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国外医学（药学分册） 2002年第2期29卷 78-82页

作者：张珉第二军医大学基础部微生物学教研室上海200433

血管生成抑制剂的研究是目前肿瘤研究的热点。其中 ,血管生长抑制素在控制肿瘤的生长和转移过程中发挥重要作用 ,它是人体内源蛋白的一部分 ,具有生理毒性小、不会产生耐药性等特点 ,有较好的抗癌前景。最近 ,世界各国对血管生长抑制素... 详细信息

血管生成抑制剂的研究是目前肿瘤研究的热点。其中 ,血管生长抑制素在控制肿瘤的生长和转移过程中发挥重要作用 ,它是人体内源蛋白的一部分 ,具有生理毒性小、不会产生耐药性等特点 ,有较好的抗癌前景。最近 ,世界各国对血管生长抑制素的研究已全面展开 ,本文就血管生长抑制素的产生、结构。

关键词：血管生长抑制素肿瘤血管生成研究进展

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影响人干细胞因子基因高效表达的因素探讨

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免疫学杂志 2002年第3期18卷 225-228页

作者：洪海燕戚中田赖春宁冯健男王建安刘涛沈倍奋第二军医大学微生物学教研室上海200433 军事医学科学院基础医学研究所分子免疫室北京100850

目的分析SD序列长度、基因起始码ATG和终止码TAA上下游处RNA的二级结构及密码子偏性等影响表达效率的主要因素,以期实现重组人干细胞因子在原核细菌中高效表达。方法分析并修改编码人SCF氨基酸的密码子,分段合成改造后的基因,PCR一次... 详细信息

目的分析SD序列长度、基因起始码ATG和终止码TAA上下游处RNA的二级结构及密码子偏性等影响表达效率的主要因素,以期实现重组人干细胞因子在原核细菌中高效表达。方法分析并修改编码人SCF氨基酸的密码子,分段合成改造后的基因,PCR一次性完成拼接,将基因克隆到pBV-220载体上,诱导表达。结果天然人SCF基因在pBV-220载体的表达占菌体总蛋白的9.5％,基因改造后SCF占菌体总蛋白的27％,表达的蛋白能够为SCF的单克隆抗体所识别,初步纯化的SCF蛋白纯度大于80％,能够促进Mo7e细胞的增殖活性。结论密码子偏性是影响SCF在原核细菌中高效表达的主要因素,通过改变密码子偏性能过实现高效表达。

关键词： pBV-220 RNA 二级结构蛋白表达全基因合成干细胞因子

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HGV RNA转录体感染恒河猴的血清学及组织学改变

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世界华人消化杂志 2002年第1期10卷 7-11页

作者：任浩朱分禄朱诗应王路戚中田中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海市200433

目的:观察接种HGV实验猴的血清学和组织病理改变,以探讨HGV对恒河猴的致病性。方法:将庚型肝炎病毒(HGV)全长RNA转录体肝内注射感染恒河猴,检测血清HGV RNA、ALT变化和抗HGV,定期取实验猴肝组织,观察肝组织病理改变,免疫组化对HGV E2... 详细信息

