检索结果-内蒙古大学图书馆

复制缺陷型腺病毒载体介导hVEGF cDNA在C2C12和NIH3T3细胞中的表达

中国生物化学与分子生物学报 2001年第6期17卷 704-709页

作者：孙欲晓陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心上海200025

为提高hVEGFcDNA在心肌中的表达 ,降低在其它组织中表达可能产生的不良反应 ,用PCR法得到人磷酸肌酸激酶 (MCK)增强子和CMV核心启动子 .利用克隆技术构建了含双拷贝MCK增强子 (m)和人巨细胞病毒 (CMV)核心启动子 (c)的嵌合启动子 (mmc) ... 详细信息

为提高hVEGFcDNA在心肌中的表达 ,降低在其它组织中表达可能产生的不良反应 ,用PCR法得到人磷酸肌酸激酶 (MCK)增强子和CMV核心启动子 .利用克隆技术构建了含双拷贝MCK增强子 (m)和人巨细胞病毒 (CMV)核心启动子 (c)的嵌合启动子 (mmc) ,构建真核表达质粒pK3 mmcLacZ ,制备受mmc嵌合启动子调控的重组腺病毒Ad mmcVEGF .经X gal染色、β 半乳糖苷酶定量分析、RT PCR、hVEGFELISA定量分析、VEGF活性测定等研究表明。

关键词：人磷酸肌酸激酶增强子嵌合启动子肌细胞特异性表达血管内皮生长因子腺病毒载体心肌缺血基因治疗复制

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干扰素-γ基因转导前后人肝癌细胞HepG1表型变化及基因表达图谱差异的研究

引用

胃肠病学 2001年第4期6卷 211-214页

作者：蒋小陵杨劲松张腾飞陈诗书上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心 200025

目的：比较人肝癌细胞经干扰素（ＩＦＮ）－γ基因转导前后细胞表型及基因表达图谱的差异。方法：①用扫描电镜、流式细胞仪等方法观察ＩＦＮ－γ基因转导前后人肝癌细胞ＨｅｐＧ１表型的变化；③应用微阵列膜片分别与未转导及转导了Ｉ... 详细信息

目的：比较人肝癌细胞经干扰素（ＩＦＮ）－γ基因转导前后细胞表型及基因表达图谱的差异。方法：①用扫描电镜、流式细胞仪等方法观察ＩＦＮ－γ基因转导前后人肝癌细胞ＨｅｐＧ１表型的变化；③应用微阵列膜片分别与未转导及转导了ＩＦＮ－γ基因的ＨｅｐＧ１ｍＲＮＡ进行杂交，同时设一转导空白载体ＬＸＳＮ的ＨｅｐＧ１ｍＲＮＡ与膜片杂交作为对照，比较杂交信号，获得表达差异的基因。结果：①ＩＦＮ－γ基因转导的ＨｅｐＧ１细胞生长速度减慢，表面绒毛结构数量增多，绒毛变细、变长，ＨＬＡⅠ类和Ⅱ类分子表达增高；②ＩＦＮ－γ基因转导后，ＨｅｐＧ１细胞有多种基因的表达发生变化，其中一些基因较未转导ＩＦＮ－γ时表达增高，一些较未转导ＩＦＮ－γ时表达减低。表达发生变化的基因主要为与细胞周期和细胞凋亡相关的基因。结论：ＩＦＮ－γ基因修饰ＨｅｐＧ１细胞后使细胞表型发生变化，并且在基因表达上也发生改变。运用微阵列技术为进一步了解这些基因的相互关系及其与肿瘤生物学行为的关系奠定了基础，也可为优化肿瘤免疫基因治疗提供线索。

关键词：肝肿瘤基因表达基因转导干扰素-γ基因基因治疗

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外源性TNF-α基因克服多药耐药性的初步研究

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癌症 2001年第4期20卷 383-386页

作者：郭伟剑钱关祥沈兆忠罗建明郑颂国胡亮孙欲晓上海第二医科大学附属新华医院肿瘤科上200092 上海第二医科大学人类基因治疗研究中心上海200025 复旦大学医学院附属肿瘤医院分子生物学实验室上海200032

目的：探索外源性细胞因子 TNF-α基因克服多药耐药（ multidrug resistance,MDR）的新途径。方法：以重组逆转录病毒为载体，将 TNF-α基因导入具 MDR表型的人乳腺癌细胞系 MCF- 7/Adr，经 G418抗性筛选获阳性克隆 MCF- 7/Adr- TNF1与 ... 详细信息

