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解剖学研究 2016年第2期38卷 104-108页

作者：杜莉莉吕润潇杨晓漪许静于艳秋马廷贤中国医科大学基础医学院病理生理教研室辽宁沈阳110013 第二军医大学附属长海医院研究生队上海200433 第二军医大学研究生队上海200433 中国医科大学中国医科大学附属盛京医院皮肤科辽宁沈阳110013

目的研究胎盘间充质干细胞(placenta mesenchymal stem cells,p MSCs)缺氧培养液对血管内皮细胞增殖,迁移及血管形成的影响,并探讨其机制。方法取人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),分别培养与正常培养... 详细信息

目的研究胎盘间充质干细胞(placenta mesenchymal stem cells,p MSCs)缺氧培养液对血管内皮细胞增殖,迁移及血管形成的影响,并探讨其机制。方法取人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),分别培养与正常培养液,p MSCs常氧培养液,p MSCs缺氧培养液,p MSCs缺氧培养液+IGF-1Ab(Insulin-like growth factor-1 antibody,IGF-1Ab)中,台盼蓝染色检测HUVECs增殖细胞数,划痕实验检测HUVECs迁移,血管形成实验检测HUVECs血管形成情况。结果与正常培养液相比,p MSCs常氧培养液,p MSCs缺氧培养液,p MSCs缺氧培养液+IGF-1Ab中的HUVECs增殖,迁移及血管生成均加快,p MSCs缺氧培养液中HUVECs的增殖,迁移及血管生成快于p MSCs常氧培养液。向p MSCs缺氧培养液中加入IGF-1Ab后,HUVECs增殖,迁移及血管生成均减慢。结论 p MSCs缺氧培养液可促进血管内皮细胞增殖,迁移及血管生成,p MSCs缺氧培养液中增多的IGF-1(Insulin-like growth factor-1)是原因之一。

关键词：胎盘间充质干细胞人脐静脉内皮细胞增殖迁移血管生成

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小鼠腹腔巨噬细胞不同分离方法的比较

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大连医科大学学报 2015年第4期37卷 331-335页

作者：杜莉莉吕润潇于艳秋辛娜金玉楠中国医科大学基础医学院病理生理教研室辽宁沈阳110013 第二军医大学第二军医大学附属长海医院脊柱外科上海200433

目的比较不同方法分离的小鼠腹腔巨噬细胞的生物学特性并找出最优方法。方法采用3种方法分离小鼠腹腔巨噬细胞:5%淀粉肉汤小鼠腹腔注射3 d后灌洗(5%淀粉肉汤组);直接DMEM液腹腔灌洗(无血清DMEM组);含75%血清DMEM液腹腔注射30 min后灌洗(... 详细信息

目的比较不同方法分离的小鼠腹腔巨噬细胞的生物学特性并找出最优方法。方法采用3种方法分离小鼠腹腔巨噬细胞:5%淀粉肉汤小鼠腹腔注射3 d后灌洗(5%淀粉肉汤组);直接DMEM液腹腔灌洗(无血清DMEM组);含75%血清DMEM液腹腔注射30 min后灌洗(75%血清DMEM组),每组6只小鼠。观察各组巨噬细胞形态、计数细胞数量、流式细胞仪测细胞纯度、台盼蓝染色测细胞存活率、划痕实验测迁移能力及ELISA检测脂多糖(LPS)刺激后巨噬细胞分泌TNFα、IL-6及IL-1β的水平。结果 3组巨噬细胞的形态、纯度、存活率相似,75%血清DMEM组巨噬细胞数量为(80.47±0.82)×105个,明显多于5%淀粉肉汤组(5.64±0.31)×105个及无血清DMEM组(2.63±0.42)×105个(P<0.05);75%血清DMEM组巨噬细胞迁移能力明显高于其他两组(P<0.05);75%血清DMEM组巨噬细胞分泌TNFα(15.51±0.51)ng/m L、IL-6(415.33±1.55)pg/m L、IL-1β(421.01±2.64)pg/m L,均多于5%淀粉肉汤组TNFα(10.50±0.50)ng/m L、IL-6(386.33±1.52)pg/m L、IL-1β(375.33±2.51)pg/m L(P<0.05),也多于无血清DMEM组TNFα(9.56±0.25)ng/m L、IL-6(384.66±1.15)pg/m L、IL-1β(393.34±2.62)pg/m L(P<0.05)。结论 75%血清DMEM液腹腔注射30 min后灌洗是一个比较好的分离小鼠腹腔巨噬细胞的方法。

