检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2002年第4期23卷 403-406页

作者：吴晓兰潘卫马仲才陈秋莉武文斌曹明媚戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的：建立一种研究人干扰素-α结构与功能的新平台。方法：利用噬菌体表面展示（phage display）技术表达人于扰素-α2b（hIFN-αa2b）基因。结果：生物活性测定表明，3×108TU重组噬菌体干扰素的抗病毒活性与SIU基因工程IFN-α2a... 详细信息

目的：建立一种研究人干扰素-α结构与功能的新平台。方法：利用噬菌体表面展示（phage display）技术表达人于扰素-α2b（hIFN-αa2b）基因。结果：生物活性测定表明，3×108TU重组噬菌体干扰素的抗病毒活性与SIU基因工程IFN-α2a的活性相当，并能被 IFN-α单抗中和。结论：hlFN-α 2b在噬菌体表面能正确折叠和功能性表达，即成功地建立了噬菌体展示外源肽（hIFN-α）的技术平台。

关键词：人干扰素-α 抗病毒活性噬菌体表面展示

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表达HCV核心蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌口服免疫小鼠的研究

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自然科学进展 2002年第9期12卷 997-1000页

作者：赵平曹洁曹明媚朱诗应戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

构建了丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白原核表达质粒pQE-HCV,转化到减毒鼠伤寒沙门菌SL7207中,SDS-PAGE和Western blot检测到该重组菌能表达3种分子量的HCV核心蛋白,以该重组菌作为口服型活疫苗灌胃接种BALB/c小鼠,检测到小鼠产生的抗HCV核... 详细信息

构建了丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白原核表达质粒pQE-HCV,转化到减毒鼠伤寒沙门菌SL7207中,SDS-PAGE和Western blot检测到该重组菌能表达3种分子量的HCV核心蛋白,以该重组菌作为口服型活疫苗灌胃接种BALB/c小鼠,检测到小鼠产生的抗HCV核心蛋白IgG及迟发型超敏反应、T细胞增殖反应和细胞毒性T淋巴细胞反应,结果表明该重组菌能有效诱导免疫应答,尤其能高效诱导细胞免疫应答,这为研制高效免疫、成本低廉、接种方便的HCV疫苗提供了一个新的可行途径。

关键词： HCV核心蛋白小鼠丙型肝炎病毒核心蛋白减毒鼠伤寒沙门菌口服活疫苗免疫原性免疫应答基因表达重组菌

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脑源性神经营养因子与帕金森病

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神经解剖学杂志 2002年第1期18卷 87-90页

作者：马仲才潘卫戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

帕金森病(PD)的最主要病理特征是中脑黑质致密部(substantia nigra pars compacta, SNpc)多巴胺(DA)能神经元的进行性退化变性，由于其机制还不清楚，因而限制了此病的临床治疗。脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,... 详细信息

帕金森病(PD)的最主要病理特征是中脑黑质致密部(substantia nigra pars compacta, SNpc)多巴胺(DA)能神经元的进行性退化变性，由于其机制还不清楚，因而限制了此病的临床治疗。脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)由Barde等于1982年在猪脑中首次发现，其氨基酸序列有55%～60%与神经生长因子(nerve growth factor, NGF)完全相同，也属神经营养素(neurotrophin)家族的成员，BDNF可通过其高亲和力受体trkB和低亲和力受体p75~(NTR)发挥生物活性，能够促进多种神经元的存活，尤其对DA能神经元有很强的营养和保护作用，因而受到了广泛的关注，被认为是治疗PD的新一代药物。但是对于BDNF在PD发生、发展中的作用和意义一直未有定论，近年来的一些研究结果为该问题提供了一些有意义的答案。

关键词：神经元保护作用脑源性神经营养因子帕金森病

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携带HBV包膜大蛋白DNA疫苗的减毒沙门菌在小鼠诱导免疫应答

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生物工程学报 2002年第5期18卷 601-604页

作者：赵平王宏卫卢洋戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433 第一军医大学珠江医院肿瘤科广州510282

