检索结果-内蒙古大学图书馆

生命的化学 2000年第4期20卷 159-161页

作者：王建华陈诗书上海第二医科大学分子生物学实验室人类基因治疗研究中心上海200025

凋亡蛋白(apoptin)是近年来发现由鸡贫血病毒(CAV)vp3基因产生的蛋白质, 主要引起鸡淋巴细胞凋亡[ 1、2 ].进一步研究发现, 凋亡蛋白具有一种抗肿瘤细胞特异性, 即仅仅诱导肿瘤细胞或转化细胞凋亡, 而对正常细胞或二倍体细胞不起作用.... 详细信息

凋亡蛋白(apoptin)是近年来发现由鸡贫血病毒(CAV)vp3基因产生的蛋白质, 主要引起鸡淋巴细胞凋亡[ 1、2 ].进一步研究发现, 凋亡蛋白具有一种抗肿瘤细胞特异性, 即仅仅诱导肿瘤细胞或转化细胞凋亡, 而对正常细胞或二倍体细胞不起作用.更让人感兴趣的是, 凋亡蛋白诱导的凋亡不依赖功能性P53的生成, 也不被BAG-1、Bcr-abl的生成所抑制, 甚至不受凋亡抑制因子Bcl-2过分产生的影响[3、4].这些特性预示, 凋亡蛋白可被用作一种治疗因子, 只要它在体内能被大量传递给肿瘤细胞, 就可选择性地将它们根除.这一诱人的基因治疗策略超越了目前所有基因治疗方法, 可能会给肿瘤的基因治疗带来广阔前景.

关键词：调亡蛋白鸡贫血病毒肿瘤基因治疗

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外源性TNF-α基因克服多药耐药性的实验研究

外源性TNF-α基因克服多药耐药性的实验研究

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中国癌症研究基金会第五次学术大会

作者：郭伟剑钱关祥吴国华沈兆忠郑颂国罗建明胡亮孙欲晓 200092 上海上海第二医科大学附属新华医院肿瘤放疗科上海第二医科大学人类基因治疗研究中心上海医科大学附属肿瘤医院分子生物学实验室

多药耐药性是指肿瘤细胞对多种结构与功能不同的化疗药物产生耐药性.多种机制如多药耐药基因(MDR1)的高表达、谷胱甘肽S转移酶(GST)和谷胱甘肽(GSH)升高,拓扑异构酶(Topo)活力降低,凋亡抑制等参与MDR的产生.MDR为肿瘤临床化疗失败的主... 详细信息

多药耐药性是指肿瘤细胞对多种结构与功能不同的化疗药物产生耐药性.多种机制如多药耐药基因(MDR1)的高表达、谷胱甘肽S转移酶(GST)和谷胱甘肽(GSH)升高,拓扑异构酶(Topo)活力降低,凋亡抑制等参与MDR的产生.MDR为肿瘤临床化疗失败的主要原因之一,且由于凋亡抑制,产生MDR的癌细胞常对放射等其他疗法抵抗.克服MDR,提高临床肿瘤的治疗效果有两条途径:①找寻能有效抑制或杀灭耐药细胞的药物或方法.②采用MDR的逆转剂以恢复耐药细胞对化疗的敏感性.已发现多种化学药物体外具逆转MDR的作用,但绝大多数因严重的毒副反应而无法应用于临床.肿瘤坏死因子-α(TNF-α)具多种生物学效应,能直接抑制或杀灭多种肿瘤细胞,并能通过抑制MDR1基因的机制逆转MDR,但其具有的严重广泛的毒性作用大大限制了它的临床应用.采用基因治疗的方法,将TNF-α基因导入肿瘤细胞,使肿瘤局部高浓度持续表达TNF-α,局部发挥其生物学效应,则可望解决这一问题.本文采用逆转录病毒介导TNF-α基因转染耐药细胞,观察TNF-α基因的导入对耐药细胞的抑制及耐药性逆转作用,以期为TNF-α基因临床应用于克服耐药性打下基础.

