检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2009年第3期30卷 319-321页

作者：周京晶路长林由振东第二军医大学基础部神经生物学教研室上海200433

目的:表达纯化可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)及其突变体,观察其对大鼠进食行为的影响。方法:PCR扩增CART活性片段CART55-102cDNA,构建表达CART55-102原核表达载体,并对其68位和94位半胱氨酸残基突变,构建表达CART55-102(Cys68Ser)和CAR... 详细信息

目的:表达纯化可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)及其突变体,观察其对大鼠进食行为的影响。方法:PCR扩增CART活性片段CART55-102cDNA,构建表达CART55-102原核表达载体,并对其68位和94位半胱氨酸残基突变,构建表达CART55-102(Cys68Ser)和CART55-102(Cys94Ser)原核表达菌株,经IPTG诱导表达后,亲和层析纯化3种小肽;行为学技术检测原核表达小肽对大鼠进食行为的影响。结果:获得的重组CART55-102及其突变体的纯度在95%以上,产物得率约75%;CART55-102可显著抑制饥饿大鼠的进食行为,而68和94位突变体对饥饿大鼠的进食行为无明显影响。结论:原核表达系统可以成功制备高纯度CART活性小肽和突变体,68位和94位突变导致CART抑制进食的作用消失。

关键词：可卡因一苯丙胺调节转录肽突变体基因表达纯化二硫键

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丹参中苯丙氨酸裂解酶基因的克隆、诱导及其对酚酸类成分的影响(英文)

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中国天然药物 2009年第6期7卷 449-457页

作者：胡永胜张磊邸鹏陈万生第二军医大学长征医院药学部上海210003 第二军医大学药学院生药学教研室上海200433

目的:克隆丹参中的苯丙氨酸裂解酶基因(Smpal),研究其表达特征及其对丹参中酚酸类成分的影响。方法:通过cDNA末端快速扩增(RACE)方法克隆了Smpal全长基因,分别使用甲基茉莉酸(MeJA)、水杨酸(SA)、赤霉素(GA3)诱导Smpal的表达。代谢物含... 详细信息

目的:克隆丹参中的苯丙氨酸裂解酶基因(Smpal),研究其表达特征及其对丹参中酚酸类成分的影响。方法:通过cDNA末端快速扩增(RACE)方法克隆了Smpal全长基因,分别使用甲基茉莉酸(MeJA)、水杨酸(SA)、赤霉素(GA3)诱导Smpal的表达。代谢物含量通过液质联用仪检测。结果:Smpal全长cDNA序列为2354bp,包含一个2133bp的开放阅读框,编码711个氨基酸残基的蛋白,含有长度为21bp的5'非编码区,171bp的3'非编码区。Smpal在根茎叶中都有表达,在根中表达量最多,其次是茎和叶。结论:Smpal与其他物种中pal基因具有62.4%-93%的同源性,Southern杂交表明Smpal属多基因家族。丹参中迷迭香酸(RA)和丹酚酸B(LAB)的含量与Smpal的表达相关。

关键词：苯丙氨酸裂解酶基因迷迭香酸丹酚酸B 生物合成丹参防御/应激

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MiR-122稳定转染细胞系的建立及其脂代谢特征

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第二军医大学学报 2009年第7期30卷 825-829页

作者：章亚南王芳杨富殷一旋张玲孙树汉第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的:利用稳定表达人miR-122前体的表达载体,转染低表达miR-122的人肝癌细胞系HepG2细胞,获得过量表达miR-122的稳定转染细胞系,探讨miR-122对肝脏细胞脂代谢的影响及其机制。方法:对已构建完成的表达质粒pEZX-hsa-mir-122和对照质粒pEZ... 详细信息

