检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2000年第1期21卷 16-19页

作者：任浩朱分禄朱诗应宋燕斌戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的：研制特异的抗ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ抗体诊断试剂。方法：ＰＣＲ扩增ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＮＳ５基因片段并定向克隆至转座载体ｐＦａｓｔＢａｃＨＴａ，转化ＤＨ１０Ｂａｃ感受态细胞，３７℃振荡培养４ｈ使发生转座，于三抗选... 详细信息

目的：研制特异的抗ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ抗体诊断试剂。方法：ＰＣＲ扩增ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＮＳ５基因片段并定向克隆至转座载体ｐＦａｓｔＢａｃＨＴａ，转化ＤＨ１０Ｂａｃ感受态细胞，３７℃振荡培养４ｈ使发生转座，于三抗选择平皿筛选重组ｂａｃｍｉｄ。脂质体介导转染ｓｆ９细胞，将转染上清再次感染ｓｆ９细胞，以批量表达ＮＳ５重组蛋白。利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法分析、检测重组蛋白。结果：序列测定证实克隆的基因片段是ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的ＮＳ５基因片段，且阅读框架正确。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示在相对分子质量４．１５×１０４处有重组蛋白的表达条带，薄层扫描占总蛋白量的１１．７％。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ发现重组蛋白可与ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ阳性患者混合血清发生较强的免疫反应。结论：ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＮＳ５重组蛋白可以用于ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染的检测。

关键词： NS5蛋白庚型肝炎 GBV-C/HGV 基因表达

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庚型肝炎病毒研究现状与展望

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 802-805页

作者：戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

病原微生物是人类健康的大敌,1977年至1997年的20年中,人类先后发现并鉴定的重要致病微生物就有近30种,包括埃博拉病毒、汉坦病毒、大肠杆菌O157、艾滋病毒、霍乱弧菌 O139等,学术界将这类微生物所致的疾病称为'新现传染病'(eme... 详细信息

病原微生物是人类健康的大敌,1977年至1997年的20年中,人类先后发现并鉴定的重要致病微生物就有近30种,包括埃博拉病毒、汉坦病毒、大肠杆菌O157、艾滋病毒、霍乱弧菌 O139等,学术界将这类微生物所致的疾病称为'新现传染病'(emerging infectious disea ses).由于对这类病原微生物本身及其致病机制了解甚少,加之人群缺乏免疫力及有效的防治方法,这类新的病原体常引起严重的传染性疾病,造成巨大的社会影响和经济损失.庚型肝炎病毒(hepatitis G virus,HGV)被认为是这类病原微生物之一.

关键词：庚型肝炎庚型肝炎病毒 HGV 病原微生物

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HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库的构建

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 857-860页

作者：潘卫戚中田贺祥陈秋莉潘欣第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 第二军医大学科研部

目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p ... 详细信息

目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p CANTAB5 X的 Xba 位点 ,转化大肠杆菌 TG1,辅助噬菌体拯救 ,建立噬菌体随机肽展示文库。结果 :所构建的随机文库含 1.2 3× 10 5个不同克隆 ,库容噬菌体滴度为 2× 10 1 2 TU/ m l(转导单位 / ml) ,PCR法检测插入阳性为 2 8.1% ,核酸杂交证实 40 %的克隆为 HCV核心基因阳性克隆。结论 :所建的随机文库有足够大的库容和较好的多样性 ,可以满足HCV C抗原表位的筛选。

关键词：噬菌体随机展示肽库核心蛋白丙型肝炎 HCV

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庚型肝炎病毒E2蛋白在转基因小鼠细胞内的定位及致病性研究

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 842-845页

作者：胡卫江陈景山戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 美国耶鲁大学

目的 :在已建成庚型肝炎病毒 (HGV)转基因小鼠模型的基础上 ,研究 HGV包膜蛋白 E2在转基因小鼠体内的表达及定位 ,并探讨 HGV在转基因小鼠体内是否引起病理学改变。方法 :取小鼠的器官组织用免疫组织化学方法 ,以 HGV E2蛋白的单克隆... 详细信息

