检索结果-内蒙古大学图书馆

中华国际医学杂志 2003年第1期3卷 51-54页

作者：薛利军第二军医大学微生物学教研室，中国上海200433

结核病已被WHO列为世界三大传染病之一，其病原菌结核分枝杆菌（Mtb）的致病机制仍不十分清楚。由于多耐药Mtb日渐增多，研发新型抗结核药物及疫苗已势在必行，Mtb毒力基因的研究将因此而成为关键热点。近年来建立的结核分枝杆菌毒力基... 详细信息

结核病已被WHO列为世界三大传染病之一，其病原菌结核分枝杆菌（Mtb）的致病机制仍不十分清楚。由于多耐药Mtb日渐增多，研发新型抗结核药物及疫苗已势在必行，Mtb毒力基因的研究将因此而成为关键热点。近年来建立的结核分枝杆菌毒力基因的筛选策略主要有差异显示PCR法（DDRT-PCR）、消减杂交法（SH）、体内互补技术及标签转座子诱变技术（STM）等，通过这些方法已发现了rpoV、KatG、erp等诸多Mtb毒力基因。这些技术各有利弊，对于它们各自特点的把握及作出相应的改进，将在今后Mtb及其它病原生物毒力基因的研究中发挥重要作用。

关键词：结核分枝杆菌毒力基因筛选

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新型噬菌粒展示载体pCANTAB5L的构建

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第二军医大学学报 2003年第3期24卷 298-302页

作者：沈毅珺潘卫易进华徐容陈秋莉潘欣冯春芝邓松华戚中田刘彦君第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 上海复旦张江生物医药股份有限公司安徽医科大学病理生理学教研室

目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ... 详细信息

目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ识别序列的引物 ,PCR扩增获得XbaⅠ StuⅠ SalⅠ KpnⅠ [G4S]3 NotⅠ衔接片段 ,将该PCR产物克隆到pMD 18T中 ,再将该片段插入 pCANTAB 5X中构建成新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L。结果 :限制性内切酶酶谱及DNA序列分析证明[G4S]3多肽接头和限制性内酶切位点XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ序列被引入到新构建的噬菌粒载体pCANTAB 5L中。结论 :成功构建了新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L ,并能有效展示功能靶蛋白。

关键词：噬菌体展示噬菌粒载体多克隆位点多肽接头

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内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对新生血管的抑制效应

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生物技术通讯 2003年第5期14卷 439-443页

作者：潘欣王泳张珉赵平潘卫戚中田第二军医大学微生物学教研室第二军医大学附属长海医院眼科上海200433

内皮抑素与血管内皮细胞抑制因子均为内源性新生血管抑制分子。为了探讨两分子融合后的生物学功能,以重组腺病毒为载体介导融合基因在体内外表达。体外实验表明重组腺病毒Ad-hENDO-VEGI151能够在ECV304、HepG2、L929等细胞中表达41000... 详细信息

内皮抑素与血管内皮细胞抑制因子均为内源性新生血管抑制分子。为了探讨两分子融合后的生物学功能,以重组腺病毒为载体介导融合基因在体内外表达。体外实验表明重组腺病毒Ad-hENDO-VEGI151能够在ECV304、HepG2、L929等细胞中表达41000大小的融合蛋白,对血管内皮细胞增殖有明显的特异性抑制作用,对HepG2和L929细胞无抑制作用(F=13112.13,P=0.0001)。体内实验表明Ad-hENDO-VEGI151重组腺病毒表达的融合蛋白可以显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管的生成;与AdLacZ对照组相比,Ad-hENDO-VEGI151对兔炎症性角膜新生血管的抑制明显(F=1413.11P=0.0001),免疫组化结果显示,融合蛋白主要在角膜上皮层表达;治疗荷肝癌裸鼠,注射Ad-hENDO-VEGI151的肿瘤体积(487.7±241.2mm3)与AdLacZ对照组(4075.9±1849.9mm3)差异显著(F=14.80P=0.0085),抑瘤率达到88.03%,免疫组化结果显示,胞膜染色阳性,Ad-hENDO-VEGI151组肿瘤的微血管密度30.75±3.31%与AdLacZ组50.25±8.65%差异明显F=17.72P=0.0056抑制率为39%。结果提示:重组腺病毒Ad-hENDO-VEGI151能够表达有生物学活性的融合蛋白,并发挥特异性的新生血管抑制作用。

关键词：内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒新生血管抑制效应生物活性

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病毒研究的崭新技术——RNA干扰

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国外医学（微生物学分册） 2003年第2期26卷 1-3,6页