关键词：巨噬细胞小鼠迁移细胞因子

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胎盘间充质干细胞缺氧培养液对成纤维细胞及巨噬细胞生物学特性的影响

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热带医学杂志 2016年第5期16卷 589-592页

作者：杜莉莉吕润潇杨晓漪许静于艳秋马廷贤中国医科大学基础医学院病理生理教研室辽宁沈阳110013 第二军医大学附属长海医院研究生队第二军医大学研究生队上海200433 中国医科大学辽宁沈阳110013 中国医科大学附属盛京医院皮肤科辽宁沈阳110013

目的探讨胎盘间充质干细胞(p MSCs)缺氧培养液对成纤维细胞及巨噬细胞的作用及机制。方法提取并鉴定胎盘间充质干细胞,ELISA法检测缺氧时p MSCs分泌胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平。台盼蓝染色及划痕实验检测p MSCs条件培养液中成纤维细... 详细信息

目的探讨胎盘间充质干细胞(p MSCs)缺氧培养液对成纤维细胞及巨噬细胞的作用及机制。方法提取并鉴定胎盘间充质干细胞,ELISA法检测缺氧时p MSCs分泌胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平。台盼蓝染色及划痕实验检测p MSCs条件培养液中成纤维细胞增殖及成纤维细胞、巨噬细胞迁移情况。结果成功提取p MSCs,该细胞表达CD29、CD44,不表达CD31、CD34、CD45及HLA-DR。缺氧p MSCs分泌IGF-1增加。p MSCs缺氧培养液中成纤维细胞增殖快于p MSCs常氧培养液(P<0.05)。加入IGF-1Ab后,细胞增殖减慢(P<0.05)。p MSCs缺氧培养液中成纤维细胞或巨噬细胞迁移快于p MSCs常氧培养液(P<0.05)。加入IGF-1Ab后,细胞迁移减慢(P<0.05)。结论 p MSCs缺氧培养液促进成纤维细胞增殖及迁移,促进巨噬细胞迁移。其可能与p MSCs在缺氧培养液中分泌IGF-1增多相关。

关键词：胎盘间充质干细胞成纤维细胞巨噬细胞增殖迁移

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慢病毒介导的p21/Waf1基因沉默增强膀胱癌特异性溶瘤腺病毒的复制及对EJ细胞增殖的抑制作用

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肿瘤 2015年第10期35卷 1083-1091页

作者：石洁王志平李晓娟杨兰秦晓东王莉付生军陶燕兰州大学第二医院输血科甘肃兰州730030 甘肃省泌尿系疾病重点实验室甘肃兰州730030 兰州大学生命科学院甘肃兰州730000 兰州兽医研究所甘肃兰州730046 兰州大学基础医学院药理教研室甘肃兰州730000

目的 :沉默人膀胱癌EJ细胞中p21/Waf1基因的表达,并探讨p21/Waf1表达下调对膀胱癌特异性溶瘤腺病毒复制及对EJ细胞增殖的影响。方法 :设计并合成特异性针对p 21/Waf 1基因的sh RNA,插入含绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)... 详细信息

