检索结果-内蒙古大学图书馆

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第6期33卷 691-695页

作者：赵兰娟刘厚奇曹洁冯根生戚中田加利福尼亚州Burnham研究所中国第二军医大学微生物学教研室美国圣迭戈加州92037 第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学组织胚胎学教研室

人CD8 1是丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)的细胞表面特异性受体 ,HCV包膜蛋白 2 (E2 )可与其结合。细胞外信号调节激酶 (extracellularsignal regulatedproteinkinase ,MAPK/ERK 1,2 )信号途径主要介导细胞增殖及分化。为探讨HCVE... 详细信息

人CD8 1是丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)的细胞表面特异性受体 ,HCV包膜蛋白 2 (E2 )可与其结合。细胞外信号调节激酶 (extracellularsignal regulatedproteinkinase ,MAPK/ERK 1,2 )信号途径主要介导细胞增殖及分化。为探讨HCVE2蛋白与人CD81结合对MAPK/ERK活性变化的影响 ,以HCVE2蛋白刺激HepG2细胞 ,采用免疫印迹、免疫组化及免疫荧光等方法动态观察细胞内MAPK/ERK的激活情况 ,并以流式细胞术检测细胞表面CD81的表达。结果表明 :HepG2细胞高表达人CD81;HCVE2蛋白可激活细胞内MAPK/ERK ;MAPK/ERK的磷酸化反应与HCVE2蛋白浓度、作用时间呈依赖关系 ;HCVE2 CD81相互作用引发的细胞异常信号转导可能与HCV致病性相关

关键词：丙型肝炎病毒 E2蛋白细胞外信号调节激酶 CD81 信号转导

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HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库的构建与筛选

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第4期21卷 359-363页

作者：潘卫戚中田吴晓兰贺祥陈秋莉潘欣第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的　探讨噬菌体随机肽展示技术在筛选和鉴定病毒抗原序列研究中的应用前景。方法　用噬菌粒展示载体pCANTAB5X ,构建HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库。用抗 HCV核心单独阳性的血清对该库进行 4轮筛选 ,获得多个阳性克隆 ,测定和分析 ... 详细信息

目的　探讨噬菌体随机肽展示技术在筛选和鉴定病毒抗原序列研究中的应用前景。方法　用噬菌粒展示载体pCANTAB5X ,构建HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库。用抗 HCV核心单独阳性的血清对该库进行 4轮筛选 ,获得多个阳性克隆 ,测定和分析 8个杂交阳性克隆的DNA序列。结果　构建的随机文库含 1.2 3× 10 5个不同克隆 ,噬菌体滴度为 2× 10 12 TU/ml(转化单位 /ml)。所测定的 7个阳性序列中的 6个为HCV核心蛋白序列 ,这些序列均含有与免疫筛选结果相似的HCV核心抗原序列。另一个为大肠杆菌nrfa基因。结论　所建的噬菌体文库有足够大的库容和较好的随机性 ,可以从该文库中筛选出正确的HCVC抗原序列。噬菌体展示技术完全可应用于病毒蛋白抗原序列的筛选 ,并具有简便、快速。

关键词：噬菌体展示文库丙型肝炎病毒核心蛋白病毒抗原

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CD81分子:新发现的丙型肝炎病毒受体

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中华医学杂志 2001年第2期81卷 126-127页

作者：曹洁戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）是1989年确认的可引起输血后非甲非乙型肝炎的主要致病因子，其感染人数约占世界人口的3%，其中大部分感染者可发展为慢性感染，严重危害人类健康。

关键词：丙型肝炎病毒受体 CD81分子基因结构功能相互作用

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TT型病毒基因组的克隆与进化分析

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微生物学报 2001年第4期41卷 408-414页

作者：任浩董辉朱分禄缪晓辉王文戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长征医院感染科

利用PCR方法从输血传播性病毒(transfusion transmitted virus,TTV)阳性标本中获得不同长度且重叠覆盖TTV基因组的DNA片段.将PCR扩增片段克隆到pT-Adv载体中,筛选获得阳性克隆.DNA序列测定结果表明所克隆的片段为TTV基因组序列.利用DNA... 详细信息

利用PCR方法从输血传播性病毒(transfusion transmitted virus,TTV)阳性标本中获得不同长度且重叠覆盖TTV基因组的DNA片段.将PCR扩增片段克隆到pT-Adv载体中,筛选获得阳性克隆.DNA序列测定结果表明所克隆的片段为TTV基因组序列.利用DNA片段中特有的限制性内切酶位点将TTV的DNA片段首尾相连,得到近全长的基因组克隆,命名为TTV021.对TTV021的核酸序列进行分析,TFV021长3 472 nt,存在2个阅读框架ORF1和ORF2,分别编码785和146个氨基酸.将TTV021与其它已知的TTV基因组全序列进行了同源性比较,并进行进化分析.结果表明,TTV021序列与TTV分离株CHN2、BDH1的遗传距离较近,而与其它分离株相对较远.