探索一种简便、有效的乙型肝炎病毒DNA疫苗免疫方法。将编码绿色荧光蛋白的真核表达质粒pEGFPN1转化到减毒鼠伤寒沙门菌SL72 0 7,灌胃饲服BALB c小鼠 ,流式细胞术检测出小鼠脾细胞内表达的绿色荧光蛋白 ;构建编码HBV包膜大蛋白的DNA疫苗... 详细信息

探索一种简便、有效的乙型肝炎病毒DNA疫苗免疫方法。将编码绿色荧光蛋白的真核表达质粒pEGFPN1转化到减毒鼠伤寒沙门菌SL72 0 7,灌胃饲服BALB c小鼠 ,流式细胞术检测出小鼠脾细胞内表达的绿色荧光蛋白 ;构建编码HBV包膜大蛋白的DNA疫苗pCI S1S2S ,分别以SL72 0 7为载体的口服途径或直接肌肉注射途径免疫BALB c小鼠 ,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞反应 ,结果表明两种免疫途径均能在小鼠体内诱生细胞和体液免疫应答 ,但口服途径诱导免疫应答的强度明显强于肌肉注射途径。口服携带HBVDNA疫苗的减毒伤寒沙门菌可能代表一种简便。

关键词： HBV包膜大蛋白 DNA疫苗减毒沙门菌小鼠诱导免疫应答乙型肝炎病毒

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利用基因重组抗原研制人CD20单克隆抗体及其功能的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第4期22卷 385-388页

作者：李爱玲孙瑛勋洪海燕于鸣赵法伋郭俊生沈倍奋第二军医大学军队卫生教研室上海200433 军事医学科学院基础医学研究所分子免疫室第二军医大学微生物学教研室

目的　利用基因重组抗原免疫小鼠 ,制备人CD2 0单克隆抗体 ,研究其特异性和功能。方法　用表达重组人CD2 0基因的细胞NIH 3T3免疫BALB c小鼠 ,取其脾细胞与Sp2 0细胞融合 ,以间接免疫荧光法筛选杂交瘤上清。免疫沉淀法及流式细胞术鉴... 详细信息

目的　利用基因重组抗原免疫小鼠 ,制备人CD2 0单克隆抗体 ,研究其特异性和功能。方法　用表达重组人CD2 0基因的细胞NIH 3T3免疫BALB c小鼠 ,取其脾细胞与Sp2 0细胞融合 ,以间接免疫荧光法筛选杂交瘤上清。免疫沉淀法及流式细胞术鉴定其识别抗原的相对分子质量 (Mr)和特异性 ;以MTT法、流式细胞术及形态学方法检测诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖的功能。结果　利用杂交瘤技术获得了 1株抗人CD2 0的单克隆抗体 1 2 8,它具有CD2 0抗体特异的细胞反应谱 ,其识别的抗原Mr 为 33× 10 3 。MTT实验证实 1 2 8能显著抑制Daudi和Raji细胞生长。结论　利用基因重组抗原制备了 1株能够稳定分泌抗人CD2 0的单克隆抗体的杂交瘤细胞株 1 2 8,此单抗具有抑制CD2 0阳性细胞增殖和诱导其凋亡的功能。

关键词：基因重组抗原 CD20基因单克隆抗体细胞凋亡间接免疫荧光法免疫沉淀法流式细胞术抗体制备

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庚型肝炎病毒全基因转基因小鼠的制备与遗传

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1175-1178页

作者：胡卫江王宏卫戚中田李建秀胡以平第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 基础医学部细胞生物学教研室

目的:利用显微注射方法产生整合庚型肝炎病毒(HGV)全基因的转基因小鼠,并研究HGV基因的遗传特性。方法:将含有HGV全长基因的载体线性化后,将目的基因DNA溶于显微注射用缓冲液,依常规方法进行显微注射,得到仔鼠后用PCR及基因组DNA South... 详细信息

