp长 4 9bp的 DNA序列可能就是 Hind B片段的原核增强子功能的决定序列 .

关键词： SV40早期启动子荧光素酶基因原核增强子

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用微小卫星引物PCR鉴定红色毛癣菌和须癣毛癣菌

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第二军医大学学报 2001年第3期22卷 252-254页

作者：朱红梅廖万清戴建新李志刚吴建华温海第二军医大学长征医院皮肤科上海200003 基础医学部分子遗传学教研室

目的 :观察红色毛癣菌和须癣毛癣菌临床分离株 DNA PCR指纹的差异 ,找出一种区分红色毛癣菌和须癣毛癣菌的基因分类方法。方法 :采用寡核苷酸重复序列 (GACA ) 4、(GTG) 5 及 M13中心序列 (5′- GAGGGTGGCGGTTCT- 3′) 3种引物 ,对 2 ... 详细信息

目的 :观察红色毛癣菌和须癣毛癣菌临床分离株 DNA PCR指纹的差异 ,找出一种区分红色毛癣菌和须癣毛癣菌的基因分类方法。方法 :采用寡核苷酸重复序列 (GACA ) 4、(GTG) 5 及 M13中心序列 (5′- GAGGGTGGCGGTTCT- 3′) 3种引物 ,对 2 3株红色毛癣菌和 11株须癣毛癣菌临床分离株的 DNA进行 PCR扩增 ,观察产物电泳带型的差异。结果 :在 3种引物的扩增产物中 ,均可见红色毛癣菌和须癣毛癣菌呈现出不同的 DNA指纹 ,其中 ,以引物 (GACA) 4扩增的条带差异最为清晰。结论 :红色毛癣菌和须癣毛癣菌可以用 PCR方法加以鉴别 ,以 (GACA ) 4作引物区分这两种菌较为合适。

关键词：红色毛癣菌须癣毛癣菌 PCR指纹微小卫星引物

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萤火虫荧光素酶基因cDNA真核表达载体在细菌中的高效表达

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生物学杂志 2001年第3期18卷 22-24页

作者：李植峰高丽杰曹韫旭孙树秦陆德如解放军北京军医学院生物化学教研室北京100017 第二军医大学分子遗传学研究所上海200433

将萤火虫荧光素酶基因cDNA真核表达载体pGL2 导入大肠杆菌HB1 0 1、鼠伤寒杆菌LB50 0 0和X4 0 64中 ,它在这些原核细胞中均有较好的表达效果。它在大肠杆菌HB1 0 1的表达量是该基因cDNA原核表达载体 pUHF12 - 1的表达量的 3 0倍。采用... 详细信息

将萤火虫荧光素酶基因cDNA真核表达载体pGL2 导入大肠杆菌HB1 0 1、鼠伤寒杆菌LB50 0 0和X4 0 64中 ,它在这些原核细胞中均有较好的表达效果。它在大肠杆菌HB1 0 1的表达量是该基因cDNA原核表达载体 pUHF12 - 1的表达量的 3 0倍。采用计算机PC/GENE程序包分析 ,pGL2 的SV4 0 早期启动子序列中含有SV4 0 基因组HindⅢB片断中一段长为 4 9bp的DNA序列 ,这一序列可能就是SV4 0 基因组HindⅢB片断的原核增强子功能的决定序列 ,正是该序列使pGL2 在细菌中获得了高效表达。

关键词：荧光素酶基因真核表达载体原核增强子

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热休克后表达受抑基因的分子克隆及其表达特性

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第6期32卷 657-660页

作者：戴建新王易伦周凤娟陆德如刘宇建徐仁宝第二军医大学病理生理学教研室!上海200433 第二军医大学分子遗传学教研室!上海200433

以人成骨肉瘤细胞株HOS 860 3为热休克模型 ,在利用DDmRNA方法筛选和克隆了一个热休克后表达受抑基因的cDNA片段的基础上 ,以该片段为探针 ,筛选HOS 860 3细胞的cDNA文库 ,获得该基因的全长cDNA克隆(HSSG 1) ;DNA序列测定表明该cDNA全长... 详细信息

以人成骨肉瘤细胞株HOS 860 3为热休克模型 ,在利用DDmRNA方法筛选和克隆了一个热休克后表达受抑基因的cDNA片段的基础上 ,以该片段为探针 ,筛选HOS 860 3细胞的cDNA文库 ,获得该基因的全长cDNA克隆(HSSG 1) ;DNA序列测定表明该cDNA全长 14 5 6bp ,编码 2 76个氨基酸 ,经计算机辅助分析 ,该cDNA序列尚未被报道。经RNA斑点杂交证实 ,该基因的表达于多种组织细胞之中 ,并且热休克反应对其表达水平的抑制具有普遍性

