检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2004年第8期25卷 862-864页

作者：彭艳郑颖蒋平何玮侯彦强周聪郭春香倪健焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 上海富纯中南生物技术有限公司上海201203 第二军医大学长征医院实验诊断科上海200003

目的:建立一种利用二维液相色谱法分离肿瘤细胞全细胞裂解液的方法。方法:将肿瘤细胞裂解样品用初始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,然后先对二维色谱条件进行优化和重现性分析,再将一维收集的pH值8.5-4.0之间的组分分别进行二维反... 详细信息

目的:建立一种利用二维液相色谱法分离肿瘤细胞全细胞裂解液的方法。方法:将肿瘤细胞裂解样品用初始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,然后先对二维色谱条件进行优化和重现性分析,再将一维收集的pH值8.5-4.0之间的组分分别进行二维反相HPLC分离,利用ProteoVue软件将UV图转换成胶图。结果:一维色谱聚焦分离pH值8.5-4.0之间的组分共收集到16个,每个组分的二维UV图转换成pI／UV胶图。结论:二维液相色谱分离法是一种有效的分离肿瘤细胞裂解液的方法。

关键词：蛋白质组肿瘤细胞二维液相色谱分离

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丙二醛对大鼠肝线粒体呼吸功能及相关脱氢酶活性影响

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第二军医大学学报 2005年第10期26卷 1131-1135页

作者：龙建纲王学敏高宏翔刘昌盛刘志缪明永刘健康中国科学院营养科学研究所上海200031 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:探索脂质氧化终产物丙二醛(MDA)在体外对线粒体呼吸链复合物及线粒体内关键酶活性的影响。方法:采用不同浓度MDA体外干预大鼠肝线粒体,氧电极法检测线粒体呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O),测定呼吸链复合物及α酮戊二酸脱氢酶、丙酮... 详细信息

目的:探索脂质氧化终产物丙二醛(MDA)在体外对线粒体呼吸链复合物及线粒体内关键酶活性的影响。方法:采用不同浓度MDA体外干预大鼠肝线粒体,氧电极法检测线粒体呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O),测定呼吸链复合物及α酮戊二酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶活性。结果:线粒体经MDA作用后,以苹果酸/谷氨酸或琥珀酸作底物,线粒体两条呼吸途径对MDA呈现不同的耐受力,前者在MDA100μmol/L时RCR显著降低(P<0.05),400μmol/L时P/O降低(P<0.05);后者MDA浓度达到400和800μmol/L时,线粒体P/O及RCR值显著降低(P<0.05)。丙酮酸脱氢酶及α酮戊二酸脱氢酶分别在50μmol/L和100μmol/L时活性下降(P<0.05),而MDA浓度达到1mmol/L时,苹果酸脱氢酶活性降低(P<0.05)。呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ分别在MDA400和800μmol/L时最大反应速度(Vm)降低(P<0.05),但MDA(0～3.2mmol/L)对呼吸链复合物Ⅲ、Ⅳ的Vm及米氏常数(Km)没有影响。结论:MDA对线粒体呼吸链及α酮戊二酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶存在不同程度的损伤作用,不同酶对MDA损伤的敏感程度有所差异,本研究中相关酶受MDA损伤的次序可能是:丙酮酸脱氢酶、α酮戊二酸脱氢酶、呼吸链复合物Ⅰ、呼吸链复合物Ⅱ、苹果酸脱氢酶、呼吸链复合物Ⅲ、Ⅳ。

关键词：丙二醛肝线粒体脱氢酶

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高密度培养大肠杆菌TG1/pGEX-hCT和高表达重组人降钙素

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第二军医大学学报 2000年第3期21卷 213-215页

作者：窦鸿李民毛积芳陈常庆第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 中国科学院上海生物工程研究中心

目的 :高密度、高表达培养重组大肠杆菌 TG1/p GEX- h CT,生产重组人降钙素 (rh CT)。方法和结果 :应用 NBSBio Flo30 0 0型 5 L 自控发酵罐 ,采用分批培养和补料分批培养相结合的培养技术 ,控制碳源和氮源的补加 ,控制溶解氧 ,使重组... 详细信息