关键词：多药耐药性多药耐药基因肿瘤治疗耐药细胞基因治疗

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反义寡核苷酸抑制血管平滑肌细胞增殖

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第四军医大学学报 2000年第12期21卷 1492-1494页

作者：边杰芳张柏根钱虎声陈诗书第四军医大学西京医院血管外科陕西西安710033 上海第二医科大学仁济医院心血管外科上海第二医科大学分子生物学实验室和人类基因治疗研究中心

目的　证实反义 c- myc,PCN A寡核苷酸阻遏血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的效应 .方法　人工合成正义、反义及错配反义 c- myc,PCN A寡核苷酸 ,转入体外培养的 VSMC中 ,分别于作用后 1～ 5 d进行细胞计数和 3H- Td R掺入法测定 .结果　加... 详细信息

目的　证实反义 c- myc,PCN A寡核苷酸阻遏血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的效应 .方法　人工合成正义、反义及错配反义 c- myc,PCN A寡核苷酸 ,转入体外培养的 VSMC中 ,分别于作用后 1～ 5 d进行细胞计数和 3H- Td R掺入法测定 .结果　加入反义 c- myc,PCN A寡核苷酸的 VSMC增殖受到抑制 ,而正义和错配反义寡核苷酸对 VSMC增殖没有明显影响 .结论　反义 c- myc,PCN

关键词：反义寡核苷酸血管平滑肌细胞计理技术

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反义c-myc、增殖细胞核抗原基因片断抑制血管平滑肌细胞相关基因表达

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中华医学杂志 1999年第1期79卷 10-14页

作者：边杰芳张柏根陈诗书钱虎声上海第二医科大学附属仁济医院血管外科第四军医大学西京医院血管外科上海第二医科大学人类基因治疗中心暨分子生物学实验室

目的研究有效的防治血管术后再狭窄的方法，以及应用反义ｃｍｙｃ、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因片断来封闭其相应基因表达的可行性。方法设计并合成ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ正义、反义及四个碱基错配的反义寡核苷酸，经体外稳定性检... 详细信息

目的研究有效的防治血管术后再狭窄的方法，以及应用反义ｃｍｙｃ、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因片断来封闭其相应基因表达的可行性。方法设计并合成ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ正义、反义及四个碱基错配的反义寡核苷酸，经体外稳定性检测和细胞转染实验证实其有效性后，分别作用于体外培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ），应用逆转录ＰＣＲ半定量测定及计算机图像分析的方法，观测其对ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ基因表达的影响。结果设计合成的寡核苷酸在血清培养基中１～５天未被完全降解；寡核苷酸能顺利进入ＶＳＭＣｓ内；１０μｍｏｌ／Ｌ浓度的反义ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ作用于ＶＳＭＣｓ后１～５天，其相应的ｃｍｙｃ和ＰＣＮＡ基因表达减弱，计算机图像分析表明其表达产物与对照组相比差异有显著意义（Ｐ＜０．０５），而正义和错配反义寡核苷酸无此效应（Ｐ＞０．０５）。

关键词：反义c-myc 增殖细胞核抗原血管平滑肌细胞

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H-2K^b cDNA的克隆及其在多种真核细胞中的表达

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上海第二医科大学学报 1999年第3期19卷 193-196,200页

作者：钱书兵钱关祥陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心

目的克隆H－2KbcDNA及研究其在多种真核细胞中的表达。方法RT－PCR法扩增H－2KbcDNA，克隆入双顺反子逆转录病毒载体pGCEN，PA317包装出重组病毒后，分别感染NIH3T3、COS7及***，PCR和RT－PCR分析目的基因表达，FACS分析H－2Kb在细胞膜... 详细信息

目的克隆H－2KbcDNA及研究其在多种真核细胞中的表达。方法RT－PCR法扩增H－2KbcDNA，克隆入双顺反子逆转录病毒载体pGCEN，PA317包装出重组病毒后，分别感染NIH3T3、COS7及***，PCR和RT－PCR分析目的基因表达，FACS分析H－2Kb在细胞膜上的表达。结果以双顺反子逆转录病毒载体pGCEN介导，分别建立了H－2Kb基因转导细胞：NIH3T3／Kb、COS7／Kb及***／Kb。PCR结果表明目的基因已存在于宿主细胞中，RT－PCR结果表明目的基因已获得正确表达。FACS结果表明H－2Kb分子已稳定表达在细胞膜表面。结论MHC分子基因在多种真核细胞中的表达为研究抗原递呈及抗肿瘤作用提供了基础。

