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人胚生殖嵴干细胞多能性调节基因Oct4的克隆及其在大肠杆菌中的表达(英文)

第二军医大学学报 2003年第9期24卷 937-940页

作者：刘善荣王庆敏杨玲汤淑萍惠宁蒋正戚中田刘厚奇第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学长海医院妇产科第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的 :克隆人胚生殖系细胞多能性调节基因Oct4 ,并使其在大肠杆菌中表达。方法 :取 4～ 6周人胚胎分离生殖嵴和背侧肠系膜 ,利用RT PCR技术扩增编码Oct4的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建成 pGEX5T Oct4重组质粒。β硫... 详细信息

目的 :克隆人胚生殖系细胞多能性调节基因Oct4 ,并使其在大肠杆菌中表达。方法 :取 4～ 6周人胚胎分离生殖嵴和背侧肠系膜 ,利用RT PCR技术扩增编码Oct4的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建成 pGEX5T Oct4重组质粒。β硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导使该基因在k80 2菌中表达。结果 :用PCR方法扩增获得大小约 1 .1kb条带 ;全自动测序与GenBank中登录的序列 97%同源。获得了pGEX5T Oct4重组子并在k80 2菌中获得了表达 ,SDS PAGE分析有一特异性的 6 2 0 0 0条带。结论 :扩增和克隆了人胚生殖系细胞多能性调节蛋白Oct4全长cDNA并在大肠杆菌中获得表达。

关键词：人胚生殖嵴干细胞多能性调节基因 Oct4 克隆基因克隆基因表达

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Oct4调节胚胎干细胞全能性扩增的研究进展

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 963-965页

作者：刘善荣刘厚奇戚中田第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

Oct4是一种POU转录因子,属于Ⅴ类POU蛋白,在小鼠全能胚胎干细胞和生殖系干细胞表达.在早期鼠胚中,只有在ICM变成滋养层阶段,Oct4为维持其全能表型而发挥作用.Oct4表达可能是由位置效应引起的,还与特异调节Oct4活性的元件,如近端、远端... 详细信息

Oct4是一种POU转录因子,属于Ⅴ类POU蛋白,在小鼠全能胚胎干细胞和生殖系干细胞表达.在早期鼠胚中,只有在ICM变成滋养层阶段,Oct4为维持其全能表型而发挥作用.Oct4表达可能是由位置效应引起的,还与特异调节Oct4活性的元件,如近端、远端增强子元件有关.Oct4对转录的调节分为抑制转录和转录激活两种.Oct4的激活有3种模式:远端依赖性共激活,构象依赖性共激活,Oct4聚合体依赖性共激活.

关键词： Oct4 胚胎干细胞全能性扩增综述文献

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哺乳动物生殖细胞的形成、性分化和永生化

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 960-962页

作者：刘善荣胡凯猛刘厚奇戚中田第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

小鼠原始生殖细胞产生于原肠胚形成阶段,迁移到生殖嵴位置后获得性别分化决定.体外培养时原始生殖细胞可大量增殖,现在已经建立了人类EG细胞株,这些永生的EG细胞具有正常的核型和多向分化能力,它可分化为某些特定的细胞类型,在临床上对... 详细信息

小鼠原始生殖细胞产生于原肠胚形成阶段,迁移到生殖嵴位置后获得性别分化决定.体外培养时原始生殖细胞可大量增殖,现在已经建立了人类EG细胞株,这些永生的EG细胞具有正常的核型和多向分化能力,它可分化为某些特定的细胞类型,在临床上对退行性疾病的治疗有一定的意义.

关键词：原始生殖细胞性分化永生化综述文献

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人胚胎多能干细胞研究中的几个问题

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 933-936页

作者：刘善荣戚中田第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

目前在人胚胎多能干细胞的研究中存在材料来源不足、培养体系复杂和自发性分化的问题.这3个基本问题限制了人胚胎多能干细胞的基础和临床应用研究.要建立新的胚胎多能干细胞系应利用细胞核移植和细胞质重新编程功能建立新的途径,并探讨... 详细信息

目前在人胚胎多能干细胞的研究中存在材料来源不足、培养体系复杂和自发性分化的问题.这3个基本问题限制了人胚胎多能干细胞的基础和临床应用研究.要建立新的胚胎多能干细胞系应利用细胞核移植和细胞质重新编程功能建立新的途径,并探讨其中的机制和可能的关键因子;干细胞培养时主要进行简化培养体系和抑制细胞分化的研究;对干细胞分化进行临床应用研究时,主要将多种方法联合应用来诱导和筛选目的细胞并对其形态和功能进行评价.