目的:利用稳定表达人miR-122前体的表达载体,转染低表达miR-122的人肝癌细胞系HepG2细胞,获得过量表达miR-122的稳定转染细胞系,探讨miR-122对肝脏细胞脂代谢的影响及其机制。方法:对已构建完成的表达质粒pEZX-hsa-mir-122和对照质粒pEZX-mir-control进行酶切鉴定,对酶切正确的克隆进行DNA测序,测序正确的克隆应用脂质体试剂转染,绿色荧光蛋白表达监测转染效率,应用嘌呤霉素筛选稳定转染细胞系,实时定量PCR在RNA水平鉴定miR-122的表达,蛋白质印迹法从靶分子水平验证miR-122的抑制功能,尼罗红染色观察细胞内脂质。结果:pEZX-hsa-mir-122质粒成功转染HepG2细胞,质粒携带的miR-122前体序列整合到细胞基因组中,获得过量表达miR-122的HepG2细胞株,细胞内成熟体miR-122可抑制靶基因的翻译,细胞内脂质明显增加。结论:人miR-122前体序列可整合在HepG2细胞基因组中,过量表达miR-122的HepG2细胞出现脂质代谢异常。

关键词：人miR-122 稳定转染脂代谢嘌呤霉素 HepG2细胞

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射干异黄酮类化学成分的HPLC-DAD/ESI-MS分析

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第二军医大学学报 2009年第7期30卷 817-820页

作者：冯超周婷婷范国荣魏华第二军医大学药学院药物分析学教研室上海200433

目的:通过高效液相色谱-二极管阵列光谱检测/电喷雾离子化质谱(HPLC-DAD/ESI-MS)联用技术定性分析射干中的主要化学成分。方法:以70%乙醇超声辅助提取中药射干原药材。高效液相色谱条件:选择YMC ODS-C18(250mm×4.6mm I.D.,5μm)色... 详细信息

目的:通过高效液相色谱-二极管阵列光谱检测/电喷雾离子化质谱(HPLC-DAD/ESI-MS)联用技术定性分析射干中的主要化学成分。方法:以70%乙醇超声辅助提取中药射干原药材。高效液相色谱条件:选择YMC ODS-C18(250mm×4.6mm I.D.,5μm)色谱柱,以20%甲醇水溶液A-70%乙腈水溶液B(0→30→45→65min,20%→30%→90%→100% B)梯度洗脱,流速为0.45ml/min,检测波长为265nm。ESI质谱条件:正离子扫描模式,喷针电压5000V,毛细管电压20V,干燥气(N2)压力20psi(1psi=6894.8Pa),质量扫描范围m/z250～550,雾化温度300℃。结果:通过HPLC-DAD/ESI-MS联用技术,分离检测并鉴定出射干中9个主要异黄酮类化学成分。结论:通过HPLC-DAD/ESI-MS联用技术,为鉴定射干中的化学成分建立起了一种快速、高效的分析方法,也为中药射干的质量控制提供更多的科学依据。

关键词：射干高效液相色谱-二极管阵列光谱检测/电喷雾离子化质谱联用化学成分

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研究生《临床应用解剖学》教学改革的实施

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解剖学杂志 2009年第2期32卷 277-278页

作者：张志英张传森党瑞山纪荣明张炎陈尔瑜第二军医大学解剖学教研室上海200433

研究生教育担负着为国家培养高级专门人才的重任,临床应用解剖学是医学研究生教育中一门重要的桥梁学科,是顺应临床外科新技术、新术式等发展的需要产生的一门学科,是从应用的角度进行人体形态结构的研究,以解决外科中出现的各种临床问... 详细信息

研究生教育担负着为国家培养高级专门人才的重任,临床应用解剖学是医学研究生教育中一门重要的桥梁学科,是顺应临床外科新技术、新术式等发展的需要产生的一门学科,是从应用的角度进行人体形态结构的研究,以解决外科中出现的各种临床问题为目的.临床应用解剖学的发展,大大提高了外科疾病的诊断和治疗水平.外科学分科较细,虽然各分科专业具有共性,但研究生受学习时间的限制,只能以掌握与本专业有关的内容为主.现将我们在研究生临床应用解剖学教学中进行总结,以与同行商榷.

