检索结果-内蒙古大学图书馆

解剖学杂志 2003年第3期26卷 203-208页

作者：向正华吕军蒋平焦炳华 Burnstock G 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 英国伦敦大学学院自主神经科学研究所

目的:观察大鼠脑外伤后嘌呤受体亚型P2X4的表达水平。方法:免疫组织化学和半定量RT-PCR。结果:脑外伤后P2X4受体表达水平迅速升高,并在损伤后较长的时间内维持高的表达水平;脑外伤早期,损伤区P2X4免疫反应阳性细胞主要是圆形细胞,中后... 详细信息

目的:观察大鼠脑外伤后嘌呤受体亚型P2X4的表达水平。方法:免疫组织化学和半定量RT-PCR。结果:脑外伤后P2X4受体表达水平迅速升高,并在损伤后较长的时间内维持高的表达水平;脑外伤早期,损伤区P2X4免疫反应阳性细胞主要是圆形细胞,中后期主要以具有突起的细胞为主。结论:脑外伤早期,损伤区P2X4受体免疫反应阳性细胞主要为小胶质细胞,中后期可能星形胶质细胞为多;由此推测P2X4参与脑外伤时大脑生理或病理生理功能的调节。

关键词：大鼠脑外伤嘌呤受体 P2X4 免疫组织化学细胞免疫反应 RT-PCR

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脊髓损伤后自主神经反射异常大鼠心脏和肠系膜前动脉α-肾上腺素能受体的表达

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第二军医大学学报 2006年第2期27卷 156-159页

作者：石学银邹最李盈科徐振东周运恒于军刘刚第二军医大学长征医院麻醉科上海200003 复旦大学附属华山医院麻醉科上海200040 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:观察高位脊髓横切(spinal cord transection,SCT)慢性期自主神经反射异常(autonomic dysreflexia,AD)大鼠心脏和肠系膜前动脉α-肾上腺素能受体(-αAR)各亚型mRNA表达量,探讨AD的可能机制。方法:暴露大鼠脊髓,横切T4节段,术后4周... 详细信息

目的:观察高位脊髓横切(spinal cord transection,SCT)慢性期自主神经反射异常(autonomic dysreflexia,AD)大鼠心脏和肠系膜前动脉α-肾上腺素能受体(-αAR)各亚型mRNA表达量,探讨AD的可能机制。方法:暴露大鼠脊髓,横切T4节段,术后4周用自制导管刺激直肠,观察升压反应,挑选发生AD的大鼠(AD组,n=16),取其心脏和肠系膜前动脉及其分支,实时定量PCR测定α1A-,α1B-,α1D-,α2A-,α2B-,α2C-AR mRNA的表达量,与只暴露脊髓、不进行横切的大鼠(假手术组,n=16)进行比较。结果:与假手术组相比,AD组大鼠心脏α1A-AR mRNA(P<0.05)、α1B-AR mRNA(P<0.01)表达下调,而α1D-ARmRNA表达量未见明显改变;肠系膜前动脉α1A、-α1D、-α2B-AR mRNA(P<0.01)、α2C-AR mRNA(P<0.05)表达上调,而α1B-、α2A-AR mRNA表达量未见明显改变。结论:大鼠SCT慢性期AD的发生可能与心脏α1A-、α1B-AR,肠系膜前动脉α1A-、α1D-、α2B-、α2C-AR的异常表达有关。

关键词：脊髓损伤自主神经反射异常受体肾上腺素能α 心脏肠系膜动脉基因表达

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人破骨细胞形成抑制因子成熟肽基因在大肠杆菌中的融合表达

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第二军医大学学报 2004年第10期25卷 1086-1089页

作者：张兴群王梁华袁勤生2 缪辉南焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 华东理工大学国家生物反应器中心上海200237

目的 :在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子 (osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)成熟肽基因。方法 :利用 PCR从人肝细胞文库中扩增得到 OCIF成熟肽编码基因序列 ,将其与 p MD18- T连接 ,转化大肠杆菌 K80 2 ,筛... 详细信息