目的：探索外源性细胞因子 TNF-α基因克服多药耐药（ multidrug resistance,MDR）的新途径。方法：以重组逆转录病毒为载体，将 TNF-α基因导入具 MDR表型的人乳腺癌细胞系 MCF- 7/Adr，经 G418抗性筛选获阳性克隆 MCF- 7/Adr- TNF1与 MCF- 7/Adr- TNF2。以 PCR和 ELISA法检测目的基因的整合与表达。细胞计数法观察细胞生长速度的改变 , MTT法检测外源性 TNF-α基因的逆转 MDR作用，流式细胞仪分析细胞内 ADR积累的变化。结果： MCF- 7/Adr- TNF1与 MCF- 7/Adr- TNF2细胞中有 TNF-α基因的整合和表达，病毒上清中 TNF-α含量分别为 1 737 pg/ml（ 106 cells/48 h）、 2 875 pg/ml。与阴性对照细胞相比， MCF- 7/Adr- TNF1与 MCF- 7/Adr- TNF2细胞的生长速度明显减慢，生长抑制率分别为 32.4％、 54.8％，对 ADR的耐药性明显降低，耐药逆转倍数分别为 5.2倍、 19.3倍，细胞内 ADR的积累明显增加。结论：外源性 TNF-α基因的导入能有效克服耐药性，增加细胞内药物的积累为其逆转耐药性的主要机制。

关键词：乳腺肿瘤多药耐药性肿瘤坏死因子TNF-α 基因治疗

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痘苗病毒介导肿瘤抗原肽体内表达具有诱导特异CTL的功能

痘苗病毒介导肿瘤抗原肽体内表达具有诱导特异CTL的功能

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中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议

作者：李煜钱关祥上海第二医科大学分子生物学实验室人类基因治疗中心上海第二医科大学分子生物学实验室人类基因治疗中心

肿瘤疫苗大致可以分为两类:基于整个肿瘤细胞的疫苗和基于肿瘤抗原肽的疫苗.肽疫苗在特异性、可预测性和方便运用等多个方面优于细胞疫苗.本研究以来源于Balb/c鼠的肥大细胞瘤P815细胞为模型,研究编码肿瘤相关抗原肽的微小基因疫苗诱导... 详细信息

肿瘤疫苗大致可以分为两类:基于整个肿瘤细胞的疫苗和基于肿瘤抗原肽的疫苗.肽疫苗在特异性、可预测性和方便运用等多个方面优于细胞疫苗.本研究以来源于Balb/c鼠的肥大细胞瘤P815细胞为模型,研究编码肿瘤相关抗原肽的微小基因疫苗诱导产生特异性CD8T细胞应答的作用.痘苗病毒是一种研究抗原递呈作用的常用载体:重组痘苗病毒不仅诱导机体产生体液免疫,且诱导持久的细胞免疫.痘苗病毒作

关键词：肿瘤抗原肽 CTL 痘苗病毒体内表达

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微阵列(microarrays)技术及其应用

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生命科学 2001年第2期13卷 85-88页

作者：杨劲松陈诗书上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心!上海200025

微阵列分为ｃＤＮＡ微阵列和寡聚核苷酸微阵列。微阵列上“印”有大量已知部分序列的ＤＮＡ探针，微阵列技术就是利用分子杂交原理，使同时被比较的标本（用同位素或荧光素标记）与微阵列杂交，通过检测杂交信号强度及数据处理，把他们... 详细信息

微阵列分为ｃＤＮＡ微阵列和寡聚核苷酸微阵列。微阵列上“印”有大量已知部分序列的ＤＮＡ探针，微阵列技术就是利用分子杂交原理，使同时被比较的标本（用同位素或荧光素标记）与微阵列杂交，通过检测杂交信号强度及数据处理，把他们转化成不同标本中特异基因的丰度，从而全面比较不同标本的基因表达水平的差异。微阵列技术是一种探索基因组功能的有力手段。

关键词：微阵列分子杂交基因组功能

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诱导PTPα表达24小时NIH3T3细胞基因表达差异的研究

诱导PTPα表达24小时NIH3T3细胞基因表达差异的研究

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中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议

作者：杨劲松郑新民陈诗书上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心

肿瘤的发生、发展是起因于细胞内正常代谢途径发生改变,代谢途径是由基因所决定的,因此肿瘤的发生、发展与基因密切相关.对许多生理过程而言,蛋白质酪氨酸残基的磷酸化是一种关键的控制机制,它由蛋白质酪氨酸磷酸酶和蛋白质酪氨酸激酶... 详细信息