目的:观察接种HGV实验猴的血清学和组织病理改变,以探讨HGV对恒河猴的致病性。方法:将庚型肝炎病毒(HGV)全长RNA转录体肝内注射感染恒河猴,检测血清HGV RNA、ALT变化和抗HGV,定期取实验猴肝组织,观察肝组织病理改变,免疫组化对HGV E2蛋白的表达进行定位分析,尸检取猴的各种脏器进行常规病理检查,并分析HGV E2蛋白在心、肝、胰、脾和肾脏的表达,PCP检测心、肝、胰、脾和肾脏中HGV正负链RNA的存在,透射电镜分析肝组织超微结构的变化。结果:感染后1wk HGV RNA即阳转,最长持续达27wk,实验恒河猴血清ALT间歇性升高,最高达2106nkat·L^(-1),肝组织学活检呈现轻度炎性病变,尸检结果表明实验猴死于间质性肺炎,除肝组织炎症改变外,其他组织正常,免疫组化显示HGVE2蛋白主要在肝细胞质内表达,在心脏和脾脏亦有不同程度的表达,HGV基因组RNA和负链RNA的检测表明HGV在肝脏以外的其他脏器如心和脾脏中亦有复制,电镜结果表明肝细胞超微结构改变较大,肝窦内发现直径约25nm～30nm的病毒样颗粒呈晶格状排列。结论:HGV RNA转录体有感染性并能形成病毒血症,恒河猴对HGV感染敏感,可作为研究HGV复制及致病性的动物模型。任浩,朱分禄,朱诗应,王路,戚中田,HGV RNA转录体感染恒河猴的血清学及组织学改变,世界华人消化杂志2002;

关键词： HGVRNA转录体感染恒河猴血清学组织学改变庚型肝炎病毒病理

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神经营养素受体与神经母细胞瘤预后和分期的关系

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国外医学（肿瘤学分册） 2002年第1期29卷 74-76页

作者：马仲才吴晓兰戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

不同的神经营养素受体在不同分期的神经母细胞瘤中的表达水平不同 ,具有不同的预后意义。trk A和 trk C在早期神经母细胞瘤中表达水平较高 ,是预后良好的指标 ,而晚期神经母细胞瘤中则往往表达高水平的全长 trk B和脑源性性神经营养因... 详细信息

不同的神经营养素受体在不同分期的神经母细胞瘤中的表达水平不同 ,具有不同的预后意义。trk A和 trk C在早期神经母细胞瘤中表达水平较高 ,是预后良好的指标 ,而晚期神经母细胞瘤中则往往表达高水平的全长 trk B和脑源性性神经营养因子 ,这样的患者多表现为预后不良。不同神经营养素对神经母细胞瘤细胞有不同的生物学活性 ,这可能是其受体有不同预后意义的原因。

关键词：神经营养素 NGF BDNF NT-3 NT-4 NT-5 NT-6 神经营养素受体 NB 临床分期

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庚型肝炎病毒全长基因在体外的表达

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微生物学杂志 2002年第4期22卷 4-6页

作者：胡卫江王路王文戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

利用第二军医大学微生物学教研室克隆的庚型肝炎病毒 (HGV)全长基因组 (HGVqz) ,构建由不同启动子调控的HGV表达载体 ,将 2种表达载体及HGV全长基因片段进行体外表达 ,探讨此HGV全长基因克隆的功能。利用脂质体将HGV全长基因cDNA以及表... 详细信息

利用第二军医大学微生物学教研室克隆的庚型肝炎病毒 (HGV)全长基因组 (HGVqz) ,构建由不同启动子调控的HGV表达载体 ,将 2种表达载体及HGV全长基因片段进行体外表达 ,探讨此HGV全长基因克隆的功能。利用脂质体将HGV全长基因cDNA以及表达载体转入Changliver或NIH 3T3细胞进行瞬时表达 ,分别提取转染72h后转染细胞的RNA及蛋白质进行RT PCR及Westernblotting ,以检测HGV基因的表达。RT PCR及Westernblotting结果表明 ,HGV全长基因cDNA以及 2种表达载体均可以在体外培养的细胞内表达 ,其表达产物为HGV前体蛋白 ,分子量约为 310ku。第二军医大学微生物学教研室克隆的HGV全长基因具有正确的开读框架和可表达性 ,能表达HGV前体蛋白。

关键词：庚型肝炎病毒基因组体外表达

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人CD38抗原胞外段基因克隆及表达

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细胞与分子免疫学杂志 2002年第6期18卷 533-535页