目的 :高密度、高表达培养重组大肠杆菌 TG1/p GEX- h CT,生产重组人降钙素 (rh CT)。方法和结果 :应用 NBSBio Flo30 0 0型 5 L 自控发酵罐 ,采用分批培养和补料分批培养相结合的培养技术 ,控制碳源和氮源的补加 ,控制溶解氧 ,使重组菌 *** TG1/p GEX- h CT发酵光密度 [D(6 0 0 ) ]达到 5 8.6 ,人降钙素和 GST融合蛋白 (GST- h CT)的含量达到 3.2 g/L。结论 :本研究为工业化生产重组 h CT奠定了基础。

关键词：降钙素多肽激素大肠杆菌 TG1/pGEX-hCT

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血管内皮生长因子基因治疗兔下肢缺血的实验研究

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第二军医大学学报 2000年第5期21卷 447-449页

作者：顾洪陈少萍张电波王官将毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长海医院心血管内科长征医院放射科

目的 :了解血管内皮生长因子 (VEGF)基因治疗兔下肢缺血模型后新生血管和侧支循环形成状况。方法 :构建h VEGF1 6 5 的真核表达载体 ,通过直接肌肉注射将 h VEGF1 6 5 基因转染缺血部位肌细胞 ,经颈总动脉插管行下肢血管造影。结果 :V... 详细信息

目的 :了解血管内皮生长因子 (VEGF)基因治疗兔下肢缺血模型后新生血管和侧支循环形成状况。方法 :构建h VEGF1 6 5 的真核表达载体 ,通过直接肌肉注射将 h VEGF1 6 5 基因转染缺血部位肌细胞 ,经颈总动脉插管行下肢血管造影。结果 :VEGF治疗组在质粒转染后 2和 4周动脉血管造影显示 ,新生血管数目和侧枝血管形成较对照组明显增加。结论 :肌细胞能够吸收裸露的 VEGF c DNA质粒并获得局部高效表达。

关键词：侧支循环血管内皮生长因子基因治疗下肢缺血

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人线粒体tRNA^(Leu(UUR))基因A3243G点突变对其亮氨酰化活性的影响

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遗传 2003年第4期25卷 383-387页

作者：汪振诚王学敏金由辛缪明永韩伟国焦炳华中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

化学法合成人线粒体野生型与A3243G点突变型tRNA^(Leu(UUR))基因,体外转录生成相应的tRNA^(Leu(UUR)),表达并纯化人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS),用mtLeuRS催化野生型与突变型tRNA^(Leu(UUR))与亮氨酸结合,分别检测两种类型tRNA^(Leu(UUR))的氨酰化动力学常数。结果表明,野生型tRNA^(Leu(UUR))的K_m/K_(cat)仅为突变型tRNA^(Leu(UUR))的63.9％,A3243G点突变使tRNA^(Leu(UUR))接受亮氨酸的能力明显下降,提示此为A3243G点突变致病机制之一。

关键词：人线粒体tRNA^Leu(UUR) 基因点突变氨酰化

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携带野生型PTEN基因的重组腺病毒治疗子宫内膜癌的体内研究

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第二军医大学学报 2005年第9期26卷 1002-1005页

作者：刘玉环崔英杨培丽蔡在龙俞超琴王锡智惠宁古航石书芳第二军医大学长海医院妇产科上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长海医院中医科长海医院泌尿外科

目的:探讨携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)进行子宫内膜癌基因治疗的可行性.方法:BALB/c裸鼠随机分3组,每组8只, 以空载体Ad-CMV转染或未转染作为对照组,观察Ad-PTEN体外转染后体内接种对子宫内膜癌细胞致瘤能力的影响.应用La... 详细信息

