检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 1997年第3期18卷 261-262页

作者：徐荷郭俊生陈克明第二军医大学卫生勤务学系军队卫生学教研室第二军医大学基础医学部生物化学教研室

目的：探讨热应激时锌对超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性的影响。方法：以ＳＤ大鼠制备热应激模型，测定以不同浓度的锌饲料喂养的大鼠在热应激的不同时间肝脏、大脑皮质ＳＯＤ活性。结果：热应激后大鼠ＳＯＤ活性升高，持续应激后ＳＯＤ... 详细信息

目的：探讨热应激时锌对超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性的影响。方法：以ＳＤ大鼠制备热应激模型，测定以不同浓度的锌饲料喂养的大鼠在热应激的不同时间肝脏、大脑皮质ＳＯＤ活性。结果：热应激后大鼠ＳＯＤ活性升高，持续应激后ＳＯＤ活性下降；高、中锌组ＳＯＤ活性明显高于低锌组。结论：充足的锌能够通过增强ＳＯＤ活性而提高机体热耐受力。

关键词：热应激锌超氧化物歧化酶类

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时间分辨荧光核酸杂交分析体系的建立及其初步应用

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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 309-312页

作者：游冬青陈杞张丽民贺广彩韩玲邹鲁峰陈克明第二军医大学海军医学系放射医学研究室第二军医大学基础医学部生物化学教研室

目的：建立时间分辨荧光核酸杂交分析体系并应用于临床乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ检测。方法：采用本室自制螯合剂异硫氰酸苯基－ＥＤＴＡ制备铕离子标记的链霉亲和素（Ｅｕ３＋－ＳＡ），抽提患者血清中的ＤＮＡ，包被于聚苯乙烯微... 详细信息

目的：建立时间分辨荧光核酸杂交分析体系并应用于临床乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ检测。方法：采用本室自制螯合剂异硫氰酸苯基－ＥＤＴＡ制备铕离子标记的链霉亲和素（Ｅｕ３＋－ＳＡ），抽提患者血清中的ＤＮＡ，包被于聚苯乙烯微滴板中，与生物素化ＨＢＶＤＮＡ杂交后，以Ｅｕ３＋－ＳＡ为检测物，应用时间分辨荧光技术检测血清样本中的ＨＢＶＤＮＡ。结果：本实验共检查了４３例临床血清样本，在２９例ＨＢｅＡｇ阳性病例中共检出２５例ＨＢＶＤＮＡ阳性，阳性率为８６．２１％；在１４例ＨＢｅＡｂ阳性病例中检出２例ＨＢＶＤＮＡ阳性，阳性率为１４．２９％。结论：本方法快速、简便、易自动化处理，是一项值得推广的非放射性分析检测技术。

关键词：时间分辨荧光检测分子杂交乙型肝炎病毒 DNA

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人胃癌相关蛋白VRG107基因的扩增及组织表达初步研究

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第二军医大学学报 2003年第12期24卷 1373-1374页

作者：吴浩焦炳华娄永华史薇郭兴中第二军医大学基础医学部新药评价中心上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室

以正常人肝脏cDNA文库为模板,采用PCR方法扩增出编码胃癌相关蛋白VRG107基因片段,应用半定量RT-PCR和Northern印迹分析研究它在人体组织中表达的分布。结果表明VRG107基因编码区为297 bp,与文献报道完全相同。该基因在肝、胃、结肠、肾... 详细信息

以正常人肝脏cDNA文库为模板,采用PCR方法扩增出编码胃癌相关蛋白VRG107基因片段,应用半定量RT-PCR和Northern印迹分析研究它在人体组织中表达的分布。结果表明VRG107基因编码区为297 bp,与文献报道完全相同。该基因在肝、胃、结肠、肾、乳腺等多种组织(包括肿瘤组织)中均有不同程度的表达。在肝癌组织中表达量明显少于癌旁组织(P<0.01),而在结肠癌组织中表达也少于癌旁组织。提示VRG107基因是一个组织分布广泛的基因,在部分肿瘤组织中表达量明显减少。

关键词：人胃癌 VRG107基因基因扩增基因表达癌组织

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兔乳酸脱氢酶C_4的分离纯化及动力学研究

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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 328-332页

