检索结果-内蒙古大学图书馆

一种改良的分离小分子蛋白质的电泳方法——Tricine-SDS-PAGE

第二军医大学学报 1999年第9期20卷 696-697页

作者：蔡在龙陈世敏冯伟华周雍毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室

蛋白质电泳是生物化学与分子生物学中的常规技术，蛋白质电泳结果的好坏，影响到整个实验结果和资料分析。以往蛋白质电泳通常用的是ＧｌｙＳＤＳＰＡＧＥ法［１］，这种方法简便、快速、价廉，并具有相对较高的分辨率，然而对于相... 详细信息

蛋白质电泳是生物化学与分子生物学中的常规技术，蛋白质电泳结果的好坏，影响到整个实验结果和资料分析。以往蛋白质电泳通常用的是ＧｌｙＳＤＳＰＡＧＥ法［１］，这种方法简便、快速、价廉，并具有相对较高的分辨率，然而对于相对分子质量为２万以下的蛋白质分离效果欠佳。我们结合文献［２，３］，通过探索，建立了一种有效分离小分子蛋白质、多肽的电泳方法，为小分子蛋白质、多肽的研究提供极大方便。１　材料和方法１．１　主要试剂和设备　Ｔｒｉｃｉｎｅ｛Ｎ［三（羟甲基）甲基］甘氨酸｝、尿素、Ｔｒｉｓ购自Ｓｉｇｍａ公司；丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺购自Ｓａｎｇｏｎ公司；垂直平板电泳槽购自中科院生物化学研究所；电泳仪Ｐｏｗ

关键词：蛋白质小分子蛋白分离电泳

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病理性氧供依赖与器官组织能量代谢间的关系

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第二军医大学学报 1999年第4期20卷 234-236页

作者：单红卫杨兴易陈学云景炳文缪明永陈克明第二军医大学长征医院急救科第二军医大学基础医学部生物化学教研室

目的：分析病理性氧供依赖与器官组织能量代谢间的关系，探讨该关系对器官组织氧合评价的意义。方法：以大鼠盲肠结扎穿孔（ＣＬＰ）方法制作脓毒性休克模型，随机分成ＣＬＰ前及ＣＬＰ后２，４，５，６，７，８ｈ组，测定氧动力学等指... 详细信息

目的：分析病理性氧供依赖与器官组织能量代谢间的关系，探讨该关系对器官组织氧合评价的意义。方法：以大鼠盲肠结扎穿孔（ＣＬＰ）方法制作脓毒性休克模型，随机分成ＣＬＰ前及ＣＬＰ后２，４，５，６，７，８ｈ组，测定氧动力学等指标后，立即处死动物并取肝、心、肾组织标本，用生物发光法测定磷酸肌酸（ＰＣ）和三磷酸腺苷（ＡＴＰ）含量。结果：全身氧供给（ＤＯ２）与氧消耗（ＶＯ２）呈双相变化关系，ＤＯ２进行性降低并在ＣＬＰ后６ｈ降至临界ＤＯ２值（ｃＤＯ２），以后呈病理性氧供依赖关系。ＣＬＰ后５ｈ，肝组织ＰＣ含量明显降低（Ｐ＜０．０５），６ｈ时肝ＡＴＰ含量及肾ＰＣ、ＡＴＰ含量均明显降低；心肌ＰＣ、ＡＴＰ分别在ＣＬＰ后６，７ｈ始显著下降（Ｐ＜０．０１）。结论：病理性氧供依赖关系的出现反映了心、肝、肾组织能量代谢障碍存在，但在其出现前，肾、肝组织已开始出现这种异常，故应尽早预防器官生物能量衰竭发生。

关键词：氧供给氧消耗脓毒性休克多器官衰竭

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隆纳霉素引起三阴性乳腺癌细胞周期阻滞基因表达谱及关键通路的生物信息学分析

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第二军医大学学报 2021年第6期42卷 585-595页

作者：薛佳兴孔杰卢小玲孙筱于豪冰梁珍珍徐尧邓博文焦炳华海军军医大学(第二军医大学)基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的利用生物信息学方法分析隆纳霉素对人三阴性乳腺癌细胞系细胞周期阻滞的作用机制。方法利用隆纳霉素处理人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-468细胞48、72 h,计算IC50,采用流式细胞术分析细胞周期变化。选取0.8μmol/L隆纳霉素处理48 h的M... 详细信息

