检索结果-内蒙古大学图书馆

超临界流体萃取-胶束电动毛细管色谱法测定银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素的含量

第二军医大学学报 2000年第10期21卷 958-960页

作者：佘佳红柳正良王春燕陈燕第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 第二军医大学药学院药物分析教研室上海200433

目的 :以超临界流体萃取 ( SFE)银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素 ,以胶束电动毛细管色谱法 ( MECC)测定这两种成分的含量。方法 :采用正交设计法考察 SFE提取工艺 ,SFE条件 :压力 42 m Pa;温度 6 0℃ ;静态萃取时间 4m in;动态萃取体积 4... 详细信息

目的 :以超临界流体萃取 ( SFE)银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素 ,以胶束电动毛细管色谱法 ( MECC)测定这两种成分的含量。方法 :采用正交设计法考察 SFE提取工艺 ,SFE条件 :压力 42 m Pa;温度 6 0℃ ;静态萃取时间 4m in;动态萃取体积 4m l;改性剂 0 .2 ml乙醇。 MECC条件 :空心熔融石英毛细管柱 ( 5 5 cm× 75μm ) ;缓冲液为磷酸二氢钠 -硼砂 =2 5 - 6 .2 5mm ol/L ( p H 8.5 ) ;SDS 35 mmol/L ;检测波长 2 5 4nm。结果 :SFE时改性剂对萃取效率的影响最大 ;MECC以肉桂酸为内标 ,在 2 1.2～ 10 6 .0μg/ml和 2 0 .0～ 10 0 .0μg/ml范围内 ,槲皮素和山奈素均呈良好的线性关系和重现性。 40 ,6 0和 80μl槲皮素的加样回收率分别为 93.87% ,94.0 2 %和 94.10 % ;40 ,6 0和 80μl山奈素的加样回收率分别为 94.5 0 % ,94.17%和 94.2 5 %。结论 :SFE与 MECC法联用 ,简便快速 ,可用于银杏叶粗提物中的黄酮类成分的分离分析。

关键词：银杏叶粗提物斛皮素山奈素 SFE-MECC法

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硫酸镉对FL/P4501A1细胞中人肺癌易感基因P4501A1的影响

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中华劳动卫生职业病杂志 2000年第4期18卷 201-203页

作者：陆敦印木泉上海第二军医大学卫生毒理学教研室 200433

目的　观察重金属化合物硫酸镉 (CdSO4 )在体外对人羊膜FL/P45 0 1A1细胞内P45 01A1DNA序列的改变作用 ,了解镉化合物对肺癌易感基因的影响。方法　利用不同剂量的CdSO4 处理FL/P45 0 1A1细胞 ,其半数抑制浓度 (IC50 )为 2 4.5 5mg/ml。... 详细信息

目的　观察重金属化合物硫酸镉 (CdSO4 )在体外对人羊膜FL/P45 0 1A1细胞内P45 01A1DNA序列的改变作用 ,了解镉化合物对肺癌易感基因的影响。方法　利用不同剂量的CdSO4 处理FL/P45 0 1A1细胞 ,其半数抑制浓度 (IC50 )为 2 4.5 5mg/ml。以 1/ 4IC50 终浓度CdSO4 处理FL/P45 0 1A1细胞 48h后提取细胞pREP 9/P45 0 1A1质粒。由于 pREP 9缺少通用序列 ,BamHI酶切 ,低熔点琼脂糖电泳分离P45 0 1A1cDNA片段。BamHI酶切 pGEM～ 3Zf(+ ) ,CIP处理 ,并与 2倍摩尔P45 0 1A1cDNA片段混合 ,乙醇沉淀 ,沉淀物加入 18μlTE ,加 2 μl 10倍连接酶缓冲液 ,混匀 ,加10UT4DNA连接酶 ,混匀 ,12℃保温 16～ 2 0h。凝胶电泳分析连接结果。鉴定合格连接物转化DH5α菌 ,X gal喷洒对重组子进行蓝 /白颜色筛选。选择含重组子的宿主菌进行P45 0 1A1cDNA测序。结果　在体外 ,CdSO4 未引起FL/P45 0 1A1cDNA序列改变。结论　CdSO4 对FL/P45 0 1A1细胞中肺癌易感基因P45 0

关键词：硫酸镉 FL/P4501A1细胞肺癌易感基因

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应重视新药审评机构改革后的新药申报工作

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第二军医大学学报 2000年第10期21卷 901-903页