作者：邹鲁峰杨雨善姜关祥陈志游冬青第二军医大学基础医学部生物化学教研室第二军医大学海军医学系放射医学研究室

目的：建立兔乳酸脱氢酶Ｃ４（ＬＤＨ－Ｃ４）分离纯化的新方法，研究该酶的动力学特性。方法：采用ＢｌｕｅＤｅｘｔｒａｎ和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ交联制成ＢｌｕｅＤｅｘｔｒａｎ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ染料配体亲和层析柱，结合... 详细信息

目的：建立兔乳酸脱氢酶Ｃ４（ＬＤＨ－Ｃ４）分离纯化的新方法，研究该酶的动力学特性。方法：采用ＢｌｕｅＤｅｘｔｒａｎ和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ交联制成ＢｌｕｅＤｅｘｔｒａｎ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ染料配体亲和层析柱，结合ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０离子交换层析分离提纯兔ＬＤＨ－Ｃ４，以作图法测定该酶动力学数据。结果：纯化的ＬＤＨ－Ｃ４经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及琼脂糖凝胶电泳证明为单一组分，相对分子质量１３６０００。纯化得率４５．５％，纯化倍数３１６倍。兔ＬＤＨ－Ｃ４动力学测定，其对底物乳酸、丙酮酸的Ｋｍ值分别为１．１１ｍｍｏｌ／Ｌ、０．２３ｍｍｏｌ／Ｌ；产物乳酸、丙酮酸对其均有非竞争性抑制作用，Ｋｉ值分别为９．１１ｍｍｏｌ／Ｌ、０．０２７ｍｍｏｌ／Ｌ。结论：本法是一种简便、快速、高效的分离纯化免ＬＤＨ－Ｃ４新方法；动力学性质表明该酶对丙酮酸的亲和力大于乳酸，且易受产物丙酮酸的抑制。

关键词：乳酸脱氢酶同工酶亲和层析纯化分离

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基因xylE编码的邻苯二酚2，3－双加氧酶在大肠杆菌中的亚克隆与高表达

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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 306-312页

作者：蔡在龙王学敏毛积芳季朝能张洁董海沈仁权毛裕民上海第二军医大学基础医学部生物化学教研室上海复旦大学遗传学研究所

目的：构建ｘｙｌＥ基因高表达菌株，为快速检测芳香类化合物污染提供可能。方法和结果：通过ＰＣＲ扩增，将位于质粒ｐＴＧ４０２上的ｘｙｌＥ基因进行扩增，克隆于ｐＵＣ１１８Ｎ和ｐＵＣ１１９Ｎ上，经双向测序，证明ＰＣＲ过程中并... 详细信息

目的：构建ｘｙｌＥ基因高表达菌株，为快速检测芳香类化合物污染提供可能。方法和结果：通过ＰＣＲ扩增，将位于质粒ｐＴＧ４０２上的ｘｙｌＥ基因进行扩增，克隆于ｐＵＣ１１８Ｎ和ｐＵＣ１１９Ｎ上，经双向测序，证明ＰＣＲ过程中并未发生突变，然后进一步克隆于高表达载体ｐＪＬＡ５０３，转化Ｅ．ｃｏｌｉＴＧ１，经４２℃诱导，获得了高表达的基因产物，表达量占全菌总蛋白的３４．２％。结论：ｘｙｌＥ基因在大肠杆菌中获得了高表达。

关键词： xylE基因邻苯二酚双加氧酶大肠杆菌亚克隆

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东海贻贝抗菌肽Myticin A基因的克隆表达及其生物学活性

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第二军医大学学报 2005年第1期26卷 65-68页

作者：仲燕刘军华张建鹏冯伟华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室上海200433

目的:在毕赤酵母表达系统中表达贻贝抗菌肽Myticin A并检测其生物学活性。方法:提取贻贝总mRNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增得到DNA片段。PCR产物与pMD18 T连接,得到阳性重组载体pMD18 Myticin A。Myticin A基因插入载体pPIC9K中,得到的重... 详细信息

