检索结果-内蒙古大学图书馆

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是血液传播的球形包膜病毒,编码单正链RNA,是黄病毒科成员。目前,全世界约有1.7亿患者感染丙型肝炎病毒,每年有300万的新增感染病例,我国HCV感染者近4 000万。HCV慢性化程度高,约80%的急性感染者将发展为慢性肝脏疾病,其中又有约20%将最终进展到肝硬化。

关键词：丙型肝炎病毒生命周期抗病毒靶点

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人IgMμ链恒定区各肽段的基因合成原核表达及免疫原性分析

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安徽医科大学学报 2013年第9期48卷 995-1000页

作者：张婧章萍萍祁培培吴莉莉刘超潘卫邓松华安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433 安庆医药高等专科学校安庆246052

目的全基因合成并原核表达免疫球蛋白M的重链(IgMμ链)及其各肽段,与天然的IgM、IgMμ链和IgG进行免疫原性的分析比较,进一步了解IgMμ链恒定区的结构与功能。方法根据GenBank数据库IgMμ链恒定区(CH1-CH4)的cDNA序列并进行必要的大肠... 详细信息

目的全基因合成并原核表达免疫球蛋白M的重链(IgMμ链)及其各肽段,与天然的IgM、IgMμ链和IgG进行免疫原性的分析比较,进一步了解IgMμ链恒定区的结构与功能。方法根据GenBank数据库IgMμ链恒定区(CH1-CH4)的cDNA序列并进行必要的大肠杆菌密码子优化,利用重叠延伸PCR(OE-PCR)体外基因合成人IgMμ链恒定区全长(CH1-CH4)及其截断片段CH1-CH2和CH3-CH4。原核表达并纯化相应的3种融合蛋白PET32a-rMμCH1-CH4、PET32a-rMμCH1-CH2和PET32a-rMμCH3-CH4,并分别免疫BALB/c小鼠。同时设天然人IgM、IgMμ链和IgG免疫组为对照。再用ELISA法检测6种血清,分析比较其抗原性及免疫原性。结果利用OE-PCR方法体外成功合成1 359 bp的IgMμ链(CH1-CH4)全长基因、651 bp的IgMμ链CH1CH2和708 bp的IgMμ链CH3CH4,并构建相应原核表达质粒PET32a-rMμ1-4、PET32a-rMμ1-2和PET32a-rMμ3-4,血清ELISA检测结果显示:①IgG免疫原性>IgM>IgMμ链>rMμ1-4>rMμ1-2>rMμ3-4;②IgM免疫的血清与IgG有较强的交叉反应性,IgG免疫的血清与IgM也存在较强的交叉反应性;IgMμ链和重组μ链的各肽段免疫的血清与IgG均无明显的交叉反应性。结论重组的IgMμ链及其各肽段与天然IgMμ链有着相似的免疫原性和特异性,为基因工程得到抗人IgMμ链单克隆抗体奠定了研究基础。

关键词：免疫球蛋白M 免疫球蛋白μ链酶联免疫吸附测定法单克隆抗体

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人和羊IgG对噬菌体展示细菌免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库的体外进化筛选

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安徽医科大学学报 2013年第8期48卷 867-872页

作者：吴莉莉祁培培章萍萍王锦红张婧何婷潘卫邓松华安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433 安庆医药高等专科学校安庆246052

目的使用人和羊不同物种IgG来诱导噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库进行体外分子进化筛选,判断不同的Fc段构像是否具有特异的结合优势,同时探索其优势结合序列的组合特点。方法通过PCR获得金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)的A... 详细信息