作者：温新宇舒翠玲黎燕戚中田沈倍奋第二军医大学微生物学教研室军事医学科学院基础所分子免疫室北京100850 军事医学科学院基础所分子免疫室

目的　克隆并表达人CD38抗原分子的胞外段基因。方法　采用RT PCR法 ,从高表达CD38抗原的Daudi细胞系中 ,扩增CD38全长cDNA ,并将其插入 pGEM T载体中。重新设计引物 ,从重组 pGEMT载体中 ,扩增CD38抗原分子的胞外段基因 ,再亚克隆到表... 详细信息

目的　克隆并表达人CD38抗原分子的胞外段基因。方法　采用RT PCR法 ,从高表达CD38抗原的Daudi细胞系中 ,扩增CD38全长cDNA ,并将其插入 pGEM T载体中。重新设计引物 ,从重组 pGEMT载体中 ,扩增CD38抗原分子的胞外段基因 ,再亚克隆到表达载体 pET2 8a(+) ,转化大肠杆菌BL2 1,用IPTG诱导表达。结果　经酶切鉴定及序列分析表明 ,克隆的CD38胞外段基因的序列与文献[1,2 ] 的报道完全一致。将该片段亚克隆到表达载体 pET2 8a(+) ,经IPTG诱导在大肠杆菌BL2 1中获得表达。结论　获得了人CD38抗原分子胞外段基因及其原核表达产物 ,对进一步制备单克隆抗体。

关键词：抗原胞外段基因克隆 RT-PCR CD38分基因表达

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从随机9肽库中筛选HCV抗原表位

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中国免疫学杂志 2002年第12期18卷 836-838页

作者：柯屾戚中田温新宇施明赵平沈倍奋解放军总医院基础医学研究所北京100853 第二军医大学微生物学教研室上海200433 军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的 :用患者血清中抗HCV抗体从随机 9肽库中筛选HCV抗原表位。方法 :将病人血清用硫酸铵粗提后 ,用ProteinA亲和层析柱纯化和制备抗HCV多克隆抗体 ;以此为筛选配基 ,对噬菌体表面展示的随机 9肽库进行亲和筛选。结果 :三轮筛选的投入... 详细信息

目的 :用患者血清中抗HCV抗体从随机 9肽库中筛选HCV抗原表位。方法 :将病人血清用硫酸铵粗提后 ,用ProteinA亲和层析柱纯化和制备抗HCV多克隆抗体 ;以此为筛选配基 ,对噬菌体表面展示的随机 9肽库进行亲和筛选。结果 :三轮筛选的投入产出比逐轮升高至 5 0× 10 - 3 、假阳性率逐轮降低至 0 2 % ,提示具有良好的富集效果。从第三轮挑选出的 15个克隆进行结合试验 ,发现 7个克隆只与HCV抗体有较强的结合力而不与正常人血清反应 ;测序表明 6个克隆的外源肽含有核心序列SPVAXVLXT。用阳性噬菌体克隆检测 2 0例病人血清 ,有程度不等的阳性反应。结论 :用多克隆抗体从噬菌体随机肽库中筛选得到了有一定功能的模拟表位。

关键词：噬菌体随机肽库抗原表位丙型肝炎病毒 HCV

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拆方研究补中益气汤中黄芪甘草及全方的免疫调节作用

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皖南医学院学报 2002年第1期21卷 13-15页

作者：米娜吴敏毓孙卫民皖南医学院微生物学与免疫学研究室上海第二军医大学免疫学教研室

目的　检测补中益气汤中黄芪、甘草及全方对病态机体的免疫调节作用。方法　分 7组检测全方中黄芪、甘草及全方缺黄芪、缺甘草组方对利血平制备的脾虚小鼠的 5项非特异性免疫功能的影响进行研究。结果　黄芪能使Hb明显升高 ,单味甘草对... 详细信息

目的　检测补中益气汤中黄芪、甘草及全方对病态机体的免疫调节作用。方法　分 7组检测全方中黄芪、甘草及全方缺黄芪、缺甘草组方对利血平制备的脾虚小鼠的 5项非特异性免疫功能的影响进行研究。结果　黄芪能使Hb明显升高 ,单味甘草对某些免疫功能不起作用甚至起抑制作用 ,缺甘草组方作用低于全方 ,全方能明显提高机体免疫功能。结论　黄芪是方中主要升高Hb药物 ;方中甘草起到特殊的调节作用。

