检索结果-内蒙古大学图书馆

血管形成抑制因子tumstatin_(45-132)的基因克隆、表达和生物学活性

细胞与分子免疫学杂志 2005年第2期21卷 141-143页

作者：罗以勤王梁华球谊焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

　目的: 克隆人tumstatin全长编码区基因及编码tum statin45-132的基因, 在大肠杆菌中表达。方法: 采用RT PCR从人胚肾细胞系 293细胞中克隆人的tumstatin全长编码基因, 继以PCR扩增tumstatin45-132 (45 -132位氨基酸 )编码基因, PCR产... 详细信息

　目的: 克隆人tumstatin全长编码区基因及编码tum statin45-132的基因, 在大肠杆菌中表达。方法: 采用RT PCR从人胚肾细胞系 293细胞中克隆人的tumstatin全长编码基因, 继以PCR扩增tumstatin45-132 (45 -132位氨基酸 )编码基因, PCR产物克隆到pBV220载体中, 测序证实后, 转化***21, 于 42℃进行热诱导表达。用SDS -PAGE分析表达产物, 对重组蛋白纯化后用内皮细胞增殖试验测定其生物学活性。结果: RT- PCR扩增出tumstatin全长编码基因, 以PCR扩增出tumstatin45-132的编码基因, 经序列分析证实与GenBank中的序列完全一致。以含有tumstatin45-132编码基因的表达载体转化***21后, 可表达出相对分子质量(Mr)为 9 600的重组蛋白。表达产物的蛋白量占菌体蛋白量的 10%, 纯化后能抑制内皮细胞的增殖。结论: 成功克隆全长tumstatincDNA, 并在大肠杆菌中表达重组tumstatin45-132蛋白, 证实其具有抑制内皮细胞增殖的活性。

关键词： tumstatin45-132基因表达生物学活性

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伯氏疟原虫氯喹抗性株感染ICR小鼠脾脏树突状细胞成熟和B细胞活化

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第1期26卷 1-5页

作者：陈克强朱淮民倪灿荣宋关鸿上海交通大学农业与生物学院动物科学系上海201101 第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433 第二军医大学长海医院病理科上海200433

目的研究伯氏疟原虫氯喹抗性株(RC株)和氯喹敏感株(N株)感染鼠脾脏B细胞活化与树突状细胞(DC)的关系。方法分别用感染N株或RC株疟原虫的红细胞(iRBC)腹腔接种感染ICR小鼠(1×106个iRBC/只)。当小鼠原虫血症N株达50%～80%、RC株达61... 详细信息

目的研究伯氏疟原虫氯喹抗性株(RC株)和氯喹敏感株(N株)感染鼠脾脏B细胞活化与树突状细胞(DC)的关系。方法分别用感染N株或RC株疟原虫的红细胞(iRBC)腹腔接种感染ICR小鼠(1×106个iRBC/只)。当小鼠原虫血症N株达50%～80%、RC株达61.7%～68.4%时,断颈处死取脾脏。常规方法制作石蜡切片,HE染色或免疫组织化学染色,进行组织学观察。制作超薄切片,透射电镜观察脾脏细胞的变化。制作冰冻切片进行免疫荧光观察。流式细胞仪分析比较B细胞和DC变化。结果RC株感染小鼠脾脏白髓增生明显,抗B细胞的特异性表面分子CD45R/B220和CD19抗体同时表达阳性的B细胞在脾细胞中的百分比增加,中、小淋巴细胞数量增多,在红髓内浆母细胞与成熟的浆细胞数量增多。而N株感染小鼠脾小体则以大、小淋巴细胞为主,生发中心不明显,红髓可见大量的含疟原虫的红细胞、小淋巴细胞,而浆母细胞和其他发育期浆细胞则少见。RC株感染小鼠脾脏内白细胞分化抗原11c(CD11c)阳性的DC数量明显增多,尤其动脉周围淋巴鞘T细胞区。并且这些DC表面主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)类分子表达明显升高,表明主要是成熟的DC增多。DC外形不规则,胞质丰富,电子密度高,含发达的高尔基复合体和吞噬泡样结构。结论RC株感染小鼠脾脏成熟的DC明显增加,从而诱导B细胞的活化增殖。

关键词：伯氏疟原虫氯喹抗性脾脏 B细胞树突状细胞小鼠

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基于pMTR1质粒的转基因小鼠突变研究模型的建立

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 537-540页

作者：卢洋黎怀星李建秀傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的 :建立在基因组中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ,为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法 :利用分子克隆技术构建 p MTR1质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 5 72只 C5 7BL / 6小鼠受精卵 ,再将它们分... 详细信息