关键词： H-2K^b基因克隆逆转录病毒载体真核表达 cDNA

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HSV-TK/GCV系统对小鼠肝癌细胞旁杀伤效应的观察

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肝脏 1999年第2期4卷 87-90页

作者：唐展云周晓明陈诗书上海第二医科大学分子生物学实验室人类基因治疗研究中心 200025

目的研究单纯疱疹病毒-胸苷激酶/9-(1,3-二羟-2-丙氧甲基)鸟嘌呤(HSV-TK/GCV)系统对小鼠肝癌细胞旁杀伤效应。方法应用逆转录病毒载体介导HSV-TK基因修饰***细胞,命名为M45/TK,将M45/TK细胞或M45/TK细胞与未经基因修饰的M45细胞等比... 详细信息

目的研究单纯疱疹病毒-胸苷激酶/9-(1,3-二羟-2-丙氧甲基)鸟嘌呤(HSV-TK/GCV)系统对小鼠肝癌细胞旁杀伤效应。方法应用逆转录病毒载体介导HSV-TK基因修饰***细胞,命名为M45/TK,将M45/TK细胞或M45/TK细胞与未经基因修饰的M45细胞等比例混合接种Balb/c小鼠皮下,联合应用GCV,观察其致瘤性及其体内的旁杀伤效应。免疫组化分析肿瘤组织中免疫细胞的浸润情况。结果 M45/TK细胞在小鼠体内致瘤性显著下降(P<0.01),说明在体内GCV对M45/TK也很敏感,并且M45/TK细胞在小鼠体内具有明显旁杀伤效应,即肿瘤生长明显受到抑制(P<0.05)。M45/TK细胞联合GCV治疗组的肿瘤组织中有较多的CD4^+,CD8^+淋巴细胞浸润。结论 HSV-TK/GCV系统对小鼠肝癌细胞具有良好的旁杀伤细胞效应,并提示机体的免疫反应,可能参与增强自杀基因系统的旁杀伤效应。

关键词：肝癌自杀基因治疗旁杀伤效应

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绿色荧光蛋白标记基因在肿瘤研究中的应用

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中国肿瘤生物治疗杂志 1999年第2期6卷 81-82页

作者：于丽莉陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心上海200025

绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)来源于海洋生物水母,近年来在生物化学和细胞生物学中成为最广泛应用的标记性蛋白质之一.GFP的cDNA约740bp,它编码238个氨基酸残基.在激发光下,GFP肽链内部第65～67位的丝氨酸-酪氨酸-甘氨... 详细信息

绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)来源于海洋生物水母,近年来在生物化学和细胞生物学中成为最广泛应用的标记性蛋白质之一.GFP的cDNA约740bp,它编码238个氨基酸残基.在激发光下,GFP肽链内部第65～67位的丝氨酸-酪氨酸-甘氨酸通过自身环化和氧化形成一个发色基团,有效地发射内部荧光且易于观察.这种特性使其具有吸引力而且有很大的应用价值.GFP的晶体结构分析提供了一种很好的机会去了解和使用蛋白质结构和光谱功能之间的关系.由于GFP的克隆基因能在异源组织中表达产生荧光,90年代初提出了GFP作为报告分子可用于生物学研究领域.GFP作为报告基因的特点和优势:①野生型GFP在395nm波长处可吸收一个激发光,在510nm发射一个绿色荧光,只要有足够的表达,在长紫外波长或蓝光照射下,无需引入别的物质,在活体内通过显微镜就能清晰地观察到.而其它一些报告基因如氯霉素乙酰转移酶Ⅱ(CAT)、β-半乳糖苷酶(β-gal)、荧光素酶(Luc)

关键词：绿色荧光蛋白基因标记肿瘤转移肿瘤发生

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反义寡核苷酸阻遏血管平滑肌细胞c-myc,PCNA基因的表达

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第四军医大学学报 1999年第8期20卷 650-652页

作者：边杰芳张柏根陈诗书钱虎声第四军医大学西京医院血管外科陕西西安710033 上海第二医科大学仁济医院血管外科陕西西安710033 分子生物学实验室和人类基因治疗研究中心陕西西安710033