目的 :在已建成庚型肝炎病毒 (HGV)转基因小鼠模型的基础上 ,研究 HGV包膜蛋白 E2在转基因小鼠体内的表达及定位 ,并探讨 HGV在转基因小鼠体内是否引起病理学改变。方法 :取小鼠的器官组织用免疫组织化学方法 ,以 HGV E2蛋白的单克隆抗体对 HGV包膜蛋白 E2的表达进行分析和定位。通过血清 AL T检测及常规病理学技术观察转基因小鼠不同器官的病理学变化。结果 :免疫组织化学结果表明 ,HGV E2主要表达于转基因小鼠肝细胞膜 ,少量表达于胞质内 ;肾脏、心脏、肺及脾脏均未呈现 E2蛋白的阳性反应。组织病理学检查显示转基因小鼠的肝细胞出现水样变性、脂肪变性及淋巴细胞浸润等轻度炎性反应 ,这些变化不随年龄增长而加重 ;其他组织的病理学检查无异常。转基因小鼠血清转氨酶 AL T与对照小鼠无明显差异。结论 :HGV包膜蛋白 E2的表达具有相对的嗜肝性 ,主要分布在转基因小鼠的肝细胞膜 ,并可引起轻度肝细胞损伤。

关键词：转基因 E2蛋白致病性庚型肝炎 HGV

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中国姥鲨软骨源新生血管抑制因子(Sp8)的分离纯化及生物学活性

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第二军医大学学报 2000年第2期21卷 107-110页

作者：陈建鹤焦炳华缪为民王路王梁华缪辉南解放军第422医院内二科广东湛江524005 第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的 :从中国姥鲨软骨组织抽提蛋白质中筛选具有新生血管抑制活性和抗肿瘤活性的分子。方法 :盐酸胍抽提姥鲨软骨蛋白 ,采用超滤和分子筛柱层析等方法分离纯化获得相对分子质量为 8.3× 10 3的蛋白质 (Sp8) ,以体外抑制血管内皮细... 详细信息

目的 :从中国姥鲨软骨组织抽提蛋白质中筛选具有新生血管抑制活性和抗肿瘤活性的分子。方法 :盐酸胍抽提姥鲨软骨蛋白 ,采用超滤和分子筛柱层析等方法分离纯化获得相对分子质量为 8.3× 10 3的蛋白质 (Sp8) ,以体外抑制血管内皮细胞增殖、体内抑制新生血管生长和抑制小鼠移植 S180肉瘤生长作为筛选指标。结果 :Sp8可在体外抑制血管内皮细胞增殖 ,40μg/ml浓度时抑制率为 2 0 % ;在体内具有抑制新生血管生长的作用 ,兔角膜模型抑制率为 72 .7% ,鸡胚模型 (CAM)抑制率为 79% ;并能明显抑制小鼠体内移植 S180肉瘤的生长 (P<0 .0 0 1)。结论 :Sp8介导了鲨鱼软骨中的抗肿瘤活性 ,其作用可能是通过抑制肿瘤诱生新生血管形成这一途径来实现的。

关键词：鲨鱼软骨抑制因子新生血管抗肿瘤活性

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外参照PCR及其产物酶联杂交定量检测HBV DNA

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第二军医大学学报 2000年第2期21卷 120-123页

作者：缪晓辉戚中田孔宪涛第二军医大学长征医院感染科上海200003 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200003 长征医院实验诊断科

目的 :建立一种敏感、特异和精确的乙型肝炎病毒 (HBV )基因 PCR及其产物的酶联杂交定量分析技术。方法 :(1)常规 PCR法扩增 HBV DNA质粒和血清 HBV DNA,引物 (SP1 ,SP2 )为一对 HBV DNA S区基因特异引物 ,扩增片段长 319bp,SP2 的 5′... 详细信息