目的 :沉默人膀胱癌EJ细胞中p21/Waf1基因的表达,并探讨p21/Waf1表达下调对膀胱癌特异性溶瘤腺病毒复制及对EJ细胞增殖的影响。方法 :设计并合成特异性针对p 21/Waf 1基因的sh RNA,插入含绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)编码基因的p Magic 7.1载体,构建p21/Waf1-sh RNA重组慢病毒质粒p LVT1051,并进行PCR和测序鉴定。将p LVT1051、p CMV-VSV-G和p CMV-d R8.91三种质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒。将携带有p21/Waf1-sh RNA的慢病毒感染EJ细胞,采用嘌呤霉素筛选p21/Waf1-sh RNA稳定转入的EJ细胞,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测p21/Waf1-sh RNA稳定感染后EJ细胞中p21/waf1 m RNA和蛋白的表达水平。将膀胱癌特异性溶瘤腺病毒Ad/PSCAE/UPⅡ/E1A感染p 21/waf 1基因沉默的EJ细胞,采用蛋白质印迹法检测病毒复制相关指标E1A和Hexon蛋白的表达水平,MTT法检测腺病毒Ad/PSCAE/UPⅡ/E1A对EJ细胞增殖的影响。结果 :成功构建了携带有p21/Waf1-sh RNA的重组慢病毒表达载体并获得相应的慢病毒;经嘌呤霉素筛选2周后成功获得稳定感染的EJ细胞。p21/Waf1-sh RNA能明显降低EJ细胞中p21/Waf1 m RNA及蛋白的表达水平,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。膀胱癌特异性溶瘤腺病毒(Ad/PSCAE/UPⅡ/E1A)作用于p 21/waf 1基因沉默的EJ细胞后,其病毒复制相关指标E1A和Hexon的表达水平明显上调,对EJ细胞的增殖抑制作用明显增强(P<0.01)。结论 :成功建立了p21/Waf1基因沉默表达的EJ细胞,沉默p21/Waf1基因的表达能增强膀胱癌特异性溶瘤腺病毒的复制能力,并对EJ细胞的增殖有明显的抑制作用。

关键词：膀胱肿瘤 RNA 小分子干扰慢病毒感染 p21/Waf1基因病毒复制 EJ细胞

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褪黑素促进体外缺氧的神经干细胞增殖及定向分化

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神经解剖学杂志 2015年第1期31卷 37-43页

作者：付洁宋海岩马传飞刘慧娟新乡医学院组织胚胎学教研室新乡453003 新乡医学院组织解剖学教研室新乡453003 新乡市第二人民医院骨一科新乡453002 上海交通大学Bio-X研究院遗传发育与精神神经疾病教育部重点实验室上海200240

目的:观察褪黑素对体外缺氧诱导的小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖和分化的影响。方法:取孕12.5 d胚胎小鼠大脑皮质分离培养NSCs,建立缺氧模型。利用免疫荧光染色,检测分析褪黑素对缺氧诱导后不同时间点的NSCs增殖和分化的... 详细信息

目的:观察褪黑素对体外缺氧诱导的小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖和分化的影响。方法:取孕12.5 d胚胎小鼠大脑皮质分离培养NSCs,建立缺氧模型。利用免疫荧光染色,检测分析褪黑素对缺氧诱导后不同时间点的NSCs增殖和分化的影响。结果:缺氧后NSCs的增殖能力明显下降,而褪黑素可显著改善这一现象,促进缺氧后NSCs的增殖。缺氧后NSCs向神经元的分化明显受阻,褪黑素处理组的神经元的分化率明显高于对照组,其中作用高峰期是分化的第七天。结论:体外缺氧的NSCs增殖和分化均明显受到抑制,而褪黑素的干预可明显改善干细胞的增殖,促进NSCs向神经元的分化,但对星形胶质细胞的分化没有显著影响。

关键词：褪黑素缺氧神经干细胞增殖分化小鼠

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正极性聚丙烯驻极体对糖尿病大鼠皮肤结构的影响

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中国医学物理学杂志 2015年第6期32卷 835-840页

作者：苑旺梁媛媛崔黎丽江键王美玲石岩第二军医大学药学院无机化学教研室上海200433 第二军医大学基础部数理教研室上海200433 第二军医大学海军医学系上海200433

目的:研究正极性驻极体作用在大鼠皮肤两侧形成静电场的稳定性,以及对糖尿病大鼠皮肤结构的影响,进而明确驻极体在经皮给药系统中对药物的促渗机制。方法:利用栅控恒压电晕充电系统制备不同表面电位的正极性聚丙烯驻极体。以糖尿病大鼠... 详细信息

