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玄参中环烯醚萜Epibueropyridinium A预防D-半乳糖性白内障的实验研究

第二军医大学学报 2006年第11期27卷 1204-1206页

作者：黄才国魏善建第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:探讨玄参中环烯醚萜Epibueropyridinium A对D-半乳糖性白内障形成的干预作用。方法:大鼠随机分为正常对照组、模型组、样品高、低剂量组和阳性对照组,每组10只。模型组腹腔注射D-半乳糖诱导大鼠白内障模型;样品高、低剂量组在注射D... 详细信息

目的:探讨玄参中环烯醚萜Epibueropyridinium A对D-半乳糖性白内障形成的干预作用。方法:大鼠随机分为正常对照组、模型组、样品高、低剂量组和阳性对照组,每组10只。模型组腹腔注射D-半乳糖诱导大鼠白内障模型;样品高、低剂量组在注射D-半乳糖同时分别给予20、10 mg/kg环烯醚萜Epibueropyridinium A灌胃;正常对照组仅仅灌胃生理盐水;晶体混浊度和山梨醇含量的变化阳性对照为依帕司他(10 mg/kg),SOD活性和丙二醛含量变化的阳性对照为VitE(30 mg/kg)。3、6周后用裂隙灯观察晶体混浊程度,处死动物后检测晶体中SOD的活性,丙二醛以及山梨醇的含量。结果:样品高、低剂量组大鼠白内障的晶体混浊度明显低于模型组,样品高剂量组低于低剂量组(P<0.01)。晶体中SOD活性(***-1)由模型组的32.1±11.2分别升高到样品低剂量组的65.9±16.7和样品高剂量组的83.2±15.6(P<0.01);丙二醛含量(***-1)由模型组的26.72±5.36分别降到样品低剂量组的18.34±4.29和样品高剂量组的15.66±5.47(P<0.01);山梨醇含量(μmol.g-1)在第3周时由模型组的24.33±2.57分别降到样品低剂量组的15.46±2.07和样品高剂量组的11.45±1.39(P<0.01),在第6周时由模型组的20.04±1.59分别降到样品低剂量组的15.82±1.42和样品高剂量组的13.22±1.37(P<0.05或0.01)。结论:玄参中环烯醚萜Epibueropyridinium A对大鼠糖性白内障形成有一定的预防作用。

关键词：白内障 Epibueropyridinium A 超氧化物歧化酶丙二醛山梨醇

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玄参中环烯醚萜Epibueropyridinium A对醛糖还原酶的抑制作用

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第二军医大学学报 2006年第7期27卷 760-762页

作者：黄才国魏善建刘军华第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室上海200433

目的:研究Epibueropyridium A对醛糖还原酶的抑制作用。方法:醛糖还原酶通过硫酸铵分级沉淀从牛眼晶状体中提取,在含有DL-甘油醛、醛糖还原酶、NADPH的反应体系中,加入一定浓度的Epibueropyridium A,通过340 nm处光密度的变化来反映Epib... 详细信息

目的:研究Epibueropyridium A对醛糖还原酶的抑制作用。方法:醛糖还原酶通过硫酸铵分级沉淀从牛眼晶状体中提取,在含有DL-甘油醛、醛糖还原酶、NADPH的反应体系中,加入一定浓度的Epibueropyridium A,通过340 nm处光密度的变化来反映Epibueropyridium A对酶活性的抑制作用。阳性对照为依帕司他,采用双倒数作图的方法确定抑制类型,二次作图法求Ki,以抑制剂浓度对抑制率作图求IC50。结果:Epibueropyridium A能显著抑制醛糖还原酶的活性,为竞争性抑制,其半数抑制剂量IC50为4.2μg/ml,Ki值为4.88μg/ml。结论:Epibueropyridium A是醛糖还原酶的竞争性抑制剂。

关键词： Epibueropyridium A 玄参醛糖还原酶酶抑制剂

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腺病毒介导的PTEN cDNA对子宫内膜癌细胞凋亡的影响

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中华妇产科杂志 2006年第8期41卷 549-553页