目的 :建立一种敏感、特异和精确的乙型肝炎病毒 (HBV )基因 PCR及其产物的酶联杂交定量分析技术。方法 :(1)常规 PCR法扩增 HBV DNA质粒和血清 HBV DNA,引物 (SP1 ,SP2 )为一对 HBV DNA S区基因特异引物 ,扩增片段长 319bp,SP2 的 5′端用生物素修饰。扩增条件经过严格优化组合 ,以最大限度减少非特异片段 ,包括引物二聚体的产生。设定 5个不同梯度的 HBV DNA外参照管 ,制作标准曲线。 (2 )酶联杂交分析 :PCR产物经 10 0℃解链并稀释后 ,与捕获探针 (长 2 0 nt,3′端用氨基修饰 ,借氨基与 DNA- BINDTM反应板结合 )杂交 ;用亲和素 -碱性磷酸酶及相应显色系统检测杂交信号。结果 :目的片段含量较低的 PCR产物 ,在琼脂糖凝胶电泳时未见光带 ,但可被后续的酶联杂交检出 ,故灵敏度可超过普通 PCR定性法。结论 :本定量方法操作相对简单 ,结果数据化 ,不受主观因素干扰 ,灵敏度很高 ,而且省时、省材。

关键词：聚合酶链反应乙型肝炎 HBV DNA

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庚型肝炎病毒NS3蛋白在杆状病毒载体中的表达及其抗原性研究

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 849-852页

作者：朱分禄任浩朱诗应谢南潘卫董辉戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 南昌市传染病医院中心实验室

目的 :利用 Bac- to- Bac HT杆状病毒系统在 Sf9昆虫细胞中表达庚型肝炎病毒 (HGV) NS3蛋白 ,并对表达产物的免疫原性进行研究。方法 :将 HGV NS3基因片段定向克隆至转座载体 p Fast Bac HTa,转化 DH10 Bac感受态细胞 ,37℃振荡培养 4... 详细信息

目的 :利用 Bac- to- Bac HT杆状病毒系统在 Sf9昆虫细胞中表达庚型肝炎病毒 (HGV) NS3蛋白 ,并对表达产物的免疫原性进行研究。方法 :将 HGV NS3基因片段定向克隆至转座载体 p Fast Bac HTa,转化 DH10 Bac感受态细胞 ,37℃振荡培养 4h使发生转座 ,用抗生素平皿筛选重组 bacmid。脂质体介导转染 Sf9昆虫细胞 ,待细胞形态明显改变后收获细胞和培养上清液 ,将上清液再次感染 Sf9细胞以大量表达 HGV NS3重组蛋白。利用 SDS- PAGE和 Western- blotting方法分析重组蛋白。结果 :SDS- PAGE分析发现表达产物在 Mr43810处有一条明显的蛋白带 ,占细胞总蛋白量的 30 %以上 ;应用 Ni- NTA亲和层析柱获得了纯化的重组蛋白 ;Western- blotting显示该抗原可与 HGV RNA阳性血清发生特异反应。结论 :获得了昆虫细胞内表达的 HGV NS3重组蛋白 ,并证明该蛋白有可能用于 HGV感染的抗体检测。

关键词：免疫原性杆状病毒载体庚型肝炎 NS3蛋白

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从噬菌体随机肽库筛选庚型肝炎病毒E2抗原表位

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 838-841页

作者：柯屾戚中田施明赵平王建安姚志建沈倍奋第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 军事医学科学院基础医学研究所北方基因研究中心

目的 :筛选能识别庚型肝炎病毒 (HGV) E2区的单克隆抗体和有竞争抑制活性的多肽。方法 :利用抗 HGV E2区的3株单克隆抗体 M6 ,M13,M30作为筛选配基 ,对构象限制性的随机环 9肽库进行亲和筛选 ,并对阳性噬菌体克隆进行功能鉴定。结果 :... 详细信息