目的利用生物信息学方法分析隆纳霉素对人三阴性乳腺癌细胞系细胞周期阻滞的作用机制。方法利用隆纳霉素处理人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-468细胞48、72 h,计算IC50,采用流式细胞术分析细胞周期变化。选取0.8μmol/L隆纳霉素处理48 h的MDA-MB-468细胞和未加药处理的对照细胞进行转录组测序,测序数据经质量控制过滤后,使用DESeq21.16.1软件进行差异表达基因分析,并进行基因本体和京都基因与基因组百科全书功能分析及基因集富集分析,用STRING工具进行蛋白质相互作用网络分析及用AutoDock 1.5.6软件进行分子对接预测。结果隆纳霉素干预MDA-MB-468细胞48、72 h的IC50分别为2.733和0.866μmol/L,且流式细胞术分析显示隆纳霉素干预48 h有明显G2/M阻滞作用。隆纳霉素干预后共筛选出1764个差异表达基因,主要定位于NF-κB介导的TNF-α通路和P53通路,G蛋白γ亚基7(GNG7)、G蛋白γ亚基11(GNG11)、C-X-C基序趋化因子配体8(CXCL8)、腺苷酸环化酶2(ADCY2)等基因可能是隆纳霉素作用基因网络中的关键节点。隆纳霉素与DNA分子、拓扑异构酶、基因表达调节蛋白[20S蛋白酶体β亚单位5(PSMB5)和含有SET结构域7的组蛋白赖氨酸甲基转移酶(SETD7)]有较好的结合及相互作用。结论隆纳霉素具有与蝴蝶霉素类似的功能,其通过与DNA-拓扑异构酶Ⅰ复合物中的DNA分子结合发挥抗肿瘤活性;还可通过与基因表达调节蛋白PSMB5和SETD7结合影响GNG7、GNG11、CXCL8、ADCY2等基因的表达水平,从而上调NF-κB介导的TNF-α通路和P53通路,最终导致乳腺癌细胞发生G2/M阻滞,发挥抗肿瘤作用。

关键词：隆纳霉素蝴蝶霉素类似物三阴性乳腺癌细胞周期阻滞

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人肝癌SM MC-7721细胞热休克反应时糖皮质激素受体mRNA减少机制初探

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中华内分泌代谢杂志 2002年第6期18卷 478-480页

作者：徐晓辉王学敏向正华郭兴中缪明永徐仁宝第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部病理生理学教研室上海200433

目的　探讨人肝癌SMMC 772 1细胞热休克反应时糖皮质激素受体 (GR)mRNA减少的机制。方法　利用聚合酶链反应 (PCR)从大鼠GRcDNA质粒及人肝癌SMMC 772 1细胞基因组中扩增大鼠GR跨外显子 3 ,4,5片段 (与人GR跨外显子 3 ,4,5片段同源性在 ... 详细信息

目的　探讨人肝癌SMMC 772 1细胞热休克反应时糖皮质激素受体 (GR)mRNA减少的机制。方法　利用聚合酶链反应 (PCR)从大鼠GRcDNA质粒及人肝癌SMMC 772 1细胞基因组中扩增大鼠GR跨外显子 3 ,4,5片段 (与人GR跨外显子 3 ,4,5片段同源性在 89%以上 )及人GR内含子E的DNA片段 ,构建转录质粒 ,并在体外进行转录 ,用地高辛标记反义RNA探针 ,进行细胞原位杂交 ,碱性磷酸酶底物NBT BCIP显色 ,计算机图像分析系统进行扫描半定量分析。结果　人肝癌SMMC 772 1细胞 44℃培养 1h后 ,用跨外显子和内含子探针杂交显色所得的积分灰度值均比未经热休克反应组低 ;加放线菌素D后热休克反应组 ,用跨外显子探针杂交显色所得的积分灰度值比单加放线菌素D组低 ,而用内含子探针杂交显色所得的积分灰度值比单加放线菌素D组高 ;加放线菌酮后热休克反应组 ,用跨外显子探针和内含子探针杂交显色所得的积分灰度值均比热休克反应组高。结论　热休克反应时GRmRNA转录过程受抑 ,GRmRNA前体成熟过程存在剪接障碍。

关键词：肝癌 SMMC-7721细胞热休克反应糖皮质激素受体 mRNA

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腺病毒介导的PTEN cDNA对子宫内膜癌细胞凋亡的影响

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中华妇产科杂志 2006年第8期41卷 549-553页

