检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学教育 2012年第1期14卷 36-37页

作者：许刚任浩戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

医学微生物学实验课是整个教学的重要组成部分,既能帮助学员巩固理论知识,又能增强学员的动手能力。随着医学科学技术的迅速发展,知识更新速度加快,对学员的培养要求也越来越高。在实验教学中开展科研素质教育和科研精神培养,可为学员... 详细信息

医学微生物学实验课是整个教学的重要组成部分,既能帮助学员巩固理论知识,又能增强学员的动手能力。随着医学科学技术的迅速发展,知识更新速度加快,对学员的培养要求也越来越高。在实验教学中开展科研素质教育和科研精神培养,可为学员今后从事相关医学和科研工作奠定基础。

关键词：医学微生物学实验方法科研素质

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开展防生演练提高危险病原体检出技能

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西北医学教育 2012年第2期20卷 332-335页

作者：潘欣李晗蔡家麟曹洁朱风慧孙如美仇晓芳第二军医大学微生物学教研室上海200433

采用商品化益生菌模拟高危病原体组织教员和研究生开展防生演练,为本科生防生演练探索可操作流程。防生演练以生物安全防护、检出盲检样品中的病原体、理顺演练流程为主线,建立预案,持续改进,不断解决数次防生演练过程中出现的技术问题... 详细信息

采用商品化益生菌模拟高危病原体组织教员和研究生开展防生演练,为本科生防生演练探索可操作流程。防生演练以生物安全防护、检出盲检样品中的病原体、理顺演练流程为主线,建立预案,持续改进,不断解决数次防生演练过程中出现的技术问题、人事问题,形成出版了演练教材,储备了侦检试剂,积累了演练经验,提高了检出技能,锻炼了应急处置心理素质,造就了一支防生演练生力军,为在本科教学中扩大防生演练规模敦实了基础。

关键词：防生演练模拟病菌盲检样品本科教学

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医学微生物学教学改革探索与分析

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基础医学教育 2012年第3期14卷 161-162页

作者：赵平徐庆强戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

针对医学微生物学的学科特点以及学科发展现状,在教学过程中,通过改变教学模式、丰富教学手段、改革实验内容以及改变考核形式等方法来提高教学效果,使学生成为教学过程的主体,激发学生的学习兴趣和创新热情,培养学生的动手能力以及分... 详细信息

针对医学微生物学的学科特点以及学科发展现状,在教学过程中,通过改变教学模式、丰富教学手段、改革实验内容以及改变考核形式等方法来提高教学效果,使学生成为教学过程的主体,激发学生的学习兴趣和创新热情,培养学生的动手能力以及分析问题和解决问题的能力。

关键词：医学微生物学教学改革能力培养

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单域重链抗体的分子特征

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生物技术通讯 2012年第5期23卷 741-745页

作者：潘欣蔡家麟王颖第二军医大学微生物学教研室上海200433

源于软骨鱼或骆驼科动物的同型重链二聚体无轻链,用基因工程方法获得其单一重链可变区可保留完整的抗原结合活性,称为单域重链抗体。单域重链抗体具有分子小、稳定性高、体内组织渗透性好、可溶性好、易表达、抗原识别表位独特的结构特... 详细信息

源于软骨鱼或骆驼科动物的同型重链二聚体无轻链,用基因工程方法获得其单一重链可变区可保留完整的抗原结合活性,称为单域重链抗体。单域重链抗体具有分子小、稳定性高、体内组织渗透性好、可溶性好、易表达、抗原识别表位独特的结构特征,近年来在生物技术研究与诊断治疗应用领域得到广泛关注,取得了快速发展。

关键词：单域重链抗体免疫球蛋白新抗原受体骆驼科动物软骨鱼

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SR-BI及其伴侣分子PDZK1在HCV入侵中的作用

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生命科学 2012年第2期24卷 150-155页

作者：许刚任浩第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室

B族Ⅰ型清道夫受体(scavenger receptor class B type I,SR-BI)是丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)的受体之一,可以与HCV的包膜蛋白E2结合,介导病毒颗粒进入宿主细胞。伴侣分子PDZK1(PDZdomain containing 1)是一个含有4个PDZ结构域的支架蛋白,其第一个PDZ结构域可以与SR-BI的C端结合,调节其稳定表达和正确定位。研究发现PDZK1基因敲除以后,HCVcc(cell culture produced HCVvirus)和HCVpp(HCV pseudotype particles)的感染性明显下降;重新转入PDZK1后,可以部分恢复感染性。研究表明PDZK1可促进HCV入侵并可能是通过与SR-BI的相互作用介导的。伴侣分子对受体分子的调节在HCV入侵中的作用可能成为HCV治疗的潜在靶标,有助于开发新的治疗方法。

