检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2005年第4期26卷 402-405页

作者：卢莹陈光椿李忆东卢建第二军医大学基础医学部病理生理学教研室上海200433

目的:探讨前列腺癌中发现的4 种雄激素受体(androgen receptor,AR)的点突变对AR转录激活功能的影响。方法:将野生型AR(wtAR)或AR突变体的表达载体与报告基因(pMMTV LUC)及内参照基因(pRLSV40 LUC)质粒共转染入PC 3细胞中,分别用雄激素... 详细信息

目的:探讨前列腺癌中发现的4 种雄激素受体(androgen receptor,AR)的点突变对AR转录激活功能的影响。方法:将野生型AR(wtAR)或AR突变体的表达载体与报告基因(pMMTV LUC)及内参照基因(pRLSV40 LUC)质粒共转染入PC 3细胞中,分别用雄激素受体的激动剂二氢睾酮(DHT)以及其他甾体激素(雌二醇及孕激素)处理细胞,24 h后用双荧光素酶报告基因分析系统检测报告基因的活性,同时用Western印迹法检测AR蛋白。结果:在DHT作用下,G142V、D221H突变体对报告基因的诱导水平高于wtAR,是wtAR的近1.30 倍(P<0.05),其余突变体与wtAR相比对报告基因的诱导水平无显著差异;在雌二醇(E2)与孕激素(PROG)作用下,E872Q对报告基因的诱导水平高于wtAR,分别为wtAR的1.27、1.47倍(P<0.05)。结论:G142V、D221H点突变使AR突变体转录激活功能增强,E872Q点突变可能影响了AR的配体结合特异性,上述结果有助于阐明前列腺癌由雄激素依赖性转为非依赖性的机制。

关键词：前列腺癌雄激素受体基因突变转录激活

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地塞米松对人肝癌细胞系酪氨酸转氨酶mRNA表达的影响

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 176-178页

作者：李忆东刘宇健卢建第二军医大学基础医学部病理生理学教研室上海200433

目的 :观察地塞米松 (Dex)对人肝癌细胞系 (SMMC- 772 1细胞 )酪氨酸转氨酶 m RNA表达的影响。方法 :采用定量逆转录 -多聚酶链反应 (RT- PCR)检测酪氨酸转氨酶 m RNA。结果 :Dex能够诱导 SMMC- 772 1细胞酪氨酸转氨酶 m RNA的表达 ,... 详细信息

目的 :观察地塞米松 (Dex)对人肝癌细胞系 (SMMC- 772 1细胞 )酪氨酸转氨酶 m RNA表达的影响。方法 :采用定量逆转录 -多聚酶链反应 (RT- PCR)检测酪氨酸转氨酶 m RNA。结果 :Dex能够诱导 SMMC- 772 1细胞酪氨酸转氨酶 m RNA的表达 ,且具有剂量依赖性和时间依赖性特点 ,但诱导倍数偏低。结论 :SMMC- 772

关键词：酷氨酸氨基转移酶肝肿瘤糖皮质激素类糖皮质激素受体地塞米松影响 mRNA

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稳定转染维生素D受体反义cDNA的人骨肉瘤细胞系的建立

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第二军医大学学报 2001年第3期22卷 242-244页

作者：陈玉霞刘宇健宋亮年第二军医大学基础医学部病理生理学教研室上海200433

目的 :建立稳定转染维生素 D受体 (VDR)反义 c DNA的人骨肉瘤细胞系。方法 :构建 VDR反义 c DNA的真核表达载体 ,用 L ipofectamine法转染人骨肉瘤细胞系 HOS- 86 0 3,经 G418筛选后获得稳定转染细胞株 ,并用免疫组化技术检测内源性 VD... 详细信息

