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第二军医大学学报 2005年第10期26卷 1136-1139页

作者：龙建纲王学敏高宏翔刘志缪明永刘健康中国科学院营养科学研究所上海200031 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:观察黄素单核苷酸(FMN)对羟自由基(OH·)损伤线粒体酶复合物1(complexⅠ)的作用,分析FMN与complexⅠ的相互作用机制。方法:差速离心法分离大鼠肝线粒体,OH·体外损伤线粒体,氧电极法测定线粒体耗氧速率,比色法检测线粒体co... 详细信息

目的:观察黄素单核苷酸(FMN)对羟自由基(OH·)损伤线粒体酶复合物1(complexⅠ)的作用,分析FMN与complexⅠ的相互作用机制。方法:差速离心法分离大鼠肝线粒体,OH·体外损伤线粒体,氧电极法测定线粒体耗氧速率,比色法检测线粒体complexⅠ动力学参数及线粒体内MDA、GSH含量及SOD活性。结果:OH·损伤后,线粒体3态、4态(state3,state4)耗氧速率、complexⅠ最大反应速度(Vm)降低(P<0.05),但呼吸控制率(respiratorycontrolratio,RCR)、磷氧比(P/O)及complexⅠ米氏常数(Km)不变,线粒体中GSH含量下降(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05),MDA含量升高。损伤线粒体补充FMN165ng/ml可部分恢复complexⅠ呼吸途径state3耗氧速率(P<0.05),补充FMN82.5～165ng/mg可显著提高OH·损伤的线粒体复合物Ⅰ的Vm(P<0.05)。损伤线粒体补充较低剂量的FMN(FMN<82.5ngFMN/ml),线粒体中GSH、SOD、MDA含量不发生变化,在补充较高剂量FMN(>165ngFMN/ml)时,SOD活性升高(P<0.05),但线粒体MDA含量升高(P<0.05)、GSH含量下降(P<0.05)。结论:FMN能够提高氧化损伤线粒体复合物Ⅰ活性,促进complexⅠ呼吸途径的state3耗氧速率。FMN不能直接清除OH·及自由基,可能通过保护complexⅠ中的酶结合/活性位点免受OH·等自由基攻击从而维持酶活性。

关键词：黄素单核苷酸羟自由基肝线粒体酶复合物Ⅰ

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丙二醛对大鼠肝线粒体呼吸功能及相关脱氢酶活性影响

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第二军医大学学报 2005年第10期26卷 1131-1135页

作者：龙建纲王学敏高宏翔刘昌盛刘志缪明永刘健康中国科学院营养科学研究所上海200031 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:探索脂质氧化终产物丙二醛(MDA)在体外对线粒体呼吸链复合物及线粒体内关键酶活性的影响。方法:采用不同浓度MDA体外干预大鼠肝线粒体,氧电极法检测线粒体呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O),测定呼吸链复合物及α酮戊二酸脱氢酶、丙酮... 详细信息

目的:探索脂质氧化终产物丙二醛(MDA)在体外对线粒体呼吸链复合物及线粒体内关键酶活性的影响。方法:采用不同浓度MDA体外干预大鼠肝线粒体,氧电极法检测线粒体呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O),测定呼吸链复合物及α酮戊二酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶活性。结果:线粒体经MDA作用后,以苹果酸/谷氨酸或琥珀酸作底物,线粒体两条呼吸途径对MDA呈现不同的耐受力,前者在MDA100μmol/L时RCR显著降低(P<0.05),400μmol/L时P/O降低(P<0.05);后者MDA浓度达到400和800μmol/L时,线粒体P/O及RCR值显著降低(P<0.05)。丙酮酸脱氢酶及α酮戊二酸脱氢酶分别在50μmol/L和100μmol/L时活性下降(P<0.05),而MDA浓度达到1mmol/L时,苹果酸脱氢酶活性降低(P<0.05)。呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ分别在MDA400和800μmol/L时最大反应速度(Vm)降低(P<0.05),但MDA(0～3.2mmol/L)对呼吸链复合物Ⅲ、Ⅳ的Vm及米氏常数(Km)没有影响。结论:MDA对线粒体呼吸链及α酮戊二酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶存在不同程度的损伤作用,不同酶对MDA损伤的敏感程度有所差异,本研究中相关酶受MDA损伤的次序可能是:丙酮酸脱氢酶、α酮戊二酸脱氢酶、呼吸链复合物Ⅰ、呼吸链复合物Ⅱ、苹果酸脱氢酶、呼吸链复合物Ⅲ、Ⅳ。

关键词：丙二醛肝线粒体脱氢酶

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携带野生型PTEN基因的重组腺病毒治疗子宫内膜癌的体内研究