关键词：热休克基因表达表达调控差别显示基因克隆

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外源性野生型P16^(ink4a)基因在兔损伤动脉壁的表达

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中国病理生理杂志 2000年第11期16卷 1159-1162,2002页

作者：张亚文张国元黄长晖邹祝英第二军医大学附属长征医院心内科上海200003 第二军医大学分子遗传学开放实验室上海200433

目的 :研究转染外源性野生型P16 ink4a基因逆转录病毒重组质粒对兔颈总动脉壁损伤后再狭窄形成的抑制作用。方法 :构建野生型P16 ink4a基因的复制缺陷型逆转录病毒重组质粒 ,经包装细胞包装后取得高滴度病毒液 ,并以此病毒转染损伤后即... 详细信息

目的 :研究转染外源性野生型P16 ink4a基因逆转录病毒重组质粒对兔颈总动脉壁损伤后再狭窄形成的抑制作用。方法 :构建野生型P16 ink4a基因的复制缺陷型逆转录病毒重组质粒 ,经包装细胞包装后取得高滴度病毒液 ,并以此病毒转染损伤后即刻的兔颈总动脉。应用膜杂交和原位杂交技术检测损伤动脉壁的外源性P16 ink4a基因表达 ,并通过病理学等方法观察动脉内膜增生情况及管腔狭窄程度。结果 :逆转录病毒重组质粒可有效地将外源基因P16 ink4a转入兔体内动脉壁并在其中表达。P16 ink4a基因转染组动物的损伤动脉壁内膜平滑肌细胞增生 (11 80± 3 5 4vs 2 5 2 0± 5 12 ,P <0 0 5 )和管腔狭窄程度 (5 0 2 %± 9 6 0 %vs 82 2 %±12 83% ,P <0 0 5 )均显著低于对照组。结论 :体内转染外源性野生型抑癌基因P16

关键词：颈总动脉壁损伤 P16^ink4a基因基因表达

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转基因动物研究的现状与展望

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中国科学基金 2000年第1期14卷 23-26页

作者：戴旭明李坚傅继梁第二军医大学医学遗传教研室医学分子遗传学开放实验室上海200433

简要评述了国内外转基因动物研究的现状,归纳了目前常用的几种转基因动物遗传修饰的策略,比较分析了几种转基因动物建立途径的特点以及存在的问题。在此基础上介绍了国家自然科学基金重点项目“医学转基因动物模型研究”的研究内容,并... 详细信息

简要评述了国内外转基因动物研究的现状,归纳了目前常用的几种转基因动物遗传修饰的策略,比较分析了几种转基因动物建立途径的特点以及存在的问题。在此基础上介绍了国家自然科学基金重点项目“医学转基因动物模型研究”的研究内容,并对转基因动物研究的未来发展作了展望。

关键词：转基因动物遗传修饰基因组修饰

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体外转染野生型p16-基因对兔血管平滑肌细胞生长的抑制作用

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中国循环杂志 2000年第1期15卷 48-50页

作者：张亚文张国元黄长晖上海长征医院心内科上海市200003 中国人民解放军第二军医大学分子遗传学开放实验室

目的 :研究体外转染外源性野生型 p16基因对兔血管平滑肌细胞生长的影响。　　方法 :构建野生型 p16基因的重组逆转录病毒载体 ,并体外转染兔血管平滑肌细胞 ,应用 Northern blot及 Westernblot检测外源 p16基因的表达 ,并用四唑盐 ( M... 详细信息

目的 :研究体外转染外源性野生型 p16基因对兔血管平滑肌细胞生长的影响。　　方法 :构建野生型 p16基因的重组逆转录病毒载体 ,并体外转染兔血管平滑肌细胞 ,应用 Northern blot及 Westernblot检测外源 p16基因的表达 ,并用四唑盐 ( MTT)法及流式细胞仪检测其对细胞生长的抑制作用。　　结果 :逆转录病毒载体可有效地将外源性 p16基因导入平滑肌细胞 ,表达 P16蛋白 ,并显著抑制血管平滑肌细胞的生长使细胞滞留于 G1 期。　　结论 :体外转染外源性野生型 p16基因可有效抑制血管平滑肌细胞的生长。

关键词： p16基因逆转录病毒载体血管平滑肌细胞抑制

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人顶体蛋白酶原基因片段的克隆及与β-半乳糖苷酶基因(LacZ)的融合基因载体的构建

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中国男科学杂志 2000年第1期14卷 5-8页

作者：盛毅纪亚忠张其赵亚南李建秀傅继梁第二军医大学附属长海医院全军生殖研究中心上海200433 第二军医大学分子遗传学开放实验室

为确定人顶体蛋白酶原基因特异的基因表达调控和蛋白分选的序列 ,从血白细胞中抽提人基因组 ,聚合酶链式反应 (PCR)扩增该基因 5’侧翼序列和第 1外显子。将扩增获得的 1.3Kb片段克隆到 pGEM T中 ,经酶切鉴定和DNA序列测定确定为人顶体... 详细信息