目的 :建立稳定转染维生素 D受体 (VDR)反义 c DNA的人骨肉瘤细胞系。方法 :构建 VDR反义 c DNA的真核表达载体 ,用 L ipofectamine法转染人骨肉瘤细胞系 HOS- 86 0 3,经 G418筛选后获得稳定转染细胞株 ,并用免疫组化技术检测内源性 VDR蛋白的表达情况 ;采用瞬时转染报告基因技术从靶基因水平检测 VDRas3细胞内 VDR的转录激活功能。结果 :筛选出 6株抗 G418细胞克隆 (VDRas1～ 6 ) ,其中 VDRas3细胞内源性 VDR蛋白的表达量低于对照细胞。激素作用 72 h后 ,对照细胞的报告基因氯霉素乙酰转移酶 (CAT)转录活性增加约 3.5倍 ,而 VDRas3细胞 CAT的转录基本不受激素诱导。结论 :获得了稳定转染 VDR反义 c DNA的细胞系 ,为今后进一步研究 1,2 5 (OH) 2 D3及其类似物调节细胞增殖分化的分子机制提供了一个良好的细胞模型。

关键词：人骨肉瘤细胞受体维生素D 反义cDNA 基因转染

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锌指蛋白ZBTB20基因重组腺病毒表达载体的构建和鉴定

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中国病理生理杂志 2014年第5期30卷 876-880页

作者：朱晓彤杨瑞周露婷张晔李玲章卫平施广霞陈玉霞第二军医大学基础部病理生理学教研室上海200433 大连医科大学病理生理学教研室辽宁大连116044

目的:构建含锌指蛋白ZBTB20基因的重组腺病毒载体,以研究锌指蛋白ZBTB20的生物学功能。方法:将带有FLAG标签的ZBTB20 cDNA片段(ZBTB20-FLAG)克隆至pAdTrack-CMV载体,将该载体与pAdEasy质粒进行细菌内同源重组从而获得重组腺病毒载体pAd-... 详细信息

目的:构建含锌指蛋白ZBTB20基因的重组腺病毒载体,以研究锌指蛋白ZBTB20的生物学功能。方法:将带有FLAG标签的ZBTB20 cDNA片段(ZBTB20-FLAG)克隆至pAdTrack-CMV载体,将该载体与pAdEasy质粒进行细菌内同源重组从而获得重组腺病毒载体pAd-ZBTB20,之后在293细胞中进行包装以及扩增,并对病毒滴度进行检测;采用肝脏组织特异性ZBTB20基因敲除小鼠的原代肝细胞和肝脏组织模型,分别于离体和在体水平鉴定所制备的重组腺病毒Ad-ZBTB20介导的ZBTB20蛋白表达情况;并采用报告基因技术检测过表达的ZBTB20蛋白的功能活性。结果:成功制备了锌指蛋白ZBTB20重组腺病毒,该重组腺病毒感染原代肝细胞和小鼠肝脏组织能过表达ZBTB20蛋白,并且此ZBTB20蛋白能抑制其下游靶基因甲胎蛋白的转录。结论:所构建的ZBTB20重组腺病毒可以介导ZBTB20的过表达并具备转录调节活性,为今后研究ZBTB20的相关生物学功能奠定了基础。

关键词：含锌指和BTB区蛋白20 重组腺病毒甲胎蛋白类转录调节

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Rho GTP酶参与肿瘤调控的下游效应蛋白

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生命的化学 2006年第3期26卷 252-254页

作者：陈玉霞刁飞第二军医大学病理生理学教研室上海200433

小G蛋白Rho家族是一类能结合GTP的蛋白质,在哺乳动物细胞的信号转导系统中发挥着“分子开关”样的重要作用。Rho蛋白通过其下游效应蛋白介导发挥多种生物学效应,包括调控细胞骨架重组、黏附和运动等。近年来,Rho蛋白在肿瘤细胞的增殖、... 详细信息

小G蛋白Rho家族是一类能结合GTP的蛋白质,在哺乳动物细胞的信号转导系统中发挥着“分子开关”样的重要作用。Rho蛋白通过其下游效应蛋白介导发挥多种生物学效应,包括调控细胞骨架重组、黏附和运动等。近年来,Rho蛋白在肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡和转移的调控中的作用渐受重视。该文就介导RhoGTP酶调控肿瘤发生发展的几个下游蛋白作一介绍。

关键词： Rho GTP酶肿瘤效应蛋白

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Forskolin对1，25－二羟维生素D_3受体mRNA表达的调节及其生物学意义

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第二军医大学学报 1996年第6期17卷 513-517页