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第二军医大学学报 2005年第9期26卷 1002-1005页

作者：刘玉环崔英杨培丽蔡在龙俞超琴王锡智惠宁古航石书芳第二军医大学长海医院妇产科上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长海医院中医科长海医院泌尿外科

目的:探讨携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)进行子宫内膜癌基因治疗的可行性.方法:BALB/c裸鼠随机分3组,每组8只, 以空载体Ad-CMV转染或未转染作为对照组,观察Ad-PTEN体外转染后体内接种对子宫内膜癌细胞致瘤能力的影响.应用La... 详细信息

目的:探讨携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)进行子宫内膜癌基因治疗的可行性.方法:BALB/c裸鼠随机分3组,每组8只, 以空载体Ad-CMV转染或未转染作为对照组,观察Ad-PTEN体外转染后体内接种对子宫内膜癌细胞致瘤能力的影响.应用LacZ 作为报告基因,X-gal染色检测Ad-PTEN 体内转染效率.皮下荷人子宫内膜癌BALB/c裸鼠15只,随机分为对照组、Ad-CMV组及Ad-PTEN治疗组,每组5只,每只裸鼠皮下有2个移植瘤.待皮下移植瘤长至4～5 mm时,治疗组Ad-PTEN肿瘤内注射,每个移植瘤5×108 pfu/100 μl,隔日1次,共3次,观察裸鼠肿瘤体积的变化及有无不良反应,最后1次治疗后15 d处死裸鼠,取肿瘤组织及治疗组裸鼠肝脏病理检查.结果:Ad-PTEN体外转染子宫内膜癌RL 95-2细胞,子宫内膜癌细胞致瘤能力完全抑制,裸鼠成瘤率为0;而空载体转染组和PBS对照组裸鼠成瘤率均为100%.重组腺病毒在裸鼠体内具有较高的转染效率,Ad-CMV-LacZ肿瘤内注射后96 h,转染效率可达到80%. Ad-PTEN肿瘤内注射可使裸鼠皮下移植瘤生长速度显著减慢,肿瘤体积较对照组明显缩小(P<0.05),Ad-PTEN基因治疗未发现明显不良反应. 结论:PTEN基因治疗有可能成为子宫内膜癌非手术治疗的一个新方法,具有潜在的应用价值.

关键词：子宫内膜癌 PTEN 基因治疗裸鼠体内研究

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利用真菌分生孢子筛选抗真菌活性的海洋微生物

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第二军医大学学报 2005年第11期26卷 1300-1301页

作者：宋志刚许强芝鲁心安刘小宇杨妤艾峰焦炳华华东师范大学生命科学学院上海200062 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:建立筛选抗真菌活性化合物的96孔板方法,筛选海洋活性菌株。方法:利用96孔板培养真菌孢子,将样品加入到真菌培养基中,在适宜条件下培养,通过显微镜来检测菌丝的生长情况,判断样品是否有抗真菌活性,筛选活性菌株。结果:通过对我国... 详细信息

目的:建立筛选抗真菌活性化合物的96孔板方法,筛选海洋活性菌株。方法:利用96孔板培养真菌孢子,将样品加入到真菌培养基中,在适宜条件下培养,通过显微镜来检测菌丝的生长情况,判断样品是否有抗真菌活性,筛选活性菌株。结果:通过对我国东海海洋微生物的筛选,从541株微生物中找到了25株具有抗黄瓜黑星病菌的活性菌株。结论:本生物检测模型方便、快速、费用低,并且可以进行高通量筛选、相关性好,是一种抗真菌天然产物的理想筛选模型。

关键词：抗真菌药黄瓜黑星病菌筛选

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PTEN基因突变与遗传性癌症综合征及其相关疾病的研究进展

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第二军医大学学报 2005年第1期26卷 90-92页

作者：刘玉环王锡智蔡在龙俞超芹崔英沙金燕第二军医大学长海医院妇产科上海200433 长海医院泌尿外科基础医学部生物化学与分子生物学教研室长海医院中医科

PTEN基因是具有双重特异性磷酸酶功能的抑癌基因,其脂质磷酸酶活性降调PKB/Akt信号转导,使细胞周期阻滞在G1期,诱导其凋亡。已证实在人类许多恶性肿瘤中存在体细胞PTEN基因突变,如神经胶质细胞瘤、子宫内膜癌、前列腺癌、肾癌、乳腺癌... 详细信息