目的 :在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子 (osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)成熟肽基因。方法 :利用 PCR从人肝细胞文库中扩增得到 OCIF成熟肽编码基因序列 ,将其与 p MD18- T连接 ,转化大肠杆菌 K80 2 ,筛选得到阳性重组克隆载体 p MD18- OCIFm,双酶切重组克隆质粒 p MD18- OCIFm得到 OCIF成熟肽基因 ,将其定向插入p MAL- c2载体中 ,转化大肠杆菌 TB1。筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达。结果 :所获得的 OCIF成熟肽基因编码序列经测序与 Gen Bank报道的完全一致。所表达的产物经 SDS- PAGE分析可见在相对分子质量 80 0 0 0处出现一条特殊条带 ,与预期的相对分子质量一致。Western印迹证实了表达产物的正确。表达产物在高剂量 (>12 0 ng/L)时可诱导体外培养小鼠成熟破骨细胞的凋亡。结论 :成功获得了人 OCIF成熟肽基因的克隆并实现了其在大肠杆菌中的融合表达。

关键词：破骨细胞形成抑制因子基因克隆融合蛋白

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βB2晶体蛋白基因敲除小鼠模型的建立

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第二军医大学学报 2006年第11期27卷 1246-1248页

作者：张军黄才国李闻捷 Wei Weng 汪佳祺第二军医大学长海医院中心实验室上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 美国inGenious Targeting Laboratory Inc．纽约11790—3350

目的:建立βB2晶体蛋白基因敲除小鼠模型。方法:采用美国iGTL实验室的技术构建打靶载体,建立基因敲除小鼠模型。采用PCR对小鼠基因型进行鉴定,Western印迹法对晶体蛋白的表达进行鉴定。结果:PCR成功检测出3种基因型;纯合子基因敲除的小... 详细信息

目的:建立βB2晶体蛋白基因敲除小鼠模型。方法:采用美国iGTL实验室的技术构建打靶载体,建立基因敲除小鼠模型。采用PCR对小鼠基因型进行鉴定,Western印迹法对晶体蛋白的表达进行鉴定。结果:PCR成功检测出3种基因型;纯合子基因敲除的小鼠未检测到βB2晶体蛋白的表达。结论:成功构建了βB2晶体蛋白基因敲除的小鼠模型。

关键词： β晶体蛋白小鼠基因敲除

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贻贝水溶性多糖MP-Ⅰ的分离纯化及体外抗肿瘤活性研究

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第二军医大学学报 2006年第9期27卷 998-1001页

作者：徐红丽郭婷婷郭一峰张建鹏冯伟华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 上海水产大学生命学院中心实验室上海200090

目的:分离纯化贻贝多糖MP-Ⅰ,并进行体外抗肿瘤活性的研究。方法:采用热水提取,Sevage法除蛋白分离得粗多糖,DEAE-Sepharose、Sepharose CL-6B柱层析纯化的方法从东海厚壳贻贝中得到贻贝多糖纯品MP-Ⅰ。用GC及TLC法进行单糖组分的分析,... 详细信息

目的:分离纯化贻贝多糖MP-Ⅰ,并进行体外抗肿瘤活性的研究。方法:采用热水提取,Sevage法除蛋白分离得粗多糖,DEAE-Sepharose、Sepharose CL-6B柱层析纯化的方法从东海厚壳贻贝中得到贻贝多糖纯品MP-Ⅰ。用GC及TLC法进行单糖组分的分析,用MTT法进行体外抗肿瘤活性的研究。结果:得到贻贝多糖纯品MP-Ⅰ,多糖的得率为2.14%。单糖组分分析显示MP-Ⅰ主要由葡萄糖组成,MP-Ⅰ(0.5,0.1,0.02 mg/ml)对体外HO-8910、MCF-7、K562、SMMC-7721肿瘤细胞均有不同程度抑制作用(P<0.01),其中高浓度组对HO-8910、MCF-7肿瘤细胞的抑制率分别达到30.55%和36.38%。结论:贻贝多糖MP-Ⅰ主要由葡萄糖组成,对HO-8910、MCF-7、K562、SMMC-7721肿瘤细胞有体外抑制作用。

关键词：贻贝多糖类分离和提纯抗肿瘤药

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SMO液对低温下肾皮质线粒体功能的保护作用

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第二军医大学学报 2006年第2期27卷 196-199页

作者：牛强朱有华缪明永杨军昌张纯第二军医大学长征医院全军器官移植研究所上海200003 基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长征医院药学部

目的：探讨自制上海多器官保存液（SMO液）对肾皮质线粒体低温缺氧损伤的保护作用。方法：以HC-A液和UW液作对照，在犬肾低温保存各时间点，取皮质标本；通过电镜观察保存期间线粒体形态改变；差速离心法分离皮质线粒体，Clark氧电极法... 详细信息