目的:研究正极性驻极体作用在大鼠皮肤两侧形成静电场的稳定性,以及对糖尿病大鼠皮肤结构的影响,进而明确驻极体在经皮给药系统中对药物的促渗机制。方法:利用栅控恒压电晕充电系统制备不同表面电位的正极性聚丙烯驻极体。以糖尿病大鼠皮肤为研究对象,正常大鼠皮肤为对照,利用等温表面电位衰减测量大鼠皮肤两侧静电场的稳定性,利用光镜研究驻极体对糖尿病大鼠皮肤显微结构的影响。结果:(1)+1500 V驻极体作用糖尿病大鼠皮肤24 h,透过大鼠皮肤的等效表面电位可达驻极体初始表面电位的(61.78±2.38)%,且初始表面电位随时间衰减缓慢,表明大鼠皮肤处于较稳定的静电场中;(2)随着驻极体作用时间的延长,糖尿病大鼠皮肤角质层逐渐增厚,表皮层和真皮层细胞排列有序性增加,但是与正常大鼠皮肤相比,仍比较松散。结论:(1)正极性驻极体在糖尿病大鼠皮肤两侧形成了一定强度且稳定的静电场;(2)正极性驻极体产生的静电场,可以一定程度地改善大鼠皮肤的显微结构,而且角质层和表皮层细胞排列仍然松散,有利于大分子药物的经皮转运。

关键词：驻极体静电场糖尿病大鼠皮肤显微结构经皮给药

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大力发掘南海生物资源,加速开发海洋生物产业

大力发掘南海生物资源,加速开发海洋生物产业

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第十届全国海洋生物技术与创新药物暨海洋生化学术会议

作者：缪辉南何培民林厚文吴文惠王梁华刘小宇胡波王洛伟沈先荣张兴群王璐刘莉李铁军杨桥马丽艳蒋升严泽民上海麦琳(海洋)生物医学工程科技有限公司上海200433 上海海洋大学生命院与食品学院上海201306 上海交大医学院上海200240 第二军医大学生物化学与分子生物学教研室上海200433 长海医院消化内科上海200433 海军医学研究所防化实验室上海200433 东华大学化学化工与生物工程学院及纺织生物医用材料科学与技术创新引智基地上海201620 上海医药工业研究所药理室上海200437 上海医药工业研究所药理室上海200437 第二军医大学药学院上海200433 上海麦琳(海洋)生物医学工程科技有限公司上海200433 中国水产科学研究院东海水产研究所上海200091

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季铵化壳聚糖胰岛素纳米粒的制备、处方优化及其初步药效学实验

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药学实践杂志 2015年第4期33卷 319-323页

作者：苑旺王美玲石岩崔黎丽第二军医大学药学院无机化学教研室上海200433 第二军医大学基础部数理教研室上海200433 第二军医大学海军医学系上海200433

目的采用正交设计试验优化载胰岛素季铵化壳聚糖纳米粒的处方工艺,并初步考察其降糖效果。方法用离子交联法制备载胰岛素的季铵化壳聚糖纳米粒,用正交试验确定其最佳处方工艺。用透射电子显微镜观察纳米粒的表面形态;用粒径/Zeta电位仪... 详细信息

目的采用正交设计试验优化载胰岛素季铵化壳聚糖纳米粒的处方工艺,并初步考察其降糖效果。方法用离子交联法制备载胰岛素的季铵化壳聚糖纳米粒,用正交试验确定其最佳处方工艺。用透射电子显微镜观察纳米粒的表面形态;用粒径/Zeta电位仪测定纳米粒的粒径和Zeta电位;用高效液相色谱(HPLC)法测定纳米粒的包封率、载药量及体外释放情况。对糖尿病大鼠皮下注射给药,对其药效学进行初步考察。结果制得的纳米粒呈球形,分布均匀;平均粒径(63.26±1.88)nm;Zeta电位(33.1±0.3)mV;包封率(37.92±2.11)%;载药量(5.42±0.3)%;24h累计释放率63.83%。皮下注射给药8h,糖尿病大鼠血糖较单纯注射胰岛素组下降平缓,且药效持久。结论优化后的载胰岛素的季铵化壳聚糖纳米粒形态较好、粒径较小,为研究胰岛素的新型给药途径奠定了基础。