目的:在毕赤酵母表达系统中表达贻贝抗菌肽Myticin A并检测其生物学活性。方法:提取贻贝总mRNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增得到DNA片段。PCR产物与pMD18 T连接,得到阳性重组载体pMD18 Myticin A。Myticin A基因插入载体pPIC9K中,得到的重组载体pPIC9K Myticin A转化至宿主菌中。得到高抗性阳性菌株并进行诱导表达。发酵上清进行Tricine SDS PAGE分析并用CM sepharose柱和Sephadex G 25柱纯化,Western印迹法鉴定并检测生物学活性。结果:获得重组载体pPIC9K Myticin A。高抗性多拷贝阳性表达菌株GS115/pPIC9K Myticin A经甲醇诱导后,Tricine SDS PAGE证实其相对分子质量为4 500,表达量为14%以上,纯化后纯度达到90%以上。Western印迹法证实所表达样品为Myticin A。表达样品对巨大芽胞杆菌的生长有抑制作用,对小鼠成纤维细胞(L929)、胰腺癌细胞(SW1990)、结肠腺癌细胞(LoVo)的生长均有明显抑制作用。结论:应用毕赤酵母表达系统能较好地表达抗菌肽Myticin A,生物学活性研究证实其具有抗革兰阳性菌作用,明显抑制肿瘤细胞生长。

关键词：抗菌肽 Myticin A 贻贝重组质粒毕赤酵母基因表达

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玄参中环烯醚萜Epibueropyridinium A对醛糖还原酶的抑制作用

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第二军医大学学报 2006年第7期27卷 760-762页

作者：黄才国魏善建刘军华第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室上海200433

目的:研究Epibueropyridium A对醛糖还原酶的抑制作用。方法:醛糖还原酶通过硫酸铵分级沉淀从牛眼晶状体中提取,在含有DL-甘油醛、醛糖还原酶、NADPH的反应体系中,加入一定浓度的Epibueropyridium A,通过340 nm处光密度的变化来反映Epib... 详细信息

目的:研究Epibueropyridium A对醛糖还原酶的抑制作用。方法:醛糖还原酶通过硫酸铵分级沉淀从牛眼晶状体中提取,在含有DL-甘油醛、醛糖还原酶、NADPH的反应体系中,加入一定浓度的Epibueropyridium A,通过340 nm处光密度的变化来反映Epibueropyridium A对酶活性的抑制作用。阳性对照为依帕司他,采用双倒数作图的方法确定抑制类型,二次作图法求Ki,以抑制剂浓度对抑制率作图求IC50。结果:Epibueropyridium A能显著抑制醛糖还原酶的活性,为竞争性抑制,其半数抑制剂量IC50为4.2μg/ml,Ki值为4.88μg/ml。结论:Epibueropyridium A是醛糖还原酶的竞争性抑制剂。

关键词： Epibueropyridium A 玄参醛糖还原酶酶抑制剂

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应用Tet-On基因表达系统实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达

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第二军医大学学报 2006年第10期27卷 1092-1097页

作者：杨生生杨志峰严鸣蔡在龙焦炳华毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 基础医学部病理生理学教研室上海200433

目的:应用Tet-On基因表达系统构建可调控性真核表达质粒,实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达。方法:采用DNA重组技术构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18(CD11b和CD18是Mac-1的两个亚基),通过脂质体介导共转... 详细信息

目的:应用Tet-On基因表达系统构建可调控性真核表达质粒,实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达。方法:采用DNA重组技术构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18(CD11b和CD18是Mac-1的两个亚基),通过脂质体介导共转染CHO细胞,用荧光显微镜观察转染后阳性细胞;应用RT-PCR和荧光强度分析观察不同浓度(0、0.01、0.1、0.5、1、2μg/ml)强力霉素(Dox)对细胞内CD11b和CD18表达水平的影响;检测PMA(1μg/ml)刺激前后CHO-Mac-1-FP细胞与其配基ICAM-1黏附活性的变化。结果:酶切鉴定和测序证实,已成功构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18,在荧光显微镜下观察到转染成功的CHO细胞发出青色荧光和黄色荧光。通过荧光显微镜观察到随着培养液中Dox浓度的增加,CHO细胞内的荧光强度相应增强,同时CD11b和CD18在mRNA水平的表达也随Dox浓度的增加而增加。PMA刺激后,CHO-Mac-1-FP细胞与其配基ICAM-1黏附率增高(2 h和4 h时最高,此后逐渐下降)。结论:本研究成功实现了Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达并具有野生型Mac-1的黏附活性,为进一步开展单分子光谱(SMS)和荧光共振能量转移(FRET)技术研究活细胞内Mac-1分子的2个亚基的二聚化、群集、构象及与配基亲和力变化创造条件。

