检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2006年第1期27卷 22-24页

作者：艾峰许强芝杨妤刘小宇施晓琼宋志刚焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:从海洋微生物中寻找天然活性物质。方法:利用稻瘟霉作为菌株筛选模型,对筛选出来的活性菌株F8712发酵液的醋酸乙酯提取物进行化合物分离;通过1HNMR1、3CNMR和ESI-MS对化合物进行结构鉴定。结果和讨论:鉴定了6个环二肽类化合物,它... 详细信息

目的:从海洋微生物中寻找天然活性物质。方法:利用稻瘟霉作为菌株筛选模型,对筛选出来的活性菌株F8712发酵液的醋酸乙酯提取物进行化合物分离;通过1HNMR1、3CNMR和ESI-MS对化合物进行结构鉴定。结果和讨论:鉴定了6个环二肽类化合物,它们分别为环[Ala-Leu](Ⅰ),环[Ala-Ile](Ⅱ),环[Val-Pro](Ⅲ),环[Leu-Pro](Ⅳ),环[Ile-Pro](Ⅴ)和环[Leu-Val](Ⅵ)。这些环二肽都没有抗稻瘟霉活性,化合物Ⅴ对鳗弧菌(Vibrio anguillarm)具有较强的抑制能力,其MIC为0.07μg/ml。

关键词：环二肽海洋生物学稻瘟霉鳗弧苗分离鉴定东海

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Citrostatin的构建与活性分析

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第二军医大学学报 2006年第11期27卷 1249-1253页

作者：马丽杨生生杨志峰陈欢蔡在龙第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:本研究拟通过人工化学合成技术将2个不同机制发挥抗癌作用的小肽结合起来,产生一个融合肽Citrostatin,并研究其生物学活性,以期获得具有双重抗肿瘤功能的抗肿瘤肽。方法:化学合成Citrostatin并经HPLC分离纯化,通过内皮细胞杀伤实... 详细信息

目的:本研究拟通过人工化学合成技术将2个不同机制发挥抗癌作用的小肽结合起来,产生一个融合肽Citrostatin,并研究其生物学活性,以期获得具有双重抗肿瘤功能的抗肿瘤肽。方法:化学合成Citrostatin并经HPLC分离纯化,通过内皮细胞杀伤实验、细胞毒活性分析、体外管状结构生成抑制实验,以及鸡胚绒毛尿囊膜血管生成抑制实验分析Citrostatin的生物学活性。结果:Citrostatin可明显抑制内皮细胞ECV304的增殖(ED50为6.2μg/ml),有效杀伤肿瘤细胞1990及NCI-H640细胞(ED50分别为50μg/ml、16μg/ml),并明显抑制体外管状结构生成及鸡胚绒毛尿囊膜血管的生成。结论:本研究成功构建并合成了抗肿瘤融合48肽Citrostatin,研究表明该融合肽同时具有抑制肿瘤组织新生血管形成和直接杀伤肿瘤的双重活性。

关键词： Citrostatin 融合肽抗肿瘤药血管生成抑制

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镉诱导大鼠睾丸三种类型细胞和肝脏金属硫蛋白基因表达的研究

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 184-187页

作者：张建鹏仲燕任绪义周雍冯伟华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :啮齿类动物睾丸较肝脏对镉毒性更敏感。通过对镉诱导早期大鼠睾丸三种类型细胞 (支持细胞、间质细胞和生精细胞 )与肝脏金属硫蛋白 (MT)及其亚型 MT1、MT2表达的研究 ,阐明大鼠睾丸对镉毒性较肝脏更敏感的分子机制。方法 :采用半... 详细信息