关键词：胚胎多能干细胞

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人胚胎生殖系细胞分离与体外培养的初步研究

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 941-943页

作者：刘善荣刘厚奇汤淑萍惠宁冀凯宏熊俊蒋正戚中田第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 长海医院妇产科基础医学部微生物学教研室

目的:初步探讨人胚胎生殖系细胞的分离与体外培养.方法:体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织,按单纯机械分离、酶消化分离、二者结合法及是否有饲养层将组织分为5种不同的方式培养后,用碱性磷酸酶标记,计数阳性克隆并进行比较.结果:酶消... 详细信息

目的:初步探讨人胚胎生殖系细胞的分离与体外培养.方法:体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织,按单纯机械分离、酶消化分离、二者结合法及是否有饲养层将组织分为5种不同的方式培养后,用碱性磷酸酶标记,计数阳性克隆并进行比较.结果:酶消化法培养所获得的克隆较单纯机械分离方法多,原代培养时种植到饲养层上效果较好.将分离到的组织用0.25%胰酶消化3 min,种植到丝裂霉素C处理过的小鼠胚胎成纤维细胞上培养3 d,挑取克隆传代,在第10天形成30.7 个阳性克隆,显著高于其他方法获得的阳性克隆数.用碱性磷酸酶标记的细胞(克隆)具有多样性,细胞胞体为圆形,分为有突起和无突起两种;阳性细胞克隆呈圆球形、条带形和块形,与周围细胞分界清楚.结论:人胚胎体内的微环境限制生殖系细胞的体外扩增培养,原代培养需要在饲养层上进行且宜用酶消化法尽早传代.

关键词：胚胎生殖系细胞细胞分离体外培养碱性磷酸酶

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人CD38分子研究进展

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免疫学杂志 2003年第3期19卷 239-241页

作者：温新宇戚中田黎燕军事医学科学院基础所分子免疫室北京100850 第二军医大学微生物学教研室上海200433

人CD38分子是一种Ⅱ型跨膜糖蛋白 ,广泛表达于造血细胞及非造血细胞系。CD38分子的胞外结构域与核糖核苷二磷酸 (ADPR)酶家族同源 ,与人及鼠的某些蛋白分子也具有明显的结构与功能上的同源性 ,提示这些分子可能代表一个新的蛋白分子家... 详细信息

人CD38分子是一种Ⅱ型跨膜糖蛋白 ,广泛表达于造血细胞及非造血细胞系。CD38分子的胞外结构域与核糖核苷二磷酸 (ADPR)酶家族同源 ,与人及鼠的某些蛋白分子也具有明显的结构与功能上的同源性 ,提示这些分子可能代表一个新的蛋白分子家族。近年发现CD38分子具有许多复杂而又独特的生物学特性及功能。本文就CD38分子的结构、表达。

关键词： CD38分子研究进展核糖核苷二磷酸信号传导配体分子生物学特性细胞淋巴瘤

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不同发育阶段人胚胎原始生殖细胞的定位及体外培养

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 944-946页

作者：刘善荣刘厚奇汤淑萍惠宁冀凯宏蒋正戚中田冯根生第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 长海医院妇产科基础医学部微生物学教研室 Burham InstituteSanDiegoCA92037USA

目的:对不同发育阶段的人胚胎原始生殖细胞(PGC)进行定位并比较其体外培养的差异.方法:取4～7周发育阶段的人胚胎,应用组织化学法检测PGC内碱性磷酸酶(AP)以对其定位.体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织进行培养,第1次传代后,用AP标记,... 详细信息

目的:对不同发育阶段的人胚胎原始生殖细胞(PGC)进行定位并比较其体外培养的差异.方法:取4～7周发育阶段的人胚胎,应用组织化学法检测PGC内碱性磷酸酶(AP)以对其定位.体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织进行培养,第1次传代后,用AP标记,计数不同发育阶段AP阳性的PGC和体外培养的阳性克隆并进行比较.结果:在卵黄囊、原肠、背侧肠系膜和生殖嵴处有AP强阳性细胞,阳性信号位于胞质内.阳性细胞散在分布,在生殖嵴处聚集成团.不同发育阶段的胚胎组织培养均有阳性克隆出现.统计学分析结果表明,4～7周人胚胎内AP阳性的PGC数目及细胞内信号强度无明显差异(P>0.05);由胚胎组织培养获得的AP阳性克隆数也无显著差异.结论:人PGC位于卵黄囊、原肠、背侧肠系膜和生殖嵴处.4～7周发育阶段,胚胎内PGC数目和体外培养的克隆数无明显变化.