关键词：黄芪甘草补中益气汤天然杀伤细胞肿瘤坏死因子拆方免疫调节中药

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对山东地区TTV基因片段的检测及其部分核酸序列测定

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第四军医大学学报 2002年第16期23卷 1476-1479页

作者：于建国商庆华任浩肖德明尹燕明白薇戚中田张光曙解放军第88医院感染科济南军区肝病研究所山东泰安271000 第二军医大学微生物学教研室上海200433 泰安市中心医院感染科泰山医学院附属医院感染科山东泰安271000

目的　了解山东地区输血传播病毒 (TTV)分离株感染状况及基因变异的情况 .方法　应用逆转录—聚合酶链反应法 (RT- PCR)检测山东地区 2 6例非甲～戊型肝炎和 1 2例肝细胞癌患者血清中的 TTV DNA,对阳性扩增的产物进行测序 ,并分析其基... 详细信息

目的　了解山东地区输血传播病毒 (TTV)分离株感染状况及基因变异的情况 .方法　应用逆转录—聚合酶链反应法 (RT- PCR)检测山东地区 2 6例非甲～戊型肝炎和 1 2例肝细胞癌患者血清中的 TTV DNA,对阳性扩增的产物进行测序 ,并分析其基因变异情况 .结果　 2 6例非甲～戊型肝炎患者检出 TTV DNA阳性者 1 1例 (42 % ) .对其中 2例(TTVSD4,TTVSD5)进行 PCR产物直接测序 ,并与日本株(AB0 0 8394)相比较 ,其核苷酸序列同源性分别为 99.9%和1 0 0 % .而 1 2例肝细胞癌患者中 TTVDNA阳性 3例 (2 5% ) ,对其中 1例 (TTVSD6)测序 ,与日本株 (AB0 0 8394)相比较 ,其核苷酸序列同源性为 99% ;TTVSD4、 TTVSD5和TTVSD6之间的核苷酸同源性均为 99% .结论　山东地区非甲～戊型肝炎和肝细胞癌患者中 TTV感染率较高 ,测序结果表明其与日本株 (AB0 0 8394)

关键词： TTV基因片段检测核酸序列测定输血传播病毒

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利用噬菌体随机肽库技术分析丙肝患者血清中抗HCV抗体的表位

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军医进修学院学报 2002年第4期23卷 283-285页

作者：柯屾戚中田温新宇施明胡美茹沈倍奋解放军总医院基础医学研究所北京100853 第二军医大学微生物学教研室上海200433 军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的 :分析患者血清中抗HCV抗体的抗原表位。方法 :用ProteinA亲和层析柱从患者血清中纯化、制备抗HCV多克隆抗体 ;以此对噬菌体表面展示的随机 6肽库进行亲和筛选。结果 :经具有良好富集效果的三轮筛选后 ,从第三轮挑选出的 12个克隆... 详细信息

目的 :分析患者血清中抗HCV抗体的抗原表位。方法 :用ProteinA亲和层析柱从患者血清中纯化、制备抗HCV多克隆抗体 ;以此对噬菌体表面展示的随机 6肽库进行亲和筛选。结果 :经具有良好富集效果的三轮筛选后 ,从第三轮挑选出的 12个克隆进行结合试验 ,发现 8个克隆只与HCV抗体有较强的结合力而不与正常人血清反应 ;测序表明阳性克隆的外源肽具有一定的相似性。用阳性噬菌体克隆检测 2 0例患者血清 ,有程度不等的阳性反应。结论 :用多克隆抗体从噬菌体随机肽库中筛选得到了有一定功能的模拟表位。

关键词：噬菌体随机肽库丙肝血清抗HCV抗体表位

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