肿瘤的发生、发展是起因于细胞内正常代谢途径发生改变,代谢途径是由基因所决定的,因此肿瘤的发生、发展与基因密切相关.对许多生理过程而言,蛋白质酪氨酸残基的磷酸化是一种关键的控制机制,它由蛋白质酪氨酸磷酸酶和蛋白质酪氨酸激酶协同完成,二者之间处于一种动态的平衡之中,一旦二者之间

关键词：基因表达差异 NIH3T3 PTP 延长因子生理过程

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利用基因芯片技术筛选PTPa诱导后NIH3T3细胞中差别表达的基因

利用基因芯片技术筛选PTPa诱导后NIH3T3细胞中差别表达的基因

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中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议

关键词：基因芯片技术 NIH3T3

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PTPα基因转染小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)早期(诱导24小时)细胞生物学行为的变化

PTPα基因转染小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)早期(诱导24小时)细胞...

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中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议

生命活动是由蛋白质的功能来实现的,其中蛋白质磷酸化和去磷酸化是一种通过可逆共价修饰调节蛋白质功能的方式,蛋白激酶是这一过程中催化磷酸化的重要酶类,而磷酸酯酶则是去磷酸化的重要酶类,这种方式是机体调节蛋白质生物功能的重要方... 详细信息

生命活动是由蛋白质的功能来实现的,其中蛋白质磷酸化和去磷酸化是一种通过可逆共价修饰调节蛋白质功能的方式,蛋白激酶是这一过程中催化磷酸化的重要酶类,而磷酸酯酶则是去磷酸化的重要酶类,这种方式是机体调节蛋白质生物功能的重要方式,在机体中普遍存在,它直接或间接地涉及大多数的生物功能,在蛋白质酪氨酸残基磷酸化和去磷酸化信号系统中,蛋白质酪氨酸磷酸酶通过对其靶蛋白中的磷酸化

关键词：磷酸化 PTP 细胞生物学行为小鼠胚胎成纤维细胞基因转染 NIH3T3

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反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞c-myc、增殖细胞核抗原蛋白表达的影响

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中华外科杂志 2000年第2期38卷 140-142,I007页

作者：边杰芳张柏根钱虎声陈诗书第四军医大学西京医院血管外科 710032 上海第二医科大学附属仁济医院血管外科 200001 上海第二医科大学人类基因治疗研究中心暨分子生物学实验室

目的　研究反义c myc、增殖细胞核抗原 (PCNA)基因片断对血管平滑肌细胞 (VSMCs)增殖的作用。　方法　使正义、反义及错配反义c myc、PCNA ,分别作用于体外培养的VSMCs ,应用蛋白印迹和免疫组化法测定并经计算机图像分析 ,观察其对c myc... 详细信息

目的　研究反义c myc、增殖细胞核抗原 (PCNA)基因片断对血管平滑肌细胞 (VSMCs)增殖的作用。　方法　使正义、反义及错配反义c myc、PCNA ,分别作用于体外培养的VSMCs ,应用蛋白印迹和免疫组化法测定并经计算机图像分析 ,观察其对c myc、PCNA蛋白表达的影响。　结果　 10μmol/L浓度的反义c myc、PCNA作用于VSMCs后 1～ 5d ,相应c myc和PCNA蛋白表达减弱 ,计算机图像分析表明其表达产物与对照组相比 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ,而正义和错配反义寡核苷酸无此效应 (P >0 0 5 )。　结论　反义c myc、PCNA寡核苷酸可通过阻遏其相应基因表达进而抑制蛋白表达及VSMCs增殖。

关键词：血管平滑肌细胞 c-myc PCNA 反义寡核苷酸

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缺血性疾病的基因治疗

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医学综述 2000年第10期6卷 450-452页

作者：孙欲晓上海第二医科大学分子生物学实验室人类基因治疗研究中心 200025

动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄等引起的缺血性疾病,严重危害人类的健康。基因治疗的目的是在某些细胞上产生瞬间的和局部特异的作用,因此降低细胞增生和基质形成,为缺血性疾病提供了一种很有希望和前景的治疗手段。在很多缺血动物... 详细信息

动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄等引起的缺血性疾病,严重危害人类的健康。基因治疗的目的是在某些细胞上产生瞬间的和局部特异的作用,因此降低细胞增生和基质形成,为缺血性疾病提供了一种很有希望和前景的治疗手段。在很多缺血动物模型中,抑制平滑肌细胞的增生,防止血栓的形成及抑制再狭窄的发生,从而改善缺血区的血供,缓解和治疗缺血症状;或者应用促血管生成因子,促进新生血管的产生,形成血管床。

关键词：缺血性疾病基因治疗载体系统

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