作者：戚中田任浩上海第二军医大学微生物学教研室军队医学微生物学重点实验室

RNA分子可参与生物体细胞许多基本的生理活动,继发现核酶、肽核酸和反义RNA等之后,近来有关小干扰RNA及其所致的RNA干扰现象又成为研究热点。小干扰RNA是dsRNA被DICER降解后产生的长19～23核苷酸的小RNA片段,具有5′-磷酸、3′--羟基和... 详细信息

RNA分子可参与生物体细胞许多基本的生理活动,继发现核酶、肽核酸和反义RNA等之后,近来有关小干扰RNA及其所致的RNA干扰现象又成为研究热点。小干扰RNA是dsRNA被DICER降解后产生的长19～23核苷酸的小RNA片段,具有5′-磷酸、3′--羟基和2个核苷酸(dTdT或UU)的3′端;而RNA干扰则是由小干扰RNA引起的生物细胞内同源基因的特异性沉默现象,其本质是小干扰RNA与对应的mRNA特异结合,形成降解,从而阻止mRNA的翻译。RNA干扰是生物进化的结果,是生物体对病毒基因等外源核酸侵入的一种保护性反应。当病毒在宿主细胞内进行复制时,病毒RNA可被降解成小干扰RNA,从而在细胞内产生的RNA干扰,通过RNA干扰的作用抑制病毒的增殖。

关键词：病毒研究新技术 RNA干扰 RNA分子作用机制

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SARS病毒基因组研究的新技术--RNA干扰

SARS病毒基因组研究的新技术--RNA干扰

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第五次全国医学分子微生物学学术研讨会

作者：戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

本文从已知的SARS病毒基因组与蛋白质组特点、RNA干扰用于SARS病毒基因功能研究两个方面论述了SARS病毒基因组研究的新技术--RNA干扰。

关键词：急性呼吸综合征冠状病毒病毒基因基因表达

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SARS-CoV抗原在大肠杆菌的表达和抗原性鉴定

SARS-CoV抗原在大肠杆菌的表达和抗原性鉴定

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第五次全国医学分子微生物学学术研讨会

作者：赵平秦照玲柯金山任浩赵兰娟高军戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

本文用大肠杆菌表达系统分别表达了SARS-CoV的结构蛋白S、N、M、E和非结构蛋白3CL,并用SARS恢复期患者血清对重组病毒蛋白的抗原性的进行了Western-blot分析;再根据表达载体的多克隆位点和阅读框架的要求,分别合成各抗原基因引物,以合... 详细信息

本文用大肠杆菌表达系统分别表达了SARS-CoV的结构蛋白S、N、M、E和非结构蛋白3CL,并用SARS恢复期患者血清对重组病毒蛋白的抗原性的进行了Western-blot分析;再根据表达载体的多克隆位点和阅读框架的要求,分别合成各抗原基因引物,以合成的基因为模板,扩增相应的抗原基因。研究结果表明,N抗原和S抗原可作为SARSCoV感染的重要检测抗原.

关键词： SARS病毒病毒蛋白抗原大肠杆菌表达抗原检测

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抗-HCV持续阴性HCV感染者的HVR1序列变异特点

抗-HCV持续阴性HCV感染者的HVR1序列变异特点

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第五次全国医学分子微生物学学术研讨会

作者：潘卫方芳汪年松潘欣陈秋莉钱宝华朱诗应戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

本文探讨了抗HCV阴性患者的HVR1变异特点，采用ELISA方法检测抗-HCVIgG,IgM,RT-PCR方法检测HCVRNA,对PCR产物测定其DNA序列。研究结论:HCV感染人群中存在抗-HCVIgG和IgM持续阴性者或持续阴性状态,其HVR1序列变异频率未显示出明显高于周... 详细信息

本文探讨了抗HCV阴性患者的HVR1变异特点，采用ELISA方法检测抗-HCVIgG,IgM,RT-PCR方法检测HCVRNA,对PCR产物测定其DNA序列。研究结论:HCV感染人群中存在抗-HCVIgG和IgM持续阴性者或持续阴性状态,其HVR1序列变异频率未显示出明显高于周围序列的特征。

关键词：丙型肝炎病毒 HVR1变异免疫逃逸输血传播

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内皮抑素-可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒的包装与鉴定

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世界华人消化杂志 2003年第6期11卷 741-744页

作者：李喆潘欣潘卫曹贵松闻兆章方国恩戚中田毕建威华积德中国人民解放军第二军医大学附属长海医院普通外科上海市200433 中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海市200433