目的使用人和羊不同物种IgG来诱导噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库进行体外分子进化筛选,判断不同的Fc段构像是否具有特异的结合优势,同时探索其优势结合序列的组合特点。方法通过PCR获得金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)的A、B、D、E和链球菌(C和G群)蛋白G(SpG)的B2、B3各单结构域片段,构建由该6个片段随机组合的噬菌体展示文库。再分别使用人和羊IgG对文库进行体外亲和筛选,以期能够获得具有特异优势结合能力的组合分子,并在Phage ELISA的水平上进一步验证筛选结果。结果成功构建了符合进行体外进化筛选要求的噬菌体展示单结合结构域随机组合文库后,经过6轮人IgG诱导筛选,文库的展示片段大小统一为3个结构域组合分子,E-B-B3;经过6轮羊IgG诱导筛选,文库的展示片段大小也统一为4个结构域组合分子,D-A-B3-B3。Phage ELISA进一步验证最终组合序列的对人和羊IgG的结合能力。结论首次得到两种天然SpA、SpG分子中不存在的,且分别特异地与人和羊IgG具有强结合作用的新型组合分子E-B-B3、D-A-B3-B3,在人和羊IgG的纯化和检测具有很大的应用前景。

关键词：细菌噬菌体免疫球蛋白G 定向分子进化基因文库

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丙型肝炎病毒融合蛋白及融合机制

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中华实验和临床感染病杂志（电子版） 2013年第6期7卷 111-114页

作者：秦照玲鞠鹤鹏戚中田第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海市200433

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）属于黄病毒科、肝病毒属，是有包膜的单正链RNA病毒，其包膜糖蛋白E1、E2均位于病毒颗粒外表面，主要参与子代病毒颗粒的形成（如组装）及病毒新一轮感染（如细胞黏附、受体结合以及膜融合等过... 详细信息

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）属于黄病毒科、肝病毒属，是有包膜的单正链RNA病毒，其包膜糖蛋白E1、E2均位于病毒颗粒外表面，主要参与子代病毒颗粒的形成（如组装）及病毒新一轮感染（如细胞黏附、受体结合以及膜融合等过程）。目前研究认为，有包膜病毒均通过一个共同机制--膜融合将自身基因组输送至靶细胞，然后进行复制、转录与翻译、子代病毒组装与释放。经受体结合[如Ⅰ型人免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV-1）]、pH改变[如流感病毒、登革病毒（dengue virus，DENV）和塞姆利基森林病毒（Semliki forest virus，SFV）]或二者兼具（如鸟类肉瘤病毒、白血病病毒）的方式，与细胞膜或内体（endosome）膜发生融合[1]。本文将对近年来HCV E1、E2所介导的膜融合研究作一综述。

关键词：丙型肝炎病毒病毒融合 immunodeficiency 融合机制包膜糖蛋白E1 Ⅰ型人免疫缺陷病毒正链RNA病毒白及

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MiR-221增强IFN抗HCV作用

MiR-221增强IFN抗HCV作用

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第四届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：许刚王文丁翠玲任浩戚中田第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室

目的:研究miR-221对HCV的调控。方法:首先采用荧光定量PCR方法对HCV病人血清和健康人群血清中miR-221进行定量分析。通过western blot的方法检测miR-221对IFN-α/JAK/STAT信号转导途径的影响,并通过Targetscan与PicTar在线数据库预测寻... 详细信息

目的:研究miR-221对HCV的调控。方法:首先采用荧光定量PCR方法对HCV病人血清和健康人群血清中miR-221进行定量分析。通过western blot的方法检测miR-221对IFN-α/JAK/STAT信号转导途径的影响,并通过Targetscan与PicTar在线数据库预测寻找miR-221的作用靶点。利用荧光素酶报告系统以及小干扰RNA干扰的方法证明miR-221与其作用靶点的相互作用和miR-221抑制HCV复制的作用途径。结果:HCV感染病人血清中检测到miR-221水平升高。在Huh-7细胞中,miR-221过表达后HCV复制减弱,而抑制miR-221表达后HCV复制则增强,在Huh-7.5.1细胞中miR-221过表达或抑制对HCV的复制却没有影响。通过western blot的方法检测miR-221对IFN-α/JAK/STAT信号转导途径的影响,过表达miR-221后,JAK1、STAT1与STAT3分子的磷酸化水平上升,inhibitor则有相反的作用。通过Targetscan与PicTar在线数据库预测没有发现JAK/STAT通过中的成员与miR-221有直接的相互作用,但发现细胞因子信号转导抑制因子SOCS家族的SOCS1、SOCS3两个分子的3,UTR存在miR-221的结合位点。检测荧光素酶活性的方法,证实了SOCS1和SOCS3是miR-221的靶标分子。结论:miR-221是通过抑制SOCS1、SOCS3的表达而促进JAK/STAT信号转导进而抑制HCV的复制。