目的:探讨携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)进行子宫内膜癌基因治疗的可行性.方法:BALB/c裸鼠随机分3组,每组8只, 以空载体Ad-CMV转染或未转染作为对照组,观察Ad-PTEN体外转染后体内接种对子宫内膜癌细胞致瘤能力的影响.应用LacZ 作为报告基因,X-gal染色检测Ad-PTEN 体内转染效率.皮下荷人子宫内膜癌BALB/c裸鼠15只,随机分为对照组、Ad-CMV组及Ad-PTEN治疗组,每组5只,每只裸鼠皮下有2个移植瘤.待皮下移植瘤长至4～5 mm时,治疗组Ad-PTEN肿瘤内注射,每个移植瘤5×108 pfu/100 μl,隔日1次,共3次,观察裸鼠肿瘤体积的变化及有无不良反应,最后1次治疗后15 d处死裸鼠,取肿瘤组织及治疗组裸鼠肝脏病理检查.结果:Ad-PTEN体外转染子宫内膜癌RL 95-2细胞,子宫内膜癌细胞致瘤能力完全抑制,裸鼠成瘤率为0;而空载体转染组和PBS对照组裸鼠成瘤率均为100%.重组腺病毒在裸鼠体内具有较高的转染效率,Ad-CMV-LacZ肿瘤内注射后96 h,转染效率可达到80%. Ad-PTEN肿瘤内注射可使裸鼠皮下移植瘤生长速度显著减慢,肿瘤体积较对照组明显缩小(P<0.05),Ad-PTEN基因治疗未发现明显不良反应. 结论:PTEN基因治疗有可能成为子宫内膜癌非手术治疗的一个新方法,具有潜在的应用价值.

关键词：子宫内膜癌 PTEN 基因治疗裸鼠体内研究

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化学合成东方鲎肽体内对细菌内毒素的抑制作用

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第二军医大学学报 2001年第z1期22卷 -页

作者：张国友赵峰席先成焦炳华第二军医大学学员一旅上海200433 第二军医大学学员一旅上海200433 解放军第88医院基础医学部生物化学与分子生物学教研室

　　细菌内毒素是存在于革兰阴性菌细胞壁外膜中的脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)成分,对机体具有明显的毒害作用,是革兰阴性菌的重要致病因子和脓毒性休克的主要介质[1].中和及消除内毒素毒性作用的治疗方法一直是国内外研究的重点,... 详细信息

　　细菌内毒素是存在于革兰阴性菌细胞壁外膜中的脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)成分,对机体具有明显的毒害作用,是革兰阴性菌的重要致病因子和脓毒性休克的主要介质[1].中和及消除内毒素毒性作用的治疗方法一直是国内外研究的重点,但迄今为止,尚未取得明显的突破.国外研究人员曾报道天然鲎肽对革兰阴性菌及阳性菌具有强有力的杀伤作用[2],而且还具有显著的抗HIV病毒及抗内毒素作用.我们曾研究鲎肽体外对细菌生长的抑制作用,为进一步探讨其在体内的生物活性,本实验观察了鲎肽体内对细菌内毒素诱导家兔发热反应及局部Shwartzman反应的影响,现报告如下.……

关键词：鲎肽内毒素发热 Shwartzman反应

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迷迭香酸对黄嘌呤氧化酶的抑制作用

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第二军医大学学报 2006年第2期27卷 189-191页

作者：尚雁君黄才国蒋三好朱大元魏善建焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室上海200433 中国科学院上海药物研究所上海201203

目的:研究迷迭香酸对黄嘌呤氧化酶的抑制作用。方法:将20、40、60μg/ml迷迭香酸或1μg/ml阳性对照别嘌呤醇,分别加入黄嘌呤溶液(测尿酸生成量:1 mmol/L;测超氧离子:50μmol/L)和0.1 U/ml黄嘌呤氧化酶中,用生化仪测定5min尿酸生成量和... 详细信息