关键词：《临床应用解剖学》医学研究生教育教学改革人体形态结构临床外科专门人才临床问题外科疾病

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干扰素调节因子-1和CD74的表达变化与自发性高血压大鼠源大血管平滑肌细胞增殖相关

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解剖学杂志 2009年第6期32卷 731-735页

作者：叶勇熊绍虎张喜刘艳春孙瑜杨向群张传森第二军医大学解剖学教研室上海200433

目的：借助体外模型验证IRF-1、CD74、CD36、GAP43、CYP2E1和TCA4基因表达变化是否与糖尿病大血管病变相关。方法：取自发性高血压大鼠胸主动脉平滑肌细胞，并将其分别培养于含不同浓度葡萄糖（5．5、15、25、30mmol／L和35mmol／L）、... 详细信息

目的：借助体外模型验证IRF-1、CD74、CD36、GAP43、CYP2E1和TCA4基因表达变化是否与糖尿病大血管病变相关。方法：取自发性高血压大鼠胸主动脉平滑肌细胞，并将其分别培养于含不同浓度葡萄糖（5．5、15、25、30mmol／L和35mmol／L）、波动糖中（25mmol／L和5．5mmol／L葡萄糖交替，每一浓度持续12h）以及持续高糖（25mmol／L）中，48h后运用半定量RT—PCR检测IRF-1、CD74、CD36、CYP2E1和TCA4的表达变化，SPSS分析基因变化与平滑肌增殖的相关性。结果：葡萄糖浓度低于30mmol／L时，平滑肌细胞的增殖随糖浓度的增加而加速。持续高糖中培养平滑肌细胞自第6h起增殖明显。统计分析显示，CD74、IRF-1和GAP43的表达变化与平滑肌细胞的增殖存在相关性。结论：IRF-1和CD74参与调节糖尿病大血管病变中平滑肌细胞的增殖。

关键词：干扰素调节因子-1 CD74 增殖大血管平滑肌细胞高糖基因表达

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HPLC法同时测定中药丹参中水溶性和脂溶性成分的含量

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第二军医大学学报 2009年第2期30卷 190-193页

作者：娄子洋张海李翔朱臻宇赵亮张国庆柴逸峰第二军医大学药学院分析测试中心上海200433 第二军医大学东方肝胆外科医院药材科上海200438 第二军医大学药学院药物分析学教研室上海200433

目的:建立同时测定丹参中2种水溶性成分和2种脂溶性成分的方法。方法:HPLC-DAD法,采用Agilent Zorbax TC C18柱(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇:2%醋酸为流动相进行梯度洗脱:0～15min,30%B～40%B;15～20min,40%B～60%B;20～25min,60%B～90%B;25～40min,90%B。检测波长为281nm,柱温:35℃。结果:迷迭香酸、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮ⅡA浓度分别在3.76～120.20μg·ml-1(r=0.9999)、34.20～1094.5μg·ml-1(r=0.9999)、0.64～20.32μg·ml-1(r=0.9999)、1.02～32.72μg·ml-1(r=0.9996)范围内呈良好的线性关系。4种成分精密度试验RSD<1%。48h内稳定性RSD<1%。加样回收率为99.72%～100.63%。结论:该含量测定方法简便,分离效果好,能同时测定丹参中迷迭香酸、丹酚酸B、隐丹参酮及丹参酮ⅡA四种有效成分的含量,结果准确可靠。

关键词：丹参多成分含量测定迷迭香酸丹酚酸B 隐丹参酮丹参酮ⅡA 高压液相色谱法

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水母溶血毒素的生物信息学分析(英文)

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中国天然药物 2009年第2期7卷 145-149页

作者：欧阳春磊高佳栋任玉坤肖良王倩倩郭玉峰蔡滨欣张黎明第二军医大学研究生管理大队学员11队上海200433 第二军医大学海医系防化医学教研室上海200433

目的与方法:为阐明已报道的5种水母溶血毒素的氨基酸组成和序列、信号肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、二级结构、保守区域、分子进化关系等,利用生物信息学方法对其进行了分析和预测。结果与结论:不同水母溶血毒素的氨基酸组成和理化... 详细信息