目的 :建立在基因组中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ,为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法 :利用分子克隆技术构建 p MTR1质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 5 72只 C5 7BL / 6小鼠受精卵 ,再将它们分别移入 45只受体母鼠的输卵管中 ,共产仔 44只 ,存活 35只 ,采用 PCR,PCR- Southern和基因组 Southern杂交三级筛选法鉴定子代小鼠。以 4只经基因组 Southern杂交证实在基因组 DNA中整合有多拷贝结构完整的 p MTR1质粒的小鼠作Founder小鼠 ,进行转基因小鼠的建系工作。对每个 Founder小鼠已有的 F1代及 F2代转基因小鼠的基因组 DNA进行p MTR1质粒回收实验。结果 :从转基因小鼠基因组中可以回收出结构、功能完整的 p MTR1质粒。结论 :(1)建立了在基因组 DNA中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ;(2 )

关键词：转基因小鼠基因突变 PMTR1质粒

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人胚生殖嵴干细胞多能性调节基因Oct4的克隆及其在大肠杆菌中的表达(英文)

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 937-940页

作者：刘善荣王庆敏杨玲汤淑萍惠宁蒋正戚中田刘厚奇第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学长海医院妇产科第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的 :克隆人胚生殖系细胞多能性调节基因Oct4 ,并使其在大肠杆菌中表达。方法 :取 4～ 6周人胚胎分离生殖嵴和背侧肠系膜 ,利用RT PCR技术扩增编码Oct4的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建成 pGEX5T Oct4重组质粒。β硫... 详细信息

目的 :克隆人胚生殖系细胞多能性调节基因Oct4 ,并使其在大肠杆菌中表达。方法 :取 4～ 6周人胚胎分离生殖嵴和背侧肠系膜 ,利用RT PCR技术扩增编码Oct4的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建成 pGEX5T Oct4重组质粒。β硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导使该基因在k80 2菌中表达。结果 :用PCR方法扩增获得大小约 1 .1kb条带 ;全自动测序与GenBank中登录的序列 97%同源。获得了pGEX5T Oct4重组子并在k80 2菌中获得了表达 ,SDS PAGE分析有一特异性的 6 2 0 0 0条带。结论 :扩增和克隆了人胚生殖系细胞多能性调节蛋白Oct4全长cDNA并在大肠杆菌中获得表达。

关键词：人胚生殖嵴干细胞多能性调节基因 Oct4 克隆基因克隆基因表达

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噬菌体展示protein A及protein L Ig结合单结构域随机组合文库及Ig亲和筛选

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生物化学与生物物理进展 2005年第6期32卷 535-543页

作者：徐容沈毅臖邓松华蔡春晓陈秋莉贾建安王锦红潘欣潘卫安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

ProteinA和proteinL是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含SacⅠ位点的特定引物PCR分别扩增制备proteinA的A、B、C、D抗体结合结构域和proteinL的B3抗体结合结构域,... 详细信息

ProteinA和proteinL是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含SacⅠ位点的特定引物PCR分别扩增制备proteinA的A、B、C、D抗体结合结构域和proteinL的B3抗体结合结构域,各结构域DNA片段经SacⅠ酶切后,再随机连接形成各种不同长度的分子组合文库,将该文库呈现在噬菌体表面构建了噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库,所建组合文库容量为2.3×106个菌落形成单位,滴度为4.1×1011TU/ml,包含各种单结构域片段,并以随机方式连接.用人Ig对该文库进行4轮亲和筛选,随机挑选36个代表性的阳性克隆进行序列测定分析表明,亲和筛选获得了多种非天然形式存在的新的Ig结合分子结构,其中32个克隆具有由proteinL的单结构域和proteinA的单结构域间隔重复排列而成的特征性(MDPL-MDPA)n结构.对噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库的体外分子进化研究的尝试,为Ig结合分子的结构和功能研究提供了一新的途径,也为Ig结合分子的定向改造打下基础.

关键词：噬菌体展示分子进化结构域组合文库 protein A protein L

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用Fura-2测定单个巨噬细胞内游离钙的条件的优化

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第二军医大学学报 2002年第3期23卷 341-343页

作者：朱晓燕韩建中娄淑杰严进徐仁宝第二军医大学基础医学部病理生理学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部基础医学部神经生物学教研室

Fura-2负载后用荧光显微镜成像系统研究单细胞内游离钙离子浓度([Ca~(2+)]i)应用已十分广泛，娄淑杰等用此方法检测了PC12细胞内的[Ca~(2+)]i，我们将娄淑杰等的方法应用于腹腔巨噬细胞（PEM），发现不尽理想，因此我们实验过程中对Fur... 详细信息

Fura-2负载后用荧光显微镜成像系统研究单细胞内游离钙离子浓度([Ca~(2+)]i)应用已十分广泛，娄淑杰等用此方法检测了PC12细胞内的[Ca~(2+)]i，我们将娄淑杰等的方法应用于腹腔巨噬细胞（PEM），发现不尽理想，因此我们实验过程中对Fura-2的浓度进行了调整，另外PEM作为参与炎症的非兴奋细胞，其活化对[Ca~(2+)]i有很大的影响，而细胞贴壁很可能导致活化，但测定方法又要求只能在贴壁细胞进行。因此，我们使用鼠尾胶缩短贴壁时间，并把检测用的PEM的贴壁时间控制在一定范围之内。取得了比较理想的结果。