目的 :啮齿类动物睾丸较肝脏对镉毒性更敏感。通过对镉诱导早期大鼠睾丸三种类型细胞 (支持细胞、间质细胞和生精细胞 )与肝脏金属硫蛋白 (MT)及其亚型 MT1、MT2表达的研究 ,阐明大鼠睾丸对镉毒性较肝脏更敏感的分子机制。方法 :采用半定量 RT- PCR、EL ISA、原子分光光度吸收法 ,观察镉处理后不同时相大鼠睾丸三种类型细胞与肝脏 MT基因表达的变化。结果 :睾丸组织中存在 MT。同时还发现 0 h对照组大鼠镉处理后肝脏 MT m RNA增加并保持较高的基础水平 ,3h达峰值后下降 ;而睾丸支持细胞和间质细胞则在 6 h达高峰。镉中毒大鼠睾丸支持细胞和肝脏 MT1m RNA的变化幅度要低于MT2 m RNA,而在间质细胞中则相反。此外 ,生精细胞 MT1m RNA在镉处理后 0～ 3h减少 ,然后增加 ,而 MT2 m RNA的变化则相反 ,而且它们的诱导变化幅度较其他细胞低。镉暴露后肝脏 MT m RNA和 MT均升高 ,但在睾丸三种类型细胞中 MT的表达并没有增加。结论 :镉诱导后 MT m RNA的表达具有细胞和时间依赖性 ;镉虽然能诱导睾丸 MT m RNA的转录但没有促进其 MT的合成。

关键词：金属硫蛋白镉睾丸支持细胞睾丸间质细胞生精细胞肝脏

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人肿瘤抑素(Tumstatin)在***中的克隆、表达及活性分析

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第3期21卷 304-308页

作者：罗以勤王梁华球谊焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

从人胚肾2 93细胞中扩增肿瘤抑素(tumstatin)基因,进行原核表达,纯化和生物活性检测.利用原核表达载体pMAL c2在大肠杆菌BL2 1中表达肿瘤抑素,经AmyloseResin亲和层析柱和QSepharoseFastFlow柱纯化,通过体外内皮细胞增殖、内皮细胞凋亡... 详细信息

从人胚肾2 93细胞中扩增肿瘤抑素(tumstatin)基因,进行原核表达,纯化和生物活性检测.利用原核表达载体pMAL c2在大肠杆菌BL2 1中表达肿瘤抑素,经AmyloseResin亲和层析柱和QSepharoseFastFlow柱纯化,通过体外内皮细胞增殖、内皮细胞凋亡和鸡尿囊绒膜新生血管生成试验检测其抑制活性.MBP tumstatin在BL2 1中表达率约2 0 % ,肿瘤抑素纯度可达95 % .肿瘤抑素可明显抑制内皮细胞增殖(IC50 约为15 μg ml)、诱导内皮细胞凋亡和抑制鸡尿囊绒膜新生血管生成.研究结果表明,肿瘤抑素对内皮细胞具有明显的抑制作用,提示其在肿瘤治疗中有潜在的应用前景.

关键词：肿瘤抑素,重组表达,血管抑制,生物学活性

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大鼠肝再生时线粒体通透性转换的变化

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第二军医大学学报 2004年第3期25卷 292-294页

作者：缪明永朱克军汪振诚刘军华蒋雷王学敏焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :研究大鼠肝再生过程中肝细胞线粒体膜通透性转换 (PT)的变化规律。方法 :SD大鼠肝 70 %部分切除 (PH)制作肝再生模型 ,断头取肝分离线粒体后 ,通过检测静息态和不同浓度钙离子诱导下线粒体悬液在 5 4 0 nm处光密度值 (D540 )变... 详细信息

目的 :研究大鼠肝再生过程中肝细胞线粒体膜通透性转换 (PT)的变化规律。方法 :SD大鼠肝 70 %部分切除 (PH)制作肝再生模型 ,断头取肝分离线粒体后 ,通过检测静息态和不同浓度钙离子诱导下线粒体悬液在 5 4 0 nm处光密度值 (D540 )变化来观察线粒体 PT的时相变化。结果 :与对照组比较 ,大鼠肝再生早期 (PH后 0～ 2 4 h)和后期 (PH后 1 2 0～ 1 6 8h)都表现为肝线粒体先收缩后肿胀 ,也即通透性先下降后增高 ;同时大鼠肝再生早期肝线粒体可明显抵抗钙离子的诱导作用 ,而 PH后2 4 h和 1 6 8h组的大鼠肝线粒体对钙离子的诱导非常敏感。环孢素 A(Cs A)可阻断钙的诱导作用。结论 :大鼠肝再生过程中线粒体 PT出现明显规律性改变。