目的：探讨自制上海多器官保存液（SMO液）对肾皮质线粒体低温缺氧损伤的保护作用。方法：以HC-A液和UW液作对照，在犬肾低温保存各时间点，取皮质标本；通过电镜观察保存期间线粒体形态改变；差速离心法分离皮质线粒体，Clark氧电极法测定其活性，描记四态呼吸曲线，计算Ⅲ态、Ⅳ态耗氧速率、线粒体呼吸控制率（RCR）及磷氧比（P／O）。结果：低温保存期间，HC-A组肾皮质线粒体水肿、空泡样变明显重于SMO组和UW组，而后两者改变相似；随着低温保存时间延长，实验组和对照组肾皮质线粒体Ⅲ态呼吸耗氧速率、RCR和P／0均明显降低；保存1～3dHC-A组Ⅲ态呼吸耗氧速率显著低于SMO组（P〈0．05）；保存各时间点SMO组线粒体RCR和P／O显著高于HC-A组（P〈0．05），与UW组无明显差异。结论：SMO液对肾皮质线粒体低温缺氧损伤的保护作用比HC-A液强，与UW液相似。

关键词：器官保存液低温保存缺氧肾皮质线粒体保护作用

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PTEN基因突变与遗传性癌症综合征及其相关疾病的研究进展

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第二军医大学学报 2005年第1期26卷 90-92页

作者：刘玉环王锡智蔡在龙俞超芹崔英沙金燕第二军医大学长海医院妇产科上海200433 长海医院泌尿外科基础医学部生物化学与分子生物学教研室长海医院中医科

PTEN基因是具有双重特异性磷酸酶功能的抑癌基因,其脂质磷酸酶活性降调PKB/Akt信号转导,使细胞周期阻滞在G1期,诱导其凋亡。已证实在人类许多恶性肿瘤中存在体细胞PTEN基因突变,如神经胶质细胞瘤、子宫内膜癌、前列腺癌、肾癌、乳腺癌... 详细信息

PTEN基因是具有双重特异性磷酸酶功能的抑癌基因,其脂质磷酸酶活性降调PKB/Akt信号转导,使细胞周期阻滞在G1期,诱导其凋亡。已证实在人类许多恶性肿瘤中存在体细胞PTEN基因突变,如神经胶质细胞瘤、子宫内膜癌、前列腺癌、肾癌、乳腺癌等。近年来的研究发现,PTEN基因种系突变与人类多种遗传性癌症综合征有关。本文概括介绍了PTEN基因种系突变与人类遗传性癌症综合征及其相关疾病的关系,重点介绍了考登综合征(Cowden syndrome, CS)、Bannayan Ri ley Ruvalcaba syndrome(BRRS)、Proteus syndrome (PS)、Proteus like syndromes(PS like)等疾病。随着对这些综合征认识的加深,应用基因突变分析作为分子诊断工具,将有可能对这些患者极其家庭成员进行疾病的早期诊断及必要的癌症监测。

关键词： PTEN基因基因突变遗传性癌症综合征

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可溶性TRAIL蛋白的高密度培养及补料策略研究

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生物工程学报 2004年第3期20卷 408-413页

作者：章越沈亚领夏小霞孙爱友魏东芝周劲松张国钧王梁华焦炳华华东理工大学生物化学研究所生物反应器工程国家重点实验室上海200237 上海恰尔生物技术有限公司上海200336 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

采用分批补料的方法高密度培养重组大肠杆菌C6 0 0 pBV TRAIL制备人可溶性TRAIL蛋白 ,优化发酵工艺 ,探索简单高效的分离纯化方法并测定蛋白生物活性。通过比较几种不同的补料策略 :间歇流加、DO stat、pH stat,摸索了一种流加策略 ,即... 详细信息

采用分批补料的方法高密度培养重组大肠杆菌C6 0 0 pBV TRAIL制备人可溶性TRAIL蛋白 ,优化发酵工艺 ,探索简单高效的分离纯化方法并测定蛋白生物活性。通过比较几种不同的补料策略 :间歇流加、DO stat、pH stat,摸索了一种流加策略 ,即DO stat pH stat组合流加 ,有效的避免了发酵过程中 ,尤其是诱导表达阶段乙酸积累的增加 ,使TRAIL蛋白在高密度培养条件下 ,得到高效表达。菌体密度最终达到 30 0g L(WCW )以上 ,可溶性TRAIL蛋白占菌体总蛋白的 4 2 % ,含量为 1 1g L。在整个发酵过程中 ,乙酸浓度接近于 0 ,且未使用任何特殊手段 ,如纯氧、加压等 ,简化了发酵工艺 ,降低了发酵成本 ,为TRAIL的工业化生产创造了条件。