目的:研究迷迭香酸对黄嘌呤氧化酶的抑制作用。方法:将20、40、60μg/ml迷迭香酸或1μg/ml阳性对照别嘌呤醇,分别加入黄嘌呤溶液(测尿酸生成量:1 mmol/L;测超氧离子:50μmol/L)和0.1 U/ml黄嘌呤氧化酶中,用生化仪测定5min尿酸生成量和超氧离子生成(NBT显色法)。在1 ml 2×105/ml HL-60细胞悬液中加入100μl 6 mol/L黄嘌呤、100μl0.1 U/ml黄嘌呤氧化酶、500μg/ml迷迭香酸,分别以AnnexinⅤ-PI双标试剂盒法(以1μg/ml别嘌呤醇为阳性对照)或细胞周期法(以100 U/ml SOD为阳性对照)测定细胞凋亡率。结果:迷迭香酸显著抑制尿酸生成和超氧离子引起的NBT显色,两种方法测得其IC50分别为56μg/ml和21μg/ml;对细胞凋亡的抑制率均在40%以上。结论:迷迭香酸是黄嘌呤氧化酶的竞争性抑制剂。

关键词：迷迭香酸黄嘌呤氧化酶尿酸超氧离子细胞凋亡抑制作用

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利用真菌分生孢子筛选抗真菌活性的海洋微生物

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第二军医大学学报 2005年第11期26卷 1300-1301页

作者：宋志刚许强芝鲁心安刘小宇杨妤艾峰焦炳华华东师范大学生命科学学院上海200062 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:建立筛选抗真菌活性化合物的96孔板方法,筛选海洋活性菌株。方法:利用96孔板培养真菌孢子,将样品加入到真菌培养基中,在适宜条件下培养,通过显微镜来检测菌丝的生长情况,判断样品是否有抗真菌活性,筛选活性菌株。结果:通过对我国... 详细信息

目的:建立筛选抗真菌活性化合物的96孔板方法,筛选海洋活性菌株。方法:利用96孔板培养真菌孢子,将样品加入到真菌培养基中,在适宜条件下培养,通过显微镜来检测菌丝的生长情况,判断样品是否有抗真菌活性,筛选活性菌株。结果:通过对我国东海海洋微生物的筛选,从541株微生物中找到了25株具有抗黄瓜黑星病菌的活性菌株。结论:本生物检测模型方便、快速、费用低,并且可以进行高通量筛选、相关性好,是一种抗真菌天然产物的理想筛选模型。

关键词：抗真菌药黄瓜黑星病菌筛选

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小鼠肝脏部分耐热蛋白的初步研究

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第二军医大学学报 2004年第8期25卷 896-898页

作者：张振峰高红亮蔡在龙毛积芳焦炳华华东师范大学生命科学学院上海200062 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:研究小鼠肝脏中具有耐热特性的蛋白质,尤其是与肝功能、肝脏再生有密切关系的耐热蛋白。方法:将小鼠肝脏蛋白在65℃处理30 min,去除热变性蛋白,剩余耐热蛋白进行二维电泳,经过考马斯亮蓝染色,得到小鼠肝脏耐热蛋白二维电泳图谱,共... 详细信息

目的:研究小鼠肝脏中具有耐热特性的蛋白质,尤其是与肝功能、肝脏再生有密切关系的耐热蛋白。方法:将小鼠肝脏蛋白在65℃处理30 min,去除热变性蛋白,剩余耐热蛋白进行二维电泳,经过考马斯亮蓝染色,得到小鼠肝脏耐热蛋白二维电泳图谱,共约50个蛋白斑点。其中选取5个相对分子质量在10 000-50 000、分离效果较好的斑点进行MALDI-TOF-MS肽质量指纹谱分析及生物信息学处理。结果:这5个蛋白分别为:谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase)、蛋白酶体亚单位(AF060087)、尼克酰胺乙酰乙酸水解酶(nicotinate-nucleotide pyrophosphorylase)、延胡索酰乙酰乙酸水解酶(fumary-lacetoacetate hydrolase)和regucalcin。结论:初步证明肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶、尼克酰胺乙酰乙酸水解酶、延胡索酰乙酰乙酸水解酶和regucalcin具有较强的耐热特性。

关键词：耐热性蛋白肝二维电泳肽质量指纹谱

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