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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 391-392页

作者：宋燕斌崔晓红潘卫王锦红戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室

ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ假阳性结果分析宋燕斌，崔晓红，潘卫，王锦红，戚中田丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是新近认识的一种单股正链ＲＮＡ病毒，在感染者外周血中的含量低［１］，目前认为逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测... 详细信息

ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ假阳性结果分析宋燕斌，崔晓红，潘卫，王锦红，戚中田丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是新近认识的一种单股正链ＲＮＡ病毒，在感染者外周血中的含量低［１］，目前认为逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＣＶＲＮＡ是诊断ＨＣＶ感染的最敏...

关键词：丙型肝炎病毒聚合酶链反应假阳性

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重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a的制备及纯化

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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 324-327页

作者：王梁华焦炳华第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：制备符合临床应用标准的高纯度重组人肿瘤坏死因子α衍生物３ａ（ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ）。方法：高效表达ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ的Ｅ．ｃｏｌｉ工程菌经过超声破碎、硫酸铵分段盐析、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００层析，得到电泳... 详细信息

目的：制备符合临床应用标准的高纯度重组人肿瘤坏死因子α衍生物３ａ（ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ）。方法：高效表达ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ的Ｅ．ｃｏｌｉ工程菌经过超声破碎、硫酸铵分段盐析、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００层析，得到电泳纯ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ，其比活性为１．８８×１０８ＩＵ／ｍｇ。进一步超滤浓缩，ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０纯化，比活性达２×１０８ＩＵ／ｍｇ。结果：纯度＞９８．２％，回收率约为６５％，内毒素＜２Ｅｕ·（１０６ＩＵ）－１·ｍｌ－１。结论：建立了适宜的ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ纯化方法，连续三批原料和制剂通过国家卫生部药品生物制品检定所检定，符合ＷＨＯ有关基因工程产品临床用药标准，为过渡到临床验证打下了基础。

关键词：肿瘤坏死因子衍生物纯化制备 rh-TNFαD3a

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携带HSV－tk基因的人肝癌特异性逆转录病毒载体的构建

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第二军医大学学报 1996年第2期17卷 101-104页

作者：高军曹广文戚中田仇小芳吴宗娣杜平杨文国崔龙第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科

构建携带单纯疱疹病毒ｔｋ基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的人肝癌特异性逆转录病毒载体。方法和结果：切除逆转录病毒载体ｐＭＮＳＭ内部的ＳＶ４０启动子使之成为ｐＭＮＭ；从真核表达载体ｐＢＰＧＫ－ｔｋ质粒中游离带有磷酸甘油酸激酶基因（... 详细信息

构建携带单纯疱疹病毒ｔｋ基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的人肝癌特异性逆转录病毒载体。方法和结果：切除逆转录病毒载体ｐＭＮＳＭ内部的ＳＶ４０启动子使之成为ｐＭＮＭ；从真核表达载体ｐＢＰＧＫ－ｔｋ质粒中游离带有磷酸甘油酸激酶基因（ｐｇｋ）启动子调控的ＨＳＶ－ｔｋ片段，克隆到ｐＭＮＭ的ＰＬ位点上，构建成普通型ＰＭＮｐ－ｔｋ逆转录病毒载体；从ｐＧＥＭ．７Ｚ－ＡＦＰｅ质粒中游离人甲胎蛋白基因增强子核心序列，克隆到ｐＭＮｐ－ｔｋ的ｐｇｋ启动子上游，构建成人肝癌特异型ｐＭＮＡＰ－ｔｋ逆转录病毒载体。结论：该载体对肝癌特异性前药转换基因治疗有重要意义。

关键词：肝肿瘤基因治疗逆转录病毒载体 HSV-tk

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逆转录病毒介导的人肝癌特异性HSV－tk／ACV的体外抗肝癌作用

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第二军医大学学报 1996年第6期17卷 505-508页

作者：高军曹广文戚中田吴宗娣杜平仇小芳崔龙杨文国第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科

目的：建立肝癌特异性前药转换基因治疗的方法。方法和结果：构建携带单纯疮疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的人肝癌特异性逆转录病毒载体，经过ＰＡ３１７细胞包装及病毒滴度测定后，感染肝癌ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ７７２１细胞，... 详细信息

目的：建立肝癌特异性前药转换基因治疗的方法。方法和结果：构建携带单纯疮疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的人肝癌特异性逆转录病毒载体，经过ＰＡ３１７细胞包装及病毒滴度测定后，感染肝癌ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ７７２１细胞，用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法证明ＨＳＶ－ｔｋ基因在ＡＦＰ高分泌的ＨｅｐＧ２细胞中得到特异转录，以阿昔洛韦（ＡＣＶ）为前药攻击转基因的肝癌细胞显示对ＨｅｐＧ２有相对选择性杀伤作用。结论：该ＡＦＰｅ／ＨＳＶ－ｔｋ／前药转换疗法为肝癌特异性基因治疗提供了有价值的资料。