作者：杨培丽刘玉环崔英蔡在龙毛积芳第二军医大学长海医院妇产科第二军医大学长海医院基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的研究外源性PTEN cDNA的表达对子宫内膜癌细胞凋亡的影响。方法用细菌内同源重组法构建含野生型抑癌基因PTEN cDNA的复制缺陷型腺病毒Ad-PTEN,蛋白印迹法鉴定转染Ad-PTEN后,子宫内膜癌细胞系RL95-2细胞中PTEN蛋白的表达。将RL95-2细... 详细信息

目的研究外源性PTEN cDNA的表达对子宫内膜癌细胞凋亡的影响。方法用细菌内同源重组法构建含野生型抑癌基因PTEN cDNA的复制缺陷型腺病毒Ad-PTEN,蛋白印迹法鉴定转染Ad-PTEN后,子宫内膜癌细胞系RL95-2细胞中PTEN蛋白的表达。将RL95-2细胞随机分成3组: (1)空白对照组:仅用培养基而不加腺病毒;(2)Ad-CMV组:转染复制缺陷型空载体腺病毒Ad-CMV; (3)Ad-PTEN组:转染复制缺陷型腺病毒Ad-PTEN,前两组均为对照组。采用细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)外翻检测、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)测定及染色体DNA片段化检测这3种方法,从不同角度检测PTEN蛋白的表达对RL95-2细胞凋亡的影响。结果经Ad-PTEN介导的PTEN cDNA能够在RL95-2细胞中持续有效地表达。Ad-PTEN组转染后24、48、72、96 h,RL95-2细胞中细胞膜PS外翻细胞分别占(6．09±1．01)％、(9．98±2．17)％、(11．74±2．65)％、(27．69±8．67)％,各个时间点分别与两个对照组比较,差异均有统计学意义(P<0．05);RL95-2细胞中活化caspase-3细胞分别占(2．6±0．5)％、(18．0±4．4)％、(21．8±5．1)％、(33．7±9．9)％,各个时间点分别与两个对照组比较,差异均有统计学意义(P<0．05)。Ad-PTEN转染后48 h,RL95-2细胞中出现特异性的染色体DNA梯状条带。结论腺病毒介导的PTEN cDNA能够有效地在RL95-2细胞中表达,并诱导其凋亡,为子宫内膜癌的基因治疗提供了理论基础。

关键词：磷酸单酯水解酶类肿瘤抑制蛋白质类腺病毒科子宫内膜肿瘤细胞凋亡

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应用Tet-On基因表达系统实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达

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第二军医大学学报 2006年第10期27卷 1092-1097页

作者：杨生生杨志峰严鸣蔡在龙焦炳华毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 基础医学部病理生理学教研室上海200433

目的:应用Tet-On基因表达系统构建可调控性真核表达质粒,实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达。方法:采用DNA重组技术构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18(CD11b和CD18是Mac-1的两个亚基),通过脂质体介导共转... 详细信息

目的:应用Tet-On基因表达系统构建可调控性真核表达质粒,实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达。方法:采用DNA重组技术构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18(CD11b和CD18是Mac-1的两个亚基),通过脂质体介导共转染CHO细胞,用荧光显微镜观察转染后阳性细胞;应用RT-PCR和荧光强度分析观察不同浓度(0、0.01、0.1、0.5、1、2μg/ml)强力霉素(Dox)对细胞内CD11b和CD18表达水平的影响;检测PMA(1μg/ml)刺激前后CHO-Mac-1-FP细胞与其配基ICAM-1黏附活性的变化。结果:酶切鉴定和测序证实,已成功构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18,在荧光显微镜下观察到转染成功的CHO细胞发出青色荧光和黄色荧光。通过荧光显微镜观察到随着培养液中Dox浓度的增加,CHO细胞内的荧光强度相应增强,同时CD11b和CD18在mRNA水平的表达也随Dox浓度的增加而增加。PMA刺激后,CHO-Mac-1-FP细胞与其配基ICAM-1黏附率增高(2 h和4 h时最高,此后逐渐下降)。结论:本研究成功实现了Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达并具有野生型Mac-1的黏附活性,为进一步开展单分子光谱(SMS)和荧光共振能量转移(FRET)技术研究活细胞内Mac-1分子的2个亚基的二聚化、群集、构象及与配基亲和力变化创造条件。