目的：利用反义寡核着酸阻遏血管平滑肌细胞（VSMC）c-myC，PCNA基因表达，为移植血管再狭窄的基因治疗提供理论依据．方法：人工合成正义、反义及错配反义c-myc，PCNA基因片断，并转人体外培养的VSMC中，运用逆转录聚合酶链式反应（RT-... 详细信息

目的：利用反义寡核着酸阻遏血管平滑肌细胞（VSMC）c-myC，PCNA基因表达，为移植血管再狭窄的基因治疗提供理论依据．方法：人工合成正义、反义及错配反义c-myc，PCNA基因片断，并转人体外培养的VSMC中，运用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）测定细胞中相应基因表达的情况．结果：反义寡核苦酸能有效抑制VSMC中c-myc，PC-NA基因的表达，而正义和错配反义寡核着酸没有此效应．结论：反义寡核着酸能阻遏VSMC中相应基因的表达．

关键词：反义寡核苷酸血管平滑肌基因表达血管移植

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α-TNF修饰肝癌细胞辐射后增殖性和致瘤性的改变

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上海第二医科大学学报 1997年第3期17卷 182-184页

作者：徐荣婷朱敏张腾飞胡亮吴兆平陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心 200025

将含α－肿瘤坏死因于互补DNA（α－TNFcDNA）的缺陷型逆转录病毒感染人肝癌细胞株（HHCL），经新霉素衍生物（G418）筛选，获得HHCL－TNF基因修饰株，用不同强度60Co辐射后，以不同浓度，分别接种BALB／C裸鼠，定期观察接种处肿瘤的生... 详细信息

将含α－肿瘤坏死因于互补DNA（α－TNFcDNA）的缺陷型逆转录病毒感染人肝癌细胞株（HHCL），经新霉素衍生物（G418）筛选，获得HHCL－TNF基因修饰株，用不同强度60Co辐射后，以不同浓度，分别接种BALB／C裸鼠，定期观察接种处肿瘤的生长情况。发现：（1）未经60Co辐射的HHCL细胞致瘤性明显高于60Co辐射组（P＜0．01）；（2）未经60Co辐射的HHCL－TNF细胞的致瘤性明显高于60Co辐射组（P＜0．01），但不同辐射剂量组间（40Gy～100Gy）无差异；③未经60Co辐射的HHCL细胞的致瘤性明显高于未经60Co辐射的HHCL－TNF组（P＜0．01）。结果显示：经60Co辐射后HHCL和HHCL－TNF细胞的致瘤性均基本消失，为"肿瘤疫苗"用于临床治疗提供参考依据。

关键词：肿瘤坏死因子 ^60Co辐射肿瘤疫苗肝肿瘤

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基因修饰肿瘤疫苗研究进展

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上海免疫学杂志 1996年第1期16卷 60-62页

作者：孙欲晓陈诗书上海第二医科大学分子生物学实验室人类基因治疗研究中心

近年来基因修饰肿瘤疫苗包括ＭＨＣ分子、共刺激信号Ｂ７分子及各种细胞因子基因修饰的肿瘤疫苗，在体内外试验和基础研究中取得了相当的进展，本文主要对其作用机理进行了小结。肿瘤细胞表达外源ＭＨＣ、Ｂ７分子，使宿主免疫系统能有... 详细信息

近年来基因修饰肿瘤疫苗包括ＭＨＣ分子、共刺激信号Ｂ７分子及各种细胞因子基因修饰的肿瘤疫苗，在体内外试验和基础研究中取得了相当的进展，本文主要对其作用机理进行了小结。肿瘤细胞表达外源ＭＨＣ、Ｂ７分子，使宿主免疫系统能有效识别、杀伤肿瘤；表达某些细胞因子（如ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α等）能诱导产生ＣＴＬ，而某些细胞因子则激发非Ｔ细胞的杀伤作用（如ＩＬ－４、Ｇ－ＣＳＦ诱导中性粒细胞的炎症反应，ＩＬ－２诱导ＮＫ细胞的杀伤作用，ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＦＮ－γ等诱导肿瘤局部Ｍφ的浸润）。

关键词：肿瘤细胞 MHC 修饰肿瘤疫苗

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