关键词：胚胎原始生殖细胞体外培养定位碱性磷酸酶

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HCV 1a/1b型嵌合体能在HepG2细胞内复制与表达

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中国病毒学 2003年第5期18卷 423-427页

作者：王宏卫赵平谢南张珉朱诗应戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433 南昌市第九医院江西南昌330002

采用HCV 1a/1b嵌合体cDNA构建表达质粒转染HepG2细胞,以免疫组化和Western blotting检测HCV蛋白表达,RT-PCR检测HCV正、负链RNA,研究丙型肝炎病毒(HCV)1a和1b型嵌合体全长cDNA在HepG2细胞中的复制和表达。结果证明,转染细胞中检测到分... 详细信息

采用HCV 1a/1b嵌合体cDNA构建表达质粒转染HepG2细胞,以免疫组化和Western blotting检测HCV蛋白表达,RT-PCR检测HCV正、负链RNA,研究丙型肝炎病毒(HCV)1a和1b型嵌合体全长cDNA在HepG2细胞中的复制和表达。结果证明,转染细胞中检测到分子量约70kDa的HCVNS3蛋白,转染细胞连续传20代,仍能检测到HCV正、负链RNA。表明该HCV嵌合体可以在细胞中复制和表达,HCV 1b型的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)可以起始含1a型非编码区的病毒复制。HCV 5′端非翻译区第11、12、13、34和35位核苷酸改变可不影响其与核糖体结合。3′非翻译区9400,9403和9407位核苷酸改变,9435位缺失“A”,9409,9410位及9495,9496,9497位分别插入“TT”和“AAT”可不影响RORp的生物活性。本研究对阐明HCV复制和翻译机制有重要意义。

关键词：丙型肝炎病毒嵌合体cDNA HepG2细胞 RNA聚合酶表达

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结核分枝杆菌异烟肼耐药机理及其耐药突变检测方法

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世界感染杂志 2003年第5期3卷 435-438页

作者：孙超群王文潘卫第二军医大学微生物学教研室上海200433

近年来，结核病死灰复燃，已成为世界三大传染病之一。除了爱滋病的流行、卡介苗的预防效果不佳等因素外，结核耐多药菌株的产生是该病流行加剧的主要原因^[1]。作为标准化疗的一线药物，利福平和异烟肼在结核病的治疗中发挥了重要的作... 详细信息

近年来，结核病死灰复燃，已成为世界三大传染病之一。除了爱滋病的流行、卡介苗的预防效果不佳等因素外，结核耐多药菌株的产生是该病流行加剧的主要原因^[1]。作为标准化疗的一线药物，利福平和异烟肼在结核病的治疗中发挥了重要的作用。然而，由于对这两种药物耐药株的产生使其联合治疗的有效率降低到77％^[2]。快速、准确的检测菌株的耐药情况不仅有助于选择最适合的治疗方案，继而提高治疗效果，而且有助于阻止耐药菌株的传播，因而具有非常重要的意义。

关键词：结核分枝杆菌异烟肼耐药机理耐药突变检测方法传染病耐药株

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用抗HCV多抗从随机15肽库中筛选抗原表位

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第1期19卷 65-67页

作者：柯屾朱继萍温新宇施明贺永怀沈倍奋赵平姚志建解放军总医院基础医学研究所北京100853 军事医学科学院基础医学研究所第二军医大学微生物学教研室北方基因中心

目的:分析丙肝患者血清中抗HCV抗体的抗原表位。方法: 制备Protein A亲和层析柱,从丙肝患者血清中纯化、制备抗HCV多克隆抗体;并以此为筛选配基,对噬菌体表面展示的随机15肽库进行亲和筛选。结果:三轮筛选的投入产出比逐轮升高至3.3... 详细信息

目的:分析丙肝患者血清中抗HCV抗体的抗原表位。方法: 制备Protein A亲和层析柱,从丙肝患者血清中纯化、制备抗HCV多克隆抗体;并以此为筛选配基,对噬菌体表面展示的随机15肽库进行亲和筛选。结果:三轮筛选的投入产出比逐轮升高至3.3×10-3,假阳性率逐轮降低至0.2％,提示具有良好的富集效果。对从第3轮挑选出的16个克隆进行结合试验,发现9个克隆只与HCV抗体有较强的结合力而不与正常人血清起反应。测序表明,8个克隆的外源肽含有核心序列WPWS。用阳性噬菌体克隆检测20例丙肝患者血清,有程度不等的阳性反应。结论:用多克隆抗体从噬菌体随机肽库中,筛选到有一定功能的模拟表位。

关键词：噬菌体随机肽库抗原表位丙型肝炎病毒

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