关键词： Mac-1 青色荧光蛋白黄色荧光蛋白融合蛋白可调控表达

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晕船适应与不适应大鼠脑干蛋白质双向电泳图谱的比较与鉴定

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第二军医大学学报 2006年第4期27卷 382-385页

作者：苏波张建鹏冯伟华杜鹏任绪义郭俊生第二军医大学海军医学系军队卫生学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:建立晕船适应及不适应大鼠脑干总蛋白质的双向电泳图谱,鉴定差异表达蛋白,探讨晕船适应的可能机制。方法:30只大鼠根据模拟晕船刺激后异嗜高岭土量的增减分为不晕组(n=10)、晕船适应组(n=12)和不适应组(n=8),另设未接受模拟晕船刺... 详细信息

目的:建立晕船适应及不适应大鼠脑干总蛋白质的双向电泳图谱,鉴定差异表达蛋白,探讨晕船适应的可能机制。方法:30只大鼠根据模拟晕船刺激后异嗜高岭土量的增减分为不晕组(n=10)、晕船适应组(n=12)和不适应组(n=8),另设未接受模拟晕船刺激的正常大鼠作为空白对照组(n=10)。应用双向电泳技术,分离晕船适应组和不适应组大鼠脑干蛋白(n=6),肽指纹图谱鉴定两组间差异表达蛋白质。结果:模拟晕船刺激21 d后,与空白对照组相比,晕船适应组大鼠异嗜高岭土量经历了一个由少到多又逐渐回落的过程,不适应组大鼠异嗜高岭土量则始终维持在一个较高的水平(P<0.01或P<0.05)。获得了9个晕船适应相关蛋白质:硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅰ、硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ、低分子量神经丝蛋白、泛素羧基末端水解酶PGP9.5和谷氨酰胺合成酶上调;碳酸酐酶Ⅱ、磷酸丙糖异构酶Ⅰ、磷酸甘油酸变位酶B和线粒体电压依赖型阴离子通道下调。结论:大鼠对晕船适应后可诱导脑干蛋白质组表达的改变,主要与能量代谢、神经递质调节和氧化应激有关。

关键词：晕动病脑干蛋白质组双向电泳

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刺鼠信号蛋白对自体移植皮片中黑素细胞功能的影响

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第二军医大学学报 2006年第9期27卷 969-972页

作者：薛春雨邢新李蠡张敬德蒋平龚志锦第二军医大学长海医院整形外科上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长海医院病理科

目的:通过检测刺鼠信号蛋白对自体移植皮片中黑素细胞功能的影响,进一步认识自体移植皮片过度色素沉着的原因。方法:建立过度色素沉着的自体移植皮片动物模型,皮片下分别注射刺鼠信号蛋白和生理盐水(对照组)。利用RT-PCR方法检测刺鼠信... 详细信息

目的:通过检测刺鼠信号蛋白对自体移植皮片中黑素细胞功能的影响,进一步认识自体移植皮片过度色素沉着的原因。方法:建立过度色素沉着的自体移植皮片动物模型,皮片下分别注射刺鼠信号蛋白和生理盐水(对照组)。利用RT-PCR方法检测刺鼠信号蛋白作用后自体移植皮片(n=12)黑素细胞中酪氨酸酶mRNA的表达,银染-丽春红染色后检测皮片中黑色素的含量,并与对照组(n=13)及正常豚鼠皮肤(n=5)相比较。结果:经刺鼠信号蛋白作用后,皮片中酪氨酸酶mRNA表达和黑素含量均明显减少,与对照组皮片和正常豚鼠皮肤相比其差异具有显著性意义(P<0.01)。结论:刺鼠信号蛋白在自体移植皮片中,能竞争性拮抗α-黑素细胞刺激素的黑素合成作用,使皮片着色能力降低。进一步证明了皮片移植后表皮细胞中α-黑素细胞刺激素的表达上调是皮片呈过度色素沉着的重要原因。