作者：杨培丽刘玉环崔英蔡在龙毛积芳第二军医大学长海医院妇产科第二军医大学长海医院基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的研究外源性PTEN cDNA的表达对子宫内膜癌细胞凋亡的影响。方法用细菌内同源重组法构建含野生型抑癌基因PTEN cDNA的复制缺陷型腺病毒Ad-PTEN,蛋白印迹法鉴定转染Ad-PTEN后,子宫内膜癌细胞系RL95-2细胞中PTEN蛋白的表达。将RL95-2细... 详细信息

目的研究外源性PTEN cDNA的表达对子宫内膜癌细胞凋亡的影响。方法用细菌内同源重组法构建含野生型抑癌基因PTEN cDNA的复制缺陷型腺病毒Ad-PTEN,蛋白印迹法鉴定转染Ad-PTEN后,子宫内膜癌细胞系RL95-2细胞中PTEN蛋白的表达。将RL95-2细胞随机分成3组: (1)空白对照组:仅用培养基而不加腺病毒;(2)Ad-CMV组:转染复制缺陷型空载体腺病毒Ad-CMV; (3)Ad-PTEN组:转染复制缺陷型腺病毒Ad-PTEN,前两组均为对照组。采用细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)外翻检测、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)测定及染色体DNA片段化检测这3种方法,从不同角度检测PTEN蛋白的表达对RL95-2细胞凋亡的影响。结果经Ad-PTEN介导的PTEN cDNA能够在RL95-2细胞中持续有效地表达。Ad-PTEN组转染后24、48、72、96 h,RL95-2细胞中细胞膜PS外翻细胞分别占(6．09±1．01)％、(9．98±2．17)％、(11．74±2．65)％、(27．69±8．67)％,各个时间点分别与两个对照组比较,差异均有统计学意义(P<0．05);RL95-2细胞中活化caspase-3细胞分别占(2．6±0．5)％、(18．0±4．4)％、(21．8±5．1)％、(33．7±9．9)％,各个时间点分别与两个对照组比较,差异均有统计学意义(P<0．05)。Ad-PTEN转染后48 h,RL95-2细胞中出现特异性的染色体DNA梯状条带。结论腺病毒介导的PTEN cDNA能够有效地在RL95-2细胞中表达,并诱导其凋亡,为子宫内膜癌的基因治疗提供了理论基础。

关键词：磷酸单酯水解酶类肿瘤抑制蛋白质类腺病毒科子宫内膜肿瘤细胞凋亡

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脑缺血再灌流后脑含水量、线粒体呼吸功能的改变

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第二军医大学学报 1998年第1期19卷 33-35页

作者：林兆奋缪明永王学敏朱诚第二军医大学长征医院神经外科第二军医大学基础医学部生物化学教研室

目的：探讨脑缺血与再灌流后线粒体呼吸功能变化以及与脑水肿的关系。方法：采用Ｃｌａｒｋ氧电极法测定脑缺血及再灌流后脑细胞线粒体呼吸Ⅲ、Ⅳ态及呼吸控制率（ＲＣＲ）；采用烘干法按Ｅｌｉｓ公式计算脑含水量。结果：脑缺血后脑含... 详细信息

目的：探讨脑缺血与再灌流后线粒体呼吸功能变化以及与脑水肿的关系。方法：采用Ｃｌａｒｋ氧电极法测定脑缺血及再灌流后脑细胞线粒体呼吸Ⅲ、Ⅳ态及呼吸控制率（ＲＣＲ）；采用烘干法按Ｅｌｉｓ公式计算脑含水量。结果：脑缺血后脑含水量增加，再灌流后加重脑水肿；线粒体呼吸Ⅲ态及ＲＣＲ于脑缺血时均降低，再灌流早期代偿性升高，再灌流６ｈ后呼吸Ⅳ态明显升高，而呼吸Ⅲ态未恢复，导致ＲＣＲ进一步下降。结论：脑缺血及再灌流均造成脑水肿，线粒体呼吸功能于脑缺血时受抑制，再灌流使线粒体功能进一步受损，无效耗氧增加，提示线粒体功能的改变是再灌流损伤的病理基础之一。

关键词：脑缺血线粒体呼吸功能脑水肿再灌注损伤

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奥曲肽抑制肠梗阻时毒素的吸收

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第二军医大学学报 1999年第5期20卷 336-337页