作者：宋亮年孙琳琳第二军医大学基础医学部病理生理学教研室第二军医大学军医系

目的：研究腺苷酸环化酶激活剂ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（Ｆ）对１，２５－二羟维生素Ｄ３［１，２５（ＯＨ）２Ｄ３］受体（ＶＤＲ）ｍＲＮＡ表达的调节作用及其可能的生物学意义。方法：以人原始巨核白血病细胞系（ＨＩＭｅｇ）为模型，Ｖ... 详细信息

目的：研究腺苷酸环化酶激活剂ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（Ｆ）对１，２５－二羟维生素Ｄ３［１，２５（ＯＨ）２Ｄ３］受体（ＶＤＲ）ｍＲＮＡ表达的调节作用及其可能的生物学意义。方法：以人原始巨核白血病细胞系（ＨＩＭｅｇ）为模型，ＶＤＲｍＲＮＡ的检测采用定量逆转录－聚合酶链反应；细胞增殖实验采用悬浮培养系统及甲基纤维素培养系统。结果：Ｆ对ＨＩＭｅｇ细胞ＶＤＲｍＲＮＡ的表达具有向上调节作用，且有明显的时间依赖性特点；Ｆ本身虽然对ＨＩＭｅｇ细胞的增殖及分化过程无明显影响，但却可以显著地加强１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对该细胞系的作用，具体表现在：当Ｆ同时存在时，１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对ＨＩＭｅｇ细胞的增殖过程和克隆形成率的抑制作用更为明显，对ＨＩＭｅｇ细胞分化过程的诱导作用亦更为显著；同时，１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对ＨＩＭｅｇ细胞周期分布的影响也更加突出。结论：Ｆ对ＨＩＭｅｇ细胞ＶＤＲｍＲＮＡ具有向上调节作用，并伴有１，２５（ＯＨ）２Ｄ３生物学效应的提高，说明下对ＨＩＭｅｇ细胞ＶＤＲｍＲＮＡ的向上调节作用具有生物学意义。

关键词：二羟维生素D3 受体白血病 mRNA Forskolin

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糖皮质激素受体阻断对烫伤大鼠肺、肾血管壁通透性变化的影响

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中华烧伤杂志 1995年第2期 103-105页

作者：林海龚肖崎钟纪根陈骏第二军医大学病理生理学教研室第二军医大学病理生理学教研室进修医师上海200433

我们以糖皮质激素受体(GR)的竞争性拮抗剂RU38486(简称RU486)阻断大鼠体内的GR.并通过检测肺、肾组织匀浆中荧光标记白蛋白的含量,观察了烫伤后12h大鼠肺、肾血管壁通透性的变化以及阻断GR对这种变化的影响。结果显示:烫伤后12 h,大鼠... 详细信息

我们以糖皮质激素受体(GR)的竞争性拮抗剂RU38486(简称RU486)阻断大鼠体内的GR.并通过检测肺、肾组织匀浆中荧光标记白蛋白的含量,观察了烫伤后12h大鼠肺、肾血管壁通透性的变化以及阻断GR对这种变化的影响。结果显示:烫伤后12 h,大鼠肺、肾组织匀浆中荧光标记白蛋白含量明显高于对照组(肺:P<0.05;肾:P<0.001);阻断GR后再烫伤大鼠,其肺、肾组织匀浆中的荧光白蛋白含量又显著高于烫伤组(P<0.05)。提示:①烫伤后12 h,大鼠肺、肾血管壁通透性明显升高。②GR减少可加重烫伤所致的血管壁通透性升高.并可逆转内源性糖皮质激素(GC)稳定血管壁通透性的作用。

关键词：糖皮质激素受体糖皮质激素血管壁通透性烧伤

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内质网应激

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生理科学进展 2003年第4期34卷 333-335页

作者：林丽唐朝枢袁文俊第二军医大学基础医学部生理学教研室上海200433 北京大学医学部生理学与病理生理学系北京100083

内质网应激表现为内质网腔内错误折叠与未折叠蛋白聚集以及Ca2 +平衡紊乱 ,可激活未折叠蛋白反应、内质网超负荷反应和caspase 12介导的凋亡通路等信号途径 ,既能诱导糖调节蛋白(glucose regulatedprotein 78kD ,GRP78)、GRP94等内质网... 详细信息