关键词：刺鼠信号蛋白 α-黑素细胞刺激素酪氨酸酶皮肤移植色素沉着过多

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SMO保存液对犬肾低温保存期间皮质细胞凋亡的影响

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第二军医大学学报 2006年第10期27卷 1059-1062页

作者：牛强朱有华于常虎罗明缪明永第二军医大学长征医院全军器官移植研究所上海200003 基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的：探讨自制上海多器官保存液（Shanghai multi-organ preservation solution,SMO液）对低温保存期间犬肾皮质细胞凋亡的影响,以探讨SMO液的作用机制.方法：犬肾分别以0～4℃的SMO液、高渗枸橼酸盐腺嘌呤液（HC-A）或UW液（Universit... 详细信息

目的：探讨自制上海多器官保存液（Shanghai multi-organ preservation solution,SMO液）对低温保存期间犬肾皮质细胞凋亡的影响,以探讨SMO液的作用机制.方法：犬肾分别以0～4℃的SMO液、高渗枸橼酸盐腺嘌呤液（HC-A）或UW液（University of Wisconsin solution）灌洗保存,在低温保存各时间点取肾皮质标本作形态学观察;采用TUNEL法检测皮质细胞凋亡发生情况;以硫代巴比妥酸法测定各保存液组肾皮质丙二醛（MDA）含量的改变,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性变化.结果：低温保存第1天光镜观察细胞水肿、胞质空泡化、肾小管坏死等改变,三组相似,但保存2 d后SMO组和UW组形态学改变明显轻于HC-A组.随低温保存时间延长,各保存液组肾皮质细胞凋亡的发生增加,而SMO组凋亡指数显著低于同时点HC-A液组（P＜0.05）.随着低温保存时间延长,各保存液组肾皮质MDA含量增加,保存1～3 d SMO液组MDA含量显著低于HC-A液组（P＜0.05）;低温保存中SMO液组、HC-A液组、UW液组肾皮质SOD酶活性无明显差异.结论：SMO液可以提高肾皮质保存效果,可能与其减少低温保存期间肾皮质细胞凋亡和抑制脂质过氧化损伤有关.

关键词：器官保存反应性氧族低温细胞凋亡

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海螵蛸多糖的提取分离及活性组分CPS-1的纯化

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第二军医大学学报 2006年第1期27卷 17-21页

作者：魏江洲张建鹏刘军华王顺春冯伟华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 上海中医药大学中药研究所上海201203

目的:从海洋中草药海螵蛸(乌贼骨)中提取分离得到多糖活性物质。对粗多糖中主要的活性组分CPS-1进行纯化,得到成分相对均一的天然活性多糖。方法:用热水抽提法提取海螵蛸多糖粗品,并对提取工艺进行正交设计,优化提取方法。对粗品组分进... 详细信息

目的:从海洋中草药海螵蛸(乌贼骨)中提取分离得到多糖活性物质。对粗多糖中主要的活性组分CPS-1进行纯化,得到成分相对均一的天然活性多糖。方法:用热水抽提法提取海螵蛸多糖粗品,并对提取工艺进行正交设计,优化提取方法。对粗品组分进行总糖量测定。用DEAE-Sepharose F.F柱及Sepharose CL-6B柱对海螵蛸多糖粗品进行分离。通过活性检测实验确定活性部分。最后使用Sephacryl S-300柱进一步纯化。用HPLC来检测精品多糖的纯度。标准曲线法测定相对分子质量。结果:成功得到海螵蛸粗多糖。经过离子交换柱DEAE-Sepharose Fast Flow和Sepharose CL-6B柱及分子筛Sephacr-yl S-300柱的进一步分离纯化和活性跟踪,最后得到相对均一的活性精品多糖CPS-1,其含糖量达93.6%,相对分子质量为1×106。结论:不同的提取条件影响海螵蛸多糖的得率。不同性质的分离材料能够将相对分子质量及电荷有差异的多糖分离,达到分离的目的。精品多糖CPS-1是从海洋中草药海螵蛸中得到的均一多糖组分。