目的 :筛选能识别庚型肝炎病毒 (HGV) E2区的单克隆抗体和有竞争抑制活性的多肽。方法 :利用抗 HGV E2区的3株单克隆抗体 M6 ,M13,M30作为筛选配基 ,对构象限制性的随机环 9肽库进行亲和筛选 ,并对阳性噬菌体克隆进行功能鉴定。结果 :证实亲和筛选具有良好的富集效果后 ,随机挑出 16个噬菌体克隆进行交叉结合实验 ,有 14个克隆与 M6抗体有较强的特异结合 ;其中 10个克隆在竞争抑制实验中抑制率大于 5 0 %。 DNA测序表明 9个克隆具有氨基酸核心序列 GYAPL S,该序列与 HGV E2区第 30 6～ 311位氨基酸有较好的同源性。用合成肽与核心序列相似的噬菌体克隆 P9GC5和 P9GC11进行HGV E2抗原抗体实验 ,显示它们的 IC5 0 分别为 4.5和 7.2 nmol/ L。结论 :从噬菌体随机肽库中筛选到能与 HGV E2抗体特异性结合的 HGV抗原表位 ,并确定与合成了具有活性的核心多肽序列。

关键词：噬菌体随机肽库 E2蛋白抗原表位庚型肝炎 HGV

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利用重组痘苗病毒表达人 CD2 0基因

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免疫学杂志 2000年第5期16卷 325-327页

作者：洪海燕郭燕翔舒翠玲戚中田沈倍奋第二军医大学微生物学教研室上海200433 军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的获得重组人 CD2 0分子并研究编码人 CD2 0的基因在痘苗病毒中的表达。方法从 p GEM- T- EASY/ CD2 0载体上酶切下编码人 CD2 0分子的 c DNA,亚克隆到 p JSA1175载体上 ,重组质粒与野生痘苗病毒共转染 TK- 143细胞。结果APAAP检测到... 详细信息

目的获得重组人 CD2 0分子并研究编码人 CD2 0的基因在痘苗病毒中的表达。方法从 p GEM- T- EASY/ CD2 0载体上酶切下编码人 CD2 0分子的 c DNA,亚克隆到 p JSA1175载体上 ,重组质粒与野生痘苗病毒共转染 TK- 143细胞。结果APAAP检测到重组病毒感染的细胞表面有 CD2 0分子表达 ,富集后病毒滴度约为 1× 10 9pfu/ ml。结论人 CD2 0基因在痘苗病毒中表达。

关键词：人CD20基因重组痘苗病毒基因表达

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庚型肝炎病毒NS3蛋白在大肠杆菌中的表达

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中华微生物学和免疫学杂志 1999年第6期19卷 475-478页

作者：朱分禄任浩宋燕斌戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的　获取具备免疫反应原性的庚型肝炎病毒ＮＳ３抗原。方法　从重组质粒Ｉｗｑ２利用ＰＣＲ反应扩增出ＧＢＶＣ／ＨＧＶＮＳ３基因片段，克隆至表达载体ｐＰＲＯＥＸＨＴａ后进行核苷酸序列测定，待鉴定正确后经ＩＰＴＧ诱... 详细信息

目的　获取具备免疫反应原性的庚型肝炎病毒ＮＳ３抗原。方法　从重组质粒Ｉｗｑ２利用ＰＣＲ反应扩增出ＧＢＶＣ／ＨＧＶＮＳ３基因片段，克隆至表达载体ｐＰＲＯＥＸＨＴａ后进行核苷酸序列测定，待鉴定正确后经ＩＰＴＧ诱导重组工程菌，用ＳＤＳＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ对重组蛋白进行鉴定。结果　酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明成功地构建了重组工程菌ｐＨＴＮＳ３／ＤＨ５α且克隆的基因片段为ＧＢＶＣ／ＨＧＶＮＳ３基因片段。ＳＤＳＰＡＧＥ分析诱导表达产物发现在相对分子质量约４３８１０处有一条明显的蛋白表达带，占菌体总量的１７．７％。用ＮｉＮＴＡ亲和层析柱快捷地获得了纯化的重组蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定发现重组蛋白可与ＧＢＶＣ／ＨＧＶＲＮＡ阳性病人血清发生抗原抗体反应。结论　获得了具备免疫反应原性的ＧＢＶＣ／ＨＧＶＮＳ３抗原，该重组蛋白可用于ＧＢＶＣ／ＨＧＶ感染的检测。

关键词：庚型肝炎病毒 NS蛋白大肠杆菌表达

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