关键词：输血传播性病毒克隆同源性进化分析

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受四环素系统调控的DT_(390)-VEGF_(165)融合基因对胃癌细胞的杀伤效应

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第二军医大学学报 2001年第7期22卷 695-696页

作者：潘欣潘卫戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

严格控制毒素基因的转录是肿瘤基因治疗发展的一个方向.我们曾经报道DT390- VEGF165或DT390-VEGFexon7融合基因真核表达载体在脂质体介导下转染胃癌细胞SGC7901可以观察到明显的杀伤效应[1].为了控制毒素基因的表达,我们在真核表达载体... 详细信息

严格控制毒素基因的转录是肿瘤基因治疗发展的一个方向.我们曾经报道DT390- VEGF165或DT390-VEGFexon7融合基因真核表达载体在脂质体介导下转染胃癌细胞SGC7901可以观察到明显的杀伤效应[1].为了控制毒素基因的表达,我们在真核表达载体中引入了四环素tet-off调控系统,转基因后结果显示:虽然存在漏表达,但四环素系统对控制毒素基因的表达可以发挥一定的作用.

关键词：血管内皮细胞生长因子基因真核表达载体胃肿瘤 DNA

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血管生成抑素endostatin的表达、纯化及活性研究

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第二军医大学学报 2001年第1期22卷 36-39页

作者：贺祥王路潘卫曹明媚芮耀诚戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的 :将从人胎肝组织克隆的血管生成抑素 endostatin基因进行原核表达、纯化 ,检测重组 endostatin的生物学活性。方法 :利用原核表达载体 p BV 2 2 0在大肠杆菌 DH5α中表达 endostatin,利用肝素 Sepharose亲和层析及 Sephacryl S- 2... 详细信息

目的 :将从人胎肝组织克隆的血管生成抑素 endostatin基因进行原核表达、纯化 ,检测重组 endostatin的生物学活性。方法 :利用原核表达载体 p BV 2 2 0在大肠杆菌 DH5α中表达 endostatin,利用肝素 Sepharose亲和层析及 Sephacryl S- 2 0 0分子筛纯化 ;通过体外内皮细胞 (ECV30 4)增殖实验及体内鸡胚尿囊膜 (CAM)新生血管实验检测其抑制活性。结果 :Endo-statin在 DH5α中的表达率为 2 8.5 % ,纯化后纯度可达 90 .5 %。 Endostatin可明显抑制体外培养的内皮细胞增殖 ,IC5 0 为 72μg/ m l;2 0μg/ ml时使细胞于 48h发生明显凋亡 ;2 0 0μg/ ml的 endostatin可使 CAM新生血管化率下降 30 %。结论 :研究结果表明 endostatin对内皮细胞具有明显抑制作用。

关键词：血管生成抑素基因表达内皮细胞生物学效应 ENDOSTAIN 胶原蛋白

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四环素调控白喉毒素基因的重组逆转录病毒载体的构建

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第二军医大学学报 2001年第z1期22卷 89-90页

作者：李玉光赵立军李强曹广文杨淑英陈秋莉潘卫戚中田刘忠令山东省济宁医学院附属医院呼吸内科济宁272129 第二军医大学长海医院呼吸内科第二军医大学长海医院呼吸内科第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 第二军医大学长海医院呼吸内科

　　将毒素基因导入肿瘤细胞内是肿瘤基因治疗一个较有前景的手段[1].白喉毒素(diphtheria toxin,DT)是由白喉杆菌分泌的一种单链多肽毒素,大多数哺乳类细胞均存在这种毒素的受体,其A片段(DTA)毒力特别强,它能催化不可逆转的ADP核糖酰基... 详细信息

　　将毒素基因导入肿瘤细胞内是肿瘤基因治疗一个较有前景的手段[1].白喉毒素(diphtheria toxin,DT)是由白喉杆菌分泌的一种单链多肽毒素,大多数哺乳类细胞均存在这种毒素的受体,其A片段(DTA)毒力特别强,它能催化不可逆转的ADP核糖酰基化,使肽链延长因子Ⅱ失活,从而抑制宿主细胞蛋白合成[2].Gossen等[3]提出了可调控型高表达系统(Tet系统),这为毒素基因治疗肿瘤开辟了新途径.Tet系统可分为 Tet-On和Tet-Off系统,前者的基因表达是在四环素加入后激活,而后者则是在四环素浓度逐渐降低的情况下激活.我们构建携带四环素系统调控的DTA基因的逆转录病毒载体,为进一步探讨肺癌的基因治疗奠定基础.……