关键词： HCV JAK MiR-221 IFN

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人免疫球蛋白GFcγ受体的细胞分布及其功能研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第5期28卷 557-559页

作者：祁培培曹洁第二军医大学微生物学教研室上海200433

存在于人免疫细胞表面的IgG Fcγ受体(FcγRs)在功能上分为活化性受体和抑制性受体两类,其主要的免疫学作用是对细胞反应的正向和负向调节,两者间相互作用的平衡是维持机体正常免疫应答或免疫耐受的重要因素,由此FcγRs也成为潜在的治... 详细信息

存在于人免疫细胞表面的IgG Fcγ受体(FcγRs)在功能上分为活化性受体和抑制性受体两类,其主要的免疫学作用是对细胞反应的正向和负向调节,两者间相互作用的平衡是维持机体正常免疫应答或免疫耐受的重要因素,由此FcγRs也成为潜在的治疗自身免疫病、过敏及感染性疾病等理想的作用靶标。现就人FcγRs在不同免疫效应细胞表面的分布及其免疫调节功能的研究进展作一概述。

关键词：人IgGFcγ受体细胞分布活化性受体抑制性受体免疫调节

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丙型肝炎病毒F蛋白缺失对病毒复制及感染性的影响

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生物化学与生物物理进展 2012年第2期39卷 142-150页

作者：王文博许刚王岩陶清源任浩戚中田第二军医大学微生物学教研室全军生物侦检与防护重点实验室上海市医学生物防护重点实验室上海200433

探索了F蛋白缺失及核心蛋白(Core)二级结构改变对丙型肝炎病毒(HCV)复制和感染性的影响.利用定点突变方法,将J6JFH1的核心基因引进5个终止密码子以中断F蛋白的表达,从而获得F蛋白缺失的病毒复制子J6JFH1/ΔF.体外制备RNA转录体,并电穿... 详细信息

探索了F蛋白缺失及核心蛋白(Core)二级结构改变对丙型肝炎病毒(HCV)复制和感染性的影响.利用定点突变方法,将J6JFH1的核心基因引进5个终止密码子以中断F蛋白的表达,从而获得F蛋白缺失的病毒复制子J6JFH1/ΔF.体外制备RNA转录体,并电穿孔转染Huh7.5.1细胞,采用免疫荧光、实时荧光定量PCR方法以及病毒感染等方法,观察F蛋白缺失对病毒复制、蛋白质表达及转染细胞上清感染性病毒颗粒产生的影响.在此基础上,构建5个单一突变病毒体,对HCV核心蛋白进行二级结构分析,观察核心蛋白二级结构对HCV复制和翻译的影响.结果显示,转染48 h后,J6JFH1/ΔF与野生型J6JFH1相比,J6JFH1/ΔF转染阳性细胞数明显降低,细胞内HCV RNA水平降低约95%,J6JFH1/ΔF转染后不同时间点细胞上清中HCV RNA拷贝数和病毒颗粒也明显降低.5个单一突变体不影响核心基因二级结构,病毒在细胞内复制和感染性与野生型水平一致.J6JFH1/ΔF所产生的改变可能是由于5处突变导致核心基因二级结构改变而造成的.结果说明,HCV F蛋白缺失不影响病毒的复制翻译及病毒颗粒的包装释放,核心蛋白二级结构的改变对病毒复制和翻译则产生较大影响.

关键词：丙型肝炎病毒 F蛋白核心蛋白二级结构病毒复制

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