目的:利用显微注射方法产生整合庚型肝炎病毒(HGV)全基因的转基因小鼠,并研究HGV基因的遗传特性。方法:将含有HGV全长基因的载体线性化后,将目的基因DNA溶于显微注射用缓冲液,依常规方法进行显微注射,得到仔鼠后用PCR及基因组DNA Southern印迹法鉴定。阳性小鼠即为建立者(founder)小鼠,将founder小鼠与正常小鼠交配得到F代小鼠,随后将F1代阳性鼠与正常小鼠交配得到F2代小鼠。结果:共得到5只founder小鼠,其中4只与正常小鼠交配,得到F1代小鼠共41只,其中29只为阳性,阳性率为71％。F2代小鼠共21只,其中16只为阳性,阳性率为76％。结论:得到了整合有HGV全长基因的转基因小鼠,并证明HGV基因可以在转基因小鼠体内稳定传递。

关键词：制备庚型肝炎病毒转基因小鼠遗传学动物模型

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重组人内皮细胞抑制素腺病毒载体体外活性作用的研究

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第二军医大学学报 2002年第3期23卷 261-263页

作者：倪之嘉潘卫王元和戚中田傅宏傅志仁王强第二军医大学长征医院普通外科上海200003 第二军医大学长征医院基础医学部微生物学教研室

目的 :研究表达人内皮细胞抑制素 ( endostatin)的腺病毒载体的体外活性作用。方法 :用重组人内皮细胞抑制素腺病毒载体体外转染人结肠癌 SW62 0细胞 ,观察肿瘤细胞生长情况 ,并观察其上清对大鼠肺毛细血管内皮细胞、新生牛主动脉内皮... 详细信息

目的 :研究表达人内皮细胞抑制素 ( endostatin)的腺病毒载体的体外活性作用。方法 :用重组人内皮细胞抑制素腺病毒载体体外转染人结肠癌 SW62 0细胞 ,观察肿瘤细胞生长情况 ,并观察其上清对大鼠肺毛细血管内皮细胞、新生牛主动脉内皮细胞及人脐静脉内皮细胞生长的影响。结果 :MTT法检查证实重组腺病毒对结肠癌细胞生长无抑制 ,锥虫蓝染色证实转染的人结肠癌 SW62 0细胞上清对各种血管内皮细胞的生长均有较强的抑制作用。结论 :重组人内皮细胞抑制素腺病毒载体体外对各种血管内皮细胞生长均有较强的抑制作用。

关键词：重组人内皮细胞抑制素腺病毒科血管内皮体外活性

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重组人肿瘤坏死因子a衍生物3a的克隆与表达

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 125-128页

作者：娄永华焦炳华周丙荣王梁华余伟民朱玉平第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

目的 :寻找具有更强抗肿瘤活性和 (或 )较低毒副作用的 TNFα突变蛋白。方法 :应用巨引物二轮 PCR技术对rh- TNFα的第 80、90和 92位氨基酸编码的密码子进行定点突变 ,经过 DNA序列测定证实 DNA突变准确后 ,将突变基因的c DNA插入 p B... 详细信息

目的 :寻找具有更强抗肿瘤活性和 (或 )较低毒副作用的 TNFα突变蛋白。方法 :应用巨引物二轮 PCR技术对rh- TNFα的第 80、90和 92位氨基酸编码的密码子进行定点突变 ,经过 DNA序列测定证实 DNA突变准确后 ,将突变基因的c DNA插入 p BL载体 ,转化大肠杆菌 DH5α,获得表达 rh- TNFα- D3a的工程菌。结果 :经巨引物二轮 PCR获得表达 TNFα突变蛋白的基因突变 ,经序列测定结果与设计一致 ,重组蛋白表达量占细菌总蛋白 18.0 % ,大部分为可溶性 ,占 rh- TNFα- D3a总量的 6 0 %以上。重组蛋白经纯化 ,纯度 >98%。 rh- TNFα- D3a对 L 92 9细胞表现出较高的细胞毒性 ,比活性大于 5× 10 8IU / mg。与野生型的 rh- TNFα相比 ,rh- TNFα- D3a的毒性降低为野生型的 1/ 10 ,同时其保留了 TNFα的抗肿瘤活性。结论 :rh- TNF-αD3a是一个毒性较低。