为确定人顶体蛋白酶原基因特异的基因表达调控和蛋白分选的序列 ,从血白细胞中抽提人基因组 ,聚合酶链式反应 (PCR)扩增该基因 5’侧翼序列和第 1外显子。将扩增获得的 1.3Kb片段克隆到 pGEM T中 ,经酶切鉴定和DNA序列测定确定为人顶体蛋白酶基因片段。将上述基因片段克隆到pGEM 4Z中 ,适当酶切后与pSV β Galactosidase中经酶切去除SV40早期启动子的两片段连接 ,最终获得人顶体蛋白酶基因的 5’侧翼序列和第 1外显子与LacZ的融合基因载体 ,以及人顶体蛋白酶原基因

关键词：报告基因载体构建顶体蛋白酶

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用于人顶体蛋白酶原基因表达调控和蛋白分选研究的转基因小鼠模型的建立

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中国男科学杂志 2000年第2期14卷 77-80页

作者：盛毅纪亚忠赵亚南张其傅继梁李建秀第二军医大学附属长海医院全军生殖研究中心上海200433 第二军医大学分子遗传学开放实验室上海200433

分别将构建的人顶体蛋白酶原基因 (humanproacrosin ,hACR) 5’侧翼序列 ,第 1外显子和编码 β 半乳糖苷酶的基因 (lacZ)的融合基因 (载体 1 ) ,以及hACR基因 5’侧翼序列与报告基因lacZ的融合基因 (载体 2 ) ,通过显微注射受精卵法制... 详细信息

分别将构建的人顶体蛋白酶原基因 (humanproacrosin ,hACR) 5’侧翼序列 ,第 1外显子和编码 β 半乳糖苷酶的基因 (lacZ)的融合基因 (载体 1 ) ,以及hACR基因 5’侧翼序列与报告基因lacZ的融合基因 (载体 2 ) ,通过显微注射受精卵法制备转基因小鼠 ,结果如下 :载体 1 :注射 89只卵 ,移植入 9只母鼠单侧输卵管中 ,3只怀孕 ,产仔9只 ,存活 7只 ,基因组Southern杂交检出整合有外源基因的阳性小鼠 1只 ,阳性率 1 4 .3% ;子 1代 1 5只 ,基因组Southern杂交 5只阳性。载体 2 :注射 2 35只卵 ,移植入 1 4只母鼠单侧输卵管中 ,4只怀孕 ,产仔 1 1只 ,存活 1 0只 ,基因组Southern杂交检出整合有外源基因的小鼠 1只 ,阳性率 1 0 .0 %。子 1代小鼠 1 0只 ,基因组Southern杂交 3只阳性。进一步将检测lacZ在转基因小鼠体内的表达。

关键词：人顶体蛋白酶原基因转基因小鼠核酸杂交

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LIF受体α亚基和gp130细胞内区与U937细胞内信号分子Stat3的关系

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中华血液学杂志 1999年第12期20卷 621-623页

作者：刘厚奇汤淑萍刘善荣胡世杰杨玲朱奎傅继梁第二军医大学组织胚胎教研室上海200433 第二军医大学分子遗传学开放实验室

目的　探讨人白血病细胞系Ｕ９３７的白血病抑制因子（ＬＩＦ）受体α亚基和ｇｐ１３０亚基细胞内区与转录活性因子Ｓｔａｔ３的活性关系，旨在研究白血病细胞增殖和分化的机制。方法　用基因重组技术将２个基因在细胞内区截除（ｇ... 详细信息

目的　探讨人白血病细胞系Ｕ９３７的白血病抑制因子（ＬＩＦ）受体α亚基和ｇｐ１３０亚基细胞内区与转录活性因子Ｓｔａｔ３的活性关系，旨在研究白血病细胞增殖和分化的机制。方法　用基因重组技术将２个基因在细胞内区截除（ｇｐ１９０ＥＸ、ｇｐ１３０ＥＸ），并分别在Ｕ９３７细胞中表达，因其可与野生型受体竟争性结合ＬＩＦ，故可用免疫印迹法分析受体细胞内区截除后Ｓｔａｔ３的表达水平及该信号分子酪氨酸磷酸化。结果　转染ｇｐ１９０ＥＸ和ｇｐ１３０ＥＸ的Ｕ９３７细胞Ｓｔａｔ３表达量增加；Ｓｔａｔ３酪氨酸磷酸化水平下降。结论　ＬＩＦ受体α亚基和ｇｐ１３０的细胞内区均参与了Ｓｔａｔ３的激活和Ｕ９３７细胞的分化。

关键词：白血病细胞株 U937 LIF受体 gp130细胞

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