PTEN基因是具有双重特异性磷酸酶功能的抑癌基因,其脂质磷酸酶活性降调PKB/Akt信号转导,使细胞周期阻滞在G1期,诱导其凋亡。已证实在人类许多恶性肿瘤中存在体细胞PTEN基因突变,如神经胶质细胞瘤、子宫内膜癌、前列腺癌、肾癌、乳腺癌等。近年来的研究发现,PTEN基因种系突变与人类多种遗传性癌症综合征有关。本文概括介绍了PTEN基因种系突变与人类遗传性癌症综合征及其相关疾病的关系,重点介绍了考登综合征(Cowden syndrome, CS)、Bannayan Ri ley Ruvalcaba syndrome(BRRS)、Proteus syndrome (PS)、Proteus like syndromes(PS like)等疾病。随着对这些综合征认识的加深,应用基因突变分析作为分子诊断工具,将有可能对这些患者极其家庭成员进行疾病的早期诊断及必要的癌症监测。

关键词： PTEN基因基因突变遗传性癌症综合征

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携带野生型PTEN基因的重组腺病毒治疗子宫内膜癌的体外研究

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第二军医大学学报 2005年第9期26卷 997-1001页

作者：刘玉环杨培丽蔡在龙崔英俞超琴王锡智惠宁古航沙金燕第二军医大学长海医院妇产科上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长海医院中医科长海医院泌尿外科

目的:观察携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)体外转染子宫内膜癌细胞后的表达,并探讨其对肿瘤细胞产生抑制增殖、诱导凋亡的作用及机制。方法:细菌内同源重组方法构建Ad-PTEN,体外转染PTEN基因突变的子宫内膜腺癌RL95-2细胞中,X-... 详细信息

目的:观察携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)体外转染子宫内膜癌细胞后的表达,并探讨其对肿瘤细胞产生抑制增殖、诱导凋亡的作用及机制。方法:细菌内同源重组方法构建Ad-PTEN,体外转染PTEN基因突变的子宫内膜腺癌RL95-2细胞中,X-gal染色检测转染效率。应用RT-PCR、Western印迹、细胞免疫组化检测Ad-PTEN在RL95-2细胞中的转录及表达;应用细胞计数、MTT实验,观察Ad-PTEN对RL95-2细胞生长的影响;应用光镜、透射电镜观察外源性PTEN基因表达对RL95-2细胞形态学及超微结构的影响;应用流式细胞分析仪(FCM)检测Ad-PTEN对RL95-2细胞周期分布的影响、凋亡诱导作用及半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶casapase-3的激活。结果:外源性野生型PTEN基因经腺病毒介导成功转入RL95-2细胞,3种方法均检测出有PTENmRNA及PTEN蛋白的表达,当感染复数(MOI)为50时,体外转染效率达到100%。Ad-PTEN显著抑制RL95-2细胞生长并诱导其凋亡。此外,Ad-PTEN还能诱导RL95-2细胞周期G0/G1期阻滞以及caspase-3的激活。结论:重组腺病毒Ad-PTEN是高效的基因转移系统,能将PTEN目的基因转移到丧失该基因功能的子宫内膜癌RL95-2细胞中,对RL95-2细胞产生强有力的生长抑制及凋亡诱导作用,其机制可能包括细胞周期G0/G1阻滞及caspase-3蛋白酶的激活。

关键词：子宫内膜癌基因治疗 PTEN基因腺病毒细胞周期细胞凋亡体外研究

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海洋微生物抗肿瘤研究进展

海洋微生物抗肿瘤研究进展

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中国海洋生化学术会议

作者：杨妤许强芝焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

自从美国1967年提出“向海洋寻求药物”的口号,“蓝色药物”引起了各国的重视,短短几十年便有一万多种新化合物被发现,其中两百多种已申请专利,最初研究的焦点主要在海藻和软体动物身上,并且得到了许多极具潜力的先导化合物,但海洋动植... 详细信息

自从美国1967年提出“向海洋寻求药物”的口号,“蓝色药物”引起了各国的重视,短短几十年便有一万多种新化合物被发现,其中两百多种已申请专利,最初研究的焦点主要在海藻和软体动物身上,并且得到了许多极具潜力的先导化合物,但海洋动植物资源有限,分离纯化复杂,难以工业化生产等弊端一直是阻碍海洋药物研究进一步开展的棘手问题,而海洋中种类最为多样的海洋微生物以其代谢产物多样和可培养逐渐吸引研究者的目光,尤其在抗肿瘤活性方面。有学者预言最有前途的抗肿瘤药物来自海洋,而海洋微生物在此领域有着巨大的潜力。

关键词：海洋微生物细胞毒性细胞毒作用化合物细胞毒活性肿瘤研究环缩二氨酸活性物质次级代谢产物乳腺肿瘤细胞海洋链霉菌人淋巴瘤细胞海洋细菌

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鲨鱼肝刺激物对大鼠急性肝损伤和肝脏线粒体功能的影响

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第二军医大学学报 2005年第5期26卷 531-534页

