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第十二届全国免疫学学术大会

作者：张铭健郭猛郭闻渊刘芳鲍蕾蕾丁国善王全兴第二军医大学免疫学研究所暨医学免疫学国家重点实验室第二军医大学长征医院器官移植研究所

研究背景和目的:抗体介导的排斥反应(antbody-mediated rejection,AMR)是影响肾脏、肝脏等实体器官移植物长期存活的重要原因。Jak2作为JAK激酶家族在抗原提呈细胞包括B细胞中优势表达,能够通过JAKSTAT信号通路参与免疫细胞的增殖、分... 详细信息

研究背景和目的:抗体介导的排斥反应(antbody-mediated rejection,AMR)是影响肾脏、肝脏等实体器官移植物长期存活的重要原因。Jak2作为JAK激酶家族在抗原提呈细胞包括B细胞中优势表达,能够通过JAKSTAT信号通路参与免疫细胞的增殖、分化、凋亡等免疫生物学过程,但是否参与调控B细胞的功能并影响AMR的发生有待于研究。方法:构建诱导性基因敲除Jak2小鼠并进行同种抗原免疫后,通过观察脾脏大小;检测脾脏B220+细胞数量、浆细胞数量以及生发中心形成情况;检测外周血中IgG水平。采用AMR模型,探讨诱导性基因敲除Jak2小鼠及Jak2抑制剂对AMR的作用。采用小鼠原B细胞株BaF3分析Jak2调控B细胞应答的机制。结果:同种异体小鼠脾细胞免疫Jak2基因诱导性敲除小鼠二周后,脾脏大小明显小于对照小鼠;B220+细胞数量以及生发中心均较对照小鼠显著减少;外周血中IgG水平明显低于对照小鼠。构建AMR模型后发现Jak2敲除B细胞或者采用其抑制剂能够明显抑制AMR产生,延长移植物存活期。对移植物进行病理分析发现移植物中浸润炎症细胞、C4d以及IgG明显减少。通过分离受体小鼠脾脏B细胞并进行western blot检测发现LC3Ⅰ/Ⅱ比值、Beclin-1蛋白水平上调,且mTORC1和mTORC2无明显差异,提示Jak2影响B细胞自噬作用。结论:JAK2能够有效调控B细胞分化,影响抗原特异性抗体生成,进而调控AMR的产生。研究结果为深入认识JAK2调控B细胞功能的作用机制及防治AMR提供实验数据。

关键词： JAK2 B细胞 AMR

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AGTR1基因在肝癌中的表达及其作用机制研究

AGTR1基因在肝癌中的表达及其作用机制研究

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第十二届全国免疫学学术大会

作者：鲍蕾蕾郭猛刘芳滕飞展洋洋丁国善王全兴第二军医大学免疫学研究所暨医学免疫学国家重点实验室第二军医大学长征医院器官移植研究所

研究背景和目的:肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是严重威胁着人类生命的恶性肿瘤。肝癌的异质性强,寻找在肿瘤生长中发挥重要作用的分子,可能成为靶向治疗肿瘤的关键。前期通过对TCGA数据库中374例肝癌患者的mRNA芯片结果进... 详细信息

研究背景和目的:肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是严重威胁着人类生命的恶性肿瘤。肝癌的异质性强,寻找在肿瘤生长中发挥重要作用的分子,可能成为靶向治疗肿瘤的关键。前期通过对TCGA数据库中374例肝癌患者的mRNA芯片结果进行筛选,发现AGTR1基因在该374例肝癌患者中的表达存在显著差异;通过分析AGTR1高表达的80位患者和低表达患者的手术后生存期及复发时间,发现AGIR1高、低表达的肝癌患者的生存期存在显著性差异（P=0.0011）,且AGTR1低表达的肿瘤患者预后显著优于AGTR1高表达患者。本研究拟从体内外水平阐明AGTR1在HCC生长中的作用,并探讨其靶向抑制剂的作用。结果:在7个HCC细胞株中,AGTR1呈差异表达,其中97H为AGTR1高表达细胞,SMMC-7721、Bel7404为AGTR1低表达细胞。CRISPR/dCas9敲除AGTR1后,显著抑制HCC细胞的增殖、生长、转移及侵袭能力;显著抑制裸鼠皮下成瘤作用。通过体外筛选FDA药物数据库Drugbank中靶向AGTR1的药物发现,Losartan对97H的生长抑制效果最强。在裸鼠皮下成瘤模型中采用10mg·kg,50 mg·kg,100m g·kg三个剂量的Losartan口服灌胃给药,发现随着给药剂量的提高,相比空白对照组Losartan对97H细胞肿瘤灶形成的抑制率显著提高。Western Blot检测显示过表达AGTR1后可以显著上调SMMC-7721,Be17404细胞的Angiopoietin2、VEGF水平,部分激活JAK2/SrAT3通路,而Losartan可以抑制以上效应。通过干扰SOCS3的表达可以抑制因过表AGTR1引起的Angiopoietin2、VEGF的上升。此外,过表达AGTR1还会促进移植瘤模型中裸鼠血清IGF-β,IL-6水平,上调CD31在移植瘤中的表达,且这种作用可被Losartan抑制。AGTR1对肿瘤的体内转移的影响效应仍在研究中。