内质网应激表现为内质网腔内错误折叠与未折叠蛋白聚集以及Ca2 +平衡紊乱 ,可激活未折叠蛋白反应、内质网超负荷反应和caspase 12介导的凋亡通路等信号途径 ,既能诱导糖调节蛋白(glucose regulatedprotein 78kD ,GRP78)、GRP94等内质网分子伴侣表达而产生保护效应 ,亦能独立地诱导细胞凋亡。内质网应激直接影响应激细胞的转归 ,如适应、损伤或凋亡。

关键词：内质网应激未折叠蛋白反应信号途径细胞凋亡

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缺失半胱氨酸富集区的HIV-1 HXB2株Tat蛋白在大肠杆菌中的高效表达及免疫原性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第5期28卷 404-410页

作者：陈璐邓松华曹洁何俊陈秋莉蒋少华廖文婷潘卫第二军医大学微生物教研室上海200433 安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032

目的删除人免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）HXB2株Tat罗白（长度101个氨基酸）的半胱氨酸富集区（22～37位氨基酸）以提高其在大肠杆菌中的表达量因子稳定性，并分析缺失半胱氨酸富集区后的Tat蛋白[Tat（ΔC）蛋白]免疫原性的改变。方法应用... 详细信息

目的删除人免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）HXB2株Tat罗白（长度101个氨基酸）的半胱氨酸富集区（22～37位氨基酸）以提高其在大肠杆菌中的表达量因子稳定性，并分析缺失半胱氨酸富集区后的Tat蛋白[Tat（ΔC）蛋白]免疫原性的改变。方法应用PCR方法对Tat基因的半胱氨酸富集区（64—111位核苷酸）进行缺失突变，获得其突变体序列[Tat（ΔC）DNA]，并构建其重组表达质粒pET-32a-Tat（ΔC）。相同的条件下将pET-32a-Tat（Δc）和***质粒转人大肠杆菌B121（DE3）中进行诱导表达及纯化。用pET-32a-Tat（ΔC）融合蛋白免疫家兔制备抗血清，ELISA和Western blot方法对抗血清进行免疫原性分析。结果pET-32a-Tat（ΔC）蛋白在大肠杆菌中的表达水平（7．12mg／m1）明显高于pET-32a-Tat蛋白（1．50mg／m1）；pET-32a-Tat蛋白在表达纯化后及25℃和4℃放置7d后均有明显二聚体的产生，而pET-32a-Tat（ΔC）蛋白则未形成二聚体；pET-32a-Tat（Δc）蛋白免疫家兔可诱导产生高滴度的抗体（1：320000），该抗体与Tat（Δc）蛋白、Tat蛋白（1—101AA）及化学合成Tat（1～86AA）蛋白均呈特异性反应。结论缺失HIV-1 Tat蛋白的半胱氨酸富集区可明显提高其原核表达水平和蛋白的稳定性并较好地保留其免疫原性，为HIV-1 Tat疫苗研究提供了一种新型免疫原。

关键词：人免疫缺陷病毒Ⅰ型半胱氨酸富集区缺失 Tat蛋白

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低亲和力受体的Pseudoscatchard分析

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第二军医大学学报 1995年第1期16卷 65-66页

作者：钟纪根谭金兴乐颖影徐仁宝第二军医大学基础医学部病理生理学教研室第一军医大学基础医学部生理学教研室

低亲和力受体的Ｐｓｅｕｄｏｓｃａｔｃｈａｒｄ分析钟纪根，谭金兴，乐颖影，徐仁宝在受体的放射配体结合测定中Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析是求受体的最大结合量（Ｒ０或Ｂ（ｍａｘ））和平衡解离常数（Ｋｄ）的常规方法［１］。测定低亲... 详细信息

低亲和力受体的Ｐｓｅｕｄｏｓｃａｔｃｈａｒｄ分析钟纪根，谭金兴，乐颖影，徐仁宝在受体的放射配体结合测定中Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析是求受体的最大结合量（Ｒ０或Ｂ（ｍａｘ））和平衡解离常数（Ｋｄ）的常规方法［１］。测定低亲和力受体也可用ｓｃａｔｃｈａｒｄ分...

关键词：低亲合力受体肝脑肺泡液曲线图糖皮质激素

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