目的:构建内皮抑素-可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒载体并包装成重组腺病毒,为下一步基因治疗打下基础。方法:用PCR方法在hENDO基因的5’端引入IL_3信号肽、3’端引入弹性蛋白连接肽序列(linker),再与sVEGI基因连接... 详细信息

目的:构建内皮抑素-可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒载体并包装成重组腺病毒,为下一步基因治疗打下基础。方法:用PCR方法在hENDO基因的5’端引入IL_3信号肽、3’端引入弹性蛋白连接肽序列(linker),再与sVEGI基因连接,插入到pCAl3腺病毒载体中,用脂质体介导包装出重组腺病毒,PCR法对重组腺病毒进行鉴定。结果:构建完成hENDO-sVEGI融合基因重组腺病毒载体,融合基因包括IL_3信号肽、hENDO全长基因、弹性蛋白连接肽序列和sVEGI基因,总长度约1114bp,经酶切鉴定、序列分析证实克隆序列、插入方向和读码框架均正确,可包装出携带融合基因的重组腺病毒,用TCID_(50)法测定粗制重组腺病毒滴度为2×10^(11) TCID_(50)/L。结论:成功构建了hENDO-sVEGI融合基因,连接肽序列使两蛋白空间构象不受影响,IL_3信号肽保证蛋白可被分泌至胞外,完成携带融合基因的重组腺病毒的包装与鉴定,为进一步开展肿瘤基因治疗研究奠定了基础。

关键词：内皮抑素可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒包装鉴定基因治疗肿瘤

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内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对新生血管的抑制效应

内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对新生血管的抑制效应

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第五次全国医学分子微生物学学术研讨会

作者：潘欣王泳张珉赵平潘卫戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学附属长海医院眼科上海200433

本文为了探讨两分子融合后的生物学功能,以重组腺病毒为载体介导融合基因在体内外表达。结果提示:重组腺病毒Ad-hENDO-VEGI151能够表达有生物学活性的融合蛋白,并发挥特异性的新生血管抑制作用。

关键词：内皮抑素重组腺病毒新生血管抑制效应

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内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对荷胃癌裸鼠的治疗

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世界华人消化杂志 2003年第9期11卷 1282-1285页

作者：潘欣李喆张珉王泳潘卫戚中田中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海市200433 中国人民解放军第二军医大学附属长海医院普通外科上海市200433 中国人民解放军第二军医大学附属长海医院眼科上海市200433

目的:研究重组腺病毒携带hENDO-VEGI_(151)融合基因治疗胃癌的可行性。方法:分别用 500 μL滴度为 1×10^(12)TCID_(50)/L的粗制重组腺病毒AdCA13—hENDO—VEGI_(151)或AdLacZ皮下注射治疗荷胃癌裸鼠,隔天1次,共注射10次。最后一次... 详细信息

目的:研究重组腺病毒携带hENDO-VEGI_(151)融合基因治疗胃癌的可行性。方法:分别用 500 μL滴度为 1×10^(12)TCID_(50)/L的粗制重组腺病毒AdCA13—hENDO—VEGI_(151)或AdLacZ皮下注射治疗荷胃癌裸鼠,隔天1次,共注射10次。最后一次注射24h后处死动物,检测肿瘤体积、抑瘤率、目的基因的表达、增生细胞核抗原指数(PCNA LI)、肿瘤细胞凋亡指数(AI)、肿瘤微血管密度(MVD)。结果:注射AdCA13-hENDO-VEGI_(151)的治疗组肿瘤体积为328±156mm^3,注射AdLacZ的对照组肿瘤体积为2356±1 140 mm^3,差异显著(F=12.42,P=0.0125),抑瘤率为86.1％;重组腺病毒携带的目的基因均能在荷胃癌裸鼠肿瘤组织中表达;治疗组PCNA LI为 0.13± 0.09％,对照组为 1.40 ± 0.53％,差异显著(F=22.30,P=0.0033);治疗组AI为5.09 ± 0.25％,对照组AI为0.61±0.67％,差异显著(F=155.13,P=0.0 001);治疗组MVD为0.06±0.03％,对照组MVD为 1.09 ± 0.76％,差异明显(F=7.38,P=0.0348)。结论:重组腺病毒携带的融合基因能在荷胃癌裸鼠体内表达出有生物学活性的融合蛋白,并表现出一定的抑瘤效果。

关键词：胃癌基因治疗动物实验 hENDO—VEGI151 重组腺病毒内皮抑素血管内皮细胞抑制因子新生血管

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