关键词： HCC AGTR1 Losartan metastasis proliferation

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婴幼儿及学龄前期儿童供肾在儿童肾移植中的应用48例

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中华器官移植杂志 2016年第1期37卷 1-5页

作者：赵闻雨张雷朱有华祝藩原沈茜徐虹曾力第二军医大学长海医院器官移植科上海200433 第二军医大学长征医院解放军器官移植研究所上海200003 复旦大学附属儿科医院肾内科上海200032

目的探讨婴幼儿及学龄前期儿童供肾在儿童肾移植中应用的临床效果。方法回顾性分析48例婴幼儿及学龄前期儿童供肾儿童肾移植的临床资料和随访情况。结果根据移植术式的不同分为单肾移植组（36例）和双肾整块移植组（12例）。单。肾移植... 详细信息

目的探讨婴幼儿及学龄前期儿童供肾在儿童肾移植中应用的临床效果。方法回顾性分析48例婴幼儿及学龄前期儿童供肾儿童肾移植的临床资料和随访情况。结果根据移植术式的不同分为单肾移植组（36例）和双肾整块移植组（12例）。单。肾移植组受者术后发生血管栓塞1例（2．8％），输尿管梗阻1例（2．8％），原发病复发1例（2．8％），肾功能恢复延迟17例（47．3％）和急性排斥反应4例（11．1％）。双肾整块移植组受者术后发生血管栓塞4例（33．3％），尿漏2例（16．7％），肾功能恢复延迟2例（16．7％），急性排斥反应2例（16．7％）。单肾移植组术后随访3～31个月，受者和移植肾存活率分别为100％（36／36）和94．4％（34／36），末次随访时血肌酐为（68．4±22．1）μmol／L；双肾整块移植组术后随访4～44个月，受者和移植肾存活率分别为100％（12／12）和75％（9／12），末次随访时血肌酐为（55．8±16．7）μmol／L。结论婴幼儿及学龄前期儿童供肾在儿童肾移植中的应用有利于缓解移植器官短缺的问题。术前选择合适的供、受者，术中注意手术操作，术后加强管理和并发症的处理，婴幼儿供肾在儿童肾移植中的应用可获得较好的效果。

关键词：肾移植供者选择儿童糖皮质激素

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小鼠肝脏持续低灌注模型的建立及其对热缺血再灌注损伤的耐受性

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第二军医大学学报 2016年第5期37卷 557-561页

作者：金磊滕飞郭猛刘芳王全兴傅宏丁国善第二军医大学长征医院肝脏外科解放军器官移植研究所上海200003 浙江大学医学院附属邵逸夫医院头颈外科杭州310016 第二军医大学基础部免疫学教研室上海200433

目的建立一种稳定的小鼠肝脏持续低灌注模型，并在此基础上研究肝脏持续低灌注对小鼠肝脏热缺血再灌注损伤的影响。方法选用6～8周龄C57BL／6小鼠建模，将门静脉缩窄至1mL注射器针头直径，门静脉缩窄后3d、7d、14d和21d行肝功能及肝脏... 详细信息

目的建立一种稳定的小鼠肝脏持续低灌注模型，并在此基础上研究肝脏持续低灌注对小鼠肝脏热缺血再灌注损伤的影响。方法选用6～8周龄C57BL／6小鼠建模，将门静脉缩窄至1mL注射器针头直径，门静脉缩窄后3d、7d、14d和21d行肝功能及肝脏组织病理学检测；选用稳定的模型小鼠行70％缺血再灌注手术，再灌注3h、24h、48h后行肝功能及肝脏组织病理学检测。对照组采用正常C57BL／6小鼠行缺血再灌注手术。结果小鼠门静脉缩窄术后，丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）均有不同程度的升高，在7d时达到高峰[ALT：（60.8±6．2）U／LVS（25．5±2．8）U／L，P〈0．001；AST：（74．9±6．1）U／Lvs（39．1±3．2）U／L，P〈O．001），同时H-E染色显示7d时肝细胞损伤最重，并且有较多炎细胞浸润；在21d时，ALT基本恢复正常水平（P〉O．05），而AST仍高于正常水平（P=0．03）。低灌注处理7d的小鼠进行缺血再灌注手术后，肝酶和组织病理学检查显示肝细胞损伤较对照组显著加重，肝酶在再灌注3h达到高峰[ALT：（8217．0±1111．8）U／LVS（5597.4±1015．3）U／L，P=0．004；AST：（8548．2±1155．4）U／LVS（5765．4±956．9）U／L，P=0．003]；再灌注48h时，对照组小鼠ALT和AST均恢复正常，而经过低灌注处理的小鼠肝酶仍高于对照组[ALT：（608．8±442．9）U／LVS（47．4±20．1）U／L，P=0．008；AST：（861．8±442．8）U／LVS（70.8±68．3）U／L，P=0．008）。结论成功建立了稳定的小鼠肝脏持续低灌注模型，经持续低灌注处理后的肝脏对热缺血再灌注损伤的耐受能力显著降低，这在一定程度上能够模拟临床上心死亡器官捐献供肝的状况。