关键词： Mac-1 青色荧光蛋白黄色荧光蛋白融合蛋白可调控表达

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遗传性椭圆形红细胞增多症红细胞膜蛋白和糖的变化

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第二军医大学学报 1994年第5期15卷 434-437页

作者：何丽娅冯伟华赵麟窦鸿魏尧梅第二军医大学基础医学部生物化学教研室湖北医学院咸宁分院生化教研室

对１例遗传性椭圆形红细胞增多症（ＨＥ）患者的红细胞膜进行了膜蛋白电泳、糖基和酶活力分析。发现：（１）红细胞膜蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧ电泳，在带４．５区（带４．２～４．９间）有两条带染色强度异常及在带８以下出现一分子量约为２... 详细信息

对１例遗传性椭圆形红细胞增多症（ＨＥ）患者的红细胞膜进行了膜蛋白电泳、糖基和酶活力分析。发现：（１）红细胞膜蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧ电泳，在带４．５区（带４．２～４．９间）有两条带染色强度异常及在带８以下出现一分子量约为２１０００的新蛋白带；（２）红细胞膜唾液酸和中性糖含量均显著减少。表胚凝集素－生物素－亲合素－胶体金标记红细胞膜在透射电镜下观察到椭圆形红细胞膜表面胶金颗粒结合稀少；（３）红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶及Ｃａ（２＋）－Ｍｇ（２＋）－ＡＴＰ酶活力均降低。结果提示：ＨＥ的红细胞膜蛋白异常和糖基（特别是唾液酸）减少可能与红细胞的不稳定性、形态异常及寿命缩短有关。

关键词：遗传性红细胞增多症红细胞膜蛋白质糖

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心肺复苏后大鼠脑细胞线粒体呼吸功能的变化及左卡尼汀的干预作用

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药学服务与研究 2005年第3期5卷 259-262页

作者：张雷林兆奋缪明永杨兴易马宇洁第二军医大学长征医院急救科上海200003 第二军医大学基础医学部生物化学教研室上海200433

目的:研究心肺复苏后大鼠脑细胞线粒体呼吸功能的改变及左卡尼汀对其脑细胞线粒体呼吸功能的干预作用。方法:采用窒息合并0.5 mol/L冰氯化钾停跳液致大鼠心跳骤停5 min后开始心肺复苏的动物模型,SD大鼠88只,随机分为11组:对照组(假手术... 详细信息

目的:研究心肺复苏后大鼠脑细胞线粒体呼吸功能的改变及左卡尼汀对其脑细胞线粒体呼吸功能的干预作用。方法:采用窒息合并0.5 mol/L冰氯化钾停跳液致大鼠心跳骤停5 min后开始心肺复苏的动物模型,SD大鼠88只,随机分为11组:对照组(假手术组),心肺复苏后3、12、24、48、72 h组,心肺复苏后左卡尼汀干预3、12、24、487、2 h组。每组均为8只大鼠。1 g/支的左卡尼汀溶于100 mL 0.9%NaCl注射液,按100 mg/kg的剂量给大鼠腹腔注射。取脑组织测定线粒体呼吸Ⅲ、Ⅳ态及呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O)。结果:心肺复苏后大鼠脑细胞线粒体RCR和P/O明显下降;随着复苏成功后时间的延长,线粒体RCR和P/O维持在低水平;使用左卡尼汀干预后,RCR和P/O能接近正常。结论:心肺复苏后大鼠脑细胞线粒体呼吸功能明显下降,左卡尼汀对脑细胞呼吸功能有保护作用。

关键词：左卡尼汀心肺复苏线粒体呼吸功能

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