作者：袁伯俊吴浩第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室新药评价中心上海200433

国家药品监督管理局( State Drug Administration,SDA)自1998年8月19日正式成立以来,按照国务院的统一部署,进行了一系列药品注册管理办法的改革,包括组织机构的调整 ,法规的修改、完善和补充等.尤其是对新药审批办法(含新生物制品审批... 详细信息

国家药品监督管理局( State Drug Administration,SDA)自1998年8月19日正式成立以来,按照国务院的统一部署,进行了一系列药品注册管理办法的改革,包括组织机构的调整 ,法规的修改、完善和补充等.尤其是对新药审批办法(含新生物制品审批办法)作了较大的修改,既考虑到与国际接轨,又结合了我国的实际情况,有利于保护并促进我国民族制药工业的发展,为加入WTO作了必要的准备.在强化药品监督管理的同时,还统一了药品监督管理机构,强调对新药研制开发的全过程进行严格、系统的监督管理,这对于保证临床用药的安全有效性,促进我国的新药研究与开发,提高我国的新药研制水平,保障人民身体健康 ,保持社会稳定,促进经济发展将起到积极的作用.

关键词：新药审评机构机构改革申报工作

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乙基亚硝基脲诱发转基因小鼠体内基因突变及微核形成

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中华预防医学杂志 2000年第1期34卷 28-30页

作者：曹洁印木泉陈建泉徐少甫上海市第二军医大学卫生毒理学教研室 200433 扬州大学农学院动物医学系

目的　用致突变剂乙基亚硝基脲 (ENU)验证基于pUC 118NX质粒的转基因小鼠用于体内诱变研究的可行性。方法　用酶切、环化方法从经过和未经过ENU诱变处理的xylE ,C5 7BL 6J转基因小鼠脾脏组织DNA中重新分离pUC 118NX质粒 ,使其转化DH10B... 详细信息

目的　用致突变剂乙基亚硝基脲 (ENU)验证基于pUC 118NX质粒的转基因小鼠用于体内诱变研究的可行性。方法　用酶切、环化方法从经过和未经过ENU诱变处理的xylE ,C5 7BL 6J转基因小鼠脾脏组织DNA中重新分离pUC 118NX质粒 ,使其转化DH10B宿主菌并铺氨苄青霉素抗性平板培养后喷洒邻苯二酚溶液 ,通过菌落颜色不同筛选突变体 ,并对突变靶基因xylE测序分析以确定突变类型。同时取该转基因小鼠外周血及骨髓细胞 ,观察ENU对转基因小鼠微核形成率的影响。结果　转基因小鼠脾脏组织xylE基因自发突变率 <4 79× 10 - 5,经ENU( 5 0mg kg× 5 )处理后 ,脾组织基因诱发突变率为 19 83× 10 - 5,两者差异有显著性。ENU诱发小鼠脾组织基因突变的类型包括颠换( 5 0 % )、单 /双碱基插入 ( 3 7 5 % )和转换 ( 12 5 % )。经ENU( 5 0mg kg× 5 )处理后 ,转基因小鼠外周血细胞微核率 ( 7 6‰ )和骨髓细胞微核率 ( 8 8‰ )均明显高于溶剂对照组 ,表明ENU可诱发该转基因小鼠染色体畸变。结论　基于pUC 118NX质粒的xylE ,C5 7BL 6J转基因小鼠可用于同时测定体内基因突变和染色体畸变 ,有望成为一种新的评价化学物遗传毒性的检测系统。

关键词：小鼠转基因微核乙基亚硝脲 DNA损伤

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新型重组人肿瘤坏死因子对大鼠肝细胞及小鼠肝组织中钙稳度的影响

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第二军医大学学报 2000年第1期21卷 20-23页

作者：颜天华袁伯俊刘俊平张淑英吴浩南京军医学院药理学教研室南京210049 第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433

目的：研究新型重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ－ＮＣ）对培养大鼠肝细胞内游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）及小鼠肝组织中Ｃａ２＋含量的影响。方法：以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为Ｃａ２＋荧光检测，荧光分光光度法测定培养大鼠... 详细信息