目的与方法:为阐明已报道的5种水母溶血毒素的氨基酸组成和序列、信号肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、二级结构、保守区域、分子进化关系等,利用生物信息学方法对其进行了分析和预测。结果与结论:不同水母溶血毒素的氨基酸组成和理化性质相类似;水母溶血毒素存在跨膜结构域和疏水区域;在20～21位点最有可能存在信号肽切割位点;α螺旋、不规则卷曲是二级结构中最大量的结构元件,β折叠散布于整个蛋白质中;在其中3种水母毒素蛋白中存在4个保守区;以MP法和NJ法构建的系统发生树基本一致。

关键词：水母溶血毒素生物信息学

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NR4A2基因及其选择性剪接异构体与胃癌发生及转移的关系

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第二军医大学学报 2009年第9期30卷 1004-1008页

作者：刘小康林丽萍常文军顾立强曹广文马立业第二军医大学长海医院普外一科上海200433 第二军医大学基础部流行病学教研室上海200433

目的:检测胃癌中NR4A2(又称Nurr1)基因的表达,从NR4A2调控机制出发寻找相关选择性剪接异构体,探讨其与胃癌发生和转移的关系。方法:通过选择性剪接数据库(ASD)预测NR4A2基因可能存在的选择性剪接异构体,半定量PCR检测NR4A2及异构体的表... 详细信息

目的:检测胃癌中NR4A2(又称Nurr1)基因的表达,从NR4A2调控机制出发寻找相关选择性剪接异构体,探讨其与胃癌发生和转移的关系。方法:通过选择性剪接数据库(ASD)预测NR4A2基因可能存在的选择性剪接异构体,半定量PCR检测NR4A2及异构体的表达,基因测序技术鉴定新的剪接异构体;实时定量PCR检测41例样本中NR4A2及剪接异构体的表达水平;免疫组织化学方法检测28例样本中NR4A2蛋白表达。结果:NR4A2基因在胃癌原位、癌旁、转移组织中均有表达,确定了2种剪接异构体NR4A2-Ⅰ和NR4A2-Ⅱ。实时定量PCR检测41例样本中NR4A2及2种异构体在癌旁组织表达水平高于原位癌(P=0.017,P=0.007,P=0.004);在肝转移灶中表达水平低于原位癌(P=0.001,P=0.018,P=0.016),差异有统计学意义。免疫组化检测发现癌旁组织中NR4A2表达阳性率高于原位癌及转移灶,但差异无统计学意义(P=0.672)。结论:胃癌原位、癌旁和转移组织中至少存在NR4A2基因的2种剪接模式;NR4A2及异构体的表达变化与胃癌发生和转移相关。

关键词： NR4A2 Nurr1 胃肿瘤剪接异构体

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药品包装材料中锡迁移量的石墨炉原子吸收光谱法测定

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中国医药工业杂志 2009年第3期40卷 209-212页

作者：张芳芳范国荣第二军医大学药物分析教研室上海200433

建立了石墨炉原子吸收光谱法测定模拟不同极性(10%乙醇、正庚烷、异辛烷)的浸提条件下药品包装材料中锡的迁移量。模拟浸提后,挥干有机溶剂,消化回收后测定,用硝酸钙为基体改进剂,3%硝酸为辅助剂。锡在5～25ng/ml低浓度条件下,线性良好(... 详细信息

建立了石墨炉原子吸收光谱法测定模拟不同极性(10%乙醇、正庚烷、异辛烷)的浸提条件下药品包装材料中锡的迁移量。模拟浸提后,挥干有机溶剂,消化回收后测定,用硝酸钙为基体改进剂,3%硝酸为辅助剂。锡在5～25ng/ml低浓度条件下,线性良好(r=0.9995)。10%乙醇、正庚烷、异辛烷3种浸提溶剂的回收率分别为95.6%、96.2%和98.4%,检测限分别为0.4、0.3和0.7ng/ml。

关键词：石墨炉原子吸收锡药品包装基体改进剂测定

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