关键词： Fura-2 巨噬细胞钙测定优化 PEM

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电镜技术在病理学诊断中的应用

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第二军医大学学报 2003年第6期24卷 628-628,649页

作者：颜永碧陆月良王英第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

为摸索出适合临床超微结构病理诊断的电镜技术，更好地发挥其对疾病诊断的作用，现根据多年工作积累并结合临床实际，介绍本实验室在疾病诊断中电镜技术的应用情况。

关键词：病理学诊断电镜技术临床应用疾病诊断

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抑郁症大鼠海马和顶叶皮质神经元NGF含量及其mRNA的表达

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第二军医大学学报 2002年第6期23卷 590-592,I006页

作者：王雪琦由振东赵小林王勇姿路长林第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

目的 :观察实验性抑郁症大鼠脑内神经生长因子含量及其 m RNA表达的变化。方法 :采用长期不可预见性中等强度应激造成大鼠抑郁症模型。运用 openfield法观察大鼠行为学变化 ,运用免疫组化和原位杂交法观察神经元 NGF含量及其m RNA表达... 详细信息

目的 :观察实验性抑郁症大鼠脑内神经生长因子含量及其 m RNA表达的变化。方法 :采用长期不可预见性中等强度应激造成大鼠抑郁症模型。运用 openfield法观察大鼠行为学变化 ,运用免疫组化和原位杂交法观察神经元 NGF含量及其m RNA表达的变化。结果 :与对照组相比 ,抑郁组大鼠海马和顶叶皮质神经元 NGF免疫阳性颗粒数目减少 ,着色浅淡 ;NGFm RNA杂交阳性信号减少。结论 :实验性抑郁症大鼠海马和顶叶皮质神经元 NGF含量下降 ,NGF m RNA表达水平降低。

关键词：抑郁症大鼠海马顶叶皮质神经元 NGF 含量 mRNA 神经生长因子

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SNT1与RET之间相互作用的酵母双杂交研究

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第二军医大学学报 2006年第6期27卷 617-619页

作者：矫力张勇刘翾刘秀杰张照环王永刚朱伟何成第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

目的:研究suc1-binding neurotrophic target(SNT1)与RET之间的相互作用,寻找RET受体下游的结合蛋白,以深入认识RET下游信号转导机制。方法:将RET胞内域与LexA蛋白融合作为DNA结合蛋白,分别将SNT1、SNT1PTB及SNT1ΔPTB与B42AD蛋白融合... 详细信息

目的:研究suc1-binding neurotrophic target(SNT1)与RET之间的相互作用,寻找RET受体下游的结合蛋白,以深入认识RET下游信号转导机制。方法:将RET胞内域与LexA蛋白融合作为DNA结合蛋白,分别将SNT1、SNT1PTB及SNT1ΔPTB与B42AD蛋白融合作为激活域蛋白,共转化酵母菌后,通过β-半乳糖苷酶活性检测以及氨基酸营养缺陷生长实验分析它们之间的相互作用。结果:SNT1及SNT1PTB与RET之间在酵母中存在结合,而SNT1ΔPTB不与RET结合。结论:证实RET与SNT1之间具有相互作用,SNT1的PTB结构域在介导此相互作用的过程中非常重要。

关键词： RET SNT1 PTB 酵母双杂交蛋白相互作用

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糖皮质激素受体基因片段的克隆和目标载体的构建

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第二军医大学学报 1999年第10期20卷 726-728页

作者：姚玉成胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的：构建针对糖皮质激素受体（ＧＲ）基因第２外显子的目标载体，为获得糖皮质激素受体基因缺陷型胚胎干细胞准备条件。方法：通过限制性酶切对ＤＮＡ片段进行了结构分析，克隆相应ＤＮＡ片段进行ＤＮＡ序列测定，利用ｐＴＫ－Ｎｅ... 详细信息

目的：构建针对糖皮质激素受体（ＧＲ）基因第２外显子的目标载体，为获得糖皮质激素受体基因缺陷型胚胎干细胞准备条件。方法：通过限制性酶切对ＤＮＡ片段进行了结构分析，克隆相应ＤＮＡ片段进行ＤＮＡ序列测定，利用ｐＴＫ－Ｎｅｏ质粒框架和同源片段构建载体。结果：详细分析了ＧＲ基因第２外显子及其侧翼的基因组ＤＮＡ片段结构，克隆了同源片段，构建了目标载体。结论：这一载体的构建将为进一步建立ＧＲ基因剔除小鼠奠定基础。

关键词：糖皮质激素受体目标载体克隆 GR基因

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