目的：研究新型重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ－ＮＣ）对培养大鼠肝细胞内游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）及小鼠肝组织中Ｃａ２＋含量的影响。方法：以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为Ｃａ２＋荧光检测，荧光分光光度法测定培养大鼠肝细胞内［Ｃａ２＋］ｉ；原子吸收分光光度法测定小鼠肝组织中Ｃａ２＋含量。结果：在加入ｒｈＴＮＦ－ＮＣ３ｈ后，可剂量依赖性地引起培养大鼠肝细胞内［Ｃａ２＋］ｉ显著升高；ｒｈＴＮＦ－ＮＣ可使Ｄ－ＧａｌＮ致敏小鼠出现严重肝损伤，肝组织中Ｃａ２＋含量明显增加，钙通道阻滞剂维拉帕米、硝苯地平能显著降低肝组织中Ｃａ２＋含量，同时减轻肝损伤程度。结论：ｒｈＴＮＦ－ＮＣ可引起培养大鼠肝细胞及小鼠肝组织中钙稳度失调，钙通道阻滞剂通过减少Ｃａ２＋

关键词：肿瘤坏死因子肝损伤钙稳度 rhTNF-NC

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一种新的胸腺素α原cDNA

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第二军医大学学报 2000年第2期21卷 101-103页

作者：道书艳卞广兴苗红邱磊郭葆玉余建国张淑英第二军医大学药学院生化药学教研室上海200433 济南军区第88医院肝病研究中心第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室

目的 :我们克隆了有中国人特征的胸腺素 α原 (prothymosinα,PTMAα)全长 c DNA,并进行测序分析。方法 :从健康中国人 PBMC po1y(A) + RNA中采用 RT- PCR法克隆 hu PTMAα c DNA,酶切鉴定 ,序列分析。结果 :经测序后发现该基因是一个... 详细信息

目的 :我们克隆了有中国人特征的胸腺素 α原 (prothymosinα,PTMAα)全长 c DNA,并进行测序分析。方法 :从健康中国人 PBMC po1y(A) + RNA中采用 RT- PCR法克隆 hu PTMAα c DNA,酶切鉴定 ,序列分析。结果 :经测序后发现该基因是一个与国外的高加索人种胸腺素 α原有 86 .4%同源性的新基因。结论 :从中国人中新发现了一个 hu PTMAα基因 ,并于日前被美国 NCBI(National Center of Biotechnology Inform ation) Gen Bank收入 ,获得登录号 (Accession:AF170 2 94)

关键词：胸腺素α原 cDNA 结构分析克隆

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克隆人胸腺素α原cDNA及RNA二级结构分析和带Xa因子的融合表达

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第二军医大学学报 2000年第1期21卷 34-37页

作者：郭葆玉余建国张淑英道书艳苗红邱磊第二军医大学药学院生化药学教研室上海200433 济南军区第88医院肝病研究中心第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室

目的：克隆表达具有重要生物功能的胸腺素α原ｃＤＮＡ（ｈｕｍａｎｐｒｏｔｈｙｍｏｓｉｎα，ｈｕＰＴＭＡα）。方法：从健康中国人ＰＢＭＣｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ中采用ＲＴ－ＰＣＲ法克隆ｈｕＰＴＭＡαｃＤＮＡ，并作ＲＮ... 详细信息

目的：克隆表达具有重要生物功能的胸腺素α原ｃＤＮＡ（ｈｕｍａｎｐｒｏｔｈｙｍｏｓｉｎα，ｈｕＰＴＭＡα）。方法：从健康中国人ＰＢＭＣｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ中采用ＲＴ－ＰＣＲ法克隆ｈｕＰＴＭＡαｃＤＮＡ，并作ＲＮＡ二级结构分析。结果：克隆出长度为３００ｂｐ，编码１００个氨基酸的ｈｕＰＴＭＡαｃＤＮＡ，经氨基酸序列分析发现在３７～４１位缺失Ａｓｎ３７－Ｇｌｙ３８－Ａｓｎ３９－Ａｌａ４０－Ｇｌｕ４１和６５～６８位缺失Ｇｌｕ６５－Ｇｌｕ６６－Ｇｌｕ６７－Ｇｌｕ６８，与国际基因库连接检索证明是与ｈｕＰＴＭＡα有８６．４％同源性的一个新亚型，融合表达蛋白的相对分子质量为３．７×１０４，有促进ＩＦＮ和ＴＮＦ产生的生物学活性。结论：本研究克隆的ｈｕＰＴＭＡαｃＤＮＡ是中国人中新发现的一个多态型基因序列，它的克隆并表达成功为今后该基因的免疫功能研究及中国人基因型研究分析提供了有用的材料。