作者：范秋领黄才国金艳冯波李闻捷魏善建缪辉南焦炳华袁勤生华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的研究鲨鱼肝刺激物(sHSS)对硫代乙酰胺(TAA)所致大鼠急性肝损伤和肝线粒体功能的影响。方法雄性SD大鼠,体质量(200±20)g,随机分3组对照组、模型组、治疗组,每组8只。以400mg/kgTAA2次腹腔注射建立大鼠急性肝损伤模型,治疗组在注... 详细信息

目的研究鲨鱼肝刺激物(sHSS)对硫代乙酰胺(TAA)所致大鼠急性肝损伤和肝线粒体功能的影响。方法雄性SD大鼠,体质量(200±20)g,随机分3组对照组、模型组、治疗组,每组8只。以400mg/kgTAA2次腹腔注射建立大鼠急性肝损伤模型,治疗组在注射TAA前1h腹腔注射80mg/kgsHSS,对照组注射等体积的生理盐水,24h后观察大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性和肝中丙二醛(MDA)含量的变化,以及TAA和sHSS对肝线粒体呼吸功能、线粒体肿胀和膜电位的影响。结果治疗组大鼠血清中ALT、AST的水平明显低于模型组,而模型组MDA含量明显高于治疗组和正常组(P<0.05);治疗组大鼠肝脏线粒体ADP诱导的3态氧消耗、呼吸控制率(RCR)、氧化磷酸化率(OPR)明显高于TAA模型组(P<0.05);注射TAA和sHSS后,线粒体肿胀和跨膜电位没有明显的变化。结论sHSS能明显抑制TAA造成的急性肝损伤和脂质过氧化,改善因TAA而受损的线粒体呼吸功能。

关键词：硫代乙酰胺鲨鱼肝刺激物肝损伤脂质过氧化线粒体功能

来源：评论

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鲨鱼肝提取物促肝细胞增殖及对大鼠肝细胞线粒体的保护作用

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中国海洋药物 2005年第5期24卷 15-17页

作者：金艳黄才国范秋领冯波第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的研究鲨鱼肝提取物的促肝细胞增殖及对线粒体的保护作用。方法利用[3H]-TdR掺入的方法,测定HepG2细胞的增殖指数;利用D-半乳糖建立大鼠急性肝损伤模型,提取肝脏细胞线粒体,测定以苹果酸-谷氨酸,琥珀酸为底物,ADP诱导的氧消耗、呼吸... 详细信息

目的研究鲨鱼肝提取物的促肝细胞增殖及对线粒体的保护作用。方法利用[3H]-TdR掺入的方法,测定HepG2细胞的增殖指数;利用D-半乳糖建立大鼠急性肝损伤模型,提取肝脏细胞线粒体,测定以苹果酸-谷氨酸,琥珀酸为底物,ADP诱导的氧消耗、呼吸控制率(RCR)、ADP/O、氧化磷酸化率(OPR)等指标。结果与结论鲨鱼肝提取物能够提高肝源细胞的增殖指数并对线粒体具有明显的保护作用。

关键词： D-半乳糖急性肝损伤线粒体

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鲨鱼肝刺激物的促肝细胞增殖和抗小鼠急性肝损伤作用

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第二军医大学学报 2005年第2期26卷 227-228页

作者：范秋领金艳黄才国冯波魏善建缪辉南焦炳华袁勤生华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

肝刺激物(hepatic stimulator substance,HSS)是从初断乳大鼠肝和部分肝切除后的再生肝中发现的一种肝脏刺激因子,它存在于新生肝和再生肝的肝细胞胞液中,能刺激肝细胞有丝分裂,促进肝细胞再生和肝细胞DNA的合成.与其他肝细胞因子不同,... 详细信息

肝刺激物(hepatic stimulator substance,HSS)是从初断乳大鼠肝和部分肝切除后的再生肝中发现的一种肝脏刺激因子,它存在于新生肝和再生肝的肝细胞胞液中,能刺激肝细胞有丝分裂,促进肝细胞再生和肝细胞DNA的合成.与其他肝细胞因子不同,HSS的作用只有组织特异性,而没有种属特异性,目前已从猪、狗、兔等多种动物的乳肝组织及人胎肝组织提取出HSS.大量研究证明,从哺乳动物提取的HSS对CCl4、D-(+)-氨基半乳糖、硫代乙酰胺(TAA)、乙醇造成的大鼠急性肝损伤有明显的保护作用[1,2].研究表明鲨鱼组织提取物有可能用于提高和改善人类机体免疫状况[3].本文探讨了其对小鼠急性肝损伤的影响.

关键词：肝刺激物肝细胞增殖急性肝损伤

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