二肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidaseⅣ,DPPⅣ;EC3.4.14.5/CD26)是由Hopsu-Havu和Glenner在鼠肝脏组织匀浆过程中发现的,它能从甘氨酰-脯氨酰-2-萘酰胺(gly-Pro-2-naphthylamide)底物中水解2-萘酰胺,最初被称为甘氨酰脯氨酸萘酰胺酶(glycylpro line naphthlamidase),后被证明广泛存在于肾脏、胃肠道、结缔组织、淋巴结等组织中,唾液及血液中也含有此酶.凡N末端数第二位上存在脯氨酸(Pro)或丙氨酸(Ala)的多肽是该酶发挥活性的主要底物,DPPⅣ能从肽链的N末端水解两个氨基酸残基Xaa-Pro或Xaa-Ala,从而使哺乳动物体内的许多生物活性肽部分或完全失去与其受体的结合.哺乳动物体内DPPⅣ的重要底物包括神经肽、循环肽激素、趋化因子等.
目的 :克隆人肝脏再生增强因子 (h AL R) c DNA,构建重组表达载体并对其诱导表达、纯化。 方法 :提取胎儿肝组织总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增出 h AL R c DNA,克隆于载体 p GEM- T,酶切鉴定后亚克隆至表达载体 p GEX- 4T- 3,测序证实序...
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目的 :克隆人肝脏再生增强因子 (h AL R) c DNA,构建重组表达载体并对其诱导表达、纯化。 方法 :提取胎儿肝组织总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增出 h AL R c DNA,克隆于载体 p GEM- T,酶切鉴定后亚克隆至表达载体 p GEX- 4T- 3,测序证实序列正确并转化大肠杆菌 BL 2 1(DE3) ,IPTG诱导表达融合蛋白 GST- h AL R,表达产物通过谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析纯化后进行 Throm bin酶切。 结果和结论 :构建成融合蛋白 GST- h AL R的重组表达质粒 ,h AL R在大肠杆菌高效表达 ,重组蛋白主要以可溶形式存在于胞质中 ,融合蛋白的分离纯化简单易行。
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