关键词：肝脏低灌注缺血再灌注损伤动物模型

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HLA高致敏受者经脱敏治疗后成功接收全错配供肾移植一例

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中华器官移植杂志 2017年第6期38卷 378-379页

作者：朱兰付程陈刚王大卫徐晶刘锋王芳张雷华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部重点实验室武汉430030 解放军第一六一医院第二军医大学附属长海医院上海200433

近年来,登记等待二次肾移植的受者数量增加明显,其中相当比例受者因群体反应性抗体（panel reactive antibodies,PRA）不同程度的升高而较难获得移植机会,特别是PRA≥80%的高致敏受者不仅配型困难,而且二次移植后出现HLA抗体介导排斥反... 详细信息

近年来,登记等待二次肾移植的受者数量增加明显,其中相当比例受者因群体反应性抗体（panel reactive antibodies,PRA）不同程度的升高而较难获得移植机会,特别是PRA≥80%的高致敏受者不仅配型困难,而且二次移植后出现HLA抗体介导排斥反应,甚至导致移植肾功能丧失的风险也较高[1].我们对1例初次肾移植后移植肾功能丧失的高致敏受者,通过利妥昔单抗（rituximab）联合血浆置换（plasmapheresis）和静脉注射免疫球蛋白（IVIG）进行预先脱敏治疗,并成功进行了再次肾移植,现报告如下.

关键词：高致敏受者供肾移植脱敏治疗 HLA 静脉注射免疫球蛋白 reactive 群体反应性抗体肾功能丧失

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含甲烷UW液通过保护线粒体功能减轻大鼠心脏死亡供体冷保存-再灌注损伤

含甲烷UW液通过保护线粒体功能减轻大鼠心脏死亡供体冷保存-再灌...

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2016中国器官移植大会暨第三届中国器官移植医师年会

作者：李培磊滕飞郭闻渊傅志仁第二军医大学附属长征医院器官移植/肝脏外科解放军器官移植研究所

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miR-29影响B细胞的功能及其在抗体介导的排斥反应中的作用和机制研究

miR-29影响B细胞的功能及其在抗体介导的排斥反应中的作用和机制...

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2016第十一届全国免疫学学术大会

作者：张铭健郭猛郑楠薪展洋洋刘芳鲍蕾蕾丁国善曹雪涛王全兴第二军医大学免疫学研究所暨医学免疫学国家重点实验室第二军医大学免疫学研究所暨医学免疫学国家重点实验室第二军医大学长征医院器官移植研究所第二军医大学长征医院器官移植研究所

抗体介导的排斥反应(antibody-mediated rejection,AMR),又称体液性排斥,主要由B细胞产生的供体特异性抗体(donor specific antibody,DSA)所引发。大量的证据表明,AMR是影响移植物长期存活的重要原因,但目前对于AMR的防治手段较少且效... 详细信息

抗体介导的排斥反应(antibody-mediated rejection,AMR),又称体液性排斥,主要由B细胞产生的供体特异性抗体(donor specific antibody,DSA)所引发。大量的证据表明,AMR是影响移植物长期存活的重要原因,但目前对于AMR的防治手段较少且效果不佳。

关键词： miR-29 B细胞 AMR

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miR-199a/b-5p调控肝癌恶性生物学表型及其作用机制

miR-199a/b-5p调控肝癌恶性生物学表型及其作用机制

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2016第十一届全国免疫学学术大会

作者：展洋洋郑楠薪腾飞郭文渊郭猛鲍蕾蕾丁国善王全兴第二军医大学免疫学研究所暨医学免疫学国家重点实验室第二军医大学长征医院器官移植研究所第二军医大学免疫学研究所暨医学免疫学国家重点实验室第二军医大学长征医院器官移植研究所

研究背景：miRNAs在肝癌发生发展中具有重要的生物学功能，可以作为治疗和诊断潜在靶点。本研究中，通过分析TCGA数据库中肝细胞肝癌miRNA-Seq数据，发现miR-199a/b-5p在肝癌中显著的下调，而其生物学功能在肿瘤中尚未报道。