关键词：大鼠肝再生线粒体通透性转换钙离子环孢素A

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人肝脏再生增强因子cDNA的克隆、表达及纯化

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 534-536页

作者：陈世敏蔡在龙毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :克隆人肝脏再生增强因子 (h AL R) c DNA,构建重组表达载体并对其诱导表达、纯化。方法 :提取胎儿肝组织总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增出 h AL R c DNA,克隆于载体 p GEM- T,酶切鉴定后亚克隆至表达载体 p GEX- 4T- 3,测序证实序... 详细信息

目的 :克隆人肝脏再生增强因子 (h AL R) c DNA,构建重组表达载体并对其诱导表达、纯化。方法 :提取胎儿肝组织总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增出 h AL R c DNA,克隆于载体 p GEM- T,酶切鉴定后亚克隆至表达载体 p GEX- 4T- 3,测序证实序列正确并转化大肠杆菌 BL 2 1(DE3) ,IPTG诱导表达融合蛋白 GST- h AL R,表达产物通过谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析纯化后进行 Throm bin酶切。结果和结论 :构建成融合蛋白 GST- h AL R的重组表达质粒 ,h AL R在大肠杆菌高效表达 ,重组蛋白主要以可溶形式存在于胞质中 ,融合蛋白的分离纯化简单易行。

关键词：肝再生基因表达纯化 cDNA 克隆

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重组人可溶性THANK在大肠杆菌中的高效表达

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 143-146页

作者：娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :克隆人 THANK的全长基因及编码可溶性胞外区的基因 ,并在大肠杆菌中表达可溶性 THANK。方法 :采用RT- PCR从 PMA诱导的 HL 6 0细胞中克隆人 THANK全长编码基因 ,继以 PCR扩增出可溶性 THANK编码区基因 (134～2 85位氨基酸 ) ,PC... 详细信息

目的 :克隆人 THANK的全长基因及编码可溶性胞外区的基因 ,并在大肠杆菌中表达可溶性 THANK。方法 :采用RT- PCR从 PMA诱导的 HL 6 0细胞中克隆人 THANK全长编码基因 ,继以 PCR扩增出可溶性 THANK编码区基因 (134～2 85位氨基酸 ) ,PCR产物克隆于 p MD- 18T,经 DNA测序证实后亚克隆到 p ET- 11a中。重组质粒转化 BL 2 1,以 1m mol/ LIPTG进行诱导表达产物 ,SDS- PAGE分析表达产物 ,对重组蛋白经纯化复性后测定生物学活性。结果 :RT- PCR扩增出编码人 THANK全长编码基因及 PCR扩增出 THANK1 34 - 2 85基因的 c DNA ,经序列分析证实与文献报道完全一致。含有THANK1 34 - 2 85编码基因的表达载体 ,转化大肠杆菌后表达出相对分子质量约 180 0 0的重组蛋白。该重组蛋白经纯化后能够诱导 U937细胞凋亡。结论 :成功克隆了人 THANK基因 ,并在大肠杆菌中表达重组可溶性 THANK,该重组蛋白在实验条件下具有诱导 U937细胞凋亡的作用。

关键词： TNF超家族 RT-PCR 基因克隆基因表达肿瘤重组人可溶性THANK 大肠杆菌

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人胰高血糖素样肽-1 cDNA的克隆与表达

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第二军医大学学报 2001年第4期22卷 316-318页

作者：张志珍毛积芳窦鸿杨生生第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :克隆人胰高血糖素样肽 - 1(h GL P- 1) c DNA,构建原核表达质粒 p GEX- 4T- 3/ h GL P- 1c DNA,并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶 - h GL P- 1(GST- h GL P- 1)融合蛋白。方法 :采用亚磷酸二酯法合成 6个 h GL P- 1c DNA的寡核苷酸片... 详细信息

目的 :克隆人胰高血糖素样肽 - 1(h GL P- 1) c DNA,构建原核表达质粒 p GEX- 4T- 3/ h GL P- 1c DNA,并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶 - h GL P- 1(GST- h GL P- 1)融合蛋白。方法 :采用亚磷酸二酯法合成 6个 h GL P- 1c DNA的寡核苷酸片段 ,拼接成完整的 h GL P- 1c DNA ,克隆至 p BS SK(+ / - )载体中 ,经双酶切鉴定和测序后把 h GL P- 1c DNA定向插入融合基因表达载体 p GEX- 4T- 3的多克隆位点上 ,构建重组质粒 p GEX- 4T- 3/ h GL P- 1c DNA,并转化大肠杆菌 TG1。结果 :经限制性内切酶Bam H 、Xho 酶切和电泳 ,证明 h GL P- 1c DNA已插入到 p GEX- 4T- 3中并诱导表达出融合蛋白。结论 :成功诱导表达出融合蛋白 GST- h GL P- 1,为进一步获得大量可供实验研究和临床应用的重组 h GL P- 1创造条件。