作者：陈大伟王元和王强周晓武王来根缪明永第二军医大学长征医院普通外科第二军医大学基础医学部生物化学教研室

肠梗阻时不但有大量的体液丧失，而且还有毒素的吸收和细菌的易位［１，２］，有报道奥曲肽可用于肠梗阻的治疗［３］。本研究就奥曲肽能否在缓解肠梗阻的同时，减少毒素的吸收，降低血液内毒素水平作了实验性研究。１材料和方法１．１... 详细信息

肠梗阻时不但有大量的体液丧失，而且还有毒素的吸收和细菌的易位［１，２］，有报道奥曲肽可用于肠梗阻的治疗［３］。本研究就奥曲肽能否在缓解肠梗阻的同时，减少毒素的吸收，降低血液内毒素水平作了实验性研究。１材料和方法１．１动物及分组４０只雄性ＳＤ大鼠，体质...

关键词：肠梗阻药物疗法奥曲肽毒素内毒素

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大鼠烧伤休克延迟复苏后内脏能量代谢的变化

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第二军医大学学报 1996年第S1期17卷 25-27页

作者：路卫陈玉林夏照帆葛绳德方之扬陈克明魏尧梅第二军医大学长海医院烧伤科第二军医大学基础医学部生物化学教研室

目的：观察烧伤休克延迟复苏后内脏能量代谢的变化．方法：通过建立大鼠烧伤休克延迟复苏模型，测定烧伤后不复苏、立即复苏和延迟复苏后心、肺、肝、肾中ＡＴＰ含量及肺、肾组织Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶活力的变化。结果：实验发现烧伤... 详细信息

目的：观察烧伤休克延迟复苏后内脏能量代谢的变化．方法：通过建立大鼠烧伤休克延迟复苏模型，测定烧伤后不复苏、立即复苏和延迟复苏后心、肺、肝、肾中ＡＴＰ含量及肺、肾组织Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶活力的变化。结果：实验发现烧伤后３种复苏条件下都有ＡＴＰ含量的一过性上升，随后下降。肺、肾ＡＴＰ酶活力在伤后３０ｍｉｎ即已开始下降，在１２ｈ和６ｈ分别降至最低点，随后逐渐回升。结论：烧伤早期内脏中能量代谢紊乱是明显的，其中不仅有能量供应障碍，而且还有能量利用障碍。

关键词：灼伤腺苷三磷酸腺苷三磷酸酶大鼠

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人肝癌SMMC-7721细胞热休克反应条件的确立

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 920-921页

作者：徐晓辉王学敏谭金兴徐仁宝第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部病理生理学教研室

热休克反应在生物界广泛存在，热休克时细胞变化的机制是当前研究的一个重要领域。本实验在热休克反应时糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor，GR）减少机制的研究中，确立了人肝癌SMMC-7721细胞的热休克反应条件。

关键词：肝癌 SMMC-7721细胞热休克反应细胞培养肝肿瘤糖皮质激素

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三种心肌保护方法对长时间停搏心脏功能恢复的影响

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第二军医大学学报 1999年第8期20卷 554-556页

作者：陈龙胡寿鹏张宝仁杨玲陈克明第二军医大学长海医院胸心外科上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学教研室

目的：对比观察间断灌注冷血、持续灌注冷血及持续灌注温血心脏停搏液对长时间停搏心脏心室功能的保护作用。方法：利用猫体外循环模型，分别用间断冷血、持续冷血及持续温血停搏液保护心肌，测定其心功能、心肌酶释放及丙二醛（ＭＤ... 详细信息

目的：对比观察间断灌注冷血、持续灌注冷血及持续灌注温血心脏停搏液对长时间停搏心脏心室功能的保护作用。方法：利用猫体外循环模型，分别用间断冷血、持续冷血及持续温血停搏液保护心肌，测定其心功能、心肌酶释放及丙二醛（ＭＤＡ）含量变化。结果：心脏停搏１８０ｍｉｎ复灌６０ｍｉｎ时，间断冷血及持续冷血停搏液灌注组心室功能明显下降，心肌酶释放及ＭＤＡ含量增加，尤以前者为甚，而持续温血停搏液灌注组心室功能在复灌后其测值接近停搏前水平，心肌酶释放及ＭＤＡ含量亦出现类似变化。结论：持续灌注温血心脏停搏液在心脏长时间的停搏过程中可提供充足的血供，是一种理想的心肌保护方法，特别适用于需长时间停搏及高危心脏病患者的术中心肌保护。

关键词：心肌保护体外循环温血停搏液

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