关键词：白喉毒素四环素系统肺癌逆转录病毒载体

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从HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库中筛选抗原表位

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细胞与分子免疫学杂志 2001年第1期17卷 20-23页

作者：潘卫戚中田吴晓兰贺祥潘欣陈秋莉杜平第二军医大学微生物学教研室上海市翔殷路800号上海200433

目的探讨病毒抗原序列研究的新方法。方法应用噬菌体展示技术，筛选ＨＣＶ核心蛋白的抗原序列。用抗－ＨＣＶ核心抗体单独阳性的血清，对巳构建的ＨＣＶ核心蛋白噬菌体随机展示肽库进行４轮筛选，检测筛选阳性的克隆数、插入阳性率和杂... 详细信息

目的探讨病毒抗原序列研究的新方法。方法应用噬菌体展示技术，筛选ＨＣＶ核心蛋白的抗原序列。用抗－ＨＣＶ核心抗体单独阳性的血清，对巳构建的ＨＣＶ核心蛋白噬菌体随机展示肽库进行４轮筛选，检测筛选阳性的克隆数、插入阳性率和杂交阳性率来评价筛选的效果。测定和分析７个杂交阳性克隆的ＤＮＡ序列。结果所测定的７个序列中，６个为ＨＣＶ核心蛋白序列，其中５个被正确地展示于噬菌体表面，１个可能被正确展示，这些序列均含有重要的ＨＣＶ核心抗原表位。另１个为大肠杆菌ｎｒｆａ基因。结论噬菌体展示技术完全可应用于病毒蛋白抗原序列的筛选，并具有简便、快速、准确的优点。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白噬菌体随机肽库抗原

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重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子的抗肿瘤活性

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第二军医大学学报 2001年第7期22卷 639-641页

作者：肖扬焦炳华朱玉平娄永华王路第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

目的 :检测重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子 (VEGI)的抗肿瘤活性。方法 :检测重组人可溶性 VEGI对建株人脐静脉内皮细胞 (ECV 30 4)、新生牛主动脉内皮细胞 (BAEC)增殖抑制的活性以及对荷 S180肉瘤小鼠的疗效。结果 :重组人可溶... 详细信息

目的 :检测重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子 (VEGI)的抗肿瘤活性。方法 :检测重组人可溶性 VEGI对建株人脐静脉内皮细胞 (ECV 30 4)、新生牛主动脉内皮细胞 (BAEC)增殖抑制的活性以及对荷 S180肉瘤小鼠的疗效。结果 :重组人可溶性 VEGI可以直接抑制 ECV30 4、BAEC的增殖 ,强烈抑制 S180肉瘤生长并延长 S180腹水瘤小鼠的寿命。结论 :重组人可溶性 VEGI可通过抑制新生血管形成用于肿瘤治疗。

关键词：血管内皮细胞生长抑制因子内皮新生血管生长抑制物抗肿瘤药 VEGI

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人内皮抑素与IL_3信号肽融合蛋白真核表达载体的构建

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世界华人消化杂志 2001年第1期9卷 43-46页

作者：曹明媚潘卫陈秋莉马仲才倪之嘉吴晓兰武文斌潘欣曹广文戚中田中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海市200433

目的构建IL_3信号肽与内皮抑素融合蛋白基因的真核表达载体。方法用PCR方法扩增IL_3信号肽序列和人内皮抑素基因,然后采用重叠延伸PCR拼接的方法将两者拼接和扩增。并将IL_3-endocl)NA克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中。结果 IL_3-endo... 详细信息

目的构建IL_3信号肽与内皮抑素融合蛋白基因的真核表达载体。方法用PCR方法扩增IL_3信号肽序列和人内皮抑素基因,然后采用重叠延伸PCR拼接的方法将两者拼接和扩增。并将IL_3-endocl)NA克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中。结果 IL_3-endo融合蛋白基因包括了IL_3信号肽序列和人内皮抑素蛋白全长基因,基因总长度约701bp,被正确拼接,并克隆到pcDNA3.1(+)的CMV启动子下游。序列分析证实克隆序列、插入方向和读码框架均正确。结论成功的将IL_3信号肽序列连接到人内皮抑素基因序列前并构建了其真核表达载体,为以后的内皮抑素用于基因治疗打下了基础。

关键词：信号肽类内皮抑素基因疗法真核表达载体聚合酶链反应基因扩增

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