关键词：肝肿瘤胸苷激酶甲胎蛋白增强子基因治疗

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携带HuIFN－β　cDNA的重组逆转录病毒载体的构建及在人肝癌细胞中的特异表达

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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 301-305页

作者：曹广文杜平杨文国戚中田孔宪涛上海第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海第二军医大学长征医院实验诊断科

目的：研究逆转录病毒介导干扰素基因转移及在肝癌细胞中特异表达作用。方法：将人β干扰素（ＨｕＩＦＮ－β）ｃＤＮＡ克隆到逆转录病毒载体ＰＬ位点，分别构建了转录受ＳＶ４０启动子驱动的载体ＭＮＳＩＦＮＢ和转录受人甲胎蛋白增强... 详细信息

目的：研究逆转录病毒介导干扰素基因转移及在肝癌细胞中特异表达作用。方法：将人β干扰素（ＨｕＩＦＮ－β）ｃＤＮＡ克隆到逆转录病毒载体ＰＬ位点，分别构建了转录受ＳＶ４０启动子驱动的载体ＭＮＳＩＦＮＢ和转录受人甲胎蛋白增强子（ＡＦＰｅ）调控的载体ＭＮＡＩＦＮＢ。用脂质体转染法将载体分别转导ＰＡ３１７包装细胞，质粒转染率为每１０５ＰＡ３１７细胞（４～２５）×１０３ＣＦＵ／μｇ，病毒感染率（４．５～５００）×１０４ＣＦＵ／ｍｌ。重组病毒在４μｇ／ｍｌｐｏｌｙｂｒｅｎｅ存在条件下感染人肝癌、肾癌及黑色素瘤细胞。结果：ＮｅｏＲ克隆ＲＮＡ斑点杂交及ＩＦＮ活性分析证明，人ＡＦＰｅ可促进异源启动子启动ＨｕＩＦＮ－β基因在合成ＡＦＰ的人肝癌细胞中高效特异转录和表达。结论：ＡＦＰ＂持家基因＂顺式调控序列在合成ＡＦＰ的肝癌细胞中特异驱动ＩＦＮ－β基因表达，该研究为肝癌特异性免疫基因治疗提供了资料。

关键词： β干扰素逆转录病毒载体肝肿瘤基因治疗 cDNA

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含CD基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建

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第二军医大学学报 1996年第3期17卷 289-291页

作者：崔龙曹广文王元和屠岳孟荣贵高军仇小芳吴宗娣谢苏庆第二军医大学长海医院普外科第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长征医院普外科

含ＣＤ基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建崔龙，曹广文，王元和，屠岳，孟荣贵，高军，仇小芳，吴宗娣，谢苏庆关键词大肠癌；胞嘧啶脱氨酶基因；逆转录病毒载体；癌胚抗原；转录调控序列胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）是真菌及某些大肠... 详细信息

含ＣＤ基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建崔龙，曹广文，王元和，屠岳，孟荣贵，高军，仇小芳，吴宗娣，谢苏庆关键词大肠癌；胞嘧啶脱氨酶基因；逆转录病毒载体；癌胚抗原；转录调控序列胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）是真菌及某些大肠杆菌等ＤＮＡ嘧啶补救合成途径中的关...

关键词：大肠肿瘤 CD基因逆转录病毒载体病毒载体

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小鼠Alb　e／p序列与肝癌细胞核蛋白之间的相互作用

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海军军医大学学报 1996年第4期17卷 354-357页

作者：杨文国曹广文高军吴宗娣谢苏庆崔龙潘欣杜平戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科第二军医大学长海医院消化内科

目的：研究肝癌组织特异性基因治疗的机理。方法：从小鼠肝细胞、肝癌细胞和黑色素瘤细胞中分别提取核蛋白组分和胞浆蛋白，分别与小鼠白蛋白增强子／启动子（Ａｌｂｅ／ｐ）、白蛋白增强子（Ａｌｂｅ）和白蛋白启动子（Ａｌｂｐ）结合... 详细信息

目的：研究肝癌组织特异性基因治疗的机理。方法：从小鼠肝细胞、肝癌细胞和黑色素瘤细胞中分别提取核蛋白组分和胞浆蛋白，分别与小鼠白蛋白增强子／启动子（Ａｌｂｅ／ｐ）、白蛋白增强子（Ａｌｂｅ）和白蛋白启动子（Ａｌｂｐ）结合。结果：Ｂａｎｄ－Ｓｈｉｆｔ试验和竞争试验发现某些肝癌细胞核蛋白组分能与Ａｌｂｅ／ｐ特异结合，其中与Ａｌｂｅ和Ａｌｂｐ特异结合的核蛋白在不同的组分中，而肝癌细胞胞浆蛋白和黑色素瘤细胞核蛋白不能与Ａｌｂｅ／ｐ结合。结论：提示肝癌细胞核中能与Ａｌｂｅ和Ａｌｂｐ作用的核蛋白是应用Ａｌｂｅ／ｐ调控目的基因于肝癌细胞中特异表达的基础。