关键词：胸腺素α原 RNA 融合表达克隆 cDNA

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恶性疟原虫裂殖子表面蛋白2基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

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第二军医大学学报 2000年第4期21卷 322-325页

作者：陈志辉管惟滨吴少廷缪为民焦炳华第二军医大学基础医学部寄生虫学教研室上海200433 深圳市卫生防疫站第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室

目的：克隆恶性疟原虫裂殖子表面蛋白２全基因，并在大肠杆菌中进行表达。方法：采用ＰＣＲ扩增恶性疟原虫ＦＣＣ－１／ＨＮ株ＭＳＰ２基因，克隆插入ｐＵＣ１９，并重组人表达质粒载体中，转化大肠杆菌，诱导重组质粒ｐＢＫ－ＣＭＶ／... 详细信息

目的：克隆恶性疟原虫裂殖子表面蛋白２全基因，并在大肠杆菌中进行表达。方法：采用ＰＣＲ扩增恶性疟原虫ＦＣＣ－１／ＨＮ株ＭＳＰ２基因，克隆插入ｐＵＣ１９，并重组人表达质粒载体中，转化大肠杆菌，诱导重组质粒ｐＢＫ－ＣＭＶ／ｍｓｐ２表达ＭＳＰ２蛋白抗原，对表达产物进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｗｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定。结果：ＰＣＲ扩增出８２４ｂｐＤＮＡ片段。

关键词：恶性疟原虫裂殖子表面蛋白2 基因克隆大肠杆菌

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人单核细胞趋化蛋白受体5的基因克隆及该基因超家族成员氨基酸结构分析(英文)

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第二军医大学学报 2000年第11期21卷 1055-1058页

作者：郭葆玉张淑英余建国道书艳苗红邱磊第二军医大学药学院生化药学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室济南军区第88医院肝病研究中心

目的 :获取有重要生物功能的人单核细胞趋化蛋白受体 5 (hum an m onocyte chemotactic receptor5 ,hu CCR5 )。方法 :从人 PBMC中提取总 RNA和 poly(A) + RNA,而后经反转录合成 c DNA第一链 ,再以 PCR扩增出 hu CCR5 c DNA并插入融合... 详细信息

目的 :获取有重要生物功能的人单核细胞趋化蛋白受体 5 (hum an m onocyte chemotactic receptor5 ,hu CCR5 )。方法 :从人 PBMC中提取总 RNA和 poly(A) + RNA,而后经反转录合成 c DNA第一链 ,再以 PCR扩增出 hu CCR5 c DNA并插入融合表达载体 pc DNA3.0的 Bam H 和 Hind 位点 ,转化大肠杆菌 TG- 1,挑取克隆 ,酶切鉴定 ,序列分析。结果 :克隆出长度为 10 5 6 bp,编码 35 2个氨基酸的 hu CCR5 c DNA。并分析证明与该基因超家族氨基酸有 80 %同源性 ,与国外发表资料比较有3个碱基突变。结论 :克隆出人单核细胞趋化蛋白 5受体 ,为今后基础研究提供了较有用的材料。

关键词：人单核细胞趋化蛋白受体5 克隆氨基酸

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人CCR55′侧翼调控序列克隆测定及基序分析

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第二军医大学学报 2000年第11期21卷 1059-1061页

作者：郭葆玉张淑英余建国道书艳卞广兴第二军医大学药学院生化药学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 济南军区第88医院肝病研究中心

目的 :克隆人 CCR5 5′侧翼调控序列及其基序分析。方法 :设计单引物 ,利用单向多循环 PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化人 CCR5 5′侧翼调控序列基因组 DNA,PCR产物作为序列分析模板。结果 :得到长为 1.5 kb的人 CCR5 5′侧翼调控序... 详细信息

目的 :克隆人 CCR5 5′侧翼调控序列及其基序分析。方法 :设计单引物 ,利用单向多循环 PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化人 CCR5 5′侧翼调控序列基因组 DNA,PCR产物作为序列分析模板。结果 :得到长为 1.5 kb的人 CCR5 5′侧翼调控序列基因组 DNA序列 ,并对该区域的基序进行了分析。结论 :该方法适合于基因组 DNA,特别是逆向扩增一些读框区 5′侧翼调控序列。

关键词：调控序列 CCR5 基序分析克隆

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