关键词：点突变聚合酶链反应重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a 克隆 rh-TNF α-D3a

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重组人肿瘤坏死因子a衍生物3a研究的综合报告

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 121-124页

作者：焦炳华娄永华王梁华朱玉平周丙荣第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

目的 :将采用点突变技术获取的重组人肿瘤坏死因子α衍生物 3a(rh- TNFα- D3a)研究开发为临床新药。方法 :与野生型 TNFα比较 ,采用动物体内抑瘤试验测定其 ED50 ;急性毒性试验测定 L D50 ;长期毒性试验测定安全剂量并观察毒性反应发... 详细信息

目的 :将采用点突变技术获取的重组人肿瘤坏死因子α衍生物 3a(rh- TNFα- D3a)研究开发为临床新药。方法 :与野生型 TNFα比较 ,采用动物体内抑瘤试验测定其 ED50 ;急性毒性试验测定 L D50 ;长期毒性试验测定安全剂量并观察毒性反应发生的程度 ; 期临床试验观察人体可耐受的安全剂量 ; - 期临床试验观察其对肿瘤患者的临床疗效。结果 :rh- TNFα-D3a体内抑瘤的 ED50 为其野生型的 2 / 3;L D50 为野生型的 11倍 ;恒河猴长期毒性的安全剂量为日本同类产品 PT0 5 0的 6 4倍 ; 期临床试验表明 ,≤ 2× 10 6 IU/ (m2· d)× 7d为人体可耐受的安全剂量 ,本品与野生型药物比较 ,其毒性反应的发生率及反应程度远远降低 ; - 期临床试验表明 ,胸腔内注射对恶性胸水 ,静脉途径对多种实体瘤包括恶性淋巴瘤、乳腺癌、恶性黑素瘤和肾癌等均有较好的疗效。结论 :研制新一代高效。

关键词：抗肿瘤药临床试验重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a rh-TNFα-D3a

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逆向点杂交方法检测耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变

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中华结核和呼吸杂志 2002年第10期25卷 591-594页

作者：王文潘卫戚中田金维荣严然苏蓓翁心华陈澍张文宏卢洪洲第二军医大学微生物学教研室上海200433 国家人类基因组南方研究中心上海市华山医院传染科

目的　建立一种灵敏、特异、快速检测结核分支杆菌耐药相关基因突变的方法 ,用于临床对利福平耐药的快速诊断。方法　将 1 4条特异性探针固定在尼龙膜上 ,通过在下游引物标记生物素的方法得到生物素标记的结核分支杆菌DNAPCR扩增产物 ,... 详细信息

目的　建立一种灵敏、特异、快速检测结核分支杆菌耐药相关基因突变的方法 ,用于临床对利福平耐药的快速诊断。方法　将 1 4条特异性探针固定在尼龙膜上 ,通过在下游引物标记生物素的方法得到生物素标记的结核分支杆菌DNAPCR扩增产物 ,与固定在尼龙膜上的特异性探针杂交 ,杂交物通过链酶亲和素标记辣根过氧化物酶及底物 (四甲基联苯胺 )显色判定结果。将杂交结果与基因测序结果及药敏试验结果进行对比分析。结果　采用逆向点杂交法共检测 2 3株耐利福平及1 1株敏感型菌株 ,与药敏试验结果、测序结果符合率分别为 2 8/ 34和 30 / 34。所发现突变类型依次为 :第 531位突变 1 1株 ,第 52 6位突变 7株 ,第 533位突变 3株。未检测到第 51 6位、第 51 3位碱基突变。

关键词：利福平基因突变逆向点杂交结核分支杆菌药物耐受性结核病

来源：评论

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