关键词：海螵蛸多糖类分离提纯 CPS-1

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迷迭香酸对黄嘌呤氧化酶的抑制作用

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第二军医大学学报 2006年第2期27卷 189-191页

作者：尚雁君黄才国蒋三好朱大元魏善建焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室上海200433 中国科学院上海药物研究所上海201203

目的:研究迷迭香酸对黄嘌呤氧化酶的抑制作用。方法:将20、40、60μg/ml迷迭香酸或1μg/ml阳性对照别嘌呤醇,分别加入黄嘌呤溶液(测尿酸生成量:1 mmol/L;测超氧离子:50μmol/L)和0.1 U/ml黄嘌呤氧化酶中,用生化仪测定5min尿酸生成量和... 详细信息

目的:研究迷迭香酸对黄嘌呤氧化酶的抑制作用。方法:将20、40、60μg/ml迷迭香酸或1μg/ml阳性对照别嘌呤醇,分别加入黄嘌呤溶液(测尿酸生成量:1 mmol/L;测超氧离子:50μmol/L)和0.1 U/ml黄嘌呤氧化酶中,用生化仪测定5min尿酸生成量和超氧离子生成(NBT显色法)。在1 ml 2×105/ml HL-60细胞悬液中加入100μl 6 mol/L黄嘌呤、100μl0.1 U/ml黄嘌呤氧化酶、500μg/ml迷迭香酸,分别以AnnexinⅤ-PI双标试剂盒法(以1μg/ml别嘌呤醇为阳性对照)或细胞周期法(以100 U/ml SOD为阳性对照)测定细胞凋亡率。结果:迷迭香酸显著抑制尿酸生成和超氧离子引起的NBT显色,两种方法测得其IC50分别为56μg/ml和21μg/ml;对细胞凋亡的抑制率均在40%以上。结论:迷迭香酸是黄嘌呤氧化酶的竞争性抑制剂。

关键词：迷迭香酸黄嘌呤氧化酶尿酸超氧离子细胞凋亡抑制作用

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脊髓损伤后自主神经反射异常大鼠心脏和肠系膜前动脉α-肾上腺素能受体的表达

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第二军医大学学报 2006年第2期27卷 156-159页

作者：石学银邹最李盈科徐振东周运恒于军刘刚第二军医大学长征医院麻醉科上海200003 复旦大学附属华山医院麻醉科上海200040 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:观察高位脊髓横切(spinal cord transection,SCT)慢性期自主神经反射异常(autonomic dysreflexia,AD)大鼠心脏和肠系膜前动脉α-肾上腺素能受体(-αAR)各亚型mRNA表达量,探讨AD的可能机制。方法:暴露大鼠脊髓,横切T4节段,术后4周... 详细信息

目的:观察高位脊髓横切(spinal cord transection,SCT)慢性期自主神经反射异常(autonomic dysreflexia,AD)大鼠心脏和肠系膜前动脉α-肾上腺素能受体(-αAR)各亚型mRNA表达量,探讨AD的可能机制。方法:暴露大鼠脊髓,横切T4节段,术后4周用自制导管刺激直肠,观察升压反应,挑选发生AD的大鼠(AD组,n=16),取其心脏和肠系膜前动脉及其分支,实时定量PCR测定α1A-,α1B-,α1D-,α2A-,α2B-,α2C-AR mRNA的表达量,与只暴露脊髓、不进行横切的大鼠(假手术组,n=16)进行比较。结果:与假手术组相比,AD组大鼠心脏α1A-AR mRNA(P<0.05)、α1B-AR mRNA(P<0.01)表达下调,而α1D-ARmRNA表达量未见明显改变;肠系膜前动脉α1A、-α1D、-α2B-AR mRNA(P<0.01)、α2C-AR mRNA(P<0.05)表达上调,而α1B-、α2A-AR mRNA表达量未见明显改变。结论:大鼠SCT慢性期AD的发生可能与心脏α1A-、α1B-AR,肠系膜前动脉α1A-、α1D-、α2B-、α2C-AR的异常表达有关。

关键词：脊髓损伤自主神经反射异常受体肾上腺素能α 心脏肠系膜动脉基因表达

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