关键词：重组大肠杆菌分批补料发酵 TRAIL 分离纯化

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丹参总酚酸抑制大鼠肾间质纤维化的初步观察

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第二军医大学学报 2006年第12期27卷 1295-1298页

作者：尚雁君黄才国蒋山好朱大元魏善建焦炳华李锴男张建荣第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室上海200433 中国科学院上海药物研究所上海201203 第四军医大学基础医学部病理学教研室西安710033 第二军医大学长海医院实验诊断科上海200433

目的观察丹参总酚酸对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。方法将40只健康、雄性SD大鼠随机分为4组分别为UUO组、假手术组(SOR)、阳性对照依那普利(ACEI)组和丹参总酚酸样品(TSA)组,术前分别给UUO组和SOR组灌生理盐水,ACEI组... 详细信息

目的观察丹参总酚酸对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。方法将40只健康、雄性SD大鼠随机分为4组分别为UUO组、假手术组(SOR)、阳性对照依那普利(ACEI)组和丹参总酚酸样品(TSA)组,术前分别给UUO组和SOR组灌生理盐水,ACEI组和丹参总酚酸组分别灌胃ACEI[6mg/(kg·d)]和丹参总酚酸[20mg/(kg·d)],连续8d。术后第7天分别处死各组大鼠用免疫组织化学方法测定TGF-β1的表达情况。行H-E和Masson染色,动态观察肾间质病理学改变。结果丹参总酚酸组和ACEI组TGF-β1的表达量与模型组(0.22±0.06)比较有明显的下降(P<0.05),结果分别是1.38±0.26和1.38±0.26。丹参总酚酸能显著减少UUO大鼠肾小管间质TGF-β1的表达,减轻胶原在肾间质的沉积,改善了肾脏病理改变。结论丹参总酚酸对UUO所致的大鼠肾脏纤维化的形成有明显的抑制作用,其作用可能跟降低TGF-β1的表达有关。

关键词：丹参总酚酸肾间质纤维化转化生长因子β1

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携带野生型PTEN基因的重组腺病毒治疗子宫内膜癌的体外研究

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第二军医大学学报 2005年第9期26卷 997-1001页

作者：刘玉环杨培丽蔡在龙崔英俞超琴王锡智惠宁古航沙金燕第二军医大学长海医院妇产科上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长海医院中医科长海医院泌尿外科

目的:观察携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)体外转染子宫内膜癌细胞后的表达,并探讨其对肿瘤细胞产生抑制增殖、诱导凋亡的作用及机制。方法:细菌内同源重组方法构建Ad-PTEN,体外转染PTEN基因突变的子宫内膜腺癌RL95-2细胞中,X-... 详细信息

目的:观察携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)体外转染子宫内膜癌细胞后的表达,并探讨其对肿瘤细胞产生抑制增殖、诱导凋亡的作用及机制。方法:细菌内同源重组方法构建Ad-PTEN,体外转染PTEN基因突变的子宫内膜腺癌RL95-2细胞中,X-gal染色检测转染效率。应用RT-PCR、Western印迹、细胞免疫组化检测Ad-PTEN在RL95-2细胞中的转录及表达;应用细胞计数、MTT实验,观察Ad-PTEN对RL95-2细胞生长的影响;应用光镜、透射电镜观察外源性PTEN基因表达对RL95-2细胞形态学及超微结构的影响;应用流式细胞分析仪(FCM)检测Ad-PTEN对RL95-2细胞周期分布的影响、凋亡诱导作用及半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶casapase-3的激活。结果:外源性野生型PTEN基因经腺病毒介导成功转入RL95-2细胞,3种方法均检测出有PTENmRNA及PTEN蛋白的表达,当感染复数(MOI)为50时,体外转染效率达到100%。Ad-PTEN显著抑制RL95-2细胞生长并诱导其凋亡。此外,Ad-PTEN还能诱导RL95-2细胞周期G0/G1期阻滞以及caspase-3的激活。结论:重组腺病毒Ad-PTEN是高效的基因转移系统,能将PTEN目的基因转移到丧失该基因功能的子宫内膜癌RL95-2细胞中,对RL95-2细胞产生强有力的生长抑制及凋亡诱导作用,其机制可能包括细胞周期G0/G1阻滞及caspase-3蛋白酶的激活。

关键词：子宫内膜癌基因治疗 PTEN基因腺病毒细胞周期细胞凋亡体外研究

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