关键词： miR-199a b-5p ROCK1 增殖迁移肝细胞肝癌

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MBD2调控IL-8的产生在DSS诱导溃疡性肠炎中的作用机制

MBD2调控IL-8的产生在DSS诱导溃疡性肠炎中的作用机制

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2016第十一届全国免疫学学术大会

作者：郭猛张铭健刘芳鲍蕾蕾展洋洋丁国善曹雪涛王全兴第二军医大学免疫学研究所暨医学免疫学国家重点实验室第二军医大学长征医院器官移植研究所第二军医大学免疫学研究所暨医学免疫学国家重点实验室第二军医大学长征医院器官移植研究所

研究背景和目的：免疫细胞的甲基化调控成为关注的热点.前期实验中,利用CRISPR/Cas9敲除小鼠腹腔巨噬细胞中的甲基化相关结合蛋白2 (Methyl-CpG Binding Domain,MBD2)分子后,可显著降低LPS诱导的IL-8产生(0.127±0.011 v.s.1.086... 详细信息

研究背景和目的：免疫细胞的甲基化调控成为关注的热点.前期实验中,利用CRISPR/Cas9敲除小鼠腹腔巨噬细胞中的甲基化相关结合蛋白2 (Methyl-CpG Binding Domain,MBD2)分子后,可显著降低LPS诱导的IL-8产生(0.127±0.011 v.s.1.086±0.121),但其在炎症性疾病中的作用和机制不明确.

关键词： MBD2 免疫细胞肠炎

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MBD2调控IL-8的产生在DSS诱导溃疡性肠炎中的作用机制

MBD2调控IL-8的产生在DSS诱导溃疡性肠炎中的作用机制

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第十一届全国免疫学学术大会

作者：郭猛张铭健刘芳鲍蕾蕾展洋洋丁国善曹雪涛王全兴第二军医大学免疫学研究所暨医学免疫学国家重点实验室第二军医大学长征医院器官移植研究所

研究背景和目的:免疫细胞的甲基化调控成为关注的热点。前期实验中,利用CRISPR/Cas9敲除小鼠腹腔巨噬细胞中的甲基化相关结合蛋白2(Methyl-CpG Binding Domain,MBD2)分子后,可显著降低LPS诱导的IL-8产生(0.127±0.011v.s.1.086±... 详细信息

研究背景和目的:免疫细胞的甲基化调控成为关注的热点。前期实验中,利用CRISPR/Cas9敲除小鼠腹腔巨噬细胞中的甲基化相关结合蛋白2(Methyl-CpG Binding Domain,MBD2)分子后,可显著降低LPS诱导的IL-8产生(0.127±0.011v.s.1.086±0.121),但其在炎症性疾病中的作用和机制不明确。本研究拟采用DSS诱导小鼠溃疡性肠炎损伤模型,阐明MBD2在DSS诱导小鼠溃疡性肠炎损伤中的作用机制。方法:采用3%DSS口服建立小鼠诱导性肠炎模型,观察并记录体重变化等指标,并以大便情况作为疾病活动度(DAI)评价;小鼠处死后进行结肠病灶病理组织显微镜检查评分(CMDI);利用FACS和免疫组化检测模型小鼠肠道粒细胞与单核/巨噬细胞浸润情况;qPCR检测肠道组织中细胞因子与趋化因子的表达情况;dispase消化法获取小鼠肠道上皮细胞,ChIP-Seq检测DSS处理前后MBD2所结合DNA片段的差异。结果:DSS诱导小鼠后,MBD2缺陷小鼠体重下降较对照组明显减弱;MBD2-/-小鼠DAI评分为1.35±0.50,对照组全部出现血便并伴随腹泻,DAI评分为3.00±1.00;小鼠处死后进行CMID评分,MBD2-/-为2.76±0.82,对照组为4.88±0.23;采用FACS和免疫组化检测模型小鼠肠道免疫细胞侵润情况,MBD2-/-小鼠中性粒细胞远低于对照组;qPCR检测肠道组织中细胞因子与趋化因子的表达情况,发现MBD2-/-小鼠肠道IL-8 mRNA水平远低于对照组(P<0.01),此外CXCL1和CXCL2的mRNA水平及TNF-α、IL-1β等细胞因子水平与对照组相比也明显下降;dispase消化法获取小鼠肠道上皮细胞,Ch IP-Seq检测DSS处理前后MBD2所结合DNA片段的差异,发现MBD2在IL-8上游非编码区域存在一段结合序列,推测这一序列可能是IL-8的顺式调控元件。进一步的调控IL-8的机制研究仍在进行中。结论:MBD2可调控免疫细胞IL-8的产生影响肠道炎症反应,在肠炎的形成中发挥重要作用。

关键词： MBD2 免疫细胞肠炎

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