关键词：胰高血糖素样肽-1 克隆分子基因表达糖尿病 cDNA

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衰老大鼠肝线粒体质与量的改变

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第二军医大学学报 1998年第6期19卷 524-526页

作者：缪明永蔡在龙俞超芹王学敏毛积芳凌昌全第二军医大学基础医学部生物化学教研室第二军医大学长海医院中医科

目的：探究大鼠衰老时肝组织细胞线粒体的变化规律。方法：分别从４月龄和２４月龄大鼠的肝组织分离出线粒体，并用双缩脲法测定单位组织的线粒体蛋白；用Ｃｌａｒｋ氧电极极谱法分别测定线粒体呼吸链３个氧化酶活性：ＮＡＤＨ氧化酶、... 详细信息

目的：探究大鼠衰老时肝组织细胞线粒体的变化规律。方法：分别从４月龄和２４月龄大鼠的肝组织分离出线粒体，并用双缩脲法测定单位组织的线粒体蛋白；用Ｃｌａｒｋ氧电极极谱法分别测定线粒体呼吸链３个氧化酶活性：ＮＡＤＨ氧化酶、琥珀酸氧化酶和细胞色素氧化酶；用差光谱法（连二亚硫酸还原的消光值减去正铁氰化钾氧化的消光值）获得细胞色素ａ，ｂ，ｃ和ｃ１（Ｃｙｔａ，ｂ，ｃ和ｃ１）含量。结果：与４月龄大鼠相比，２４月龄大鼠的肝组织细胞线粒体含量有一定的下降，而３个氧化酶活性显著增强，同时细胞色素含量尤其是Ｃｙｔｂ和ｃ１也显著升高。结论：衰老大鼠肝组织线粒体呼吸链氧化功能增强可能是通过某种反馈机制使残存尚好的线粒体代偿性功能增强。

关键词：线粒体氧化还原酶衰老肝组织

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细菌双杂交系统在细胞外蛋白质相互作用中的应用

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第二军医大学学报 2003年第10期24卷 1095-1098页

作者：张弛王梁华罗以勤张兴群高云史薇包晨颖球谊焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:探索应用细菌双杂交系统在细胞外蛋白质之间相互作用的可行性。方法:应用Stratagene BacterioMatch two hy-brid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达质粒;以pBT构建编码DR4、DR5、OPG等的细胞外区域序列融合... 详细信息

目的:探索应用细菌双杂交系统在细胞外蛋白质之间相互作用的可行性。方法:应用Stratagene BacterioMatch two hy-brid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达质粒;以pBT构建编码DR4、DR5、OPG等的细胞外区域序列融合表达质粒。重组质粒分别相应共转化报告菌株XL1-Blue MRF,报道基因产物以抗羧苄青霉素和β-半乳糖苷酶活性作为转录激活的指标。结果:pTRG-TRAIL与pBT-DR4,pTRG-TRAIL与pBT-DR5及对照组分别共转化后在高浓度羧苄青霉素(500μg/ml以上)筛选下宿主菌呈转录激活状态,pTRG-TRAIL与pBT-OPG组共转化后在低浓度羧苄青霉素(250μg/ml以下)筛选下宿主菌呈转录激活状态,用X-Gal-PETG平皿可以进一步验证阳性克隆。对照组pTRG-TRAIL与pBT-LGF2,pBT-DR4、pBT-DR5或pBT-OPG与pTRG-Gal114组共转化后呈阴性。结论:所用的双杂交序列皆为编码这些蛋白质的细胞外区域,而这些蛋白质本身的相互作用已有其他报道验证,所以细菌双杂交系统可以用于细胞外蛋白质的相互作用研究。

关键词：细菌双杂交系统细胞外蛋白质相互作用临床应用可行性 TNF相关凋亡诱导配体质粒构建

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