关键词： HCV 入侵 SR-BI PDZK1

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基孔肯雅病毒包膜蛋白E2的全基因合成及原核表达

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安徽医科大学学报 2012年第6期47卷 617-622页

作者：章萍萍潘卫曹洁陈秋莉王锦红张华群葛宜兵祁培培刘超邓松华安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433 安庆医药高等专科学校安庆246052

目的通过对全长基孔肯雅病毒包膜蛋白E2(CHIKV-E2,1～404 aa)及其跨膜疏水区(351～378 aa)缺失突变体E2(1～350 aa)进行原核表达,分析跨膜疏水区对E2蛋白在大肠杆菌中表达的影响。方法利用ExPasy预测软件对E2蛋白跨膜疏水区进行预测分析... 详细信息

目的通过对全长基孔肯雅病毒包膜蛋白E2(CHIKV-E2,1～404 aa)及其跨膜疏水区(351～378 aa)缺失突变体E2(1～350 aa)进行原核表达,分析跨膜疏水区对E2蛋白在大肠杆菌中表达的影响。方法利用ExPasy预测软件对E2蛋白跨膜疏水区进行预测分析,根据GenBank数据库中CHIKV-E2氨基酸序列获得其对应的基因序列。结合重叠延伸PCR(OE-PCR)原理设计用于全基因合成的核酸引物对CHIKV-E2全长基因(404 aa)进行体外合成,构建全长E2蛋白及其缺失突变体原核表达质粒,将序列正确的两种重组质粒分别转至*** BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组质粒的表达情况。结果 OE-PCR法成功合成了大小为1 212 bp的编码CHIKV-E2(1～404 aa)蛋白的全长基因,构建了全长E2蛋白及其缺失突变体重组表达质粒pET21b-E2(1～404)和pET21b-E2(1～350),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE结果显示缺失突变体pET21b-E2(1～350)融合蛋白表达量较pET21b-E2(1～404)有明显提高。结论 E2蛋白跨膜疏水区(351～378 aa)对该蛋白的原核表达具有重要影响,缺失该疏水区的突变体在大肠杆菌中表达量比全长E2蛋白表达量明显提高。

关键词： CHIKV-E2 跨膜疏水性蛋白全基因合成缺失突变体原核表达

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虚拟现实技术在医学实验教学课程中的应用

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基础医学教育 2012年第8期14卷 627-628页

作者：陶清源王岩任浩戚中田第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433

随着基础医学教学改革的不断深入以及计算机网络技术的不断普及,网络化教学的地位日益重要;其中,利用虚拟现实技术构建的虚拟实验室在医学实验教学课程中起着其他技术手段无法替代的作用,可以促进实验教学课程的教学改革与发展。

关键词：虚拟现实技术虚拟实验室教学改革

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rpoB作为蜡样芽胞杆菌群快速检测的标志基因的实验研究

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热带医学杂志 2012年第10期12卷 1171-1174页

作者：朱诗应何胜菲王文博赵平任浩戚中田第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433

目的探讨常规PCR和实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的特异性和敏感性。方法提取蜡样芽胞杆菌群和其他各种对照细菌的基因组DNA,合成蜡样芽胞杆菌群rpoB基因扩增引物,采用常规PCR和SYBRgreen实时定量PCR两种方法扩... 详细信息

目的探讨常规PCR和实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的特异性和敏感性。方法提取蜡样芽胞杆菌群和其他各种对照细菌的基因组DNA,合成蜡样芽胞杆菌群rpoB基因扩增引物,采用常规PCR和SYBRgreen实时定量PCR两种方法扩增rpoB基因片段,并将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行DNA测序。结果常规PCR和Q-PCR均能扩增出蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的174bpDNA片段,而各种对照菌株均未见扩增。序列比对发现蜡样芽胞杆菌群细菌在该片段中存在5处核苷酸的不同,差异率为2.88%。以炭疽芽胞杆菌基因组DNA系列稀释作为扩增模板显示常规PCR最小检出量为3.42pg,Q-PCR的敏感性达到171fg,3次重复实验显示Q-PCR检测rpoB基因的灵敏度为(3.32×101±7.45×100)拷贝。结论以rpoB基因为检测靶基因的Q-PCR方法具有高度的特异性和良好的敏感性,能实现对蜡样芽胞杆菌群快速而准确的检测。

关键词：蜡样芽胞杆菌群 rpoB基因实时定量PCR

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α干扰素和利巴韦林抗丙型肝炎病毒作用的比较研究

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微生物与感染 2012年第2期7卷 89-94页

作者：杨猛何胜菲任浩赵兰娟戚中田第二军医大学研究生管理大队临床十队上海200433 第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433