关键词：肝肿瘤核蛋白白蛋白增强子启动子

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含HSV－tk基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建

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第二军医大学学报 1996年第3期17卷 216-218页

作者：崔龙曹广文王元和屠岳孟荣贵高军仇小芳吴宗娣第二军医大学长海医院普通外科第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长征医院普通外科

目的：为使自杀基因在大肠癌细胞中特异性表达，以达到靶向基因治疗的目的，首先构建以ＣＥＡ基因转录调控序列驱动的重组逆转录病毒载体。方法：将目的基因片段ＨＳＶ－ｔｋ定向克隆入ｐＵＣ１１８质粒载体中，以相应的内切酶取出合适... 详细信息

目的：为使自杀基因在大肠癌细胞中特异性表达，以达到靶向基因治疗的目的，首先构建以ＣＥＡ基因转录调控序列驱动的重组逆转录病毒载体。方法：将目的基因片段ＨＳＶ－ｔｋ定向克隆入ｐＵＣ１１８质粒载体中，以相应的内切酶取出合适的酶切片段后，与来自ｐＣＥＡ４２４／２ＣＡＴ质粒的ＣＥＡ５＇转录调控序列相连接，克隆入逆转录病毒载体中。结果：经鉴定及筛选，构建成重组逆转录病毒载体Ｇ１ＣＥＡｔｋＮａ。结论：Ｇ１ＣＥＡｔｋＮａ的成功构建，为进一步研究大肠癌组织特异性基因治疗奠定了基础。

关键词：单纯疱疹病毒大肠肿瘤逆转录病毒病毒载体

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肝癌细胞核蛋白对白蛋白增强子／启动子序列的体外转录调控作用

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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 350-353页

作者：曹广文高军谢苏庆杨文国崔龙潘欣杜平戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院消化内科第二军医大学长海医院普通外科

目的：研究肝癌细胞核蛋白调控白蛋白＂持家基因＂转录调控序列对目的基因转录的作用。方法：分别从小鼠肝癌细胞、肝细胞和黑色素瘤细胞中提取核蛋白组分，用于体外启动白蛋白增强子／启动子的转录作用。结果：发现某些肝癌细胞和肝细... 详细信息

目的：研究肝癌细胞核蛋白调控白蛋白＂持家基因＂转录调控序列对目的基因转录的作用。方法：分别从小鼠肝癌细胞、肝细胞和黑色素瘤细胞中提取核蛋白组分，用于体外启动白蛋白增强子／启动子的转录作用。结果：发现某些肝癌细胞和肝细胞核蛋白组分具有明显的转录作用，而细胞浆蛋白和其他肿瘤核蛋白组分没有转录作用，将同一肝癌细胞某些核蛋白组分合并可使转录活性增强。结论：本研究在基因转录调控水平部分解释了应用白蛋白增强子／启动子调控目的基因于肝癌细胞中特异表达的机理。

关键词：肝肿瘤核蛋白转录分析白蛋白增强子启动子

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IL－2和TNF特异性基因治疗后肝癌组织病理及免疫组化分析

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第二军医大学学报 1996年第6期17卷 509-512页

作者：曹广文余永伟沈茜杜平杨文国孔宪涛戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院病理诊断科第二军医大学长海医院实验诊断科第二军医大学长征医院临床免疫中心

目的：探讨ＴＮＦ和ＩＬ－２基因治疗后实验性肝癌瘤体内细胞水平的改变。方法：应用病理检查和免疫组化分析对ＩＬ－２和ＴＮＦ转基因治疗后的实验性肝癌病理改变及免疫细胞浸润进行分析。结果：发现受白蛋白增强子／启动子转录调控的... 详细信息

目的：探讨ＴＮＦ和ＩＬ－２基因治疗后实验性肝癌瘤体内细胞水平的改变。方法：应用病理检查和免疫组化分析对ＩＬ－２和ＴＮＦ转基因治疗后的实验性肝癌病理改变及免疫细胞浸润进行分析。结果：发现受白蛋白增强子／启动子转录调控的ＩＬ－２和ＴＮＦ基因在原位感染实验性肝癌可使肝癌逐渐缩小。ＴＮＦ基因可使肝癌组织内广泛出血坏死，Ｍａｃ－１＋炎细胞浸润为主；ＩＬ－２基因可使肝癌组织内大片坏死，Ｌｙｔ２＋炎细胞浸润，两组治疗后期均出现明显的纤维化。结论：ＩＬ－２或ＴＮＦ肝癌特异性原位基因治疗介导免疫抗肿瘤反应，但机理有所不同。

关键词：肝肿瘤基因治疗肿瘤坏死因子白细胞介素2

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