关键词：胰岛素纳米粒离子交联法正交设计

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miR-181b过表达对胶质瘤U87细胞中MT1-MMP和TIMP3蛋白表达和细胞侵袭能力的影响

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吉林大学学报（医学版） 2015年第5期41卷 925-931页

作者：李蕴潜赵丽艳石艳刘辉苗春生许万振杨志青吉林大学第一医院神经外科吉林长春130021 吉林大学第二医院检验科吉林长春130041 吉林大学药学院实验药理与毒理学教研室吉林长春130021 吉林大学基础医学院解剖学系吉林长春130021

目的:探讨微小RNA-181b(miR-181b)过表达对人胶质瘤细胞中膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)和金属蛋白酶组织抑制剂3(TIMP3)表达的调控作用及对细胞侵袭能力的影响。方法:将培养于DMEM培养基的人胶质瘤U87细胞分为阴性对照组(不做任何处理... 详细信息

目的:探讨微小RNA-181b(miR-181b)过表达对人胶质瘤细胞中膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)和金属蛋白酶组织抑制剂3(TIMP3)表达的调控作用及对细胞侵袭能力的影响。方法:将培养于DMEM培养基的人胶质瘤U87细胞分为阴性对照组(不做任何处理)、空载组(转染Lipofetamine 2000)、乱序组(转染乱序has-miR-181b寡核苷酸)和miR-181b组(转染has-miR-181b寡核苷酸)。qRT-PCR法检测各组细胞中miR-181b基因表达水平,Western blotting法检测各组细胞中MT1-MMP和TIMP3蛋白的相对表达水平,基质胶侵袭试验检测各组细胞的侵袭能力,测定各组细胞的趋化运动抑制率、迁移率和细胞黏附率;生物信息学数据库预测miR-181b的侯选靶基因。结果:miR-181b组U87细胞中miR-181b基因表达水平明显高于其他各组(P<0.01),呈过表达。miR-181b组U87细胞中MT1-MMP蛋白表达水平低于其他各组(P<0.01),miR-181b与MT1-MMP蛋白表达水平呈负相关关系(r=-0.787,P<0.05);miR-181b组U87细胞中TIMP3蛋白表达水平高于其他各组(P<0.01),miR-181b与TIMP3蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.801,P<0.05)。基质胶侵袭试验中miR-181b组穿膜细胞数明显低于其他各组(P<0.05)。与其他3组比较,miR-181b组U87细胞的趋化运动抑制率升高、迁移率和细胞黏附率降低(P<0.05)。生物信息学数据库预测,在MT1-MMP的3′非翻译区(3′UTR)有1个与miR-181b的结合位点,在TIMP3的3′UTR有2个与miR-181b的结合位点。结论:miR-181b过表达可下调MT1-MMP和上调TIMP3蛋白的表达,从而抑制胶质瘤细胞的侵袭能力;miR-181b作为关键性调节miR,可能成为胶质瘤治疗的重要靶标。

关键词：微小RNA-181b 膜型基质金属蛋白酶1 金属蛋白酶组织抑制剂3 胶质瘤细胞侵袭

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汗法探微

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上海中医药杂志 2015年第1期49卷 18-21页

作者：杨学孔祥亮第二军医大学附属长海医院中医系经典著作教研室上海200433 上海中医药大学基础医学院伤寒论教研室上海201203

为探讨汗法的机制与临床应用,系统回顾《伤寒论》《金匮要略方论》与温病名著中的发汗与得汗诸方证,梳理解表主治、发汗相关脏腑,提出"开腠理、通经脉、畅气机、益正气"为汗法四要,是发汗与得汗的机制。并总结发汗之度、汗出... 详细信息

为探讨汗法的机制与临床应用,系统回顾《伤寒论》《金匮要略方论》与温病名著中的发汗与得汗诸方证,梳理解表主治、发汗相关脏腑,提出"开腠理、通经脉、畅气机、益正气"为汗法四要,是发汗与得汗的机制。并总结发汗之度、汗出之量、中病之征、服药之法、汗后调护、汗法禁忌以及误汗救治,为汗法的临床应用提供基础。

关键词：汗法伤寒论温病

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