α干扰素(IFN-α)联合利巴韦林是目前临床治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的标准方案。本研究以体外培养的感染性病毒HCVcc为研究对象,比较IFN-α和利巴韦林对HCV复制的影响,以及对干扰素调节因子9(IRF9)和干扰素刺激基因15(ISG15)等抗病毒... 详细信息

α干扰素(IFN-α)联合利巴韦林是目前临床治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的标准方案。本研究以体外培养的感染性病毒HCVcc为研究对象,比较IFN-α和利巴韦林对HCV复制的影响,以及对干扰素调节因子9(IRF9)和干扰素刺激基因15(ISG15)等抗病毒基因的调节能力。结果显示,100u/mlIFN-α显著降低HCV RNA水平,利巴韦林剂量依赖性抑制HCV复制,且IFN-α联合利巴韦林对HCV复制及HCV NS3和E2蛋白表达具有协同抑制作用。5～80u/mlIFN-α剂量依赖性诱生IRF9和ISG15;1和5μg/ml利巴韦林不促进IRF9和ISG15水平升高;而利巴韦林联合IFN-α对两者亦无促进作用。

关键词： α干扰素利巴韦林丙型肝炎病毒干扰素调节因子9 干扰素刺激基因15

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细胞膜胆固醇对于人肠道病毒71型细胞入侵的影响及其机制研究

细胞膜胆固醇对于人肠道病毒71型细胞入侵的影响及其机制研究

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：朱勇喆吴达革任浩王文徐庆强曹明媚王文博赵平戚中田第二军医大学微生物学教研室全军医学微生物学重点实验室上海市医学生物防护重点实验室

目的人肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病的主要病原体之一,然而目前对于EV71的感染机制尚不清楚。本研究旨在通过观察细胞膜胆固醇对EV71易感性的影响,阐明EV71细胞入侵的途径,揭示病毒生命周期的早期环节。方法人胚胎横纹肌肉瘤细胞(R... 详细信息

目的人肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病的主要病原体之一,然而目前对于EV71的感染机制尚不清楚。本研究旨在通过观察细胞膜胆固醇对EV71易感性的影响,阐明EV71细胞入侵的途径,揭示病毒生命周期的早期环节。方法人胚胎横纹肌肉瘤细胞(RD细胞)与不同浓度的胆固醇破坏剂(MβCD,nystatin和lovastatin)分别培养,感染EV71病毒后通过免疫荧光、实时荧光定量PCR和病毒空斑实验,观察病毒衣壳蛋白(VP1)表达水平、胞内病毒RNA复制水平以及上清中的病毒滴度,并与未加药物的对照细胞进行比较。继而通过观察胆固醇删除剂在病毒加入前后各个时间点对于EV71感染性的影响,确定胆固醇的作用环节。通过流式细胞术、免疫共沉淀、脂筏分离以及激光共聚焦技术分析胆固醇删除后是否影响病毒与宿主细胞的结合能力、病毒与受体相互作用、病毒与受体的脂筏定位以及病毒的内吞过程。结果胆固醇删除剂MβCD、胆固醇聚合失活剂nystatin以及胆固醇合成抑制剂lovastatin均能显著抑制EV71细胞病变效应、VP1表达水平、胞内病毒RNA复制水平以及上清中的病毒滴度,并且这种抑制作用呈剂量依赖性。RD细胞经MβCD处理后,外源加入胆固醇能够恢复EV71的感染性。在EV71感染前加入MβCD能显著抑制病毒感染,但在病毒感染30分钟后加入MβCD并不影响病毒生长。流式细胞术结果显示,胆固醇删除并不影响EV71受体B族Ⅱ型清道夫受体(SCARB2)的表达水平,结合在RD细胞表面的病毒数量也与删除前相似。免疫共沉淀结果显示,MβCD处理前后,SCARB2抗体沉淀的VP1蛋白水平相似。脂筏分离结果显示,EV71与SCARB2的相互作用发生在膜上胆固醇富集区,而MβCD的作用使得他们定位于非胆固醇区域。激光共聚焦结果显示,MβCD处理后,内化至胞浆中的EV71病毒颗粒显著减少。结论破坏细胞膜胆固醇抑制EV71感染性,且主要影响病毒的入侵环节。胆固醇删除不影响病毒与宿主细胞结合,也不影响病毒-受体的相互作用,但阻碍了EV71的内吞过程。本研究证实了胆固醇在EV71感染早期的重要作用,进一步阐明EV71细胞入侵的分子机制,为抗病毒治疗提供了可能靶点。

关键词：细胞膜胆固醇人肠道病毒71型脂筏入侵

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